猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法的建立

摘要

本研究根椐GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株和变异株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪星状病毒(PAstV)基因序列,分别设计5对引物,在建立各病毒单一RT-PCR技术的基础上,优化多重RT-PCR反应条件,建立了一种特异性强、灵敏度高的能同时检出多种病毒的多重RT-PCR检测方法.通过特异性试验证实该法能特异性的检测PEDV、TGEV、PRoV、PAstV,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)病毒、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应;重复性试验获得一致的目的片段;敏感性试验显示能检出的混合质粒最低限度为8.41×101copies/μL.结果表明,本研究建立的猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法高效、敏感、特异,可用于PEDV经典株与变异株、TGEV、PRoV、PAstV的快速鉴别诊断和流行病学调查.