组合策略促进碱性果胶酶在毕赤酵母中高效表达

摘要

本研究组合了基因密码子优化及分子伴侣共表达策略提高碱性果胶酶(PGL)在毕赤酵母中的胞外产量.基于Pichia pastoris密码子偏好性,优化了来源于Bacillus sp.WSHB04-02PGL高热稳定性突变体K314M基因,并克隆至pPIC9K的EcoR I-Not I得到PGL表达载体pPIC9K-PGL.pPIC9K-PGL转化Pichia pastoris GS115(his-)得到重组菌GS115/PGL14#,胞外PGL酶活达到301.32U/mL,较优化前提高25.1％.在此基础上,分别及同时共表达分子伴侣内质网蛋白折叠氧化还原辅助因子(ERO1)和泛素共轭酶(UBC1).结果显示,同时表达ERO1和UBC1(GS115/PGLl-ERO1-UBC12#)使重组菌胞外PGL较共表达前提高49.3％,达到450.12U/mL.应用指数流加策略对重组菌株GS115/PGLl-ERO1-UBC12#进行3L罐发酵,诱导发酵96h胞外PGL可达1362.31U/mL.研究结果对促进PGL产量的提升及其应用具有重要现实意义.