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第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会

召开年：2013
召开地：乌鲁木齐
出版时间： 2013-07

主办单位：中国农业生物技术学会

会议文集：第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会论文集

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1.慢病毒介导的表达绿色荧光蛋白(GFP)转基因鸡研究
- 孟庆文;王伟;田进;胡卫杰;张在平
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：禽类生殖系统和胚胎发育的特殊性,使禽类转基因技术的研究落后于哺乳动物.慢病毒载体作为制备转基因家禽基因转移的工具已被证明具有高效性和稳定整合性.本研究用慢病毒载体,采用赤道开窗法将表达GFP重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下腔制备转基因鸡,通过PCR、RT-PCR、Southern、Western方法鉴定.鉴定阳性的转基因鸡经Tail-PCR分析外源基因的整合位点.转基因阳性鸡(TG)与野生型鸡(WT)交配繁育F1代,荧光显微镜下观察F1代TG鸡组织GFP的表达,F1代阳性鸡与WT鸡交配繁育F2代.成功获得表达GFP的转基因鸡,整合位点分析表明GFP整合到鸡基因组4号染色体.繁育至F2代,在血液与组织中能够检测到外源基因,表明外源基因能稳定遗传,并建立微核心群单元.
2.重组人溶菌酶转基因鸡的研究
- 汪海;韩红兵;连正兴
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：利用慢病毒法制备人溶菌酶转基因鸡，并采用PCR和Southern Blot对获得转基因鸡鉴定;通过定量PCR测定人溶菌酶基因在不同组织、器官及血细胞中的表达情况。收取15只48周龄转基因鸡与巧只同周龄公母比例相同的非转基因鸡粪便，并进行肠道微生物组成结构检测。统计分析同日龄出生的转基因鸡和非转基因鸡出雏数，健雏数，出生重，6周龄体重，6周龄胫长等生长指标。得出F2代转基因鸡阳性率母鸡达到26.1，公鸡达到34.5，与文献报道的利用慢病毒载体介导法制备转基因鸡目的基因遗传给后代的遗传率范围4%-45%相符。定量PCR得到转基因鸡各组织、器官人溶菌酶的表达均无显著差异，可能是由于CMV启动子受到表观修饰，导致基因表达抑制等结论。
3.输卵管特异表达人溶菌酶转基因鸡制备
- 曹代男;胡晓湘;李宁
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：禽类胚胎从受精到形成个体要经过体内和体外两个发育阶段.在体内阶段时,胚胎已发育为含有60000个细胞的X期胚盘.因此,若像哺乳动物那样在受精后的短时间内采集卵子并进行DNA注射或者核移植等技术操作都很困难.本研究通过对采用对X期鸡胚胚盘注射慢病毒的方法成功的获得了输卵管特异表达人溶菌酶的转基因鸡.对进行胚盘注射操作后的鸡胚,我们采用的是Perry的三期培养法,其操作流程包括StageX(EG&K)第一次换壳,90°转蛋培养约72h后进行第二次换壳,其后30°转蛋培养至第10天停止转蛋,并一直培养直至出雏.
4.TALENs介导的多位点基因打靶技术的研究
- 庞春英;邓廷贤;王建;杨炳壮;梁贤威
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文中构建了多位点基因打靶载体pBC1-DS2-Fatl-eGFP-DS1。利用lipofectamine LTX介导外源pBC1-DS2-Fatl-eGFP-DS1质粒转染水牛肾脏成纤维细胞，探讨了脂质体用量、质粒用量、质粒大小、转染时间、细胞初始接种密度对转染效率的影响。结果表明，4pg打靶载体质粒DNA与4μg,L脂质体转染6h,其细胞活性达98%，可获得较满意的转染效率。应用QRT-PCR技术、酶切和测序等手段检测和分析了外源基因Fatl的表达和定点整合情况。结果表明，Fatl基因己成功整合至水牛基因组，定点整合效率有所增加，但仍然较低。
5.RXRB基因mRNA在长白山野猪不同组织的表达特征分析
- 黄锐;徐日福;秦宁;单雪松;李莫南;徐慧;杨雨江
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究采用半定量RT-PCR方法对40日龄长白山野猪背最长肌等16种组织mRNA表达进行了检测分析.结果显示,被检各组织内均检测有RXRB基因mRNA表达.
6.黑眉锦蛇免疫球蛋白重链表达特点研究
- 王涛
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：为了阐明爬行动物免疫球蛋白重链基因的特点和其在进化上的独特地位,选择蛇类这一重要代表动物作为研究对象,对其免疫球蛋白重链分别从DNA、RNA和蛋白水平进行了系统的鉴定和特点分析,并首次发现IgY亚型,为深入理解爬行动物免疫球蛋白重链的进化地位提供了重要证据.
7.超低温冷冻对小鼠桑椹胚多能性因子Oct-4表达的影响
- ZHOU Guang-bin;周光斌;GUO Jiang;郭将;ZENG Yan;曾艳;CHENG Ke-ren;程柯仁;FU Xiang-wei;傅祥伟;ZHU Shi-en;朱士恩
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本实验旨在探讨昆明白小鼠桑堪胚超低温冷冻后Oct-4表达的变化与胚胎发育潜力的关系。胚胎采用OPS法冷冻。毒性组胚胎未投入液氮，其他过程与冷冻组相同，新鲜胚胎为对照组。胚胎解冻后，检测Oct-4mRNA与蛋白的表达，通过观察其形态正常率、囊胚发育率和囊胚细胞数来综合判断其体外发育能力。qRT-PCR及Western Blot检测结果表明:桑堪胚中Oct-4mRNA的表达量，冷冻组和毒性组较对照组相比显著下降(P<0.05)，蛋白表达量三组间无显著差异。桑堪胚处理后的形态正常率以及桑堪胚培养48h后的囊胚发育率(96.67%～100%)和囊胚细胞数(89.67～92.33)三组间无显著差异。结果显示，玻璃化冷冻保存小鼠桑堪胚后多能性基因Oct-4mRNA表达的变化并未影响其体外发育潜力。
8.新疆褐牛GH基因的遗传变异及其与泌乳性状的关系
- 热伊莱·伊卜拉伊木;王雅春;黄锡霞;付雪峰;郭俊清;席艾力·依明;郭志勤;马那提·哈山;李静;李金霞
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：生长激素是一种具有广泛生理功能的生长调节素，不仅刺激骨、软骨细胞的生长与分化，调节蛋白、糖及脂代谢，还调控哺乳动物哺乳期的泌乳量。在新疆褐牛上，从DNA水平分析GH-exon5多态与生长性状的相关性研究已有报道。但GH基因其它外显子多态性与泌乳性能的相关性研究尚未见报道。因此，本研究利用PCR-SSCP技术和测序技术对新疆褐牛GH基因第3内含子和5个外显子的多态性进行研究，分析GH基因的多态性与新疆褐牛产奶性能的相关性，为新疆褐牛的遗传改良提供理论依据。
9.不同复合乳酸菌组合菌株对全株玉米青贮品质的影响
- 哈尔阿力;刘艳丰;唐淑珍;巴音巴特;古丽巴哈提
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验研究二次发酵菌、植物乳杆菌和粪肠球菌三个菌种组合体对青贮发酵的作用。采用单因素试验设计，共计3个处理，每个处理15个重复。试验表明：在3组菌株组合中，B+L组以其乳酸菌数量增殖快、产酸能力强、青贮料的pH值低，WSC含量、NDF含量低的特点为菌株组合优选。B+L组处理：玉米青贮中添加抑制二次发酵菌(5×102cfug-1)+植物乳杆菌。
10.牛滋养层干细胞的培养与鉴定
- 黄翔华;韩雪洁;乌云毕力格;云亭;赵宇航;李荣风;李雪玲
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：在哺乳动物胚胎发生过程中滋养层细胞的分化是首次分化事件,对胎盘的形态和生理起着重要作用.利用含有两个小分子抑制剂的培养系统，成功地从牛体外受精囊胚获得牛滋养层干细胞样细胞.这些细胞可以在添加B27,N2,Glutamax和2inhibitors(PD0325901,CHIR99021)的DMEM/F12和NeuralBasal培养液的培养体系中连续增殖,形成圆顶形囊泡结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,表达OCT4,SOX2,NANOG,CDX2,CK18,SSEA-1,SSEA-4,TRA-1-60和TRA-1-81等胚胎干细胞和滋养层干细胞标志因子,注射到NonScid小鼠体内可以形成包含外胚层,中胚层和成熟滋养层细胞的畸胎瘤.基因表达谱芯片分析显示,这些细胞表达滋养层干细胞和滋养层细胞标记基因如,ETS2,ELF5,SMARCA4,HSD17B1,CYP11A1,PPARG,Id2,GCM1,HAND1和THAP11.但是典型的多能基因如OCT4,SOX2和NANOG表现明显的下调,而滋养层干细胞标志基因CDX2等表现明显的上调.
11.黄牛类胚胎干细胞的培养
- 马玉洁;劳艳萍;朱鹏;阮秋燕;雷钏;杜姗姗;王萍;陆凤花;石德顺
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究采用分离着床前囊胚的内细胞团的方法培养黄牛类胚胎干细胞,通过对分离胚胎内细胞团方法和控制饲养层密度以及传代方法的培养条件的实验摸索,得出以下结论:使用器械分离法分离出囊胚内细胞团,使其贴壁在密度为80％的饲养层生长,传代培养时控制饲养层密度为40％,将器械传代法与酶消化传代方法结合进行传代能够较好的获得黄牛类胚胎干细胞.通过以上方法培养的第5代的黄牛类胚胎干细胞,具有典型的胚胎干细胞形态,经PCR鉴定和免疫组化鉴定证明其仍具有多能性,这为黄牛胚胎干细胞系的建立奠定了基础.
12.山羊胎肺间充质干细胞的体外分离培养与诱导分化
- 高静;仓明
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究从阿尔巴斯绒山羊胎儿肺部分离出胎肺间充质干细胞,在体外传代培养,鉴定其MSCs特性,并进行三胚层诱导分化,验证其多能性.结果显示,所分离的山羊胎儿胎肺间充质干细胞为成纤维样细胞,生长增值能力旺盛;细胞表面标志CD13、CD29、CD44、CD90、CD106表达呈阳性,CD45呈阴性;诱导后细胞可以成功向成脂、成骨、成软骨、成胰岛β样细胞及成神经样细胞分化.
13.西农萨能奶山羊泌乳期不同组织PITX2基因的甲基化谱研究
- 赵海谕;周瑞;周新字;甘鹏;潘传英;雷初朝;蓝贤勇;陈宏
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文以西农萨能奶山羊为研究对象，研究泌乳期不同组织PITX2基因的甲基化谱。通过BSP研究发现,西农萨能奶山羊泌乳期不同组织PITX2基因启动子区甲基化水平较低,其中脂肪的甲基化水平最低(0.41％),显著或极显著低于心脏、脾脏、肌肉和乳腺组织.
