囊膜蛋白

摘要： 目的表达流行性乙型脑炎病毒(EEBV)的囊膜蛋白(E蛋白),制备该蛋白特异性兔抗血清,为建立诊断EEBV感染的检测方法奠定基础。方法将pET32a-E质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞,以终浓度为0.5 mmol·L^(-1)的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于37°C下诱导蛋白表达8 h,在8 mol·L^(-1)尿素变性条件下,采用镍离子金属螯合亲和层析法对重组E蛋白进行纯化。透析复性后,以E蛋白为免疫原免疫新西兰兔制备兔抗血清,采用Western blot、酶联免疫吸附试验和免疫荧光分析法检测免疫血清中EEBV特异性抗体。结果成功表达了重组E蛋白,经纯化、复性后可从1 L培养物中获得23.8 mg具有生物活性的E蛋白,该蛋白能与抗EEBV单抗发生特异反应。免疫制备的兔抗血清能与E蛋白发生特异反应,抗体效价高达1×51 200;兔抗血清能与EEBV感染的细胞发生特异反应。结论成功表达了EEBV E蛋白并制备了特异性强、亲和力高的兔抗血清,为建立诊断EEBV感染的免疫学检测方法、有效防控流行性乙型脑炎奠定了基础。

摘要： 马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。

摘要： 新冠病毒(SARS-CoV-2)肆虐全球,已导致超过4.6亿人感染,600多万人死亡,给人类健康造成严重威胁。解析病毒致病机制、发掘新的药物靶点是抗病毒药物研发的关键。与埃博拉病毒、马尔堡病毒等多种重要病毒的囊膜蛋白类似,SARS-CoV-2的刺突(S)蛋白在感染过程中依赖细胞弗林蛋白酶(furin)的切割、加工而成熟,进而使病毒获得感染性,因此furin是重要的抗病毒治疗潜在靶点。但细胞在生理和感染的状况下,furin酶活性的调节机制尚不十分清楚。

摘要： 【目的】了解并掌握鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)流行特点及病毒生物学特性,为DTMUV防治提供理论依据和技术支撑。【方法】通过细胞及鸡胚接毒试验对河北某鸭场10只具有典型临床症状的发病鸭进行病毒分离,用RT-PCR、透射电镜观察、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)等方法鉴定,进行动物回归试验测定病毒毒力并对其进行囊膜蛋白遗传进化分析。【结果】分离到的病毒可在DF-1细胞上稳定增殖产生典型细胞病变效应(CPE)并致死鸡胚;病毒纯化后经电镜观察可见直径30~60 nm的病毒粒子;RT-PCR结果显示,在约270 bp处可见单一条带,与DTMUV预期大小一致;Western blotting结果显示,在60 ku处有特异性条带,与E蛋白大小一致;IFA结果表明,接种病毒的DF-1细胞胞质中可见明亮的特异性荧光,以上结果均表明分离的病毒为DTMUV。将分离到的病毒命名为AX2020株,AX2020株经肌内注射感染北京鸭后感染率高达100%,发病鸭产生神经症状及腹泻等典型临床症状;经序列比对发现AX2020株和GA株(MK907880.1)相似性最高,与SD14毒株(MH748542.1)亲缘关系较远。与商品灭活疫苗毒株HB2010株(MN649262.1)和活疫苗毒株FX2010株(MH414568.1)相比,AX2020株第93、277和487位氨基酸发生了的突变。【结论】成功分离得到1株DTMUV AX2020株,分离毒株对北京鸭具有较强的致病性,AX2020株的囊膜蛋白与国内疫苗毒株相比,已经发生了氨基酸位点的突变,结果为鸭坦布苏病毒病的流行病学及后续疫苗相关研究奠定了一定的基础。

摘要： 糖基化(Glycosylation)是指蛋白质或脂质在酶的作用下连接糖链的一种修饰形式。作为生物体内最重要的蛋白质翻译后修饰形式之一,糖基化调控了蛋白质在组织和细胞中的定位、功能、活性、寿命和多样性[1-2]。细胞内超过50%的蛋白质均有糖链的修饰,它们参与了包括细胞识别、细胞分化、发育、信号转导、免疫应答等在内的各种重要的生命活动。在多种疾病,如肿瘤。

