蛋白酶

摘要： 采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)法分析人血清中的硒酸盐(Se(Ⅵ))、亚硒酸盐(Se(Ⅳ))、硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)等5种硒形态。血清样品经蛋白酶超声水浴酶解后,ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离,以10 mmol/L柠檬酸和5 mmol/L己烷磺酸钠(含1%甲醇,pH 4.0)为流动相,等度洗脱。结果表明:10 min内即可实现5种硒形态的有效分离,线性范围为0.0~100.0μg/L,相关系数(r)均大于0.999,检出限在0.05~0.2μg/L之间;对添加3个浓度水平的5种硒形态混合标准溶液进行加标回收实验,正常血清中Se(Ⅳ)的加标回收率在35.1%~39.3%之间,去除大分子蛋白后的人血清中Se(Ⅳ)的加标回收率在87.9%~90.0%之间,正常人血清和去除大分子蛋白后的人血清中SeCys_(2)的加标回收率在57.7%~72.5%之间,Se(Ⅵ)、MeSeCys、SeMet的加标回收率均在80%~120%之间;采用不同浓度水平的测试精密度考察方法的重复性,5种硒形态的相对标准偏差(RSD)均小于5%。人血清中的硒形态主要以硒代胱氨酸为主,其次为硒代蛋氨酸,还有少量的无机硒和未知硒化合物,血清中含有的大分子蛋白可能会与Se(Ⅳ)结合,导致Se(Ⅳ)加标回收率偏低。

摘要： 从含废弃物土壤中分离筛选出一株同时产蛋白酶和纤维素酶的放线菌,并对其产酶活力进行测定,采用形态学和分子生物学对筛选菌株进行菌种鉴定。结果表明,筛选出的高产蛋白酶和纤维素酶的菌株GT-B-S001为嗜热一氧化碳链霉菌,该菌株产蛋白酶活力为161.3U/毫升、产纤维素酶活力为135.5U/亳升。GT-B-S001有较强的产蛋白酶和纤维素酶的能力,具有较好的应用前景。

摘要： 为得到具有实际应用价值的高效产蛋白酶菌株,以甘肃省夏河地区深度20~30 m处的土样为基质,以菌株生长出的透明水解圈直径大小与菌落大小之比为基础,进行菌株产蛋白酶的活力测定,从而筛选得到优良菌株。结果表明,自甘肃夏河土壤中分离得到的编号为NWMCC0320的菌株产酶活力最高,为114.21 U/mL;经多种有效的菌株鉴定法可知,此菌株属于苏云金芽孢杆菌属(Bacillus thuringiensis);将该菌株的单菌落置于液体发酵培养基中,在温度50°C、pH值9.5的碱性条件下表现较高的酶活性;经优化培养,该菌株产蛋白酶最高时条件为温度35°C、pH值8.5、碳源葡萄糖2%、氮源蛋白胨3%,酶活可达到388.34 U/mL。试验可为NWMCC0320菌株在饲料工业等方面生产碱性蛋白酶提供参考。

摘要： 试验旨在研究蛋白酶在低蛋白饲粮中对肉鸡生长性能、屠宰性能、养分消化率、氨基酸消化率和消化酶活性的影响。将324只1日龄AA白羽肉仔鸡按照体重相近、公母各半原则随机分为3组,每组6个重复,每个重复18只鸡。对照组饲粮前期粗蛋白质(CP)23%、后期CP 20%;低蛋白组饲粮前期CP 21%、后期CP 18%;低蛋白加酶组饲粮前期CP 21%、后期CP 18%,并添加500 mg/kg蛋白酶(酶活性30000 U/g)。试验期42 d。结果表明:与低蛋白组相比,低蛋白加酶组的末重和平均日增重均提高(P<0.05),且与对照组差异不显著;与低蛋白组相比,低蛋白加酶组胸肌率和腿肌率提高(P<0.05)。CP、粗脂肪、粗灰分、磷及精氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸的表观消化率均提高(P<0.05),十二指肠内胰蛋白酶和淀粉酶活性增强(P<0.05)。综上所述,降低饲粮蛋白质水平2个百分点并添加500 mg/kg的蛋白酶能够改善肉仔鸡生长性能,使其达到正常蛋白饲粮饲喂水平。