14.中国美利奴羊核因子I/B基因不同蛋白剪接体的功能分析
- 荣恩光;杨华;王宇详;闫晓红;李辉;王宁
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文以中国美利奴羊为研究对象，研究绵羊NFIB基因不同蛋白剪接体的功能.利用RT-PCR方法克隆得到绵羊NFIB基因不同蛋白剪接体编码区序列,利用过表达技术分析NFIB各蛋白剪接体对细胞增殖、凋亡的作用.
15.广西巴马香猪脂肪干细胞分离培养与鉴定
- 李海洋;刘真真;朱鹏;陈集成;邓彦飞;杨素芳;石德顺
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：在本实验条件下，探索了巴马香猪ASCs的分离、培养和鉴定方法。采用胶原酶I分离得到广西巴马香猪ASCs。香猪ASCs表达CD29,CD44,CD105，不表达CD31,CD45和HLA-DR;香猪ASCs在特定的诱导因子的作用下，可以向脂肪、骨、软骨定向诱导分化。本实验室培养的巴马香猪脂肪干细胞具有稳定的增殖能力及多向分化潜能，可为组织工程研究提供数量充足的种子细胞。
16.无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用
- 陈博;黄俊成
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：目的：无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用。方法：将分离得到的若干oESC-like集落，在体式显微镜下将其放入Tryple Express中，观察这些集落由原来的致密状态逐渐松散呈草莓状后立即转入oESC培养液中充分洗涤，然后放入用矿物质油覆盖且平衡好的oESC基础培养基中，将其吹散至单个集落，再放入38.6℃, 5%CO2的饱和湿度的培养箱内培养，每3-5天传代一次。碱性磷酸酶与免疫荧光检测将收集的oESC-like一部分按Alkaline Phosphatase(AKP)试剂盒说明书对其进行染色检测。另一部分oESC-like进行免疫荧光检测。结果：通过机械分离法从84枚扩张阶段的囊胚中分离出31枚假定的绵羊ICM，ICM的分离数量显著高于早期阶段的囊胚。早期和扩张阶段囊胚经分离、传代后获得的oESC-like，经碱性磷酸酶染色后呈棕红色。而分化的胚胎干细胞的周边细胞呈弥散式生长，碱性磷酸酶活性降低，集落逐步呈平铺式生长，界限模糊。早期囊胚和扩张囊胚中分离获得的。ESC-like经过多潜能性候选基因Oct-4和Sox-2免疫荧光检测结果呈阳性，而荧光二抗的专一性检测作为阴性对照。同时本实验所分离获得的oESC-like在后期的体内外分化实验中形成神经细胞和畸胎瘤。结论：在成分明确的无血清无饲养层培养体系下，可以有效的分离获得未分化的oESC-like，并且对于在明确培养基上衍生绵羊类胚胎干细胞是第一次报告，同时扩张(孵化)阶段的囊胚对于分离且获得较多数量的oESC-like具有促进作用，从而可以降低对囊胚数量的要求。因此，这种成分明确的无血清无饲养层培养体系对于理解家畜ESC的衍生和特征提供了一个基础的参考。
17.不同日龄山羊睾丸生殖干细胞分离效果研究
- 王菊花;曹鸿国;章孝荣;张运海;李运生
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：试验探讨了不同年龄山羊睾丸组织精原干细胞的变化状况.流式细胞仪检测显示1月龄山羊睾丸内精原干细胞数量最多.睾丸组织来源的细胞悬液分别经纯化培养后,也证实1月龄山羊睾丸来源的精原干细胞数量最多.精原干细胞纯化后体外培养,流式细胞仪分析证实1月龄来源的山羊精原干细胞数量最多且活性最强.
18.PiggyBac转座子介导的SV40T/p53转基因鼠生产及诱导细胞永生化研究
- 张婷婷;李欣憶;陈知龙;张智英
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：PiggyBac转座子是高效的转基因研究工具,可将外源基因插入到基因组中的TTAA位点,可携带高达150kb进行转座且转基因效率高达10％.本文构建了基于PiggyBac转座子的转基因载体PB-rtTA-NIT-STP,并在小鼠ES细胞系中对载体功能进行验证.该载体含有四环素诱导的tet-on系统调控的SV40T和p53基因、与tet-on系统结合的rtTA转录因子以及用于正负向筛选的LoxP-neo-IRES-tk-LoxP基因表达盒.通过构建基于转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体PB-transposase的转基因小鼠,获得能够诱导表达SV40T/p53的转基因鼠,通过杂交获得大量转基因小鼠后代,分离其原代细胞并通过四环素类似物多西霉素(Dox)的诱导,在小鼠原代细胞中表达目的基因,实现细胞的永生化,为细胞功能和基因功能研究提供材料.
19.慢病毒载体法高效率制备双荧光转基因猪研究
- 朱志伟;于福先;黄菁;陈晓宇;潘建治
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：构建了双荧光慢病毒载体,制备出效价达7.9×109TU/ml的慢病毒颗粒,4pl病毒注射2细胞期猪早期胚胎,获得3头F0代仔猪,其中1头转基因阳性母猪配种产仔2胎,共获23头F1代仔猪,转基因阳性个体占11头,检测到DsRed与Venus基因的表达.结果表明:利用高效价慢病毒注射早期胚胎,可高效地制备出转基因猪,外源基因能够稳定遗传和表达.
20.5-Aza-CdR处理供体细胞对广西德保黑猪手工克隆胚胎体外发育潜能的影响
- 陆杏蓉;孙俊铭;李兰玉;谢炳坤;刘庆友;石德顺;崔奎青
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本实验采用来源于南宁市屠宰场收集的猪卵巢的卵母细胞，于25350C生理盐水送至实验室，用带有18G针头的注射器抽取卵泡直径为3～6mm的卵泡，经沉淀后收集有3层颗粒细胞包被的卵丘卵母细胞复合体，于成熟液中经体外成熟42-44h后，收集有第一极体的成熟卵母细胞用于实验。供体细胞选用两周龄广西纯种德保黑猪第5～8代耳成纤维细胞。本实验采用四组对照实验不同浓度的5-Aza-CdR处理广西纯种德保黑猪耳成纤维细胞(72h)，观察记录其生长曲线变化情况，并用四组处理后成纤维细胞作为供体与去核猪卵母细胞融合进行手工克隆，记录其对后期胚胎发育率、囊胚细胞数和DNA甲基化程度的影响。研究表明：高浓度5-Aza-CdR对德保黑猪成纤维细胞具有抑制作用。2,3,4组相对于1组均有不同程度的畸变、生长抑制甚至致死。用处理后成纤维细胞作供体，猪手工克隆重构胚体外发育的卵裂率(24h.48h)和桑堪胚率各组间差异不显著(P>0.05)。
21.绵羊β-catenin基因的克隆与转基因动物模型的构建
- 崔凯;杨祖;邓学梅
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：针对WNT信号通路及通路中关键信号分子(3-catenin在毛囊发育周期和毛囊干细胞分化过程中的作用，筛选皮肤特异性高表达的启动子，构建特异性表达载体，通过构建转基因小鼠模型，探讨p-catenin基因的作用机理，不仅能够促进对动物毛发生长规律以及与皮肤毛囊发育相关的基因的表达调控机制的掌握，有助于揭示毛囊发生的分子生物学原理，更为超细毛羊的遗传改良提供一个理论基础。
22.晋南牛保种群部分微卫星遗传多样性分析
- 张元庆;王曦;李福星;杨效民;李博;靳光;王栋才;贺东昌
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验利用微卫星技术检测了150头晋南牛16个微卫星位点的等位基因,基因频率及分布状况.结果表明,HEL9位点在150头晋南牛中呈单态,其它15个位点有效等位基因数在1～4之间,BM18180为低度多态(PIC＜0.25),BM2113、ETH、HEL5及TGLA44属于中度多态(0.5＞PIC＞0.25),其余位点为高度多态(PIC＞0.5),这些位点适用于动物的遗传分析和个体鉴定.
23.利用微卫星DNA对中国美利奴(新疆军垦型)A系、B系遗传结构的研究
- 贾春晹;张文祥;李洪涛;赵宗胜;田占伟;林杉
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：中国美利奴羊在品种培育过程中和品种育成以后一直广泛采用了品系繁育的方法，对巩固品种的遗传性，不断提高品种的生产性能取得了显著的效果，其中A型品系系采用一只公羊建系，品系的主要特点为体格大，污毛量高。B型品系采用生产性能相似的3只公羊建系，品系的主要特点为羊毛品质好，它是用含波尔华斯血液较多的中国美利奴(新疆军垦型)做母本，加入澳洲美利奴公羊血液，后代进行横交选育而形成的品系。本研究通过对中国美利奴(新疆军垦型)A系、B系遗传多样性检测、平均有效等位基因数、平均杂合度等以及其基因和基因型的分析，显示了两个类型绵羊都表现出了不同程度的多态性，说明有效等位基因数多的类型羊，其杂合度和多态信息含量也高;PIC值的大小与杂合度的高低也体现了较高的一致性。本试验平均遗传杂合度为0.7137和0.7676，说明中国美利奴(新疆军垦型)羊A系和B系遗传群体变异程度适中。群体的遗传变异就其本质而言，是DNA分子的遗传变异，不同品种或不同类型在遗传上的差异可不同程度地反映在其DNA序列上，体现出了在DNA水平上检测群体的遗传变异，研究群体间的遗传相关的重要性。
24.中国美利奴羊(新疆型)KRT38基因多态性分析
- TUERXUN MAyila;马依拉·吐尔逊;HUANG Xi-xia;黄锡霞;TIAN Ke-chuan;田可川;TIANYue-zhen;田月珍;WU WEI-wei;吴伟伟;DI Jiang;狄江
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文采用PCR-SSCP技术与测序技术,对418只中国美利奴羊(新疆型)KRT38基因的遗传多态性进行了分析.结果表明:在中国美利奴羊(新疆型)群体中,KRT38基因有AA、AB、BB三种基因型,羊KRT38基因CDs区部分序列的基因杂合度(He)为0.48,多态信息含量(PIC)为0.36,属于中度多态;测序分析发现两处碱基突变,即G85A,C95T;经检验中国美利奴羊(新疆型)群体在该位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P＜0.01).
