酸性蛋白酶

摘要： 为解决白葡萄酒蛋白不稳定性问题,实现酸性蛋白酶的利用与酒精发酵的同步进行,本研究以酿酒酵母单倍体菌株BY4741和二倍体菌株82-9-35为宿主菌,通过酵母表面展示系统中的启动子和锚定蛋白的作用在酵母细胞表面表达酸性蛋白酶。将来源于宇佐美曲霉酸性蛋白酶基因(pepA)克隆,构建表达酸性蛋白酶的细胞展示盒,利用同源重组定点整合酸性蛋白酶基因到酿酒酵母的基因位点。经过PCR和测序验证,获得两株可细胞表面展示酸性蛋白酶的单倍体和二倍体的重组菌株,其最高酶活分别是285.71 U/mL和495.24 U/mL。本研究成功构建了利用酿酒酵母细胞壁蛋白SED1作为锚定蛋白的展示系统,为解决葡萄酒中蛋白浑浊的问题提供新思路,为实现pepA酸性蛋白酶全细胞催化剂工业化应用奠定理论基础。

摘要： 本研究拟制备2~3个氨基酸组成的鸡肉小肽,为鸡肉深加工和综合利用提供科学的方法和依据。试验采用4因素3水平正交试验设计,通过对中性蛋白酶和酸性蛋白酶的酶用量、时间、料液比、温度4个因素条件进行研究,确定最佳的鸡肉酶解小肽的工艺条件。结果表明:不同蛋白酶的酶解工艺条件对总氮(T-N)、游离氮(A-N)、水解度(DH)、氮回收率(NR)、平均肽链长度(APL)、肽平均分子质量(APM)指标均有影响。对各指标进行极差分析可知,酸性蛋白酶的酶解时间是决定DH、NR、APL和APM的主要影响因素;中性蛋白酶的酶解时间是决定DH、APL和APM的主要影响因素,而料液比是决定NR的主要影响因素。中性蛋白酶的酶解效果优于酸性蛋白酶,中性蛋白酶酶解2~3个氨基酸为主的最优酶解工艺条件为:酶用量1000 U/g,温度56°C,水解8 h,料液比1:2。

摘要： 为改善酸肉的生产工艺,研究商品化酸性蛋白酶对酸肉发酵过程中菌群结构、理化特性和风味品质的影响,利用高通量测序技术分析酸肉发酵过程中细菌和真菌群落组成。结果表明,蛋白酶的添加影响了酸肉发酵过程中乳杆菌、芽孢杆菌和葡萄球菌的相对丰度,降低了真菌的丰富度,并提高了酸肉中游离氨基酸总量。气相色谱-质谱分析结果表明,蛋白酶的添加提高了成熟酸肉中醇类、酸类、酯类、酮类和醛类物质的种类和含量。相关性分析结果显示葡萄球菌属与3-羟基-2-丁酮含量呈显著正相关,芽孢杆菌属与1-辛烯-3-醇含量呈显著正相关。感官评定结果表明,蛋白酶的添加提高了酸肉的滋味、气味和总体可接受度。因此,酸性蛋白酶对酸肉的菌群结构和风味品质具有重要影响,研究结果为改善酸肉生产工艺提供了理论依据。

摘要： 以高盐稀态发酵酱油为研究对象,以未添加酸性蛋白酶的样品为对照组(K),在酱油发酵初期(0 d)添加酸性蛋白酶(1‰)的样品为实验组(S),通过分析发酵过程(1~62 d)中酸性和中性蛋白酶活力、pH、总酸含量、氨基酸态氨含量和游离氨基酸含量的变化及生酱油的呈味氨基酸含量,考察添加外源酸性蛋白酶对酱油发酵的影响。结果表明,S组的酸性蛋白酶和中性蛋白酶活力分别为K组的2.9倍和2.1倍。发酵结束时,与K组相比,S组酱油的pH下降至4.50、总酸、氨基酸态氮含量分别增加36.71%、16.49%;游离氨基酸总含量降低13.64%,生酱油呈鲜味的谷氨酸含量由11.52 g/L降至1.26 g/L。表明酸性蛋白酶虽然能够提高原料利用率,但对酱油滋味也有一定影响。