摘要： 选用碱性蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶水解香菇粉,研究不同蛋白酶对香菇酶解液的水解度、营养成分、感官评价和挥发性风味物质的影响。结果表明,随着酶解时间的延长,三种酶解液的水解度先升高后降低,风味蛋白酶酶解4 h的酶解液水解度最高,达到26.03%;酶解液的可溶性蛋白质含量、多糖含量及鲜味和香菇特征风味在酶解过程中的变化趋势与水解度类似,其中碱性蛋白酶酶解液多糖含量较高、苦味最明显,风味蛋白酶酶解液可溶性蛋白质含量较高、苦味整体最弱,4 h的酶解液的整体感官评分最高,为22.80分。气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析三种蛋白酶解液共检出30种挥发性风味物质,其中含硫化合物相对含量占绝对优势,均高达90%以上,对风味的贡献最大;醛类物质种类最多,含量仅次于含硫化合物,其中风味蛋白酶解液中醛类物质相对含量最高。因此,风味蛋白酶酶解液水解度、营养成分更高,且整体风味更好。

摘要： 慢性阻塞性肺疾病(COPD)已成为人类健康第三大杀手,迫切需要深入研究揭示其病理分子机制及防治药物。一般COPD分为稳定期及急性加重期COPD(AECOPD),目前在该领域尚未有统一的COPD、AECOPD动物模型造模方法。通过查阅近年来各类与COPD、AECOPD动物模型相关的文献,从单因素诱导方法和复合因素诱导方法两个方面综述几种比较常用的COPD、AECOPD动物模型造模方法,并简述其造模机制、方法及一些优缺点,为COPD动物模型建立和完善提供参考。

摘要： 目的:探究酶种类对胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。方法:从大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼皮中提取胶原蛋白,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白,得到碱性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(APP)、中性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(NPP)、木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白肽(PP)、胰蛋白酶酶解胶原蛋白肽(TP),比较其总抗氧化活性、还原活性、对DPPH·、·OH和O_(2)^(-)·清除能力以及亚铁离子螯合能力和脂质氧化抑制活性。结果:4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽都具有抗氧化活性,且抗氧化能力与胶原蛋白肽浓度呈正相关,其中APP的抗氧化活性最佳,总抗氧化活性和还原活性分别为1.725和0.958,对DPPH·和O_(2)^(-)·清除率分别为56.35%和38.41%。结论:碱性蛋白酶酶解的胶原蛋白肽抗氧化活性更佳。

摘要： 为了探讨利用微生物发酵厨余垃圾产酶的最佳条件,实现厨余垃圾高值资源化,选取米曲霉为试验菌种,基于米曲霉BNCC142787(简称“米曲霉B”)、米曲霉CGMCC3.4427(简称“米曲霉C”)的生长特性解析,研究不同培养方式(静置、振荡)和培养温度(30、35、40°C)对米曲霉好氧发酵厨余垃圾产酶性能的影响.结果表明:米曲霉B和米曲霉C分别在30°C和40°C、pH为6的培养条件下生长最佳;与静置培养相比,振荡培养可显著提高米曲霉菌丝体的形成和生长速率,促进淀粉酶和蛋白酶分泌.米曲霉B在40°C下厨余垃圾好氧发酵48 h时蛋白酶活性最高,为66.64 U/g;在30°C下好氧发酵48 h时,其淀粉酶活性最佳,为129.44 U/g.米曲霉C在40°C下、厨余垃圾好氧发酵96 h时蛋白质酶和淀粉酶活性均达到最高,分别为64.02和131.11 U/g.研究显示,米曲霉B和米曲霉C产生蛋白酶与淀粉酶的能力相当,但米曲霉B生长速率快,所需发酵时间短,可在温和的条件下实现产酶,因此采用米曲霉B在40°C、好氧发酵48 h条件下进行酶源制备,可充分利用厨余垃圾中的营养物质获得富含淀粉酶和蛋白酶的产物,具有显著的应用潜力.

