表达纯化

摘要： 在组蛋白H3K4甲基转移酶MLL3的催化结构域(MLL3_(SET))中定点引入非天然氨基酸N-炔丙基赖氨酸(N-propargyl-lysine,PrK),表达、纯化该突变蛋白(MLL3_(SET)*),并评估突变蛋白的酶活,为后续进一步利用单分子荧光共振能量转移技术(smFRET)表征MLL3的作用机制奠定基础。将MLL3_(SET)接入pET-28b(+)构建表达载体,通过MLL3_(SET)晶体结构分析选择N4905位点进行PrK的引入;对商业化菌株(C321.ΔA.exp)进行基因组改造以引入T7 RNA聚合酶基因,并在改造后的菌株中表达、纯化MLL3_(SET)^(*),最后测定MLL3_(SET)^(*)的酶活性。结果表明,在构建的C321.ΔA.exp lacZ∷T7p07菌株中,pET28b-MLL3_(SET)^(*)在共转入aaRS-tRNA正交系统以及外源添加PrK后能够正常表达;通过Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析成功纯化出高纯度的MLL3_(SET)^(*)蛋白;多酶级联反应结果显示,MLL3_(SET)^(*)的酶活性比野生型蛋白低,但仍具有约43%的甲基转移酶活性。本研究成功实现了含PrK的MLL3_(SET)蛋白的原核表达与纯化,突变蛋白保留了一定酶活性,为后续深入研究MLL3的分子机制奠定了基础。

摘要： 目的对屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)8类变应原Der p 8进行克隆表达、纯化及免疫原性分析,并用生物信息学方法分析其同源性。方法根据已知Der p 8基因序列,设计PCR引物;提取屋尘螨总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到Der p 8的cDNA片段,以cDNA和设计的引物进行PCR扩增;扩增产物连接至T载体并转化入大肠埃希菌(E.coli Top10)中,培养后挑选阳性单克隆菌落测序。测序正确后,转入表达载体pET-32a,经酶切鉴定、测序后转入表达菌BL21,大量表达重组蛋白Der p 8。用亲和层析法纯化后进行免疫印迹分析(Western blotting)。利用生物信息学方法分析Der p 8基因的同源性。结果酶切鉴定显示Der p 8表达载体构建成功,目的基因分子量约为700 bp;SDS-PAGE电泳显示Der p8重组蛋白成功表达,分子量约为38 kD,且主要以包涵体形式存在。Western blotting结果显示Der p 8重组蛋白具有免疫原性。同源性分析结果显示本实验克隆Der p 8基因与NCBI基因库的Der p 8基因同源性为76.97%。结论本实验成功克隆表达并纯化出具有免疫原性的Der p 8重组蛋白,为临床上应用重组蛋白于诊断和治疗提供理论基础。

摘要： 赭曲霉毒素A(OTA)是一种广泛分布在食品中的真菌毒素,减少或脱除食品及其原料中的赭曲霉毒素A,对提高食品质量、保障国民食品安全具有重要意义。本实验室前期从粪产碱菌中获得可降解OTA的酰胺水解酶Af-OTd,本研究通过基因重组实现Af-OTd蛋白的高效表达,并对纯化的Af-OTd蛋白进行酶学性质分析。结果表明:纯化的Af-OTd酶对OTA的降解率达90%以上,降解活性受温度、pH值、酒精含量及金属离子的影响。该酶最适温度50°C,最适pH 7.5。酒精含量增加会导致酶活性下降,当酒精含量增至8%,剩余酶活几乎为0。1 mmol/L的金属离子Ca^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、K^(+)及EDTA对该酶具有不同程度的抑制作用;微量的Co^(2+)、Zn^(2+)对Af-OTd酶活性有明显的促进作用。

