摘要：光合细菌LH2是一种外周天线色素蛋白复合体,属于膜结合的色素蛋白复合体,主要功能是吸收光能并将捕获的光能传递给光反应中心(RC).它主要由α、β蛋白亚基及类胡萝卜色素、细菌叶绿素等捕光色素构成.其中类胡萝卜素分子在捕获和传递光能、进行光保护以及对色素蛋白超分子复合物结构的稳定起着重要的作用.基于类胡萝卜素在光合作用中的重要作用及光合作用产生的能量与还原力对产氢的重要影响,为此,采用高速离心的方法,对光合细菌R7(Rhodobactersp.)外周天线色素蛋白复合体LH2进行了纯化研究,以期为外周天线色素蛋白复合体LH2结合的类胡萝卜素与能量代谢及还原力产生关系的研究奠定试验基础.光合细菌R7菌株2000-30001ux光照厌氧培养,离心收集菌体,生理盐水洗涤后,悬浮于10mmol/LTris-HCl,Ph8.0缓冲液,溶菌酶并结合超声波破壁;10000g离心,收集上清,加入终浓度分别为1％、0.1％的LDAO(十二烷基胺氧化物)和NaCl增溶;22000g高速离心,收集上清30-50％(NH4)2SO4分级盐析,收集50％盐析组分.经DEAE-cellulose32柱层析,NaCl连续梯度洗脱,50％盐析组分出现5个蛋白洗脱峰,200-1000nm全波长扫描分析各蛋白洗脱峰,第4个蛋白洗脱峰流分分别在280nm、375nm、423nm、458nm、480nm、512nm、590nm、800nm、850nm共出现9个吸收峰,其中423nm、458nm、480nm、512nm为类胡萝卜素的特征吸收峰;经PAGE电泳分析显示为单一蛋白条带,PAGE-SDA电泳显示为相邻的两条蛋白带,结果表明:该流分为LH2,纯度达电泳纯,其含有分子量相近的两类亚基;进一步对纯化色素蛋白复合体进行荧光光谱分析,该复合体在480nm和512nm被激发,可产生峰位为800nm和850nm荧光发射光谱,800nm激发时,可产生峰位为850nm荧光发射光谱,该结果进一步显示:该流分为LH2,并具有480nm、512nm和800nm能量传递活性及复合体结构的完整性.