25.中国美利奴羊(新疆型)KRTAP9-2基因多态性分析
- MAIMAI-TI· Ai mai-ti;艾买提·买买提;HUANG Xi-xia;黄锡霞;TIAN Ke-chuan;田可川;TIAN Yue-zhen;田月珍;DI Jiang;狄江
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文次以418只中国美利奴羊(新疆型)为实验群体,采用PCR-SSCP技术和测序方法分析了,KRTAP9-2基因的多态性.结果表明;在中国美利奴羊(新疆型)个体中出现AA、AB、BB、CC 4种基因型,经X2检验KRTAP9-2位点上均处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P＜0.01).研究结果提示KRTAP9-2基因能够作为中国美利奴羊(新疆型)毛用性状的候选基因,以便为细毛羊分子育种提供理论依据.
26.西林水牛种群随机扩增多态性DNA研究群体遗传结构的RAPD分析
- 陈集成;蒋钦扬;陈宝剑;韦英明
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文以西林水牛种群为研究对象，采用RAPD标记对西林水牛进行了群体遗传学研究，阐明其群体遗传变异和遗传结构状况，准确揭示其种质特性。研究表明:本研究8个引物在西林水牛群体中出现了21个多态性条带，不同引物之间产生差异较大，S54,562,S101都产生了4个条带，其他都产生了5个条带，并表现出特异的条带，平均有效等位基因数为1.6578，说明西林水牛在西林当地的分化程度较高和遗传多样性是较高的，进而反映出西林水牛在选育潜力方面很大，西林水牛的Shannon多样性指数为0.14560.6916，平均Shannon多样性指数为0.5527，反映西林水牛群体遗传变异和遗传分化程度较高。
27.水牛PRNP多态性分析与抗病性评测
- 管峰;王海霞;杨利国;宋雪梅;蒋永清
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究对温州水牛PRNP基因12bp、23bp的插入缺失多态性以及24bp的八肽重复多态性进行检测.发现12和23bp都为插入等位基因,与奶牛具有显著差异;24bp多数为6个八肽重复,还有少数个体为7个八肽重复,但在水牛样本的疏水区没有发现改变氨基酸序列的SNP位点.本研究对水牛基因多态性及抗病性研究提供了基础.
28.猪骨骼肌及肺功能相关基因启动子区的鉴定及功能
- 姜运良
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文对猪骨骼肌和肺组织中特异表达基因的筛选、调控这些基因特异性表达的启动子的鉴定以及启动子功能的研究，获得了以下进展:(1)筛选得到3个猪骨骼肌组织特异性表达的基因，克隆了这些基因的启动子并构建了该启动子的红色荧光蛋白报告基因载体。验证了这些启动子的启动活性。证明了这些启动子具有使外源基因在骨骼肌中特异性的特性。(2)初步筛选出6个猪肺组织特异性候选基因，克隆了这些候选基因的启动子并构建了红色荧光蛋白报告基因载体。验证了部分启动子的启动活性和组织特异性。(3)对猪骨骼肌中表达的三个基因的印记状态进行了分析，对猪a-actin基因的表达调控进行了研究。(4)申请国家发明专利10项，目前有4项获得授权。所获得的转基因用启动子可以服务于提高肉质或抗呼吸道疾病的转基因猪的培育，或者用于条件性的对猪内源性基因的定点修饰。
29.猪不同组织microRNA的挖掘与功能研究
- 习欠云
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究分别针对蓝塘猪垂体以及蓝塘猪和长白猪肌肉和脂肪组织中的miRNA进行了Solexa深度挖掘、芯片、qRT-PCR及northern blot验证以及生物信息分析。结果表明:在垂体中，共获得450条表达的miRNA，其中169个为猪己知的miRNA，269个为保守miRNA，12条新的猪特异表达miRNAo。Solexa测序对发现新基因有优势，但对miRNA定量结果不如基因芯片更为准确。
30.不同实验室来源的猪iPS细胞系转录组表达谱分析
- 王华岩
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Porcine induced pluripotent stem cells (piPSCs) have significant biomedical and agricultural applications andhave been developed by several laboratories worldwide.Each piPSC line has shown varying levels of heterogeneityin morphology,self-renewal and pluripotency.Thus,questions have been raised pertaining to incompletereprogramming of piPSCs,the plasticity of these cells and the necessary gene regulatorynetworks that are needed to maintain pluripotency.To address these questions and to better understand themechanism of porcine cell reprogramming,we analyzed the transcriptional profiles of porcine iPSC lines usingAffymetrix GeneChip Porcine Genome Array.Our results demonstrated that cell surface proteins of EpCAM(epithelial cells adhesion molecule) and Rexl were significantly upregulated in complete reprogrammed porcineiPSCs,but not in partially reprogrammed cells,suggesting that these genes could be markers for evaluating porcinecell reprogramming.We analyzed gene expression levels of the six key developmental signaling pathways,including JAK-STAT,NOTCH,TGF-b,WNT,MAPK and VEGF.These results demonstrate that the coretranscriptional network to maintain pluripotency and self-renewal in pig may be different from mouse and human.Pig iPSCs lacked expression of specific naive state marker,but expressedunregulated primed state markers.The global networks of pig iPSCs were dominated byhighly connected genes such as POUSFI,LIN28A,DNMT3b,ERK and MAPK,which are possibly critical indetermining the fate of iPSCs.Dlkl-Dio3 domain was silenced in piPSCs as previously seen in mouse and humaniPSCs,which is a likely cause of low instances of chimeric and cloned offspring.Our analysis provides afundamental resource for better understanding of the complex genetic network that maintains pluripotency in thepig.This comparative study with mouse and human may facilitate the derivation of iPS lines from pig moreefficiently.
31.乳腺表达人IFNα-2b的转基因小鼠研究
- 石德顺
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：人干扰素α-2b(IFNα-2b)是目前治疗病毒性肝炎和癌症的有效细胞因子,其基因位于人类第9号染色体的9p21区,编码165个氨基酸.成熟的IFNα-2b蛋白是一种含有5个α螺旋和2个二硫键的糖蛋白,分子量约为19.6kD.目前所有临床应用的重组IFNα-2b均为细菌生产,因缺乏翻译后修饰和空间折叠,生物学活性较低.为获得高活性的重组人IFNα-2b,本文从基因调控序列、基因筛选、人干扰素的生物活性等方面对乳腺表达IFNα-2b的转基因小鼠进行了研究.根据在WISH细胞中添加转基因小鼠乳汁获得的RLU的值，乳汁中的IFNa-2b诱导下游基因表达量的荧光定量PCR检测结果发现，转基因小鼠乳汁能显著提高MxACaspase 1的表达，表达量相分别为非转基因小鼠乳汁的150倍、10.72倍、6.4倍和3.5倍。而而p21、MAPK、MHCI的表达量无明显变化，证明转基因小鼠乳腺表达的重组人IFNa-2b具有生物活性。
32.奶牛性控繁育新技术开发与产业化推广应用
- 李喜和
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Sperm sorting for sex preselection is one of the major achievement in reproductive biotechnology that hasgreatly influenced worldwide dairy industry.Basically,semen is labeled with a fluorescent by Hoechst 33342 whichbinds to the DNA of each spermatozoon,and then exposed to UV light during flow cytometry to measure theamount of fluorescent dye.As the X-chromosome is larger than the Y chromosome,X and Y sperm will be sorted interms of the difference of the DNA content by computer system.The high speed sperm sorter,SX-MoFlo flowcytometer was developed for commercial purpose and licensed to XY Inc,in 2000,which be able to sort X or Y sperm at a rate of 5000-7000 per second and could obtain greater than 90% purity.However,the number of sortedsperm to produced sexed semen only 30-50 thousand doses per sorter each year which still limits widespreadapplication.We developed a new technology for sexed semen production in dairy cattle based on SX-MoFlo flowcytometer and mix the sorted sperm with xenosemen which can improve more than two times of sexed semenproduction compared to original ability to 60-80 thousand doses per sorter each year.Since 2005,over 1.4 milliondoses of the sexd dairy cattle X-semen were applied for AI in China,which resulted 50-60%conception rate ofeach sex cycle and 94% heifers of average sex preselection rate in the sexed generations.These results indicatedthat feiled application of sex controling by sorted X-semen and AI is feasible with both of our developedtechnology and new product quality for dairy industry in China.
33.φC31整合酶介导猪的无选择标记转基因技术
- 毕延震
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Introduction:Marker-free transgenic technology is highly desired to create genetically modified pigs,in term of food safetyand consumer ethics.AΦC31 integrase has been used to introduce site-specific transgene integration into pseudo attPsites of animal genomes.It represents a powerful tool to produce transgenic animals.Here we attempted to examineits efficacy to mediate transgene integration into pig genome.We also wished to establish a marker-free transgenictechnology in large farm animal.Materials and methods:Donor and acceptor pigs were Hubei White Pig raised in the farm of Institute of Animal Science and VeterinaryMedicine,Hubei Academy of Agricultural Science.PBCPB+and PCMV-1NT were gifts of Prof.Calos(StanfordUniversity).PEGFP-N1-attB reporter plasmid was constructed in our group.ΦC31 mRNA were purchased fromStanfordbio Inc.(Jiangsu).Results and discussion:ΦC31 mRNA and attB-containing pEGFP-N1 plasmid(PEGFP-N1-attB)were microinjected into 120 pig 1-cellzygotes and transferred into 5 surrogate pigs.32 piglets were live born from 4 acceptor pigs.PCR analysis showed that 7 of them were attB and EGFP positive individuals.The transgenic positiverate is 7/32=22%;gene transfer efficiency is 7/120=5.83%.In comparison to naked DNA pronuclearmicroinjection,this efficiency is significantly high.One hot spot pseudo attP site (pig pseudo attP-1,ppp-1)was identified from2 piglets by TAIL-PCR.PPP-1 is located in an intergenic region of pig chromosome 1,implyingthat transgene integration into this site does not destroy any endogenous genes.Up to now no abnormal phenotypeswere observed in term of birth weight,animal behaviors.This also demonstrated that PPP-1 appears to be safeharbor for transgene integration.