摘要： 马铃薯晚疫病病原菌致病疫霉的PiGK5蛋白是一类跨膜蛋白,该蛋白在致病疫霉的致病性、无性生殖及有性生殖方面均有重要作用,但其结构与详细功能目前尚未可知。本研究通过PCR扩增PiGK5胞外端编码区,分别构建融合His标签及MBP和His双标签的原核表达载体,比较了不同标签对PiGK5胞外端表达水平、可溶性及稳定性的影响。结果显示,融合His标签的PiGK5胞外端蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为28.11 mg,其中可溶性蛋白总量约为2.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为0.1175 mg。纯化后的重组蛋白稳定性较好,可在96小时内维持蛋白结构稳定。融合MBP、His双标签的PiGK5胞外端蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为49.93 mg,其中可溶性蛋白总量约为44.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为6.0125 mg。但重组蛋白的稳定性较差,仅在1.5小时就出现了蛋白降解现象。因此,虽然融合His标签的PiGK5胞外端蛋白的可溶性蛋白量较低,但重组蛋白更稳定,融合His标签更适合于PiGK5胞外端的原核表达及后续结构与功能研究。本研究比较了不同标签对PiGK5蛋白胞外端表达的影响,建立了该蛋白的原核表达条件,为其结构与功能的研究奠定了基础。

摘要： 对1株沙门氏菌短尾噬菌体LPST144的尾纤维进行序列结构分析和表达纯化,成功验证其尾纤维基因orf38表达产物gp38的特异性受体结合活性,从而得到一个潜在的沙门氏菌检测探针.首先采用生物信息学的方法分析LPST144噬菌体尾纤维gp38的氨基酸序列、理化性质、遗传进化关系和C末端二级结构,结果表明:LPST144的尾纤维包含646个氨基酸残基,N端具有2个保守结构域,且与T7噬菌体相似度较高;而C末端序列差异极大,存在大量的β-折叠结构,与T7噬菌体尾纤维C末端二级结构类似.gp38具有噬菌体受体结合蛋白的多个特点:具有模块化的性质、序列相似性低且C末端富含β-折叠结构.进一步将尾纤维基因orf38进行异源表达、纯化,采用全菌包被的酶联免疫吸附法检测其特异性结合宿主鼠伤寒沙门氏菌ATCC13 311的能力,结果表明实验组的吸光度为0.94±0.02,阴性对照组吸光度为0.17±0.01,对宿主菌具有较强的结合能力;且gp38重组蛋白与实验中受试的其他6株不同血清型的沙门氏菌均能结合;采用大肠杆菌T10、沙门氏菌外膜蛋白、金黄色葡萄球菌6538及磷酸盐缓冲液代替宿主菌作为对照,吸光度分别为0.58±0.03、0.56±0.01、0.59±0.03和0.53±0.005,实验组与对照组结果具有显著差异,表明尾纤维gp38具有特异性结合宿主鼠伤寒沙门氏菌ATCC13311以及实验中其他受试沙门氏菌的能力.本研究可为开发基于噬菌体受体结合蛋白为分子探针建立沙门氏菌检测方法奠定实验基础.

摘要： 来源于肺炎双球菌Diplococcus pneumoniae的Ⅱ型限制性内切酶DpnⅡ是分子生物学领域中常用的一种工具酶,它在基因工程等领域发挥着重要作用,目前其三维结构尚未被解析.为了解析DpnⅡ的蛋白结构,进一步阐明DpnⅡ的分子机制,构建了pET28b-DpnⅡ重组表达载体,并采用大肠杆菌表达系统,利用BL21 (DE3) pLysS菌株高效表达了DpnⅡ及其硒代衍生物,经Ni亲和层析、阴离子交换、凝胶过滤层析、肝素亲和层析等4步纯化获得了纯度在95％以上的重组蛋白和硒代蛋白,质量浓度均为10 mg/mL,产量分别为6.5 mg/L和5.5 mg/L.酶活研究发现,硒代蛋白和重组蛋白对底物pUC19质粒切割产生了大小一致的条带,表明硒代蛋白的活性未受到明显影响.

