碱性蛋白酶

摘要： 以酸枣仁为原料,采用碱提酸沉法对酸枣仁蛋白进行提取,用三种不同蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶)对酸枣仁蛋白进行酶解,得到三种酶解物,研究不同酸枣仁蛋白酶解物的功能特性和抗氧化活性。结果表明,与酸枣仁蛋白相比,不同酸枣仁蛋白酶解物的溶解性、持油性、起泡性及其稳定性、乳化性及其稳定性均具有不同程度地提高,其中,木瓜蛋白酶解物的溶解性、持油性、起泡性和乳化性最强,碱性蛋白酶解物的起泡稳定性和乳化稳定性最强;体外抗氧化研究表明,相比于酸枣仁蛋白,不同蛋白酶所得酶解产物的抗氧化活性均明显提高,其中,碱性蛋白酶酶解物的DPPH清除能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子清除率和ABTS自由基清除能力均高于其他酶解产物,当质量浓度为2.5 mg/mL时,DPPH自由基清除率最高为95.87%、超氧阴离子自由基率为44.77%、ABTS自由基清除率为90.84%、羟基自由基清除率为47.77%。本研究表明,酸枣仁蛋白酶解物具有较好的食品加工性能,其抗氧化活性明显增高,可以作为一种潜在的蛋白质资源应用到食品中,为酸枣仁蛋白酶解物在食品行业中的应用提供理论依据。

摘要： 为探究基因组上不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响,基于解淀粉芽胞杆菌TCCC 111018基因组信息,通过预测基因组上复制起始位点OriC确定了yaah基因整合位点;与此同时,通过分析6个胞外蛋白酶基因(epr、vpr、mpr、apr、bpr和nprE)单独缺失后对外源碱性蛋白酶酶活力的影响,并对发酵上清液中主要分泌蛋白的分析和质谱鉴定,确定了nprE和amyE基因位置为另外两个整合位点。在确定的3个整合位点处分别整合克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因aprE,并对整合菌株的碱性蛋白酶酶活力进行对比分析,结果表明整合菌株解淀粉芽胞杆菌18-ΔY∷aprE和18-ΔN∷aprE碱性蛋白酶酶活力分别达到784.36 U/mL和1289.09 U/mL,分别比原始菌株提高了15%和88.9%,实时荧光定量PCR和SDS-PAGE凝胶电泳表明18-ΔN∷aprE的碱性蛋白酶的转录水平和表达量均最高,这表明在nprE基因位点整合碱性蛋白酶基因可以有效提高碱性蛋白酶表达量,为进一步构建工业酶生产菌株奠定了基础。

摘要： 以黑豆7S球蛋白为原料,研究黑豆7S球蛋白抗氧化活性肽的酶解工艺。以羟自由基清除率为指标,采用单因素试验及响应面试验设计优化黑豆7S球蛋白的酶解工艺。结果表明,在酶解温度49°C,pH 9.07,酶解时间88.79 min,酶添加量8560 U/g时,黑豆7S球蛋白活性肽显示出较强的抗氧化活性,得到的羟自由基清除率为56.03%±0.18,为黑豆蛋白的深加工和调味品领域研发提供了理论基础。

摘要： 以水解度(DH)为指标,从花生粕为原料,通过在各种条件下对不同酶和不同菌株的筛选,确定碱性蛋白酶和解淀粉芽孢杆菌作为花生粕酶解发酵偶联工艺研究。在各种酶中,碱性蛋白酶水解蛋白的能力最好,水解度最高。试验结果表明,碱性蛋白酶降解花生粕的最佳条件为:底物浓度50g/L,p H值8.5,酶解时间24h,酶加量0.2%,酶解温度35°C,此条件下蛋白质的水解度是36.4%。解淀粉芽孢杆菌具有较强的分解花生蛋白的能力,结果表明,加菌量1.5%,发酵时间36h,葡萄糖添加量0.5%能进一步提高蛋白质的水解度。

摘要： 以大豆豆渣为原料,采用碱性蛋白酶对大豆豆渣蛋白质进行水解得到蛋白水解肽并对蛋白水解肽的抗氧化性进行研究。以水解度为指标,研究碱性蛋白酶在不同水解pH值、温度、时间、酶添加量条件下对大豆豆渣酶解的影响,得出碱性蛋白酶的水解条件为p H9.25、水解时间3.05 h、酶添加量8108 U/g、水解温度53°C,水解度达到91.23%。影响豆渣蛋白水解度的因素顺序为水解温度>水解时间>酶添加量>pH值。通过测定DPPH自由基清除率检测豆渣蛋白水解肽的抗氧化性,可知豆渣蛋白水解肽在浓度为6%时抗氧化性最强,DPPH自由基清除率为71.32%。