摘要： 埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)可引起严重的出血热和最高达90%的感染死亡率。病毒粒子表面的糖基化膜蛋白(Glycoprotein,GP)是启动病毒感染的唯一蛋白,同时也是决定病毒毒力的主要因素。感染细胞中过量表达的GP蛋白可通过诱导细胞变圆、脱落,以及下调细胞表面相关分子的方式增强病毒毒力,而病毒为了能够提高其对感染细胞的适应性,会在复制过程中抑制GP的表达,但病毒自身、或病毒通过宿主细胞调控GP蛋白的表达的机理目前尚未被完全阐明。

摘要： [目的]禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用.为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白,制备多克隆抗体.[方法]利用原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1表达REV囊膜蛋白gp90,并通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白REV-His-gp90进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多克隆抗体;纯化的REV-GST-gp90蛋白用于检测多克隆抗体效价.[结果]pET-28a-REV-gp90和pGEX-6p-1-REV-gp90表达质粒构建成功,通过SDS-PAGE验证蛋白能在大肠杆菌BL21菌株中表达;Western-blot检测结果显示制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性;采用间接ELISA法检测抗血清效价为1:64000;IFA结果显示,制备的多克隆血清能与REV特异性反应.[结论]研究制备的多克隆抗体效价高、特异性良好,为进一步开展REV囊膜蛋白的生物学特性研究及其特异性抗体应用奠定基础.

摘要： 糖基化(Glycosylation)是指蛋白质或脂质在酶的作用下连接到糖链的一种修饰形式。对许多囊膜病毒而言,其囊膜蛋白的糖基化修饰会影响病毒的免疫原性、感染性和毒力,例如寨卡病毒、登革热病毒、高致病性禽流感病毒、新城疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)是绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonaryadenocarcinoma,OPA)的病原,绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白(Env)具有转化细胞的生物学功能,是具有致癌功能的蛋白质,位于病毒粒子的最外层,是构成病毒粒子的主要结构蛋白,JSRV的囊膜蛋白包含约615个氨基酸,在378R和379G处被蛋白酶裂解为N末端的表面蛋白(surface protein,SU)和C末端的跨膜蛋白(transmembrane protein,TM),两者以二硫键连接,SU和TM在绵羊肺腺瘤病毒吸附和侵入宿主细胞的过程中发挥重要作用.由于在绵羊的基因组中存在约27拷贝的与外源性绵羊肺腺瘤病毒（ex-JSRV）高同源性（90%以上）的内源性绵羊肺腺瘤病毒（en-JSRV），患OPA的病羊体内未曾检测到JSRV的循环抗体，不能用常规的血清学方法进行诊断，因此特异性抗原的检测是诊断OPA的有效方法。位于囊膜蛋白的后44位氨基酸，即胞质尾区蛋白（CT，572RGMVRDFLKMRVEMLHMKYRNMLQHQHLMELLKNKERGDAGDDP615）是en-JSRV与ex-JSRV主要高可变区，也是B细胞抗原的表位优势区。利用该段多肽成功的制备了抗CT的特异性单克隆抗体，即抗JSRV-Env572–615绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性鼠单克隆抗体。利用具有较多抗原表位，并保守的截短囊膜蛋白JSRV-Env54–394(包含部分SU和TM)，制备抗JSRV-Env54–394绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性兔多克隆抗体。用这两种不同动物源的单克隆抗体和多克隆抗体分别做检测抗体和包被抗体，建立检测绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的双抗体夹心ELISA方法。本试验建立的双抗体夹心ELISA，使用HRP标记的CT单抗，用提前包被多抗并封闭好的的酶标板检测只需150min即可得出结果，有利于高通量快速的检测OPA。