摘要： 为研究日本曲霉酸性蛋白酶的分泌表达、性质及其在猪肉嫩化中的应用。将日本曲霉来源的酸性蛋白酶基因(Ajpro A1)在毕赤酵母中高效表达,经5 L发酵罐高密度发酵后测得该酸性蛋白酶酶活力为669.6 U·mL^(-1),蛋白质量浓度为6.64 mg·mL^(-1)。氨基酸多重序列比对结果表明:该酸性蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶A1家族,与海枣曲霉来源的酸性蛋白酶同源性最高(73%),是一个新型的酸性蛋白酶。采用强阴离子交换层析柱对该酸性蛋白酶进行纯化得到电泳级纯酶,纯化后分析测得该重组酸性蛋白酶(AjproA1)的最适催化条件为pH值3.0,反应温度为45°C,在pH值为3.0~6.0及温度为40°C以下具有良好的稳定性。该酸性蛋白酶对不同蛋白质水解的分析结果表明,该酶底物水解特异性广泛,对酪蛋白组分中的κ-酪蛋白表现出最高水解活力。利用该酸性蛋白酶对猪肉进行处理,发现该酶能够有效降低猪肉剪切力,起到嫩化效果。研究结果旨在为新型酸性蛋白酶的开发及其在肉类嫩化中的应用提供理论参考。

摘要： 酸性蛋白酶在工业生产中需求量巨大,但我国产酸性蛋白酶菌株的品种较为单一,因此,亟需开发新型的微生物源蛋白酶和选育高产蛋白酶菌种。从海口红树林土壤中筛选出一株可以在酸性环境下产蛋白酶的菌株,采用福林酚法测定蛋白酶活,经过形态学观察、生理生化实验及16S rRNA序列比对鉴定为深红沙雷氏菌。利用该菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥,通过种子萌发实验,研究发酵液的促生效果。结果显示,分离出的产酸性蛋白酶菌株R3可以用于鱼下脚料的发酵,在发酵液稀释5~25倍时,处理60 h均可以促进菜心种子的萌发,与市场购买的液肥效果相同。利用分离出的产酸性蛋白酶菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥,实现了对废弃鱼蛋白资源的重新利用,增加了鱼类产品的附加值。

摘要： 中国传统米酒酒药来源广泛,发酵特性各异。探究造成不同酒药发酵特性差异的关键因素,有助于控制米酒的生产,提升米酒产品的品质。该研究针对自然培养的2种不同类型米酒酒药,糖化型酒药和糖化发酵型酒药,通过对米酒发酵过程的控制以及酒药和发酵过程中发酵参数的分析比较,探讨可能造成不同酒药发酵特性差异的关键因素。相关性分析以及米酒控制发酵实验结果表明,虽然酒药中酿酒酵母的数量及其发酵特性对酒药的发酵性能非常重要,但是酒药的酸性蛋白酶活力对于控制米酒发酵特性可能更为关键。通过提高酒药的酸性蛋白酶活力,可以在发酵初期充分提供酵母生长所需的α-氨基氮进而影响酵母的增殖,提高其发酵力,甚至可以将糖化型酒药转变为糖化发酵型酒药。因此,酒药中酸性蛋白酶活力可能是一个预测酒药米酒发酵特性及酒药分类的重要指标。该研究结果为米酒酒药的分类以及米酒生产的控制提供了参考。

摘要： 本实验研究了酸性蛋白酶的添加方式和添加量对醋醅酸度和氨基酸态氮含量的影响.结果表明:在醋酸发酵阶段添加15 U/g糯米的酸性蛋白酶,醋醅酸度提高了1.33％,氨基酸态氮含量提高了40％.该方法方便实用,为镇江香醋的生产提供了一种优化方法.

摘要： 研究了化学-酶法提取小麦麸皮中的纤维素和膳食纤维素的生产工艺流程,并确立了采用乙醇脱脂、混合使用酸性蛋白酶与α-淀粉酶去除蛋白质和淀粉的工艺,该方法能有效除去小麦麸皮的脂蛋白和脂肪,为进一步深加工奠定基础。

摘要： 研究了化学-酶法提取小麦麸皮中的纤维素和膳食纤维素的生产工艺流程,并确立了采用乙醇脱脂、混合使用酸性蛋白酶与α-淀粉酶去除蛋白质和淀粉的工艺,该方法能有效除去小麦麸皮的脂蛋白和脂肪,为进一步深加工奠定基础.

摘要： 选用还原剂TCEP(三羧乙基膦)作为打开二硫键的试剂,与酸性蛋白酶同浴处理羊毛.采用正交法设计酸性蛋白酶羊毛细化改性实验方案,确定了主要影响因素及水平,实验结果表明:影响羊毛强力和细度的主要因素是TCEP与蛋白酶的用量.而pH值与时间对细度与强力的影响不大.最佳处理工艺为:用量分别为2％(o.w.f)的TCEP与酸性蛋白酶,50°C处理90min.经过该工艺处理后的66支国产羊毛,细度下降1.393μm,强力保留71.2％.

摘要： 探讨酒用酸性蛋白酶在酒精行业中的推广应用.通过小试及生产实践表明,使用酸性蛋白酶释放玉米中被包裹的淀粉,降低残淀粉,提高酒精产率,酸性蛋白酶水解玉米中的蛋白,被酵母充分利用,酵母繁殖旺盛,通过酵母的菌群优势抑制了杂菌生成,减少副反应的发生.