摘要： 来源于珊瑚诺卡氏菌Nocardia corallina的限制性内切酶NcoⅠ是基因工程中常用的工具酶之一.然而目前NcoⅠ蛋白质三维结构尚未被解析,对其基因改造缺乏理论指导.为了解析NcoⅠ的三维结构,采用大肠杆菌表达系统,高效重组表达和纯化,获得了纯度＞95％的NcoⅠ野生型和Se-NcoⅠ硒代蛋白.质谱分析表明,重组Se-NcoⅠ蛋白中所有硫原子成功被硒原子取代.酶切实验表明,硒代蛋白与野生型具有相似的限制酶活性.采用坐滴法筛选重组NcoⅠ蛋白结晶条件,已在3种条件下获得针状晶体,1种条件下获得颗粒状晶体.X射线衍射初步分析晶体分辨率在0.8 nm左右,为下一步解析NcoⅠ三维结构提供了基础.

摘要： 目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233,Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到pMD-18T载体.生物信息分析表明,AvTPS蛋白含549个氨基酸残基,二级结构以α-螺旋为主等信息.通过蛋白的表达和纯化,获得纯度为94.22％的可溶性AvTPS蛋白.结论:从阳春砂中可成功克隆出AvTPS的编码基因,为后续研究其基因在阳春砂中的特异性表达奠定基础.

摘要： 来源于肺炎双球菌Diplococcus pneumoniae的Ⅱ型限制性内切酶DpnⅡ是分子生物学领域中常用的一种工具酶,它在基因工程等领域发挥着重要作用,目前其三维结构尚未被解析。为了解析DpnⅡ的蛋白结构,进一步阐明DpnⅡ的分子机制,构建了pET28b-DpnⅡ重组表达载体,并采用大肠杆菌表达系统,利用BL21(DE3)pLysS菌株高效表达了DpnⅡ及其硒代衍生物,经Ni亲和层析、阴离子交换、凝胶过滤层析、肝素亲和层析等4步纯化获得了纯度在95%以上的重组蛋白和硒代蛋白,质量浓度均为10 mg/mL,产量分别为6.5 mg/L和5.5 mg/L。酶活研究发现,硒代蛋白和重组蛋白对底物pUC19质粒切割产生了大小一致的条带,表明硒代蛋白的活性未受到明显影响。

摘要： 为开发噬菌体裂解酶作为一种新型的抗菌剂,用于沙门菌的防控,采用生物信息学及异源表达蛋白的方法,获得鼠伤寒沙门菌噬菌体T139的裂解酶,并验证裂解酶对鼠伤寒沙门菌的裂解活性。通过对鼠伤寒沙门菌噬菌体T139基因组进行分析,发现该基因组全长38854 bp,平均GC含量为49.10%,不包含tRNA基因。进化树分析表明噬菌体T139属于T7噬菌体属,共预测出43个ORFs,有23个被赋予已知功能。多序列比对及保守结构域分析表明,orf 40基因编码的蛋白(LysT40)包含126个氨基酸残基,具有内肽酶保守结构域,为可能的噬菌体裂解酶。LysT40二级结构中存在大量的螺旋结构(70.63%),使得该蛋白能够保持结构稳定。将orf 40进行异源表达、纯化,经过SDS-PAGE和Western blot分析,在10~15 ku处获得单一目标蛋白条带,纯化的蛋白质量浓度为280μg/mL。LysT40在30 min内对氯仿或EDTA预处理的鼠伤寒沙门菌具有较好的裂解活性,吸光值OD600相比于对照组分别下降0.18和0.31。

摘要： 本研究应用生物信息学分析工具对大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原(flic基因)抗原表位进行分析,筛选出抗原表位较富集的胞外区片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达.构建重组质粒pgex4t-2-flic和pet28a(+)-flic,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,GST胶亲和层析技术和金属螯合层析技术纯化GST标签和His标签的目的蛋白,获得了高纯度的GST-flic和His-flic.使用His-flic抗原免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测体液免疫效价,兔颈动脉取血并离心制备获得大量兔抗血清.两种标签目的蛋白的纯化和兔血清多抗的制备为大肠杆菌O157:H7的检测提供了实验依据和物质基础.