摘要： 对本实验室建立的检测绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的双抗体夹心ELISA方法进行敏感性、特异性、重复性的评价,检测临床样品,将该方法初步应用于临床实践,分别将羊的主要常见疫病(羊布病,口蹄疫,小反刍兽疫,羊痘,羊快疫、羊猝狙、羊黑疫和羊肠毒血病)的疫苗作为待检样品进行双抗体夹心ELISA试验,确定与制备的抗体有无交叉反应,确定方法的特异性.本实验室利用内外源性JSRV高可变区之一的胞子尾区多肽制备的抗JSRV-Env572–615绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性鼠单克隆抗体和有较多抗原表位；保守的截短囊膜蛋白JSRV-Env54–394制备的抗JSRV-Env54–394绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的特异性兔多克隆抗体，这两种不同动物源的单克隆抗体和多克隆抗体分别做检测抗体和包被抗体，建立检测绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA方法特异、稳定且灵敏快速，有利于JSRV感染羊的活体检测。

摘要： 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白(CT-KLH)和牛血清白蛋白(CT-BSA),用CT-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合.建立间接ELISA方法筛选分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌抗CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8E5,亚类为IgG2a/κ.间接ELISA检测培养上清效价为6.4×103腹水效价为1×105.Western blot及免疫组化结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别JSRV抗原,与其发生特异性反应.试验结果证明,单抗8E5是OPA的重要诊断试剂,为更深入地研究JSRV及其蛋白的生物学功能奠定了基础,应用8E5细胞株分泌的单克隆抗体建立了JSRV-ENV的双抗体夹心ELISA检测方法,该ELISA检测方法特异性,重复性和敏感性良好,为快速检测诊断绵羊肺腺瘤和研究囊膜蛋白功能奠定了基础.

摘要： 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多肽分别连接钥孔血蓝蛋白(简称:CT-KLH)和牛血清白蛋白(简称:CT-BSA),用CT-KLH作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合.建立间接ELISA方法筛选分泌CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CT蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8E5,亚类为IgG2a/K,染色体数目100-112.间接ELISA检测培养上清效价为6.4×103腹水效价为1×105.Western blot及免疫组化结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体能识别JSRV抗原,与其发生特异性反应.试验结果证明,单抗8E5是OPA的重要诊断试剂,为更深入地研究JSRV及其蛋白的生物学功能奠定了基础,也为实验室后期制备检测绵羊肺腺瘤病毒的ELISA试剂盒准备了条件.

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒于20世纪早期在欧洲最先发现,现在已在全球范围内传播.PRRSV主要引起患猪持续性呼吸障碍、体重减轻、生长迟缓,以及妊娠振母猪的流产.病毒基因组的变异、持续的继发感染和PRRS的流行性给防治本病带来了困难.本文研究了非结构蛋白、主要囊膜蛋白M和GP5、次要囊膜蛋白、核衣壳蛋白。PRRSV囊膜蛋白的结构仍然没有解决，除了知道其在病毒感染过程中与宿主细胞结合，并刺激免疫系统，起到非常大的作用。目前，对囊膜与宿主之间的天然作用形式还没有了解，更不知道PRRSV逃避免疫机制的机械融合和结构基础。更好的理解PRRSV的免疫学机制，病毒融合和入侵的机械原理，需要得到病毒囊膜蛋白的详细结构，核衣壳的组装和基因组的包装方式。也需要得到非结构蛋白在病毒复制过程中的作用。