34.表达Mx-RNAis转基因猪抗猪流感病毒研究
- 孟庆文
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文利用RNAi技术，通过筛选技术平台在细胞水平筛选出6对广谱抗流感病毒的RNAi基因;克隆了天然抗病毒蛋白基因Mx，在细胞水平和转基因鼠水平证明了多靶点RNAi,Mx基因的抗流感病毒转基因育种价值。建立了猪流感病毒感染猪模型，为培育的抗流感转基因猪的评价奠定了基础。通过体细胞克隆方法成功获得6头体细胞克隆猪，成活5头，均为表达抗流感病毒基因的转基因猪;繁育FI代猪，经过对仔猪耳、尾、血液的PCR、RT-PCR,southern,Western blot分析，证明可遗传。猪流感病毒感染评价实验表明:转基因猪比非转基因猪相比具有抗病毒、抑制病毒传播的特性，培育的抗猪流感转基因猪群体感染率减少30%以上。建立了400多平米的转基因猪饲养、繁育、安全评价基地，己获得具有抗猪流感转基因猪育种新材料3个，表达抗流感RNAis和Mx基因转基因猪在黑龙江省的转基因生物安全评价中间试验获得农业部农业转基因安评批文。
35.异种移植供体猪的人源化基因修饰
- 潘登科
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文利用同源重组技术和TALEN技术分别获得了敲除a1,3GT基因克隆猪(GaIKO)。利用Minigene策略获得了表达人hCD46基因猪，转基因猪细胞抗人血清补体介导的排斥反应效果明显。针对组织器官移植存在的凝血炎症反应，目前主要通过转人抗凝血因子如TFPI,CD39,TM基因等来解决。针对T细胞排斥反应，主要通过转人LEA29Y,CⅡTA-DN等基因来有效克服。我们构建了猪胰岛素启动子特异表达hCD39基因和LEA29Y基因的载体、猪血管内皮特异表达TM基因的载体、CAG启动子广泛性表达CⅡTA-DN载体，己完成胚胎移植，多基因修饰克隆猪Ga1K0/hCD46/TM,Ga1K0/hCD46/CⅡTA-DN,Ga1K0/hCD46/Ins hCD39/Ins LEA29Y即将获得。
36.山羊葡萄糖转运载体的功能验证及其在制备转基因山羊中的应用
- 庾庆华
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Glucose transport, mediated by glucose transporters, is necessary for mammary gland development and lactation.GLUT1 and GLUT12 could both be expressed in the pregnant and lactating mammary gland to participate in theglucose uptake process. In this study, the goat GLUT1 and GLUT12 genes were cloned from Saanen dairy goatsand transfected into goat mammary gland epithelial cells to assess their biological functions and distributions. Theresults showed that both goat GLUT1 and GLUT12 had 12 predicted membrane-spanning helices. Goat GLUTIand GLUT12 each influenced the mRNA expression of the other transporter and increased the glucose consumptionand lactose yield in GLUT1一and GLUT12-transfected goat mammary gland epithelial cells, respectively. Theoverexpression of GLUT1 or GLUT12 also increased the expression of amino acid transporters SLC1A5, SLC3A2and SLC7A5 and affected genes expressions in GMGE cells. Using immunofluorescence staining, GLUT1 wasdetected throughout the cytoplasm and localized to the Golgi apparatus around the nuclear membrane, whereasGLUT12 was mainly distributed in the perinuclear region and cytoplasm. This study contributes to theunderstanding of how GLUT1 and GLUT12 cooperate in the incorporation of nutrient uptake into mammary glandepithelial cells and the promotion of milk synthesis in the goat mammary gland during lactation.
37.PTD与牛体细胞重编程诱导因子的融合表达载体构建及其原核表达研究
- 贾文超;甘鹏;熊亮;潘传英;蓝贤勇;陈宏
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：2006年iPS技术的诞生标志着生命科学新的里程碑.为了避免体细胞重编程过程中,病毒载体携带的外源基因整合进靶基因组所带来的潜在危险,本研究小组曾构建了原核表达载体pProEx-HTa/TAT-人转录因子(OISIM/K)融合表达载体，转化大肠杆菌细胞，经IPTG诱导表达后，获得并纯化了TAT转录因子融合蛋白。并且发现这些融合蛋白可以跨膜进入到细胞内，但只有极其少量的蛋白，到达了细胞核内，而大部分的蛋白包裹于靶细胞的内含体内呈点状分布于细胞质。在本研究中，在融合表达载体的C端和N端分别添加了均有跨膜转导功能的TAT和9R，以期实现更加高效的跨细胞膜和核膜作用，将转录因子带入到靶细胞的细胞核，实现转录因子蛋白直接重编程，为家畜iPS研究提供科学资料。
38.BVDV Npro基因原核表达载体的构建及表达
- 王国超;乔军;孟庆玲;刘昱成;陈双庆;陈创夫
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究对BVDV Npro基因进行了克隆，选用大肠杆菌表达体系表达对其进行表达，通过SDS-PAGE和Western blot分析发现表达的重组Npro蛋白具有良好的反应原性，为进一步研究BVDVNpro非结构蛋白的功能奠定理论基础。
39.BVDV-2 E2蛋白基因的克隆及原核表达研究
- 刘昱成;王国超;孟庆玲;乔军;才学鹏;贺志吴;杨海波;陈创夫
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究对BVDV-2E2基因编码蛋白的抗原表位进行了预测分析，克隆出了BVDV-2E2区中抗原表位较集中的一段长达600bp的片段区域在大肠杆菌中进行了表达，获得具有较强反应原性的重组E2蛋白，为研发BVDV-2诊断试剂奠定了良好的基础。
40.Cre重组酶基因的原核表达
- 张译元;王立民
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Cre/LoxP系统在基因表达和控制方面是一个重要的工具,本研究隆了Cre酶基因,构建了原核表达载体PET28a-cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶,经SDS-PAGE、Western blotting得到初步验证,大小在43KD,并得到纯化后蛋白,为证明重组酶删除特性及今后基因定点整合的研究奠定了基础.
41.红鳍东方鲀抗菌肽Defensin beta-1基因的原核表达
- 徐进;仇雪梅;王秀利
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究获得了红鳍东方纯抗菌肽Defensin beta-1成熟肽序列的原核表达产物，并对该产物的生物学活性和功能进行了鉴定。这为深入研究和应用抗菌肽Defensin beta-1提供基础。
42.小鼠Zhangfei过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 陈风雷;王爱华;林鹏飞;李晓;孙晋;靳亚平
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究通过构建小鼠Zhangfei基因过表达和shRNA重组慢病毒载体，为进一步研究Zhangfei在哺乳动物生殖过程中的作用及其机制提供实验材料。根据GeneBank中小鼠Zhangfei基因序列，通过慢病毒载体pCD513B构建包含Zhangfei cDNA全长的过表达载体，并利用慢病毒干扰载体pCD513B-U6构建针对Zhangfei基因的shRNA干扰载体。将慢病毒包装系统共转染HEK 293细胞产生慢病毒，将所得病毒液梯度稀释后感染HEK 293细胞。RT-qPCR和Western Blotting结果表明，Zhangfei基因慢病毒过表达载体感染NIH3T3细胞后，Zhangfei mRNA和蛋白的表达水平显著增加(P<0.05);而携带shRNA干扰序列的慢病毒载体能够显著抑制Zhangfei mRNA和蛋白的表达，干扰效率在70%以上。本试验成功制备了小鼠Zhangfei基因过表达和shRNA干扰重组慢病毒载体，为Zhangfei基因在哺乳动物生殖过程中功能的研究奠定了基础。
43.牛PLCζ-Venus真核载体的构建以及其在Hela细胞中的初步表达
- 宁静;许晓磊;许荣;李建;雷安民
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文从牛睾丸组织中提取总RNA,经RT-PCR克隆获得牛PLCδ1CDS全长，连接到本实验室提供的pMD19-T载体上，经DHSα转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切验证后送检测序。将测序结果与NCBI上公布的牛PLCδ1序列进行比对，测序正确后，选取鉴定结果正确的质粒和空pVenus载体各自进行KpnI和NheI双酶切并纯化回收目的片段和线性化的pVenus载体，通过T4DNA连接酶将目的片段和线性化的pVenus载体连接，后经DHS。转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切鉴定，而后在进行高纯度的质粒提取。提前在24孔板上接种培养Hela细胞，待其均匀分布贴壁达到70%-80%时用PLCδ-Venus转染Hela细胞，转染程序按照LipofectamineTM2000说明书进行操作。转染24h后在荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况。以空载体pVenus组和未转染组为对照。结果经PCR扩增PLC基因，产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在约1900bp处出现特异性条带，回收的目的DNA片段连接pMD-19T在感受肤大肠杆菌中扩增，将所得质粒进行双酶切鉴定和测序对比，结果证明所回收的DNA片段确为牛PLCδl。在PLCδ-Venus转染Hela细胞相较于对照组死亡较多，在荧光显微镜下观察，出现了绿色荧光，荧光蛋白在细胞核周围呈弥散状分布。在pVenus转染组绿色荧光蛋白在整个细胞中都有分布。未转染组在荧光显微镜下观察时未观察到绿色荧光出现。讨论试验结果说明载体构建在分子水平和蛋白水平均验证正确。这有利于进一步研究牛PLCδ1在牛卵母细胞激活中的作用，并且为牛卵母细胞激活方法的改进与生物学激活方法的研究奠定基础。
44.口蹄疫病毒适体分子载体的构建及其在BHK21细胞的表达
- 刘文杰;王宇航;胡文萍;李秋艳;李宁
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：在本研究中，构建了能够表达特异性识别FMDV编码的3D聚合酶的RNA适体分子的真核表达载体，并将其转染BHK21细胞中。通过PCR和测序鉴定，证明目的片段成功的插入了表达载体中，载体构建成功。将表达载体线性化后转染BHK21细胞，转染后24h在荧光显微镜下观察，可以看到绿色荧光大量表达，转染效率能够达到70-80%。继续培养细胞，然后用6418进行筛选，流式细胞技术分选GFP阳性细胞，最终得到稳定表达适体分子和GFP的阳性细胞。
45.绵羊Wnt10b基因克隆及序列分析
- 杨祖;崔凯;邓学梅
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文克隆了绵羊Wnt10b基因，并对其表达产物进行了分析和结构功能预测。本实验通过软件预测发现绵羊Wntl0b蛋白二级结构和蛋白功能位点与人的相似度很高，推测绵羊Wntl0b蛋白在功能上与人的相似，可以通过经典Wnt途径，启动下游基因表达，进而启动静止期毛囊进入生长期。启动子预测的结果说明，Wnti0b基因5’侧翼区不具备典型的启动子调控元件，但转录起始位点下游存在典型的启动子和增强子元件。本文将利用pGL3-Basic载体确定其启动子核心区域，筛选作用于Wnt10b基因的与毛囊生长发育相关的转录调控因子。
46.猪繁殖与呼吸综合征新疆株ORF2-7基因的克隆及序列分析
- 陆桂丽;汪萍;成进;夏俊;沙依兰·卡依扎;吐尔洪·努尔;王文
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：将新疆省某规模化和散养户猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪肺脏病料进行处理,提取病毒RNA,应用PT-PCR技术扩增出4株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF2-7基因序列,并进行了序列测定,核苷酸长度为3206bp.序列分析表明,新疆分离株XJTK-02株、XJERG-03株、XJ-04株和XJFCH05株之间核苷酸的同源率较高,为90.3％～98.6％;XJTK-02株与经典PRRSV CH-1a株核苷酸同源率最高为93％;而其它3株新疆分离株与高致病性PRRSV JXA1、HuN4、JXwn06、pJX143和HPBEDV苷酸同源率较高,为95.1％～98.9％;4株新疆分离株ORF2-7与美洲型代表株VR-2332核苷酸同源性为88.9％～90.5％;而与欧洲型代表株LV4.2.1的核苷酸同源性仅为54.2％～54.6％.表明新疆分离株为PRRSV美洲型.