摘要： 昆虫肠道菌是重要的微生物资源。为拓展微生物酶资源菌种来源,本研究以含Na_(2)CO_(3)和脱脂奶粉的培养基从美洲大蠊Periplaneta americana(L.)肠道中筛选产碱性蛋白酶的嗜碱细菌,进行形态学和16S rDNA序列鉴定,并分析温度、pH和Na_(2)CO_(3)对菌株生长的影响;采用福林-酚法和SDS-PAGE酶谱法测定温度、pH对菌株所产蛋白酶活性和稳定性的影响。结果显示,从美洲大蠊肠道分离到一株嗜碱细菌PaGA523-1,革兰氏阳性,具芽孢,经鉴定为列城芽孢杆菌Bacillus lehensis,其最适生长pH范围为9~11,最适生长温度为37°C,可在含0.03~0.09 mol/L Na_(2)CO_(3)的肉汤蛋白胨液体培养基中生长。在含Na_(2)CO_(3)的玉米粉-黄豆饼粉发酵培养基中,菌株PaGA523-1可产生蛋白酶。该蛋白酶的最适反应温度为62°C,最适反应pH范围为9~11。蛋白酶在不同pH缓冲液(7~11)和热处理(40~60°C)后仍具有一定活性,在60°C处理1 h后,仍保留其初始活性的62.68%。SDS-PAGE酶谱法检测结果也定性说明菌株可产生具有一定程度热稳定性的碱性蛋白酶。本研究获得了一株嗜碱性的昆虫肠道芽孢杆菌,该菌可分泌热稳定碱性蛋白酶,在蛋白质水解方面具有潜在应用价值。

摘要： 碱性蛋白酶是液体洗涤剂中使用量最大的一类酶制剂,应用于洗涤剂行业的碱性蛋白酶占碱性蛋白酶市场的60%以上。不同于粉状洗涤剂中的酶制剂被造粒所包裹,液体洗涤剂中的碱性蛋白酶直接暴露于溶液中,与洗涤剂成分如表面活性剂、洗涤助剂及漂白剂直接接触作用,使得蛋白酶洗涤稳定性下降。除此之外,蛋白酶在液体洗涤剂环境中存在普遍的自溶失活现象,对其洗涤性能造成不利影响。如何提升碱性蛋白酶的稳定性是液体洗涤剂领域中的一个热点问题。本文介绍了碱性蛋白酶的催化与失活机制,综述了几种常用于稳定碱性蛋白酶的策略,即添加稳定剂、分子改造和化学修饰,重点介绍了化学修饰中的聚乙二醇化修饰与多糖修饰,对比了两种修饰方法的过程与效果,并在最后对碱性蛋白酶稳定性提高策略进行了展望。

摘要： 以低温脱脂豆粕提取的大豆蛋白为原料,分别采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和双酶联合方法水解大豆蛋白,分别采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳和竞争法酶联免疫吸附试验分析水解过程中蛋白质组分和抗原活性的变化。结果表明:碱性蛋白酶水解30 min即可基本去除大豆蛋白7S组分中的α-亚基和α'-亚基,木瓜蛋白酶水解10 min即可水解所有的亚基,但新产生的多条分子量小于30 kDa的谱带表现出较强的抗酶解特性;双酶联合水解既可消除碱性蛋白酶不能水解的亚基,也不会使木瓜蛋白酶水解生成新肽段。采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶及双酶联合水解120 min后,大豆蛋白7S组分的抗原活性分别下降为原蛋白的64.25%、48.79%、28.57%,大豆蛋白11S组分的抗原活性分别下降为原蛋白的78.43%、62.35%、33.93%。上述结果表明,与单酶水解相比,两种酶联合水解具有明显的加成效果。

摘要： 通过研究碱性蛋白酶等酶制剂和NaOH溶液复配等工艺优化减少化学清洗原料对设备耗损,降低化学残留物对乳制品的影响以及减少污水对环境的危害。结果表明,碱性蛋白酶和NaOH溶液按照恰当的复配方式将取得良好的降解效果。不同种类的酶制剂复配可能降低酶制剂的利用率。NaHCO_(3)和Na_(2)CO_(3)两种碱性盐与碱性蛋白酶复配能降解部分奶垢,分别达到NaOH溶液降解效果的62%和74%。研究结果为乳制品生产设备的清洗工艺改进与开发提供了依据。