摘要： 相思子毒素(abrED，ABR)是一种剧毒性高分子糖蛋白，属于Ⅱ型核糖体失活蛋白，由A链和B链两条多肽链通过二硫键组成异二聚体.文献报道ABR小鼠腹腔LD50为0.04μg／Kg体重.成年人摄入的致死剂量为5.0$tg-7.0 pg／kg.由于ABR.的高毒性和易于获取性，ABR被列为是致死性的生物毒素战剂和生物恐怖剂之一，其对社会公共安全的潜在威胁不容忽视,然而目前关于ABR中毒免疫预防方面的研究较少，相关报道有将ABR经甲醛化处理形成类毒素，注射于动物可产生免疫，免疫血清能有效保护动物而对抗相应引起的中毒。但由于ABR毒性很强，经甲醛脱毒的类毒素仍存在残留毒性，使用.ABR类毒素制备疫苗仍有许多缺陷.因此，本研究的目的就是构建一种既降低毒性，同时又保留了良好的免疫原性的抗原基因，为发展适用于人和动物的无毒性ABR疫苗奠定基础。

摘要： 本文将两个胃泌素释放肽G17替代白喉毒素的A亚单位中的一段线状环路，简称(G17-DTA)，并成功地在大肠杆菌中表达。该嵌合蛋白在经尿素变性复性后，呈较好的均一性且与野生型DTA相近。该嵌合蛋白免疫小鼠后能激发小鼠对G17小肽的抗体，显示了小肽插入到DTA以后，利用DTA作为载体蛋白，诱导小鼠产生依赖T细胞的抗体。本实验作为一种新型的抗小肽疫苗，可应用于其它小肽疫苗。

摘要： 目的：HCV C蛋白编码序列在翻译时发生核糖体读码框移位产生F蛋白。F蛋白在HCV不同基因型的高度保守性和在患者体内抗体的存在，显示其在HCV生命周期中起重要作用。rn 方法：根据GenBank提供的HCV 1b亚型序列设计引物，扩增F蛋白基因片段，诱导表达纯化。将纯化后的HCV-F/GST作为抗原包板，检测120份抗HCV阳性血清。rn 结果：HCV-F/GST的相对分子质量约为43×103。重组蛋白与82份(68％)的抗HCV阳性血清均可发生特异性反应。50岁以上年龄组抗HCV-F抗体的阳性率高于20～50岁年龄组(P<0.01);中重度和肝硬化患者阳性率最高(P<0.05)。rn 讨论：本研究分析了F蛋白与HCV感染的相关性，研究结果对于进一步探讨F蛋白的功能以及将其作为HCV感染检测指标的研究具有重要意义。

摘要： 在抗HIV治疗中,逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和进入抑制剂的使用提高了艾滋病患者的存活率。NCp7含有两个高度保守的CCHC型锌指结构(Cys-X2-Cys-X4-His- X4-Cys),锌指结构中氨基酸的突变或功能受抑制将导致HIV感染能力急剧下降.NCp7抑制剂可能是下一代有效而不容易产生耐药性的抗HIV药物,是一个很有前景的治疗靶点。本文研究了从pBRU2/ADP202质粒经PCR扩增得到HIV-1 NCp7编码序列,克隆到pet28a 质粒中构建HIV-1 NCp7表达载体。阳性克隆转染E. coli BL21 DE3,以IPTG诱导表达,细胞裂解液经Q sepherose H.P.纯化后超滤更换缓冲体系,再经SP sephrose H.P.纯化后纯度达到90％以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和AT-2与NCp7作用,用锌离子特异荧光染料TSQ [N-(6-methoxy-8- quinolyl)-p-toluenesulfonamide, N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-p-甲基磺酰胺]检测化合物的锌离子逐出活性,结果表明该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。经该方法筛选检测,KIZ-CM 10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性,值得进行深入研究。