47.水牛LPAAT基因的克隆与组织表达分析
- 邓廷贤;庞春英;王建;杨炳壮;梁贤威
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)和磷脂酸(phosphatidic acid,PA)是参与细胞内信号转导以及脂质体合成的两种主要磷脂.LPA转化成PA的反应时磷脂合成的第二步反应,这步反应由溶血磷脂酸酰基转移酶(Lysophosphatidic acid acyltransferase,LPAAT)所催化.LPAAT也叫做1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶(1-acyl snglycerol-3-phosphate acyltransferase,1-AGPAT),是三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)组装过程的一个关键酶,它催化酰基从脂酰-CoA转移至LPA的sn-2位,产生的PA即可继续进行脱磷酸反应合成TAG,也可以进入磷脂合成途径,进而参与形成生物膜结构.本研究将应用LA-PCR、RT-PCR和RACE技术克隆LPAAT基因,经QRT-PCR技术检测LPAAT基因的组织表达情况,其中6对引物可以有效的扩增出LPAAT基因的DNA片段,采用DNAStar软件成功组装拼接了LPAAT基因序列.结果表明:LPAAT基因序列全长为7050个碱基,包含6个外显子和5个内含子,开发阅读框可编码287个氨基酸,其分子量为32.02 kDa,等电点为9.55.QRT-PCR检测结果表明,LPAAT基因在心、乳腺、胰腺和肾脏组织表现较高的表达.本研究只是探究LPAAT基因功能的开始,随后将开展该基因的多样性、功能获得与失活研究,旨在为分子标记技术辅助培育乳用水牛新品种和提高水牛产奶量奠定理论基础.
48.中国美利奴羊发情期和乏情期卵巢组织差异表达基因研究
- 林杉;陈磊;张文祥;赵宗胜;田占伟
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：母羊繁殖力低是制约绵羊产业可持续性发展的重要因素.本研究选用的中国美利奴羊是我国培育的优良细毛羊品种之一,具有典型的一年一次、单胎繁殖特性.本文利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建中国美利奴羊卵巢组织消减cDNA文库,并对文库中筛选到的差异表达基因进行分析,对阐述卵巢周期性应答,研究绵羊繁殖规律,进而在生产实践中提高母羊繁殖力具有重要意义.
49.注射抗DNMT1小干扰RNA对猪克隆胚胎体外发育、基因转录和DNA甲基化的影响
- 许卫华;余波;李紫聪;吴珍芳
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究发现猪克隆胚胎在8细胞前DNMT1 mRNA水平显著高于同期的受精胚胎，这种异常的DNMT1表达水平可能会干扰正常的去甲基化。为此，本试验在化学辅助激活2小时后向重构胚胎注射抗DNMT1 siRNA，研究其对克隆胚发育性能、甲基化重编程效率以及基因表达的影响，以期为开发提高猪体细胞克隆效率的方法提供研究基础。
50.卵丘细胞对卵母细胞成熟、受精和胚胎发育的影响
- 石俊松;罗绿花;周荣;麦然标;周秀;余婉娴;吴珍芳
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：体外获取的卵母细胞其周围包括的卵丘细胞数量不一，传统上将胞质均匀的卵母细胞复合体按卵丘细胞层数分为三类:A类周围有5层以上卵丘细胞包被;B类周围有5层以下，1层以上卵丘细胞包被;C类仅有单层卵丘细胞或无卵丘细胞包被。在卵母细胞培养中，一般C类COCs弃之不用，而B类一直未有定论，而在生产操作中，一般将COCs分为两类，胞质均与包被三层以上的定义为优级卵，三层以下一层以上的定义为次级卵，本研究就此探讨卵丘细胞对卵母细胞成熟、受精和胚胎发育的影响。最后得出优级卵的卵母细胞成熟率显著高于次级卵的，且对这些卵母细胞进行孤雌激活和体外受精后，优级卵母细胞其孤雌胚胎和IVF胚胎的囊胚率也显著高于次级卵的。未去除卵丘细胞的卵母细胞的囊胚率显著高于去除卵丘细胞的等结论。
51.Jasplakinolide处理牛卵母细胞对孤雌胚胎与克隆胚胎发育的影响
- 白春玲;其布日;程磊;魏著英;李光鹏
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Jasplakinolide(JAS)是一种促进微丝聚合和稳定的药物.本研究在牛卵母细胞成熟培养过程中用JAS进行处理,分析其对孤雌发育和体细胞克隆胚胎的发育的影响.结果显示,JAS处理的卵母细胞孤雌激活后的卵裂率和囊胚率均显著低于对照组.用100nM JAS处理的卵母细胞构建的克隆胚,其卵裂率与对照组无显著性差异,但是囊胚率显著低于对照组.结果表明,JAS处理成熟过程中的卵母细胞不利子卵子其后的胚胎发育.
52.利用Solexa测序技术分析鸡与鹌鹑属间杂交种雌性和雄性胚胎的差异microRNAs
- 赵宗胜;郑炜;翟曼君;李艳;贾斌;孙杰
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验利用Illumina测序技术成功构建了孵化第3天鸡与鹤鹑杂交后代雌性和雄性胚胎的小RNA文库。miRNAs在参与动物细胞发育、增殖和死亡过程的基因表达中具有重要的调节作用，利用小分子RNA高通量测序技术可以大范围地发掘己知和未知的miRNA，尤其是针对部分保守miRNA，可通过表达的丰度分析反应这些miRNA在不同组织中的表达差异情况。然而本实验对鸡与鹤鹑属间杂交早期雌雄胚胎的miRNAs及其靶基因在性腺分化时期的作用进行初步的统计和分析，发现这些miRNA中包括了己经证实的与胚胎发育和性别分化密切相关的let-7、miR-196、miR-202*等，推测这些microRNAs及其靶基因可能在杂交种胚胎的早期发育中起到一定调控作用，为进一步深入实验miRNA在鸡×鹤鹑属间杂交胚胎性别分化与早期死亡的功能实验奠定了基础并提供了重要的实验依据。
53.猪背最长肌组织差异表达基因筛选与初步分析
- 秦宁;徐日福;张树敏;李莫南;徐慧;杨雨江;黄锐
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：以骨骼肌肌纤维直径和密度具有显著差异的东北民猪和长白山野猪为素材,利用高通量Solexa/Illumina sequencing技术分别构建了背最长肌组织cDNA文库,通过数字基因表达谱(DGE)分析和差异表达基因检测等,共筛选到4522个差异表达基因,其中上调基因4176个,下调基因346个.为进一步筛查、鉴定与肌肌纤维发生发育调控有关的重要(新)功能基因和调控元件奠定了基础.
54.猪肌内脂肪沉积相关基因的筛选
- 于永生;李兆华;罗晓彤;金海国
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：肌内脂肪是肌肉品质的重要指标之一,与肌肉的嫩度和多汁性显著相关.一般认为,地方猪种肌内脂肪含量高于国外大多白猪品种,但涉及的分子机理缺乏深入研究.本研究分别采集松辽黑猪、东北民猪、大白猪背最长肌,利用Agilent猪表达谱芯片对可能调节肌内脂肪沉积的基因进行筛选,以期为遗传标记和优质肉猪转基因提供候选基因.
55.单核细胞增生性李斯特菌prfA缺失株及其亲本株胞外蛋白的比较蛋白质组学
- 殷月兰;白春光;王国梁;贾艳艳;渠瑾;付红;高云飞;焦新安
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：PrfA蛋白对单核细胞增生性李斯特菌致病过程中毒力基因的表达起着重要调控作用，本文从蛋白质水平上初步探讨PrfA的调控功能。本文以同源重组法构建单核细胞增生性李斯特菌LM4株prfA基因缺失株LM4 4 prfA。对LM4及LM44prfA的胞外蛋白采用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术，进行比较蛋白质组学研究。研究表明：PrfA蛋白对毒力岛LIPI-I和毒力岛LIPI-Ii中毒力基因的表达具有重要的调控作用，新发现的转录调控因子和假定蛋白的功能有待于进一步深入研究。
56.Notch调控MSTN基因抑制绵羊肌卫星细胞增殖与分化的研究
- 刘晨曦;陈红玲;刘明军
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Notch(Translocation-associated notch protein)是一个进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族成员,已被视为胚胎期及成年阶段肌卫星细胞发育中最重要的调控通路基因,能够影响骨骼肌卫星细胞的形成、发育和命运决定.MSTN基因,属于生长分化因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-p)家族成员,是负调控肌肉生长的主效基因.大量研究表明,Notch与MSTN对肌卫星细胞的增殖与分化均具有重要的调控作用,但两者之间是否存在相互作用,其作用方式如何,尚不得而知.因此,本研究以肌卫星细胞为研究对象，建立了绵羊肌卫星细胞体外分离培养方法，获得了高纯度的肌卫星细胞;首次克隆获得了绵羊Notch基因胞内段结构域，将该序列导入肌卫星细胞后，确证了NICD抑制绵羊肌卫星细胞的增殖与分化，并且发现在增殖培养条件下NICD可显著上调MSTN基因的表达，而在分化条件下，NICD抑制MSTN基因的表达。结果表明，Notch1可通过调控MSTN基因的表达实现其对肌卫星细胞增殖与分化的抑制作用。
57.激活素受体ⅡB(ActRⅡB)及突变体对绵羊成肌细胞生长分化的作用
- 张雪梅;安静;刘明军
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：激活素受体ⅡB (ActRⅡB)属于TGF-β超家族成员的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶型受体,起着配体结合和特异性识别的双重功能.其突变体与MSTN结合后形成的复合物不能与Ⅰ型受体结合,从而阻断MSTN下游信号传导,抑制MSTN的功能.本研究克隆绵羊ActRⅡB基因全长cDNA,构建3种ActRⅡB突变体,进而在细胞水平研究ActRⅡB突变体对绵羊成肌细胞生长分化的影响,同时从转录水平分析其对成肌细胞生长分化相关基因表达的变化规律,初步探讨ActRⅡB突变体在绵羊肌肉细胞生长过程中的作用以及ActRⅡB突变体阻断MSTN信号通路的分子机制,为进一步研制促肌肉生长制剂或转基因动物奠定基础.