摘要： 选用脂肪酶Lipase G“Amano”50和蛋白酶Protease M“Amano”SD分步水解黄油制备天然咸奶味香基。结果表明,以乳清粉为辅底物,当酶解温度为45°C,反应体系pH为6.5,脂肪酶Lipase G“Amano”50的添加量为1.5%,酶解时间为5 h,蛋白酶Protease M“Amano”SD添加量为0.15%,酶解时间为7 h时,所得奶香基料具有浓郁、愉悦的咸奶香味。将此奶香基料用于饼干制作,可赋予饼干浓郁的咸奶风味,回味悠长,说明其具有良好的耐温性。

摘要： 《生物化学杂志》(Journal of Biological Chemistry,JBC)一直是传播和记录蛋白酶发现和特性的主要载体。1971-2010年,在Herb Tabor博士担任JBC主编期间,蛋白酶领域的研究取得了快速的发展。当他开始任职时,只有少数蛋白酶的精细结构和动力学为人所知。现在,人们已对数千种蛋白酶进行了鉴定,在人类基因组中发现了600多个蛋白酶基因。本综述除了回顾Herb Tabor博士对JBC以及美国生物化学和分子生物学学会(American society for biochemistry and molecular biology,ASBMB)在蛋白酶研究中所起的可贵贡献外,笔者还尽力概述了蛋白酶领域的研究历史,重点介绍了在蛋白酶研究过程中的一些发现及其在动物体内的作用。此外,本综述还讨论了金属蛋白酶,特别是龙虾肽酶家族中穿膜肽酶(meprin)的结构特征、调控、作用机制以及在动物健康和疾病中的作用。蛋白酶和蛋白质降解作用在生命系统中起着至关重要的作用,笔者还简要介绍了这一高度多样化和蓬勃发展的研究领域的未来方向。

摘要： 本文从土壤中筛选得到一株高产蛋白酶的菌株CAUH83,经鉴定为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).对该菌进行单因素优化,获得该菌株液体发酵产酶的最适发酵条件为:大豆粉(25g/L)、蔗糖(30g/L)、初始pH6.0、培养温度30°C、培养时间48h.在此发酵条件下,该菌株产蛋白酶酶活力达到1932.3U/mL.经过优化,该菌的蛋白酶活力提高15.3倍,具有很大的工业应用前景。

摘要： 蛋白酶作为一种生物催化剂,在生物体内几乎参与催化所有的物质转化过程,与生命活动密切相关.蛋白酶因其独特的催化能力也被广泛应用于工业生物催化和医疗应用等方面.然而天然存在的蛋白酶的活性,特异性以及稳定性并没有达到工业和医疗应用上的要求,使得蛋白酶的应用受到了极大的限制.

摘要： 筛选到一株高产蛋白酶的菌株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CAU342A,经优化后其液体发酵产蛋白酶活力高达2653.5U/mL.蛋白酶经硫酸铵沉淀、DEAE52弱阴离子交换层析和S-100凝胶过滤层析得到纯化,分子量为32.2kDa.纯化后的蛋白酶比活为8477.4U/mg,最适pH为9.0,最适温度为55°C.该酶对植物蛋白较好的水解能力使其在酱油生产中具有很强的应用潜力.