摘要： 鸡贫血病毒(Chicken anemia virus，CAV)为圆环病毒科环形病毒属的代表成员，该病毒由日本学者Yuasa于1979年首次分离到，我国于1992年由崔现兰等人分离到.病毒感染2周龄以内的雏鸡可引起10％～15％的死亡率，感染成年鸡引起严重的免疫抑制，从而给养禽业带来巨大经济损失. 本文在大肠杆菌中表达了CAV的衣壳蛋白，为进一步研究其功能莫定了基础。利用亲和层析法对表达蛋白进行纯化后免疫小鼠，制备了高效价的杭血清，该血清可与重组蛋白发生特异性反应，高效价抗血清的制备为VP1蛋白功能研究提供了基础材料。同时，重组蛋白可用作抗原检侧鸡群感染后的抗体，制备的抗血清也可用作免疫荧光实验的抗体来检测抗原，从而对该病进行诊断。

摘要： 山梨糖脱氢酶是存在于普通生酮基古龙酸菌中负责维生素C两步发酵中山梨糖生物氧化的一种醌酶.本文采用pQE60在大肠杆菌对该酶进行了高效表达,通过离子交换和亲和层析的方法从工程菌细胞裂解物中纯化得到了山梨糖脱氢酶,并对该酶的酶学性质进行了研究.

摘要： 本文构建了2种重组GL-7-ACA酰化酶表达菌株,进行了5升规模的发酵试验.其中组成型菌株发酵单位达到1500u/L,并可被单步纯化固定化.

摘要： 根据Genebank已发表的JEV序列，设计一对特异性引物，通过RT—PCR从JEV cDNA中扩增结构域Ⅲ基因，将其克隆剑pGEM—Teasy克隆载体中，序列测定正确后将其亚克隆入pET-32a(+)表达载体中，构建重组融合表达质粒pET—JEVE，转化E.coli BL21(DE3)后，利用IPTG诱导获得高效表达。通过western blot检测此表达蛋白与JEV血清呈阳性反应，为进一步研发JEV血清学检测试剂盒提供抗原。

摘要： 根据Genebank已发表的JEV序列，设计一对特异性引物，通过RT—PCR从JEV cDNA中扩增结构域Ⅲ基因，将其克隆剑pGEM—Teasy克隆载体中，序列测定正确后将其亚克隆入pET-32a(+)表达载体中，构建重组融合表达质粒pET—JEVE，转化E.coli BL21(DE3)后，利用IPTG诱导获得高效表达。通过western blot检测此表达蛋白与JEV血清呈阳性反应，为进一步研发JEV血清学检测试剂盒提供抗原。

摘要： 本发明提供了蛋白质合成方法。根据本发明的蛋白质合成方法使用自动生物材料纯化装置，所述自动生物材料纯化装置包含：孔板试剂盒、加热部件和磁场施加部件，使得与通过传统细胞培养表达／纯化蛋白质之现有方法获得的目标蛋白相比，可以更迅速和简单地获得多种目标蛋白，并且由于反应孔间没有偏差所以可以获得对同一蛋白的可重复合成效率。

摘要： 本发明公开了一种人PAK1蛋白的真核表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)以表达PAK1蛋白的基因序列为模板，采用PCR扩增获得PAK1基因片段；2)将得到的PAK1基因片段连接到真核表达载体上得到重组质粒；3)将得到的重组质粒进行转染转化复制，得到人PAK1蛋白的真核表达载体。还公开了利用真核表达系统进行重组人PAK1蛋白表达的方法：还包括步骤4)利用步骤3)获得的人PAK1蛋白的真核表达载体扩增纯化得到的质粒转染进入真核细胞中进行表达。还公开了获得重组人PAK1蛋白的方法：还包括步骤5)将步骤4)得到的阳性克隆进行培养扩大体系，收集培养细胞，离心收集上清，通过色谱柱纯化，即得。