58.cdx2基因对牛早期胚胎发育及相关基因表达的影响
- 刘欣;焦翠华;汪金泽;刘坤;吴侠;李光鹏
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Cdx2属尾型同源框转录因子,小鼠cdx2基因对早期胚胎发育过程中滋养层(Trophectoderm,TE)细胞的特性维持起关键作用,并且诱导胚胎前后极性的形成.干扰cdx2基因的小鼠胚胎能形成早期囊胚但不能维持囊胚腔,胚胎不能着床.Cdx2早期存在于胚胎3个胚层及神经管中,之后转向小肠上皮细胞,诱导其分化并长期保持稳定的分布.然而,cdx2在牛早期胚胎发育及滋养层与内细胞团(Inner cell mass,ICM)细胞分化过程中的相关分子机制还不清楚.本研究以牛作为模型,以cdx2这一胚胎发育关键基因作为研究对象,探讨了干扰cdx2基因对牛早期胚胎发育及相关基因表达的影响.研究表明：cdx2基因CDS序列第672-691区域为相对最有效的干扰区域。在牛胚胎发育不同阶段均能检测到cdx2基因mRNA，但仅在囊胚期检测到其蛋白水平的表达。干扰cdx2基因后克隆胚胎中cdx2的表达量显著降低，但克隆胚胎的囊胚发育率未受到影响。干扰cdx2没有影响囊胚中gata3,nanog的表达，而sox2和oct4的表达量略有下降，但显著影响了ifnt的表达。
59.牛布鲁氏菌A19突变株的构建及在BALB/c鼠中的免疫保护评估
- 易新萍;叶锋;谷文喜;马晓菁;刘丽娅;吐尔洪;钟旗
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：以牛布鲁氏菌A19疫苗为亲本株,利用同源重组技术对其实施改造,敲除了布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)中VirB12基因,获得了具有布鲁氏菌病诊断标记的A19-△VirB12突变株,在BALB/c鼠实验动物模型上初步评估了A19-△VirB12突变株的安全性和免疫保护效果,为建立区分动物布病免疫和自然感染的鉴别诊断方法奠定了理论基础,以期为布鲁氏菌病的防治提供技术支持.
60.转基因动物乳腺生物反应器研究
- 曾溢滔
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：应用转基因动物乳腺生物反应器生产转基因药物是一种全新的药物生产模式，具有成本低、效益高和产量高等优点。但是乳腺生物反应器制药还有三个问题需要研究解决。一是转基因动物的成功率，二是外源基因在乳腺的高效表达，三是乳汁中表达的外源药物蛋白能否完成蛋白质的翻译修饰。针对上述问题，应用同体克隆、同型克隆技术和改进的克隆方法，从转基因动物(家畜)奶汁中分离纯化得外源药物蛋白，对其分析结果表明，无论其理化性质(分子量、等电点、化学结构等)或者蛋白质修饰(轻基化、糖基化、磷酸化、剪接修饰等)以及生物活性都和天然的蛋白质无异，证明在乳腺细胞中表达的外源蛋白质己经完成了蛋白质的翻译后修饰加工，表明通过转基因乳腺生物反应器生产药物蛋白是一种理想的制药途径。
61.动物生命科学与技术研究的前沿与趋势
- 李宁
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文阐述了通过比较多品种和数以百计动物个体的全基因组序列，在全基因组水平揭示物种的进化和品种的驯化与选择特征，成为了动物基因组学研究的热点和前沿。介绍了体细胞克隆技术与转基因技术和嵌合体制备技术的深度融合。分析了动物生命科学技术创新的意义。
62.shRNA扰低水牛胎儿皮肤成纤维细胞H1c基因表达的研究
- 权利;黄高波;杨小淦;许惠艳;卢克焕;卢晟盛
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：水牛是一个重要物种,其H1基因有维持染色体结构和调节基因表达等重要作用,H1c亚型很可能是体细胞核重编程中一个重要基因.因此本文研究了干扰H1c对水牛体细胞增殖和生长的影响,通过qPCR验证了构建的3个干扰载体都能有效扰低水牛体细胞HIc基因表达，并通过脂质体介导法将载体转入水牛胎儿皮肤成纤维细胞，从而扰低细胞HIc基因的表达，结果表明扰低Hlc基因表达能影响细胞的正常分裂和生长，甚至导致细胞死亡。
63.兔胎儿成纤维细胞核型的分析
- 管晓梅;张顺;杨金姬;石金月;蒋建荣;陆凤花;石德顺
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验以兔胎儿成纤维细胞为研究对象,采用Giemsa染色法制备染色体常规玻片,通过比较体外传代培养后不同代数的普通成纤维细胞和转染EGFP基因的成纤维细胞具有正常染色体睡的细胞比例,确定体外培养至第17代之前的普通兔胎儿成纤维细胞以及第11代之前的转染EGFP基因的兔胎儿成纤维细胞均适合用于兔体细胞核移植的供体细胞.
64.抗口蹄疫转基因山羊抑制羊口蹄疫病毒复制的研究
- 李文婷;康诗梦;韩红兵;连正兴
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：口蹄疫(Foot and Mouth Disease,FMD)是一种急性、热性、高度接触性传染病,主要感染偶蹄目动物,因其感染性极强,传播速度快,造成的经济损失巨大,被国际兽疫局列为A类传染病,该疾病主要是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的.本文针对口蹄疫病毒基因组保守区3D,使用RNAi技术与转基因技术相结合,培育出抗口蹄疫转基因羊新品种.本实验筛选出了针对口蹄疫病毒3D序列的shRNA，双荧光素酶报告系统检测出抑制效率高达93.97%。随后，通过原核显微注射获得抗口蹄疫转基因山羊，获得61只微注射山羊，经PCR筛选和Southern Blot鉴定得到7只转基因阳性个体，又通过Northern Blot和qPCR对表达出的外源siRNA进行定性分析及定量检测，结果证实制备的转基因山羊上皮细胞能够稳定表达干扰口蹄疫病毒3D序列的siRNA，且表达量存在差异。
65.转TLR4基因公羊繁殖性能分析
- 姚玉昌;韩红兵;宋旭婷;邓守龙;白海;王志贤;刘玉峰;张运海;何海娟;陆明海;亓美玉;王素梅;李武;连正兴
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Toll样受体4(Toll like receptor,TLR4)是最早发现的哺乳动物TLR蛋白,在先天性免疫和适应性免疫中发挥着重要的作用.本文利用显微原核注射方法获得转TLR4基因公羊3只,在此基础上对其繁殖性能指标进行分析,以期为转基因羊群体的高效扩繁、生产性能测定和品系选育奠定基础.本研究结果表明:利用显微原核注射方法获得的转TLR4基因公羊具有正常的生长表型、正常的繁殖能力，具备将转入的基因传递给下一代的能力，并己经获得一定数量的转基因后代个体。
66.细毛羊KRT26基因的遗传多态性及其与羊毛细度的关联分析
- 田月珍;黄锡霞;田可川;狄江;柏妍;马依拉·吐尔逊;艾买提·买买提;徐新明;吴伟伟;哈尼克孜·吐拉甫;付雪峰
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：角蛋白家族基因作为羊毛纤维的重要组成成分一直是细毛羊分子育种学者研究的重点,尤其是KRT26基因作为特殊的一类酸性(Ⅰ型)角蛋白特异地表达于毛囊的内根鞘中,是一类结构蛋白,肩负着维持不同组织结构稳定性的重任.本研究利用PCR-SSCP、DNA测序和生物信息学分析等技术,分析KRT26基因的遗传变异,探讨群体遗传结构、遗传多态性及其与毛纤维直径的关系,获取相应的分子遗传学信息,找到与羊毛细度相关的DNA标记,为细毛羊遗传资源的保护、利用与分子育种提供科学的理论依据.
67.MC1R基因多态性与新疆细毛羊毛色相关分析
- 孟浩浩;李良远;李辉;万鹏程;石国庆;代蓉
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：为研究MClR基因与新疆细毛羊毛色的关系,本研究利用PCR-SSCP技术及测序方法对不同毛色新疆细毛羊(黑羊5只、白羊52只)MClR基因SNPs进行筛选与鉴定.结果表明基因型CC在白色新疆细毛羊中分布差异极显著(P＜0.01),黑色细毛羊中分布差异不显著(P＞0.5).基因型BB、AB在白色新疆细毛羊中分布差异极显著(P＜0.01),黑色新疆细毛羊中分布差异不显著(P＞0.5).推测MClR基因的CC、BB、AB基因型可能与新疆细毛羊毛色相关.
68.基于海量组学数据的基因启动子区域组蛋白修饰位置偏好性与基因表达水平的相关性分析
- 左永春;孟碟
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文对基于高通量Chip-seq实验产生的人类基因组组蛋白甲基化和乙酞化等38种表观修饰的组学数据进行计算分析，对基因近端启动子区域的组蛋白修饰信号分布的位置偏好性进行了系统研究，分析了基因启动子不同功能区域组蛋白修饰分布的差异，研究了组蛋白修饰在各个不同功能区域段对基因表达的调控作用。
69.和田青驴体质量和体尺相关性的R语言分析
- XIAO Hai-xia;肖海霞;TUOHUTI·Aji-de;托乎提·阿及德;SHI Gu-qing;石国庆;YUSHAN JIANG;玉山江;RE XIDAN;热西旦;SHI Pei-sen;师培森
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：和田青驴是新疆优良地方驴品种，针对和田青驴存栏量不断减少急需加快保种、选育和提纯复壮速度的现状，以新疆和田地区皮山县的和田青驴为研究对象，测定了和田青驴的体质量和主要体尺指标，应用R语言分析它们的相关性，并建立最优的回归模型。
70.和田羊mtDNA D-loop区遗传多样性研究
- 於建国;田可川;徐新明;董红;陈童;肉孜买买提;袁小平;邓生荣
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本实验应用PCR扩增和测序技术对民丰、于田、策勒、洛浦4个县和田羊群体mtDNA D-loop序列进行研究,结果:4个县和田羊mtDNA-dloop均存在4个75bp的重复序列;民丰、于田和田羊遗传距离较近,洛浦、策勒和田羊遗传距离较近,初步认为4个县和田羊可分为2个类群.
71.合作猪及引入猪种遗传多样性研究
- 赵生国;杨巧丽;刘丽霞;滚双宝;蔡原
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：为了解引入猪种和合作猪遗传多样性,提供外来猪种对我国地方猪种入侵评估提供参考.本文对杜洛克、长白猪、大白猪及合作猪共153个个体的线粒体DNA D-loop环进行了研究.结果表明:四个猪种共有24个变异位点,并因此界定了23个单倍型,选育猪种遗传多样性均低于选育猪种,完全符合高强度选择对遗传多样性影响的结果,系统发育分析表明合作猪在共同母系起源的基础上发生过种群分化及扩张,从而形成了两个相对独立的进化方向.