摘要： 作为动物本身可以分泌的内源酶的一种——蛋白酶,由于其特殊性、复杂性,一直以来都是作为复合酶的一个组分被使用.近年来由于养殖者对动物生产最大潜能的开发、蛋白原料价格的上涨以及由简单日粮向复杂日粮的转变,科研工作者对于单一蛋白酶和复合蛋白酶的研究也日渐增多.蛋白酶针对蛋白质中的肽键进行水解,最终的产物是氨基酸.因此,外加蛋白酶改善动物生长性能的前提主要是其能否对动物氨基酸消化利用率产生有利影响.文章主要综述了近年来关于蛋白酶对单胃动物氨基酸消化率方面的研究进展,以期与读者共享并揭开蛋白酶的神秘面纱.

摘要： 为评价不同蛋白酶水解蜂王浆蛋白的效果,本研究以常用于生化试验的蛋白酶K为试验用酶,对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及水解产物稳定性进行了研究.结果显示,蛋白酶K水解蜂王浆的最佳条件为温度55°C,pH=7.5,酶添加量60μg/mL,氯化钙添加量0.01mol/L,反应时间4h,水溶性蛋白质提取率为31.03％;蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的产物在酸、碱、热条件下能够保持较高的稳定性.蛋白酶K水解蜂王浆的效果介于植物性蛋白酶及动物性蛋白酶之间,可用于生产富钙型的水溶性蜂王浆.

摘要： 蛋白酶在饲料中的添加使用非常普遍,蛋白酶能够更好的消化饲料中粗蛋白,提高蛋白消化利用率,提升饲料营养价值,改善料肉比,提高动物生产性能.目前市场上存在国内和国外不同厂家的多种蛋白酶产品,本实验以从市场获取的四种蛋白酶产品为研究对象,由于四种蛋白酶产品的价格和推荐添加量接近,本实验按照在饲料中相同添加比例的方式,进行体外模拟消化豆粕试验,来研究对比四种蛋白酶对豆粕的分解效果.

摘要： 中国的水产养殖和水产饲料仍然处在快速发展期，对于优质蛋白原料，特别是鱼粉这类资源还存在持续性的需求。但是由于鱼粉产量的下降，寻找科学合理、可以长期使用的解决方案势在必行。外源性酶制剂已经在商品饲料行业应用数十年，蛋白酶通过提高饲料原料的消化率、分解抗营养因子和改善肠道环境来增加原料的营养价值，节约饲料成本;同时，蛋白酶还有巨大的社会效益，通过提高氮元素的利用，降低了向水体中的氨氮排放，减轻了水产养殖造成的水体富营养等一系列环境问题。酶制剂具有高效性与底物特异性，数十年的研究也让人们对蛋白酶的使用和底物的选择有了更加深刻的理解，通过技术的创新和广泛的应用，今天，在畜禽上可以精准预测蛋白酶的营养贡献，使用蛋白酶已成为成熟高效的解决方案。蛋白酶凭借卓越的耐热性能和突出的提升消化率的功效，成为很多配方师应对高价鱼粉的解决方案，也是国内的水产饲料蛋白酶领域的领跑者。随着对于降低成本与环境保护的需求逐步强烈，蛋白酶在水产饲料中的应用会愈加成熟，愈加广泛。

摘要： 利用蛋白酶对兔毛纤维外层的鳞片游离缘的作用,促进H2O2氧化剂向毛干内渗透,增强褪色效果且缩短漂白处理时间,减少氧化剂对毛的损伤.优选三种常用蛋白酶辅助兔皮漂白,通过对比漂白后兔皮的白度、兔毛的纤维强度、毛纤维鳞片层的表观结构等,结果表明角蛋白酶辅助效果较好.同时对蛋白酶预处理代替传统媒染工序进行了研究,确定其与H2O2同浴时最优用量为0.5g/L,漂白时间为2h.