摘要： 绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiektesheep retrovious,exJSRV)引起的一种慢性进行性传染性绵羊肺脏肿瘤疾病.JSVR具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内.为了进一步探索exJSRV囊膜蛋白的结构与功能,从而揭示绵羊肺腺瘤病的发病机理.本研究以绵羊腺瘤病的病肺组织为原料,提取总RNA并反转录为cDNA,以此cDNA为模板,F-env、R-env1、R-env2为引物,利用半巢式PCR扩增目的基因,胶回收纯化PCR产物并与真核表达载体pcDNA4.0(+)均用kpnⅠ和XbaⅠ限制性内切酶进行双酶切。T4DNA连接酶连接,转化DH5a感受态细胞,挑取15个单克隆,通过菌液PCR、质粒PCR、XbaⅠ单酶切、kpnⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,选取酶切验证正确的菌液送Inviotrgen公司进行测序。同时将阳性克隆按Promega公司去内毒素中量质粒提取试剂盒PureYieldTM plasmid Maxiprep System说明书提取质粒(pcDNA4.0(+)/exJSRV-env),紫外分光光度计测其浓度为700μg/L,纯度为A260/A280=1.85,贮存于-20°C备用。用含有10%的胎牛血清和含1%双抗的DMEM高糖培养基培养Hela细胞,在转染前24h,用胰酶消化对数期生长的Hela细胞并计数,将细胞接种于24孔细胞培养板里培养,待细胞密度为80%-90%时,按LipoefcatamineTM LTX Reagent说明书要求进行转染实验,同时设阴性对照组。置于37°C、5%CO2培养箱中继续培养36h。最后裂解细胞,利用微量RNA提取试剂盒提取Hela细胞总RNA,利用RT-PCR检测目的基因的表达。结果表明质粒单、双酶切和测序结果证明本试验构建的pcDNA4.0(+)/exJSRV-env重组质粒的DNA序列完全正确,将其瞬时转染Hela细胞后,裂解细胞并提取总RNA,利用RT-PCR技术,琼脂糖凝胶电泳检测到目的基因env片段约2000bp,与预期大小一致。而阴性对照与空白对照组均无条带。说明pcDNA4.0(+)/exJSRV-env真核表达质粒构建成功,并能在Hela细胞内表达。

摘要： 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus,exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV是反转录病毒,具有相互重叠的gag、pro、pol、env的结构.其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),是病毒侵袭宿主细胞和引起细胞转化的生物学功能,是构成病毒粒子的主要结构蛋白.为了进一步研究囊膜蛋白ENV的功能,本实验采用流体动力学基因转移原理将真核表达质粒pcDNA3.1/exJSRV-env用体内转染试剂经尾静脉注射到幼龄balb/c小鼠体内,共分3个实验组,第一组只注射质粒pcDNA3.1/exJSRV-env,第二组同时注射质粒pcDNA3.1/exJSRV-env以及受体透明质酸酶-2(pcDNA3.1/Hyal-2),第三组是空白对照组.每周分别注射1次,连续注射3个月,相同条件下饲养6个月后处死,分别取各组小鼠心、肝、脾、肺,肾并在10％福尔马林溶液中固定和液氮中保存.本实验初步说明了ENV蛋白引起小鼠体内的应激性病理损伤，是否引起细胞发生转化而形成肿瘤还在接下来的试验中进一步研究。

摘要： 内源性逆转录病毒(ERVs)在数百万年前整合到哺乳动物基因组中,并遵照孟德尔法则遗传给下一代.ERVs被认为是古代的外源性逆转录病毒(exogenous retroviruses)感染宿主后经进化形成的.驯化的绵羊基因组中至少包含27个拷贝的ERVs,由于与外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)高度相似,故将其命名为enJSRVs.现有研究结果表明,enJSRV在母羊生殖道上皮细胞大量且特异性表达,提示enJSRV对生殖发育可能发挥重要作用.而且目前众多学者认为,绵羊单核滋养外胚层细胞(MTC)在enJSRV囊膜蛋白(ENV)及其受体透明质酸酶2(HYAL2)的相互作用下分化、移行,之后通过核内复制或融合作用形成滋养外胚层巨型双核细胞,继续融合形成多核合胞体,最终形成胎盘的子叶,说明绵羊内源性反转录病毒enJSRV囊膜蛋白在妊娠的过程中发挥了重要作用.为了enJSRV囊膜蛋白在绵羊胚胎发育过程中可能发挥的作用,本研究体外培养了绵羊绒毛膜多核滋养层细胞,当细胞汇合度为70％～80％时利用微量RNA提取试剂盒提取细胞总RNA,检测RNA的纯度及完整性后反转录为cDNA,根据enJSRV的全基因组序列,在env基因区域设计1对特异性引物并分别引入HindⅢ和ApaⅠ的酶切位点.筛选出1个干扰效率最高的RNA干扰质粒enJRSV-env-shRNA-2，为后续包装慢病毒及进行动物实验来揭示enJSRV-env的生殖生物学作用奠定基础。