72.小鼠zfx基因RNAi片段的筛选及性控效果的观察
- 贾斌;马世俊;马军德
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究利用RNAi技术对小鼠生精细胞中ZfX基因进行沉默，旨在产生更多的雄性后代，为控制动物性别寻找新的方法。研究表明：pqz3和pqz4两个干扰表达载体对zfx基因的沉默效果较好，体外实验和体内实验结果一致。干扰zfx基因可以使X精子受损，为Y精子创造了更多的受精机会从而产生了更多的雄性后代小鼠，说明zfx基因在X精子的发生发育过程中有着重要作用。但具体的功能还需要进一步的研究。
73.绵羊血浆游离DNA提取及SRY基因检测
- 蒋立斌;张云生;杨永林;杨华;石国庆
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：目的：从绵羊外周血中分离提取游离的DNA(cfDNA).方法：采集绵羊血液分离出血浆,用酚氯仿法抽提游离的DNA.PCR扩增Y染色体性别决定区基因(SRY).结果：提取的6只绵羊cfDNA样本,有5只公羊样本均检测到127bp的目的条带.结论：绵羊外周血中存在游离DNA,可以应用于SRY基因片段的检测.
74.基因组时代构建鲤现代种业的关键技术
- 孙效文;石连玉;董在杰;冯建新;鲁翠云;匡友谊;张晓峰;程磊;张研;徐鹏;李炯棠
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文阐述了鲤种质资源的收集与创制。介绍了鲤现代种业的育种技术包括常规育种技术、分子育种技术、保种技术。阐述了现代种业的数据资源。
75.以四环素调控表达系统调节LEF1基因在绒山羊成纤维细胞中的表达
- 杜晓媛;汪慧;许腾;张志鹏;薛娜;高笑宇;梁浩;郭旭东;刘东军
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究利用Tet-on系统构建毛囊特异性的LEF1表达载体，调节和控制LEFT基因在绒山羊胎儿成纤维细胞中的表达，为今后转基因绒山羊新品种的培育提供基础数据。本研究获得了转染pcDNA4-KL表达载体后稳定整合LEF1基因的转基因绒山羊成纤维细胞克隆。己有的研究结果证明，KAP6.1启动子不仅能在毛囊细胞中特异性表达，在成纤维细胞中也有转录和表达活性。本研究经过筛选和诱导表达试验，初步证明了四环素适当浓度诱导下，在mRNA水平可检测到目的基因LEFT的转录条带。有关其蛋白质水平的表达检测目前正在进行中。
76.小尾寒羊重复超排激素用量的调整及效果
- 吴姣;王二耀;冯亚杰;辛晓玲;楚秋霞;陈付英;王治方;徐照学
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验根据首次超排效果调整小尾寒羊重复超排的激素用量，获得比较稳定的超排效果。首次超排效果较差的个体，重复超排时增加FSH及添加PMSG剂量，可显著提高红体个数;超排效果正常的个体，再次超排时增加FSH的剂量，提高平均红体数，但与第一次相比差异不显著;超排时反应强烈的个体，减少FSH剂量，以减轻卵巢肿大的情况，提高卵母细胞的回收。
77.高活性重组人溶菌酶在转基因猪乳腺中的高效表达
- 鲁丹;刘燊;商圣哲;吴芳芳;李秋艳;李宁
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：溶菌酶是一种天然的抗生素,该酶能通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4-糖苷键,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解,具有广谱的抗菌活性.同时,溶菌酶还具有抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、免疫调节等作用.仔猪腹泻是集约化猪场仔猪死亡的主要原因,为了解决仔猪腹泻,本文通过转基因技术,在猪乳腺中表达重组人溶菌酶,通过饲喂含有重组溶菌酶的乳汁来提高仔猪的抗病能力,以降低仔猪腹泻的发病率及死亡率,同时也降低抗生素滥用对人类自身安全造成的威胁.
78.玻璃化快速冷冻仪(Vit-Master)在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用研究
- 徐利;戴建军;吴彩凤;张树山;张廷宇;张德福
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,本研究采用半麦管法、Vit-Master-半麦管法两种冷冻方式冷冻猪MⅡ期卵母细胞，统计卵母细胞成活率，期望通过提高冷冻速率，降低冷冻保护剂的使用浓度来提高猪MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻效率。
79.纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响
- 韩晓;戴建军;张树山;张廷宇;吴彩风;张德福
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：在冷冻稀释液基础上分别添加体积分数为1％、5％、10％、15％、20％的纳米化红景天多糖溶液, 以添加6mg/L红景天多糖为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响.
80.暗腹雪鸡胃肠道不同部位需氧菌群分布的初步调查
- 马雪连;姜玲玲;姚刚
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文使用VITEK2 Compact全自动微生物分析鉴定仪和16SrRNA相结合的方法对暗腹雪鸡胃肠道(嗉囊、腺胃、十二指肠、回肠、盲肠)的3种菌群(大肠杆菌、葡萄球菌、肠球菌)进行测定,探讨暗腹雪鸡消化道菌群的分布规律.结果:3种菌群在盲肠内分布最多,其次为嗉囊,十二指肠;胃肠道内三种菌占比例从大到小依次为肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌.
81.伊犁河流域新垦区新疆褐牛育肥试验效果分析
- 张丽萍;任玉平;李学森;於建国;张学洲
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：新疆褐牛是经几十年培育而成的肉乳兼用牛品种，适宜在新疆牧区、半农半牧区和农区养殖。本试验选择12月龄新疆褐牛公牛，经4个月舍饲育肥、16个月出栏的标准化生产过程，研究新疆褐牛高效育肥技术及育肥效果，旨在缩短新疆褐牛的饲养周期，减少牛群对天然草地的压力。
82.毛囊特异性表达Cre酶基因载体的构建
- 王靖;李洋;连梦瑶;王彦凤;王志钢;刘东军
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文利用绵羊KAP6-1启动子构建毛囊特异性表达Cre酶的真核表达载体,为利用Cre/LoXP系统删除目的基因提供条件.研究表明：表达载体pIRES2-KAP6.1-Cre-EGFP可以在毛囊细胞中特异性表达Cre酶，进而利用Cre/LoxP系统在毛囊细胞中条件性删除阻遏毛囊生长周期的调控基因，促进毛囊发育及延长生长期，培育高转基因动物的产绒量。
83.手工克隆制备富含Omega-3的转基因家养动物新个体
- 马润林
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文通过手工克隆技术生产了127个重构胚胎，囊胚率为52.1士8.3%，且移植后能够得到克隆后代。在优化胚胎移植体系后，用转有mfat-I基因的供体细胞进行手工克隆，共获得1485个重构胚，体外培养六天后有558个发育成囊胚(囊胚率为37.6%);将其中408个囊胚移植到4头自然发情的受体后，有3头怀孕(怀孕率75%)并顺利分娩得到了14头存活的克隆猪后代，全部为转基因阳性。本文也通过手工克隆技术得到了稳定表达。-3去饱和酶的美利奴绵羊单细胞克隆，并以此为核供体细胞建立了绵羊的手工克隆体系，得到了925个重组克隆，其中约9%体外发育到囊胚。检测证明转基因羊肌肉等主要组织中Omega-3水平显著提高。检测发现，mfat-1以单拷贝顺式插入到绵羊第5号染色体CEP120基因第5个内含子内部，其结果是目标fat-1基因与housekeeping基因的表达均没有收到显著影响。
84.动物克隆技术引导的育种集成与草原生态畜牧业研究
- 李光鹏
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文阐述了草原生态畜牧业的含义。分析了在初步形成的赛诺一内大草原生态畜牧业发展模式中最关键的环节--良种选育与培育。以克隆技术、分子标记、遗传修饰技术为引导，以母羊同期发情技术、腹腔镜人工授精技术、胚胎生产与胚胎移植、多胎高产技术等高繁殖技术为主导，辅以羔羊高效育肥技术、放牧与舍饲结合、疾病防疫技术等，形成了赛诺一内大现代繁殖与育种集成技术体系。进而阐明了这一技术体系的优势。
85.转pMR-1和BMP4基因小鼠骨骼肌肌纤维形态比较分析
- 秦宁;徐日福;黄锐;单雪松;李莫南;徐慧;杨雨江
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：分别取转MR-1、pBMP4基因和pMR-1+pBMP4双基因小鼠的股二头肌和股四头肌组织进行肌纤维密度和直径测定、形态显微观察分析,为研究pMR-1基因和pBMP4基因调控肌肉纤维生长发育的作用,进而为转基因猪的制作提供参考数据.
86.奶山羊乳腺脂肪酸代谢相关miRNAs的功能分析
- 罗军
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：从miRNAs调控乳腺脂肪酸代谢的角度出发，通过Solexa测序技术获得西农萨能奶山羊乳腺组织miRNAs表达谱，并分析了山羊miRNAs序列特征。选择前30个高丰度miRNAs，检测其在乳腺组织不同阶段的表达水平，得到17个差异表达miRNAs。利用GO和KEGG软件预测miRNAs的功能，从差异表达miRNAs中筛选获得可能调控脂肪酸代谢的miR-27a/103/200a。利用腺病毒在山羊乳腺上皮细胞中进行miRNAs的过表达和抑制研究。发现miR-27a/103/200a过表达皆能在不同程度上影响细胞中脂滴和甘油三酷含量、脂肪酸含量和组成、脂肪酸代谢相关基因表达水平，证实miRNAs对山羊脂肪酸含量和组成具有重要的调控作用。
87.秦川牛背最长肌RNA序列分析
- 刘小林
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Introduction：In the long period of natural selection and artificial selection,people began to plant alfalfa for cattle feed on theGuanzhong Plain,the main production area of Qinchuan beef cattle.This resulted in tremendous improvements inQinchuan beef cattle,particularly in relation to its body size,work ability,and individual meat yield.Analysis of thebeef cattle transcriptome and its expression profile data are essential to extending the genetic information resourcesfor this species and would support studies on this animal.Materials and Methods：Using RNA-Seq,this study compared the transcriptomic landscapes of longissimus muscle from embryo at day 135 post fertilization versus 30-month-old adult cattle.Results：A total of 25605140 and 26214800 reads were sequenced for embryonic and adult pooled samples,respectively.We identified 24464-29994 novel transcript units in two pooled samples.In addition,8533一10144 genes showedevidence of alternative splicing,in agreement with the finding that alternative 3'splicing is the most common typeof alternative splicing event in cattle.We detected the expression levels of 16174 genes, and 6800 genes exhibiteddifferential expression between the two pooled samples with a false discovery rate≤0.001.Using GO enrichmentand ICEGG pathway analysis,multiple GO term and biological pathways were found to be significantly enrichedfor differentially expressed genes.In addition,we discovered that 30618-31334 putative single nucleotidepolymorphisms were located in coding regions.Discussion：A majority of the annotated transcripts in the Ensembl database were covered by sequenced reads,illustrating thesensitivity of RNA-seq for transcript discovery,even for genes expressed at low levels.We also found thatalternative 3'-end splicing is the most common type of alternative splicing event in cattle and that intron retention isthe least common alternative splicing mechanism.Our results are consistent with those of a similar pig study.However,these results contrast with those reported for humans and Holstein cows,where exon-skipping is the mostprevalent mechanism;the results also differ from those found for rice,forwhich intron retention is the primaryalternative splicing mode.