摘要： 基于基因组重组技术选育高活力酸性蛋白酶融合子。将双亲灭活后的原生质体经电融合、初筛和复筛，挑出48株较亲本A.oryzae HN3042种曲发酵液酸性蛋白酶活力有不同程度提高的融合子，其中F76较亲本提高了82.19%。传代实验证明融合株酸性蛋白酶活力稳定，酶系分布均衡，表明融合株F76有良好的工业化应用前景。

摘要： 蔗糖酯中的蔗糖-6-乙酸酯是原酸酯法合成三氯蔗糖的重要中间体。而三氯蔗糖是一种新型非营养型甜味剂，市场前景广阔。因此，对于蔗糖-6-乙酸酯的合成进行研究具有广阔的应用前景。为了探索酶催化选择性合成蔗糖-6-乙酸酯的反应体系及工艺参数，本论文探索了微水相体系中酸性蛋白酶催化蔗糖与乙酸乙烯酯的转酯化反应。得到了酯化能力和选择性都较好的反应介质：四氢呋喃/醋酸-醋酸钠缓冲液体系，pH为5.4，离子浓度为0.3mol/L，其中缓冲液体积含量为3％，反应温度为40|°C，反应时间14h,低物摩尔比(乙酸乙烯酯：蔗糖)9，酶量2.94×103u/g蔗糖，每0.68g蔗糖可得蔗糖乙酸酯30.46×10-3g，蔗糖-6-乙酸酯占总酯的比例可达61.58％。

摘要： 本文就测定饲用酶添加剂预混料中酸性蛋白酶的活力进行了探讨,并就试验方法的适用性以及影响酶活力测定的因素进行了试验论证.结果表明:回收率低,不适合于饲用酶添加剂预混料中酸性蛋白酶活力的测定；其他酶的存在不会影响酸性蛋白酶的活力测定；载体对酸性蛋白酶有较强的吸附力,结果导致回收率偏低；改进方法避免了载体吸附造成的回收率低的因素,回收率由原方法的70%左右提高到了93%以上.

摘要： 酸性蛋白酶可以在酸性环境下水解蛋白质,自1954年吉田首次发现黑曲霉可以产生酸性蛋白酶以来,国内外对微生物发酵生产酸性蛋白酶进行了广泛而深入的研究.本文对红曲霉和几种常见曲霉产酸性蛋白酶的酶学特性做了对比.

摘要： 为研究黑曲霉Asp.nigerSL2-111所产酸性蛋白酶的结构与功能之间的关系,采用NBS、PCMB、N-AI、DTT、Acetylacetone、MA、BrAc、CDC等8种化学修饰剂处理纯化的酸性蛋白酶,然后检测残余酶活力,借以研究酸性蛋白酶分子中氨基酸侧链基因与该酶活性中心之间的关系.研究结果表明氨基、巯基、精氨酸残基和羧基与酶活性无关:而色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基以及二硫键的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降,说明色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基以及二硫键是酶活力所必需的基团。

摘要： 目前，国内外玉米淀粉生产主要采用湿法加工工艺，为了降解包裹淀粉颗粒的蛋白质，在浸泡过程中使用了SO2，对环境造成污染；同时，该工艺浸泡时间较长（浸泡48~72 小时），能源消耗较大。利用生物技术手段探讨缩短浸泡时间和替代SO2的新工艺是提升该产业的有益尝试。本文采用二步微生物发酵法对玉米浸泡工艺进行了关键技术的改进。首先从淀粉生产车间的玉米浸泡水中筛选出耐50°C高温的嗜热乳酸菌，经发酵培养后，以一定比例添加到浸泡水中，缩短了浸泡初期玉米籽粒细胞破壁时间；然后从土壤中筛选出产酸性蛋白酶的烟曲霉，经发酵培养后在第二阶段以一定浓度添加到浸泡水中，用以替代传统工艺的SO2。经优化研究确定新工艺的浸泡条件为：第一步，浸泡水温度50°C，嗜热乳酸菌接种量10%，发酵浸泡玉米时间12h；第二步，烟曲霉发酵液添加量12%，浸泡时间10h。改进后的新工艺不添加SO2，减少了环境污染，使浸泡时间缩短至22h，降低了能源消耗和生产成本，具有广泛的应用前景。

摘要： 本文通过模拟动物摄食后胃肠道内环境的条件,对不同厂家的木聚糖酶进行耐酸和耐胃蛋白酶稳性试验.结果表明:在pH4.0,40°C保温2h后,不同的样品酶活性变化较大,损失最少的为33.4﹪,最大的达98.2﹪;经过pH4.0,每克木聚糖酶中添加的酸性蛋白酶为5000U,40°C保温2h后,木聚糖酶的活性进一步降低,但损失低于耐酸试验对酶活的影响.