摘要： 本发明公开了蛋白酶K（Proteinase K）突变体的序列及其分泌表达的酵母菌株Proteinase K‑m/pGAPZα‑A/GS115构建的关键技术、构建结果及利用它来生产高活性蛋白酶K的纯化方法。本发明采用基因工程表达的方法生产高活性的蛋白酶K突变体，比活性达到26.8国际单位/毫克，表达量达到366.7毫克/升蛋白，通过纯化可获得纯度达95%以上的目标蛋白蛋白酶K，为蛋白酶K今后的推广使用奠定良好基础。

摘要： 本发明公开了一种可溶性bIFNT成熟肽基因克隆菌株的构建方法，包括以下步骤：（1）bIFNT成熟肽基因的扩增与获取；（2）bIFNT成熟肽基因克隆质粒的构建；（3）可溶性bIFNT成熟肽基因克隆菌株的构建；其中，所述可溶性bIFNT成熟肽基因克隆菌株的bIFNT成熟肽的基因序列如SEQ.ID.NO.1所示。同时，本发明还公开了可溶性bIFNT成熟肽表达菌株的构建方法及产物的诱导表达和纯化方法。本发明提供的方法成功构建了与天然bIFNT成熟肽基因序列完全一致的可溶性bIFNT成熟肽基因克隆菌株和可溶性bIFNT成熟肽表达菌株，应用大肠杆菌原核表达体系，可实现低成本大规模制备rbIFNT。

摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌表达蛋白及其表达纯化方法。该方法包括以下步骤：(1)L‑阿拉伯糖诱导大肠杆菌蛋白表达，其中，在诱导表达阶段，用果糖、麦芽糖和甘油作为碳源；(2)收获菌体洗涤与匀质破碎；(3)表达蛋白的粗提取；(4)三步法柱层纯化蛋白，在阳离子交换层析纯化中引入表面活性剂TritonX‑114。本发明中，L‑阿拉伯糖诱导阶段，用果糖和麦芽糖等碳源替代葡萄糖，可以提高蛋白表达效率，L‑阿拉伯糖对于后期蛋白产品的安全性高于传统的IPTG；连续发酵连续收获的发酵方法，提高了最终收获的菌体量和产物量；采取超滤法粗提蛋白产物，有效缓解多次离心所带来的污染风险，柱层纯化引入表面活性剂Triton X‑114，可以提高蛋白纯度且有效降低内毒素含量。

摘要： 本发明公开了一种膜蛋白YcbM的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含了NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白YcbM序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白YcbM稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白YcbM的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。

摘要： 本发明公开了一种膜蛋白CcmB的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含了NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白CcmB序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白CcmB稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白CcmB的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。

摘要： 本发明公开了一种膜蛋白YddG的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白YddG序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白YddG稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白YddG的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。

摘要： 本发明公开了一种膜蛋白SecF的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含了NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白SecF序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白SecF稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白SecF的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。

摘要： 本发明公开了一种膜蛋白SohB的表达载体及其表达纯化方法。所述的表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，包含：噬菌体T7启动子；大肠杆菌核糖体结合位点，其中包含NcoI序列CCATGG、SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌膜蛋白SohB序列以及BamHI位点GGATCC；烟草蚀纹病毒半胱氨酸蛋白酶切割位点GAGAACCTGTACTTCCAATCC；NdeI酶切位点CATATG；超折叠维纳斯荧光蛋白编码序列；XhoI酶切位点CTCGAG；6个组氨酸位点以及终止密码子TAG。本发明利用分子刚性的荧光蛋白作为筛选标记以及表达进程指示剂，该荧光蛋白由于具有分子水平刚性结构可以迅速折叠，能够帮助氮端膜蛋白SohB稳定其构象。本发明构建的表达载体能够实现膜蛋白SohB的大量表达，可用于后续新型抗生素的高通量筛选。