摘要： 从共青地区禽类养殖场的土壤中筛选出了4株地衣芽孢杆菌,其中1株地衣芽孢杆菌产碱性蛋白酶的酶活高达805.53 U/mL。通过酪蛋白培养基初筛,取能够产生水解圈的菌株进行平板划线获得单一菌株,再对菌株进行革兰氏染色和芽孢染色等形态学鉴定及生化特征鉴定筛选,最后对获得菌株进行分子生物学鉴定,16S rDNA测序结果显示4株菌株与地衣芽孢杆菌的同源性在97%以上。结合其形态学鉴定结果和生化特征鉴定结果,确定筛选出来的4株菌株均为地衣芽孢杆菌;最后通过Folin-酚试剂法测定各菌株产碱性蛋白酶粗酶酶活,最终获得的菌株中:菌株2-1-1酶活为805.53 U/mL、菌株2-1-2酶活为688.87 U/mL、菌株2-1-3酶活为593.91 U/mL、菌株3-1-1酶活为729.40 U/mL。

摘要： 为了研究碱性蛋白酶对裂殖壶菌细胞破壁技术的工艺优化问题,本文以油脂产量为指标,采用碱性蛋白酶对裂殖壶菌进行破壁,提取胞内油脂.通过单因素和正交试验,筛选出最佳的破壁条件.结果表明,酶解温度为55°C,酶解时间为9h,酶用量为3％,酶解pH为10时破壁效果最好,各因素对破壁效果的影响顺序为:酶解温度＞酶解时间＞酶用量＞酶解pH.在酶解温度55°C,酶解时间9h,酶用量为生物量的3％,酶解pH为10的条件下,油脂产量达到14.15g/L.

摘要： 研究了利用α-环糊精(α-CD)与聚乙二醇-聚丙二醇-聚乙二醇(F108)之间的主客体识别作用构筑一种空心微球,此微球在水溶液中有碱性蛋白酶存在时,能够将其包裹在内腔中,起到保护作用,提高了其稳定性.结果表明,包裹后的碱性蛋白酶在液体洗涤剂中保存7d时,酶活力是包裹前的2倍.

摘要： 本文拟采用基因分子进化的策略，采用一个新的基于核酸内切酶(endoY)的方法对编码成熟肤的DHAP基因片段进行了突变和DNA改组，进一步筛选获得催化性能更加优良的新型脱毛蛋白酶，构建了一个碱性蛋白酶基因的突变文库。

摘要： 以高温豆粕为原料,通过单因素试验、正交试验进行直观分析和方差分析,确定碱性蛋白酶酶解高温豆粕的优化条件.以大豆肽水解度为指标,考察温度、时间、pH、加酶量、底物浓度等因素对水解度的影响.优化的酶解条件为:温度55°C、时间4h、pH8.5、加酶量19 200 U/g(底物)、底物浓度8％,在此条件下做验证试验酶解高温豆粕得到的大豆肽水解度为34.93％.

摘要： 从大连海域的贝类、海鱼、海参肠中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌C6-7,经形态学鉴定和16S rDNA序列分析为枯草芽孢杆菌.将该菌株接入发酵培养基中,30°C、160 r/min、摇床培养48 h,Folin酚法测定其酶活力.结果发现菌株C6-7所产蛋白酶最造作用温度为40°C,最适作用pH值为9.0；并对该菌株产酶发酵培养基进行了研究,通过单因素试验和正交试验,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖2.0％、牛肉膏1.0％、酵母粉2.0％、CaCl2 0.05％、NaCl 1.0％,优化后菌株C6-7产碱性蛋白酶的酶活力达到531U/mL.

摘要： 利用碱性蛋白酶对米渣蛋白进行酶解,测定了酶解米渣蛋白的紫外光谱吸收特征和表面微观形貌特征,以提高其发泡性为目标,对酶解米渣蛋白发泡性增效因子进行优选.结果表明,碱性蛋白酶酶解后,米渣蛋白结构由致密变得疏松,发泡能力明显提高,氢氧化钙、氢氧化钠对米渣蛋白酶解液的起泡性有显著增效作用,NaCl、蔗糖、阿拉伯树胶、葡萄糖、Na2CO3、Na2SO3等也有明显增效作用,起泡性增效优化配方为6.0％米渣蛋白的酶解液中添加1.32％NaCl、1.44％葡萄糖、1.32％Na2CO3和0.72％Na2SO3,泡沫体积由175mL增加至410mL,是空白组的2.3倍,复配后蛋白酶解液粘度明显增加.通过增效复配,可以有效增加米渣蛋白酶解液发泡性,有望开发出功能良好的蛋白质发泡粉应用于食品工业.