摘要： 目的：研究超声波辅助蛋白酶酶解制备抑制葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺方法. 方法：以冷榨花生蛋白粉为原料,以底物浓度、pH值、加酶量、温度、时间、超声波功率为考察因素,以α-葡萄糖苷酶抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面的Box-Benhnken实验设计进行工艺优化. 结果：超声波辅助蛋白酶酶解制备的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物的最优工艺条件为底物浓度11.13％、pH值9.45、加酶量1.2％、温度42°C、时间44min、超声波功率1200W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制率的响应面模型预测值为91.07％,验证实验的抑制率为(88.70±0.63)％,与模型预测值相差2.60％,说明模型与实际情况拟合较好,验证了预测模型的正确性. 结论：响应面法对超声波辅助蛋白酶解制备抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺条件参数优化是可行的,得到的工艺条件具有实际应用价值.

摘要： 本研究采用天然发酵和单一接种发酵制备了五种不同的菠萝酵素,并对菠萝酵素生物活性进行了评价.研究发现,随着时间增长,蛋白酶和SOD酶活性以及总酚含量均增加至一定的峰值,后下降或趋于平稳.其中接种干酪乳杆菌的菠萝酵素的蛋白酶活性于35d达到最高(5.68U/mL),接种嗜酸乳杆菌的菠萝酵素的SOD酶活性于40d达到最高(60.82U/mL),而几种酵素总酚含量没有显著差异,均于40d达到峰值(最高达到662.80mg/mL).经模拟消化后,菠萝酵素中蛋白酶和SOD酶活性以及总酚含量均降低.另外研究发现菠萝酵素具有ACE抑制活性.本研究表明嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌比较适宜菠萝酵素的发酵;菠萝酵素具有促进血液循环、清除体内自由基、以及潜在的促进降血压功效.

摘要： 本发明提供新型蛋白酶、编码该蛋白酶的DNA、蛋白酶的制备方法。蛋白酶具有以下①和②所示的性质：①分子量为21,000±1,000(SDS-PAGE测定)，②具有将含有以下所示的氨基酸序列(1)的肽或蛋白质在Gly-Phe位点切断，将含有氨基酸序列(2)的肽或蛋白质在Gly-Phe位点切断，将含有氨基酸序列(3)的肽或蛋白质在Ser-Leu位点切断的特异性蛋白酶活性。Pro-Gln-

摘要： 提供一种用于抑制弹性蛋白酶的口服组合物及其应用、弹性蛋白酶抑制剂、以及口服摄入弹性蛋白酶抑制剂的弹性蛋白酶活性抑制方法，所述口服组合物用于使因紫外线、活性氧等外在因素、生物体的代谢功能降低等而产生的生物体组织中的弹性蛋白的降低恢复、改善皮肤的衰老症状等。一种用于抑制弹性蛋白酶的组合物，其特征在于，含有咖啡黄葵(Abelmoschusesculentus)的种子的加工物或来源于咖啡黄葵的种子的特定化合物作为有效成分。

摘要： 本发明公开了一种测定糜蛋白酶或胰蛋白酶或弹性蛋白酶或胃蛋白酶活力的方法，本发明以酪蛋白为底物，分别加入各酶催化，用三氯乙酸终止酶催化反应并与剩余底物相互作用形成缔合微粒使得共振散射强度急剧加强，据此建立了一个测定糜蛋白酶或胰蛋白酶或弹性蛋白酶或胃蛋白酶活力的方法，酶活力浓度——共振散射校正值曲线算出。本发明的优点在于：与现有的方法相比，本方法将酶催化反应与共振散射光谱结合起来，分析灵敏度高，选择性好，检测限低，操作简便，并且所用试剂无毒安全。

摘要： 本发明涉及获得单体形式的重组凝血酶原激活蛋白酶(rLopap)的方法；重组凝血酶原激活蛋白酶(rLOPAP)及其氨基酸序列。此外，本发明还涉及这种蛋白酶用于消除血液纤维蛋白原以及用作凝血酶原血异常诊断试剂盒的用途。本发明描述了21kDa的重组形式的凝血酶原激活蛋白酶的获得和表征，该蛋白酶被命名为rLopap(Lonomiaobliqua凝血酶原激活蛋白酶)，具有丝氨酸蛋白酶特征，不过它显示出如同lipocalin家族的保守氨基酸序列。该蛋白表现出促凝血活性，消除血液中的血纤维蛋白原并延长人血液/血浆的凝固时间。本发明介绍了重组形式的rLopap的获得，该rLopap显示出足够的活性以便进行临床药理学测定。