摘要： 本研究旨在通过慢病毒载体系统将EAVGP3/GP4分别转入Marc-145细胞中,建立能够稳定表达EAVGP3/4的Marc-145细胞系.采用PCR方法从EAV感染性克隆上扩增相应的病毒基因,通过酶切连接构建pLenti-EAV GP3/4-CMV-Hygro.将重组质粒与慢病毒包装质粒VSVG和psPAX2共转染293T细胞,包装表达EAV GP3/4的慢病毒,并用其感染Marc-145细胞.采用潮霉素B和终点稀释法筛选出稳定表达EAV GP3/4的Marc-145细胞系.为后续EAV基本结构蛋白,嵌合病毒的研究以及动脉炎病毒细胞嗜性的研究提供条件.

摘要： 本研究旨在通过慢病毒载体系统将EAVGP3/GP4分别转入Marc-145细胞中,建立能够稳定表达EAVGP3/4的Marc-145细胞系.采用PCR方法从EAV感染性克隆上扩增相应的病毒基因,通过酶切连接构建pLenti-EAV GP3/4-CMV-Hygro.将重组质粒与慢病毒包装质粒VSVG和psPAX2共转染293T细胞,包装表达EAV GP3/4的慢病毒,并用其感染Marc-145细胞.采用潮霉素B和终点稀释法筛选出稳定表达EAV GP3/4的Marc-145细胞系.为后续EAV基本结构蛋白,嵌合病毒的研究以及动脉炎病毒细胞嗜性的研究提供条件.

摘要： 本发明属于医学诊断技术领域，公开了一种用于胃癌免疫治疗疗效预测的细胞外囊泡膜蛋白检测方法。本发明的检测方法主要用于检测细胞外囊泡膜蛋白PDL1、PDL2、CD3和ARG1。首先将特异性细胞外囊泡捕获抗体固定在基底上，得到抗体芯片；然后将待测样本施加到抗体芯片上，得到反应芯片；最后向反应芯片上加入检测探针，利用仪器检测细胞外囊泡特定膜蛋白的表达水平。操作便捷，与现有检测方法相比所需临床样本量小，无需进行细胞外囊泡的提取，并且检测灵敏度高、检测速度快。因此，更加适用于临床的检测，对于胃癌PD1/PDL1免疫治疗的疗效预测具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种单囊泡膜蛋白表达谱分析用于多亚群细胞外囊泡计数的方法及其应用所述方法包括：将细胞外囊泡(EVs)与抗体偶联核酸复合物一起孵育，所述抗体偶联核酸复合物由EVs普适性表达和/或特异的抗体与核酸偶联而成；然后将EVs和抗体偶联核酸复合物的混合物与引物、探针一起配制成反应体系，经液滴生成仪产生微液滴，实现单个EV的包裹，将所述液滴用PCR仪进行热循环扩增反应，随后通过液滴生成仪识别读取液滴，从而对EVs亚群进行分离分析。本发明能实现EVs数字化绝对定量，只需更换抗体就可实现多种EV亚群的精准检测分析；技术简单、稳定、成熟，利用普通PCR仪就可实现临床疾病诊断，利于临床推广转化。

摘要： 本发明属于医学诊断技术领域，公开了一种用于胃癌免疫治疗疗效预测的细胞外囊泡膜蛋白检测方法。本发明的检测方法主要用于检测细胞外囊泡膜蛋白PDL1、PDL2、CD3和ARG1。首先将特异性细胞外囊泡捕获抗体固定在基底上，得到抗体芯片；然后将待测样本施加到抗体芯片上，得到反应芯片；最后向反应芯片上加入检测探针，利用仪器检测细胞外囊泡特定膜蛋白的表达水平。操作便捷，与现有检测方法相比所需临床样本量小，无需进行细胞外囊泡的提取，并且检测灵敏度高、检测速度快。因此，更加适用于临床的检测，对于胃癌PD1/PDL1免疫治疗的疗效预测具有重要意义。