摘要： 蚕茧采用酶脱胶的方法对茧丝的损伤小,且有利于丝胶蛋白回收和减轻环境污染.为了推进酶脱胶方法在柞蚕茧缫丝生产的应用,分别用2709碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶对柞蚕茧脱胶,通过控制温度、时间和酶因素,探究适合柞蚕茧脱胶的酶种类以及工艺条件.结果表明,柞蚕茧进行丝胶膨润、软化前处理后,在酶质量浓度为4 g/L、温度45°C、pH为10,浴比1:25、酶解时间150 min的条件下,2709碱性蛋白酶对柞蚕茧的脱胶率达到10％左右;柞蚕茧经真空渗透前处理后,在酶质量浓度为6 g/L,温度70°C、pH7、浴比1:25、酶解时间90 min的条件下,中性木瓜酶对柞蚕茧的脱胶率也达到10％左右.2种酶对柞蚕茧均有较好的脱胶效果.进一步用扫描电子显微镜观察酶脱胶后缫制的柞蚕茧丝纤维,可见其表面较为光滑,茧丝的损伤程度明显小于传统的碱法脱胶对茧丝的损伤,且中性木瓜蛋白酶脱胶对茧丝的损伤小于2709碱性蛋白酶脱胶对茧丝损伤.

摘要： 本试验是以花生蛋白粉为原料,采用Alcalase碱性蛋白酶为水解酶进行水解.采用二次旋转回归设计,以反应温度,底物浓度,酶用量和水解时间四因素为变量进行水解,得出花生蛋白的最佳水解条件是:温度为54.7°C,底物浓度为4％,酶用量为0.943％,水解时间为167min,在这种水解条件下三氯乙酸沉淀后可溶性氮的得率为87.86％.

摘要： 采用Alcalase2.4L FG对小麦面筋蛋白进行酶解,在温度60°C、pH9.0的条件下通过探讨不同底物浓度及酶浓度的变化对水解度的影响,来研究小麦面筋蛋白的动力学特性,建立了关于水解速率及水解度的动力学模型,讨论了临界底物浓度和临界酶浓度,同时计算出米氏常数Km=1.3211％、最大反应速率Vmax=0.3279mol·L-1·h-1,通过对动力学模型进行验证,发现与实际酶解情况间的误差很小,说明此模型具有良好的实际应用价值;还探讨了可控酶解机理,为更好地理解间歇酶解反应奠定了基础.

摘要： 采用Alcalase和Flavourzyme两种酶分别及协同水解玉米蛋白制备抗氧化活性蛋白水解物,并对其进行分离纯化.结果表明:Alcalase+Flavourzyme水解所得玉米蛋白水解物的水解度为21.03％,可溶性蛋白含量为45.44mg/mL,比其它三种酶水解方式所得水解物可溶性蛋白含量高.在5mg/mL时,Alcalase+Flavourzyme水解所得水解物对DPPH·、·OH和O2-·的清除率分别为75.64％、63.05％和53.77％.Alcalase+Flavourzyme水解玉米蛋白所得水解物经离子交换层析、凝胶层析与HPLC等色谱方法分离获得三个新的抗氧化活性肽,它们的序列分别为Cys-Ser-Gln-Ala-Pro-Leu-Ala、Tyr-Pro-Lys-Leu-Ala-Pro-Asn-Glu和Tyr-Pro-Gln-Leu-Leu-Pro-Asn-Glu.

摘要： 本发明公开了碱性金属蛋白酶以及含碱性金属蛋白酶的制剂在防治烟草花叶病毒中的应用，调节所述碱性金属蛋白酶的pH至8.0‑9.0，所述碱性金属蛋白酶取自黏质沙雷氏菌。该制剂性质稳定，通过对寄主植物和对病毒两个方面起作用，具有良好抗病毒效果，并且对环境友好。

摘要： 本发明属于微生物技术领域，提供一株产碱性蛋白酶耐盐芽孢杆菌菌株DS5及其产碱性蛋白酶的方法与应用。所述产碱性蛋白酶耐盐芽孢杆菌DS5为耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans），于2020年8月17日保藏于广东省微生物菌种保藏管中心，保藏号为：GDMCC No.61148；保藏地址为：广东市先烈中路100号大院59号楼5楼。所述菌种从山西山区农田土壤样品中分离筛选获到。该菌株产碱性蛋白酶，耐盐、耐高温，所产蛋白酶为胞外酶；该菌株发酵过程及培养时间短、产蛋白酶迅速，发酵制备碱性蛋白酶的工艺简单、高效，制备出的蛋白酶具有耐碱和耐高温特性，可被用来作为洗涤添加剂使用，洗涤效果优良。