摘要： 在传统酿酒工艺中,原料中蛋白质的含量及蛋白质的利用率在很大程度上决定了白酒的特征和品质,因而近年来日益受到重视.原料中蛋白质的分解程度和以氨基酸为前体合成各种白酒香气成分成为白酒行业研究的热点.利用蛋白质的分解代谢理论指导传统酿酒工艺,使得原料中的蛋白质充分利用,从而节约成本、提高白酒品质、增加经济效益.

摘要： 本发明的目的是提供一种产角蛋白酶的宇佐美曲霉及其发酵产酶方法。与其他方法相比，用该方法发酵生产角蛋白酶的原料更廉价易得，发酵方法简单。

摘要： 本发明提供了一种利用酸性蛋白酶酶解鲨鱼皮胶原蛋白制备的抗氧化多肽，以鲨鱼皮胶原蛋白为原料，通过对酸性蛋白酶的酶解，分离纯化得到特异性抗氧化多肽，其氨基酸全序列为：Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly。本发明消除了天然抗氧化剂所具有的缺陷并且消除了公众对人工合成抗氧化剂的忧虑，为开发基于食品源的抗氧化多肽以及探索其在食品、医学上的广泛应用奠定理论基础。

摘要： 本发明属于蛋白纯化领域，具体公开了一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α‑淀粉酶的方法。首先采用硫酸铵盐析的方法确定每种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度，而后将各梯度的饱和酶液经透析后上柱于Q Beads 6 FF阴离子柱，再用50‑400mM的NaCl溶液梯度洗脱，流速控制在1‑5mL/min，收集各组分酶液浓缩测定其蛋白含量和酶活，最后进行SDS‑PAGE电泳确定纯化效果。

摘要： 本发明公开了一种高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在白酒酿造中的应用，所述亮白曲霉已于2014年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号是CGMCC No.8900。所述菌株能够同时高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶，属于微生物和发酵工程领域。经固态制曲，可以高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，使用该霉菌可以提高白酒的出酒率并保持较好的风味。

摘要： 本发明公开了一种高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶的塔宾曲霉及其在白酒酿造中的应用，所述塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)已于2014年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号是CGMCC No.8899。所述菌株能够同时高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶，属于微生物和发酵工程领域。曲霉经固态制曲，可以高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，使用该霉菌可以提高白酒的出酒率并保持较好的风味。

摘要： 本发明涉及蛋白纯化技术领域，且公开了一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，该方法采用硫酸铵盐析以及Q Beads 6FF阴离子层析来进行三种蛋白的纯化，该蛋白纯化技术通过下述步骤进行：通过硫酸铵盐析的方法确定三种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度；将50％硫酸铵盐析出的蛋白与50％硫酸铵除杂后补至80％硫酸铵盐析出的蛋白分别上柱于QBeads 6FF阴离子交换柱，再用50‑400mM的NaCl溶液洗脱，收集各组分的洗脱液，进行蛋白浓度和酶活的测定；本发明所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，最终使得脂肪酶纯化倍数提高63.24倍，酸性蛋白酶10.33倍，碱性蛋白酶31.69倍。

摘要： 本发明提供了一种利用酸性蛋白酶酶解鲨鱼皮胶原蛋白制备的抗氧化多肽，以鲨鱼皮胶原蛋白为原料，通过对酸性蛋白酶的酶解，分离纯化得到特异性抗氧化多肽，其氨基酸全序列为：Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Ala-Ala-Gly。本发明消除了天然抗氧化剂所具有的缺陷并且消除了公众对人工合成抗氧化剂的忧虑，为开发基于食品源的抗氧化多肽以及探索其在食品、医学上的广泛应用奠定理论基础。

摘要： 本发明属于蛋白纯化领域，具体公开了一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶、α‑淀粉酶的方法。首先采用硫酸铵盐析的方法确定每种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度，而后将各梯度的饱和酶液经透析后上柱于Q Beads 6 FF阴离子柱，再用50‑400mM的NaCl溶液梯度洗脱，流速控制在1‑5mL/min，收集各组分酶液浓缩测定其蛋白含量和酶活，最后进行SDS‑PAGE电泳确定纯化效果。

摘要： 本发明公开了一种高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在白酒酿造中的应用，所述亮白曲霉已于2014年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号是CGMCC No.8900。所述菌株能够同时高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，属于微生物和发酵工程领域。经固态制曲，可以高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，使用该霉菌可以提高白酒的出酒率并保持较好的风味。

摘要： 本发明公开了一种高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的塔宾曲霉及其在白酒酿造中的应用，所述塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)已于2014年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号是CGMCC No.8899。所述菌株能够同时高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，属于微生物和发酵工程领域。两株曲霉经固态制曲，可以高产糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒酿造中淀粉和蛋白的利用率，使用该霉菌可以提高白酒的出酒率并保持较好的风味。