枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

摘要

将编码枯草芽孢杆菌AS1.398的中性蛋白酶功能区和包含前导区序列("pro"序列)在内的全长基因克隆到酵母整合型质粒pPIC9K中,电转化His4缺陷型巴斯德毕赤酵母SMD1168,通过MD-G418平板、PCR方法筛选和鉴定重组子.重组子发酵液经SDS-PAGE分析和酶活测定表明,枯草芽孢杆菌AS1.398的全长中性蛋白酶基因在毕赤酵母中获得了高效表达,表达产物分泌至培养基中,分子量约为43kD.经甲醇诱导培养后,发酵液中的中性蛋白酶活力达20000 U/mL.