摘要： 本发明属于生物工程领域，具体涉及一株高产碱性蛋白酶的克劳氏芽胞杆菌及其所产的碱性蛋白酶。所述克劳氏芽胞杆菌(Bacillus clausii)，保藏编号为：CGMCC No.12953。本发明中诱变获得的高产碱性蛋白酶菌株是由克劳氏芽胞杆菌在经过低能N+离子注入诱变的基础上，再进行等离子体诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值达到79000U/mL，较出发菌株提高了51.9％，60T规模发酵罐酶活力达到88000U/mL。

摘要： 本发明涉及碱性蛋白酶高产菌株及碱性蛋白酶，其中菌株的分类命名为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus，保藏编号为：CGMCC No.5313，保藏日期：2011年9月30日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，酶由碱性蛋白酶高产菌株发酵得到。本发明中诱变获得的产碱性蛋白酶菌株是由嗜碱芽孢杆菌经过低能N+离子注入诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值到30700U/mL，较出发菌株提高了37.7％。

摘要： 本发明涉及一种碱性蛋白酶表达的工程菌、菌剂及在碱性蛋白酶生产中的应用。本发明以绿色木霉(Trichoderma viride)Tv‑1511作为出发菌株，通过同源重组方式构建了所述出发菌株TvPacC编码基因敲除的重组木霉菌株Tv‑1511‑△TvPacC。经测定，该重组菌株分泌碱性蛋白酶能力更强，酶活力显著提高，并且重组菌株具有更好的碱性环境适应能力，在碱性条件下的菌落直径和生物量显著提高。该重组菌株作为一种碱性蛋白酶表达的工程菌在工业和农业方面具有良好的实际应用价值。

摘要： 本发明公开了一种碱性蛋白酶基因、杂合启动子、重组表达载体、重组表达工程菌、碱性蛋白酶及方法和应用，碱性蛋白酶基因bcp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的碱性蛋白酶基因bcp，其全长为1143bp，在枯草芽孢杆菌表达菌株中进行高效表达，从而降低碱性蛋白酶BCP的生产成本。

摘要： 本发明公开一株产碱性蛋白酶菌株，涉及生物技术领域，所述菌株为柯赫芽孢杆菌(Bacillus kochii)，所述菌株的保藏日期为2020年6月8日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北武汉市八一路珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCC M 2020180。本发明还提供上述菌株所产碱性蛋白酶和碱性蛋白酶的生产方法。本发明的有益效果在于：本发明中的菌株可以高效产碱性蛋白酶，所产碱性蛋白酶在55°C活性达到最高，在pH 10‑11时酶活性最高，二价阳离子中Mg2+、Mn2+对酶活有正向提升作用。

摘要： 本发明属于微生物技术领域，提供一株产碱性蛋白酶耐盐芽孢杆菌菌株DS5及其产碱性蛋白酶的方法与应用。所述产碱性蛋白酶耐盐芽孢杆菌DS5为耐盐芽孢杆菌（Bacillus halotolerans），于2020年8月17日保藏于广东省微生物菌种保藏管中心，保藏号为：GDMCC No.61148；保藏地址为：广东市先烈中路100号大院59号楼5楼。所述菌种从山西山区农田土壤样品中分离筛选获到。该菌株产碱性蛋白酶，耐盐、耐高温，所产蛋白酶为胞外酶；该菌株发酵过程及培养时间短、产蛋白酶迅速，发酵制备碱性蛋白酶的工艺简单、高效，制备出的蛋白酶具有耐碱和耐高温特性，可被用来作为洗涤添加剂使用，洗涤效果优良。

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶基因、碱性蛋白酶及其制备方法和应用。本发明碱性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于芽孢杆菌Bacillus patagoniensis碱性蛋白酶的序列(GenBank:WP_078392427.1)进行综合优化得到。本发明碱性蛋白酶AprBp的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了碱性蛋白酶的种类和来源途径，且其自身具有较高的酶活性，在5L发酵罐中的最高酶活可达18035U/mL，同时，在较宽的温度范围和碱性条件下均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

摘要： 本发明属于生物工程领域，具体涉及一株高产碱性蛋白酶的克劳氏芽胞杆菌及其所产的碱性蛋白酶。所述克劳氏芽胞杆菌(Bacillus clausii)，保藏编号为：CGMCC No.12953。本发明中诱变获得的高产碱性蛋白酶菌株是由克劳氏芽胞杆菌在经过低能N+离子注入诱变的基础上，再进行等离子体诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值达到79000U/mL，较出发菌株提高了51.9％，60T规模发酵罐酶活力达到88000U/mL。