摘要： 本文公开了一种用于检测胞内或囊内生物分子相互作用的生物分子检测装置中的人工跨膜蛋白，人工跨膜蛋白包含胞外或囊外结合结构、疏水性跨膜结构域和具有胞内或囊内受体结构的胞内或囊内结构域，其中受体结构被配置为与待检测的生物分子相互作用的胞内或囊内成分相互作用，并且其中胞外或囊外结合结构被配置为与沿生物分子检测装置的多条预定线布置的膜识别元件结合。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，具体公开了一种基于液滴微流控联合检测单个细胞外囊泡内核酸和膜蛋白标志物的数字化分析方法及其应用。所述方法包括：将细胞外囊泡EVs与抗体核酸复合物一起孵育得到EVs检测复合物，然后将EVs检测复合物、引物、探针与EVs裂解液配制成信号反应体系在液滴微流控芯片上产生微液滴，微液滴中裂解释放其内部的核酸分子，EVs膜上的抗体核酸复合物经PCR扩增反应产生荧光信号，EVs释放的mRNA经RT‑PCR反应产生荧光信号；随后将微液滴转移至液滴分析芯片，通过液滴分析仪识别读取实现单个EV内核酸和膜蛋白标志物联合检测的数字化分析，对相关疾病的早期诊断效能评估具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种细胞外囊泡膜蛋白提取与分析方法。该方法包括：使用磁珠特异性富集提取细胞外囊泡膜蛋白，并结合蛋白质谱技术，对膜蛋白的组成进行鉴定和分析。该方法可避免蛋白质谱分析过程中，高丰度的非细胞外囊泡膜蛋白信号的影响和干扰，有助于鉴定出更多种类的细胞外囊泡膜蛋白。

摘要： 本发明提供一种阻断多肽，该多肽能够阻断中国对虾PcRab7蛋白与WSSV囊膜蛋白VP28的相互作用，具有抗WSSV的作用。本发明所提供的阻断多肽，其氨基酸序列为TAPLAITAIIAVFI。本发明所提供的多肽可以阻断PcRab7结合VP28，进而影响病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使病毒无法进入宿主细胞，实现抗WSSV的作用。本发明采用对虾感染实验验证了其可以有效延长对虾感染WSSV后的存活时间，可以作为有效的抗WSSV候选药物，为今后WSSV的防治提供可能的多肽药物。

摘要： 本发明提供一种阻断多肽，该多肽能够阻断中国对虾PcRab7蛋白与WSSV囊膜蛋白VP28的相互作用，具有抗WSSV的作用。本发明所提供的阻断多肽，其氨基酸序列为TAPLAITAIIAVFI。本发明所提供的多肽可以阻断PcRab7结合VP28，进而影响病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使病毒无法进入宿主细胞，实现抗WSSV的作用。本发明采用对虾感染实验验证了其可以有效延长对虾感染WSSV后的存活时间，可以作为有效的抗WSSV候选药物，为今后WSSV的防治提供可能的多肽药物。

摘要： 本发明公开了猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白和非结构蛋白共表达载体及其构建和表达方法，所述的共表达载体基于分子克隆技术将猪瘟病毒的主要囊膜蛋白(E2c)和非结构蛋白(NS2-3c)及牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白(E2b)和非结构蛋白(NS2-3b)的编码基因分别与双表达载体pETDuet-1、pRSFDuet-1连接。本发明的共表达载体能够同时表达猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒的主要囊膜蛋白和非结构蛋白，可用于制备多价亚单位疫苗、防控猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒。

摘要： 本发明涉及一种特异性结合发热伴血小板减少综合征病毒的囊膜蛋白Gn的人源单克隆抗体及其用途。该抗体能够特异性治疗发热伴血小板减少综合征病毒的感染。