摘要： 本发明涉及弹性蛋白酶活性抑制剂、弹性蛋白酶活性抑制外用剂及弹性蛋白酶活性抑制饮食用组合物，其中，以担子菌X(Basidiomycetes‑X)FERM BP‑10011的干燥粉末或其提取组合物为有效成分。

摘要： 本发明涉及碱性蛋白酶高产菌株及碱性蛋白酶，其中菌株的分类命名为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus，保藏编号为：CGMCC No.5313，保藏日期：2011年9月30日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，酶由碱性蛋白酶高产菌株发酵得到。本发明中诱变获得的产碱性蛋白酶菌株是由嗜碱芽孢杆菌经过低能N+离子注入诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值到30700U/mL，较出发菌株提高了37.7％。

摘要： 本发明提供新型蛋白酶、编码该蛋白酶的DNA、蛋白酶的制备方法。蛋白酶具有以下①和②所示的性质：①分子量为21,000±1,000(SDS－PAGE测定)②具有将含有以下所示的氨基酸序列(1)的肽或蛋白质在Gly－Phe位点切断，将含有氨基酸序列(2)的肽或蛋白质在Gly－Phe位点切断，将含有氨基酸序列(3)的肽或蛋白质在Ser－Leu位点切断的特异性蛋白酶活性。Pro－Gln－Gly－Phe－Gln－Gly－Pro(1)；Pro－Ala－Gly－Phe－Ala－Gly－Pro(2)；Gln－Thr－Gln－Ser－Leu－Val－Thr－Pro(3)。本发明公开了编码该蛋白酶的DNA、含有该DNA的转化体、使用该转化体的蛋白酶的制备方法。

摘要： 本发明的目的在于，提供可抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成的弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制剂、弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制用组合物、具有弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体形成抑制作用的物质的筛选方法、抑制弹性蛋白‑抑弹性蛋白酶蛋白复合体的形成的方法、抑制变性弹性蛋白的分解降低的方法及维持正常的弹性蛋白纤维的方法等。本发明涉及一种变性弹性蛋白的分解降低的抑制剂等，其特征在于，含有选自西番莲萃取物、金盏菊萃取物、白芥萃取物、药蜀葵萃取物、白柳萃取物、菖蒲萃取物、桃仁萃取物及大豆萃取物中的1种以上的植物萃取物作为有效成分。

摘要： 本发明涉及一种将选自I型胶原酶、II型胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶构成的组的至少一种酶从物质的混合物中纯化出来的方法，作为方法步骤，所述方法包括至少一个疏水作用色谱过程，其特征在于，疏水作用色谱过程中的固定相包括从聚丙二醇和丁基琼脂糖构成的组中选出的材料。本发明还涉及以这种方法纯化的酶用于制药、化妆品和/或生化目的的用途。

摘要： 本发明涉及蛋白纯化技术领域，且公开了一种同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，该方法采用硫酸铵盐析以及Q Beads 6FF阴离子层析来进行三种蛋白的纯化，该蛋白纯化技术通过下述步骤进行：通过硫酸铵盐析的方法确定三种蛋白析出时所对应的硫酸铵饱和度；将50％硫酸铵盐析出的蛋白与50％硫酸铵除杂后补至80％硫酸铵盐析出的蛋白分别上柱于QBeads 6FF阴离子交换柱，再用50‑400mM的NaCl溶液洗脱，收集各组分的洗脱液，进行蛋白浓度和酶活的测定；本发明所述的同步纯化脂肪酶、酸性蛋白酶和碱性蛋白酶的方法，最终使得脂肪酶纯化倍数提高63.24倍，酸性蛋白酶10.33倍，碱性蛋白酶31.69倍。