人源超氧化物歧化酶基因突变及在大肠杆菌中表达

摘要

目的:在克隆人源铜锌超氧化物歧化酶基因(hCu,Zn-SOD)的基础上,对hCu,Zn-SOD进行定点突变,使其在E.coliDH5α中表达,为进一步改造hCu,Zn-SOD基因奠定基础. 方法:首先构建质粒pESOD,然后用定点突变技术把其中hCu,Zn-SOD的Cys111密码子突变为Ala111密码子,再与pUCMT1相连接,构建表达载体pESODT111,使其在E.coliDH5α中表达,表达产物用改良的邻苯三酚法和Western杂交测定. 结果:hCu,Zn-SOD突变后在E.coliDH5α中成功表达,表达产物具有SOD活性,活力为16.447U/mL培养液. 结论:hCu,Zn-SOD基因经过定点突变后构建的表达载体可在DH5α中表达,表达产物同样具有天然的hCu,Zn-SOD活性。