88.胚胎移植数量对于受体妊娠以及克隆羊出生效率的影响
- 刘国辉;陈建泉;徐旭俊;成国祥
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：在转基因克隆羊的研制过程中,如何提高存活克隆羊的出生效率是研究人员所关心的核心问题.而影响核移植受体妊娠及克隆胎儿的出生的因素有很多,其中每个受体移植的胚胎数量是很重要的一个因素.本文主要研究在转基因克隆羊的制备过程中,受体的胚胎移植数量对于其后的妊娠和产羔的影响.结果表明:在转基因克隆制备实验中,如果要进行1细胞期的胚胎移植,那么移植的数量应该在8-9枚比较好,具体情况还应视供核细胞支持胚胎发育的能力而定.
89.转基因山羊快速检测方法和转基因牛基因检测芯片研究
- 陶晨雨;刘榜
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：随着转基因动物的产业化发展,建立快速、简便的转基因成分检测方法是转基因动物及其产品安全评价的重要研究部分.本实验采用环介导等温扩增方法,分别建立了检测人乳铁蛋白基因和人溶菌酶基因扩增体系,对41个转人乳铁蛋白基因山羊样品和31个转人溶菌酶山羊样品进行了盲检检测,检测结果与预期一致.同时正在研发用于转人乳铁蛋白基因、人乳清蛋白基因、人溶菌酶基因转基因牛的纳米金基因芯片.
90.转录因子Bcl11a是淋巴细胞的发育与增殖的关键调控因子
- 张淑君
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Bcllla是一个C2H2锌指转录因。前期研究表明Bcllla对维持胚肝中淋巴细胞的正常发育是必需的;Bcllla敲除的胚肝缺失B淋巴细胞和产生不正常T淋巴细胞。由于Bcllla敲除的小鼠新生胎儿致死，为研究Bcllla在成年动物淋巴细胞生成中的作用及机制，本文构建了Bcllla的条件性敲除小鼠。本研究证明了Bcllla是淋巴细胞发育的重要调控因子，B淋巴细胞和CLPs的存活和增殖依赖于Bcllla。
91.半滑舌鳎基因组精细图谱构建及性别特异基因筛选
- 陈松林
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本文利用新一代测序技术完成了半滑舌蝎全基因组测序。基因组大小约为520Mb。采用3种基因预测方法预测半滑舌蝎基因数量为20,834，平均每个基因的编码区长度为1,535bp，平均每个基因含有9个外显子。采用新一代RAD-seq技术构建了半滑舌蝎高密度SNP遗传连锁图谱。父本和母本测序深度分别为16.8X和15.1X，基因组覆盖度达到92.8%和94.9%，筛选获得拟测交SNP位点894,373个，其中父本杂合位点407,084，母本杂合位点397,300，双亲杂合位点89,989，基因组覆盖度分别达到96.2%、96.4%和95.3%。对F1群体216个子代进行RAD测序，测序深度为0.4X。利用两个亲本全基因组重测序SNP信息以及F1群体后代216个个体的RAD-tag信息，从而得到后代个体的基因型数据，选择其中的3528个标记，构建了半滑舌蝎SNP高密度遗传连锁图谱，LOD阂值为10，构建了22个连锁群(常染色体20个，性染色体2个)，平均每个连锁群含有160个标记，标记间平均距离为0.568cM覆盖基因组422Mb。利用高密度遗传连锁图谱构建了半滑丙塌染色体基因组图谱。采用BAC克隆构建了半滑舌蝎物理图谱，将30294个BAC克隆组装成1485个Contig，其平均大小达到537kb.从W染色体序列上筛选到一些雌性特异基因，采用FISH技术将这些雌性特异基因定位在W染色体上，同时进行了这些雌性基因在不同组织和不同发育时期的表达分析、重组表达及其表达产物注射后对半滑舌蝎鱼苗性别相关基因的影响。
92.绵羊肉用性状全基因组关联分析
- 张莉
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：随着世界养羊业格局的变化，肉羊生产比重不断增加，绵羊肉用性状及其功能基因定位己成为肉羊分子育种研究热点。为了在全基因组范围内寻找和挖掘影响绵羊肉用性状的重要功能基因，本研究对苏尼特羊、德国肉用美利奴羊和杜泊羊共计329只绵羊的11个影响其肉用性状的数量性状开展全基因组关联分析。
93.转基因动物快速检测方法和转基因检测芯片研究
- 刘榜
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本实验采用环介导等温扩增方法，通过在线软件设计了2对引物，并优化了反应温度、时间、酶的用量等条件，建立了检测人乳铁蛋白基因和人溶菌酶基因的扩增体系，检出限为每微升10拷贝，是普通PCR的10倍。并对41个转人乳铁蛋白基因山羊样品和31个转人溶菌酶山羊进行了盲检检测，检测结果与预期一致。同时本实验室正在研发用于检测转人乳铁蛋白基因、人乳清蛋白基因、人溶菌酶基因转基因牛的纳米金基因芯片。根据这三个基因序列设计多重PCR引物及基因芯片的捕获探针和检测探针，己优化条件建立了三种外源基因的多重PCR体系。后续将对基因芯片、纳米金探针的制备及样品的盲检筛查进行研究。
94.动物基因组编辑技术进展
- 张智英
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：近几年，人工核酸酶技术的出现与完善显著提高了基因组编辑的效率。目前用于基因组编辑的人工核酸内切酶主要包括:锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)、TALE核酸酶(Transcriptionactivator-like effector nuclease.TALEN)和CRISPR/Cas技术。本文分别对三种基因组技术从技术特征、技术应用等方面进行了详细阐述。对CRISPR/CAS9系统在酵母中做了系统研究，为设计和优化CRISPR/CAS9动物基因组编辑系统提供了依据，建立和完善了基于CRISPR/Cas9技术的动物基因组编辑平台。
95.猪iPS细胞系建立及其作为核移植供核细胞的效果
- 刘忠华
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：iPS细胞的成功为获取多能性细胞提供了新的途径，也为探索细胞核重编程机制提供了新的视角。鉴于多能性细胞对于家畜育种以及生物医学模型建立等所具有的重要作用，以猪为代表的家畜iPS细胞建系和应用研究受到广泛的关注。本文在原有的猪iPS细胞建系研究成果基础上，本次研究对比了经典四因子和六因子诱导猪成纤维细胞获得iPS的效果，同时还比较了不同成纤维细胞系用于iPS建系的效率和用于核移植供核细胞的发育潜能，观察了iPS及其源头成纤维细胞作为核移植供核细胞后所获得重构胚的发育潜能。初步分析表明，外源基因的过量表达和无法及时沉默可能是造成iPS细胞作为核移植供核细胞导致胚胎发育率低下的主要原因。
96.miRNAs对雄性生殖干细胞增殖与分化的作用
- 华进联
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：Differential expression miRNAs were selected and confirmed by a series of techniques including miRNA deepsequencing,quantitative PCR and in situ hybridization.Results showed that miR-34c might be a mammalian malegerm cell specific miRNA,and it is pivotal in mESCs differentiation into male germ cells through its target- RARg.miR-34c promoted mGSCs to apoptosis and decreased their proliferation. Moreover,expression of miR-34c wasp53-dependent.Up-regulation of miR-34c was not due to P53 activation,but which might be caused by the up-regulation of Boule and Stra8 promoting the advance of meiosis.This study preliminarily provided a model to studythe mechanism of miRNAs on the development of mGSCs.
97.牛羊繁殖调控的分子机制研究进展
- 杨利国
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：繁殖是动物的主要经济性状之一，对单(少)胎动物而言尤为重要。本文从牛羊繁殖调控的分子机制与技术方面，阐述了与精子发生、超数排卵、胚胎发育相关的候选基因筛选；卵泡发育的分子调控机制；卵泡发育的分子调控技术。
98.利用慢病毒生产能够在输卵管特异性表达人的防御素HNP-4的转基因鸡
- 刘同欣;吴寒宇;曹代男;李庆原;李宁;胡晓湘
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本实验采用慢病毒方法制备转基因鸡，将重组的人源性的HNP4构建到用于包装慢病毒的质粒中，采用三质粒系统利用293FT细胞包装慢病毒，每个鸡胚注射1～2μl的病毒。同时在细胞水平上验证了所克隆的卵清蛋白启动子的活性及重组人源性HNP4的活性。本研究旨在利用转基因鸡在鸡的输卵管中特异性的表达人的a防御素HNP4，并探索该方法生产抗菌肤的可行性。
99.piggyBac转座子介导的基因捕获在转基因鸡研究中的应用
- 吴寒宇;李宁;胡晓湘
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本研究利用piggyBac转座子实现鸡全基因组的插入突变，制备突变体库，进行表型分析，基因定位，发现新的功能基因。实验以白来航鸡为实验用鸡，分别构建piggyBac转座子和转座酶阳性的生殖腺嵌合体鸡，筛选杂合子后代，然后进行杂交。得到转座子和转座酶双阳性的种鸡后，因为转座酶能特异性介导转座子在基因组中移动，产生新的转座子插入位点的鸡。这样通过不断交配，利用piggyBac转座子实现鸡全基因组的插入突变，制备突变体库，捕获功能基因，进行基因定位及表型分析，分析基因功能。
100.抗鸡传染性支气管炎病毒shRNA转基因鸡的研究
- 于坤;汪海;呼锐;韩红兵;连正兴
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》 | 2013年
摘要：本试验构建了M蛋白保守区基因的shRNA，利用慢病毒转染法生产了表达此shRNA的转基因鸡。Tg单核巨噬细胞在IBV感染后，产生了对病毒mRNA与蛋白的抑制作用，表明构建的RNAi对IBV感染有抑制作用。IBV的侵染并未引起Tg组单核巨噬细胞强烈的炎性反应与氧化损伤，并且IBV蛋白的表达显著低于WT组，表明RNAi抑制了IBV的复制，并对干扰的病毒进行了有效的清理。对G1代阳性鸡进行攻毒试验，GI代阳性个体的成活率显著升高:组织病理变化结果显示，Tg组肺组织无明显病理变化，偶见支气管管腔中有红细胞浸润。进一步证明了表达shRNA的转基因鸡在一定程度上抑制了IBV的复制。