致病疫霉

摘要： 为建立致病疫霉Phytophthora infestans(Mont.)de Bary对缬菌胺的敏感基线,采用菌丝生长速率法测定了从河北省、黑龙江省、内蒙古自治区、贵州省和四川省未使用过缬菌胺的地区采集分离的105个致病疫霉菌株对缬菌胺的敏感性;为明确致病疫霉对缬菌胺产生抗性突变体的难易程度,进行了紫外诱导和药剂驯化试验;为明确缬菌胺与常用药剂之间的交互抗性,测定了8个抗缬菌胺突变体及其6个亲本敏感菌株对6种常用杀菌剂的敏感性。结果表明:105株致病疫霉对缬菌胺的EC50值范围为0.0594~0.159 mg/L,平均EC50值为(0.102±0.024)mg/L,不同敏感性菌株的频率呈连续单峰曲线分布,未发现敏感性下降的亚群体,因此可将缬菌胺对105株致病疫霉的平均EC50值作为致病疫霉对缬菌胺的敏感基线;通过紫外诱变敏感菌株菌丝体获得了4个抗缬菌胺的突变体,其抗性水平介于3.1~14.9倍之间,突变频率为0.54%,通过紫外照射敏感菌株孢子囊悬浮液获得了2个抗性水平分别为8.1倍和8.2倍的抗性突变体,突变频率为1.33×10^(−7);通过在含缬菌胺的黑麦蔗糖琼脂培养基上继代培养敏感菌株11代,获得2个抗性水平分别为3.1倍和9.4倍的抗性突变体。缬菌胺与烯酰吗啉和双炔酰菌胺存在交互抗性,与氟吡菌胺、嘧菌酯、甲霜灵和霜脲氰不存在交互抗性。初步推测致病疫霉对缬菌胺具有低到中等抗性风险,建议在生产上将缬菌胺与其他类型杀菌剂交替或混合使用,以延缓致病疫霉对缬菌胺抗性的产生。

摘要： 马铃薯晚疫病病原菌致病疫霉的PiGK5蛋白是一类跨膜蛋白,该蛋白在致病疫霉的致病性、无性生殖及有性生殖方面均有重要作用,但其结构与详细功能目前尚未可知。本研究通过PCR扩增PiGK5胞外端编码区,分别构建融合His标签及MBP和His双标签的原核表达载体,比较了不同标签对PiGK5胞外端表达水平、可溶性及稳定性的影响。结果显示,融合His标签的PiGK5胞外端蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为28.11 mg,其中可溶性蛋白总量约为2.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为0.1175 mg。纯化后的重组蛋白稳定性较好,可在96小时内维持蛋白结构稳定。融合MBP、His双标签的PiGK5胞外端蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为49.93 mg,其中可溶性蛋白总量约为44.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为6.0125 mg。但重组蛋白的稳定性较差,仅在1.5小时就出现了蛋白降解现象。因此,虽然融合His标签的PiGK5胞外端蛋白的可溶性蛋白量较低,但重组蛋白更稳定,融合His标签更适合于PiGK5胞外端的原核表达及后续结构与功能研究。本研究比较了不同标签对PiGK5蛋白胞外端表达的影响,建立了该蛋白的原核表达条件,为其结构与功能的研究奠定了基础。

摘要： 为合理选用抗性品种防治马铃薯晚疫病,采用对峙培养的方法对2016—2020年分离自甘肃、青海和宁夏等3省(区)25个县(区)的694株马铃薯致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont.)de Bary]进行了交配型测定。结果供试菌株中只检测到了A1交配型和A2交配型,未发现A1A2和SF(自育型),其中A2交配型菌株为优势菌株,2016—2020年占所测菌株的比例分别为86.4%、96.3%、86.4%、80.9%、96.5%。5年间A2交配型菌株占比呈先升后降再升趋势。A2交配型比例的增大给马铃薯晚疫病的防控和抗病育种带来新的挑战。

摘要： 致病疫霉是引起番茄、马铃薯晚疫病的植物病原卵菌,其分泌的效应蛋白在抑制寄主免疫方面发挥重要功能。鉴定效应蛋白的寄主靶标对研究植物与病原菌互作具有重要意义。本研究构建了高效马铃薯酵母双杂交cDNA文库,并通过筛选致病疫霉无毒蛋白PiAVR3b的互作蛋白来评价构建文库质量。分别提取接种致病疫霉后24 h和48 h的马铃薯栽培种‘合作88’叶片RNA,等量混合后构建cDNA文库。次级文库容量为1.6×10^(7) cfu/mL,重组率为100%,插入片段平均在1000 bp以上。以PiAVR3b为诱饵,通过酵母双杂交筛选初步获得10个候选靶标蛋白。经点对点验证,进一步确定了4个与PiAVR3b互作的靶标蛋白,分别是马铃薯MYB-like蛋白、线粒体外膜孔蛋白、碳分解代谢抑制蛋白、肽基脯氨酰异构酶。本研究构建的酵母双杂交文库为致病疫霉效应蛋白靶标筛选及植物与病原菌互作研究奠定了基础。

摘要： 由伦敦Bacto生物技术公司牵头、作物健康和保护农业技术创新中心(CHAP)支持的一项研究正在开展,即研究土壤中发现的天然微生物及其作为新型杀菌剂的可行性。这项研究的中心是利用最新的尖端技术来分析土壤微生物组--土壤中发现的数十亿微生物的复杂相互作用。其目的是鉴定对马铃薯晚疫病原菌--致病疫霉具有杀菌作用的细菌,以期获得活性化合物。这种具有新作用机制的新颖解决方案的发现可以显著改善作物病害管理,为种植者提供替代的植物保护工具,并有助于以更加可持续的方法进行土壤管理。

摘要： 为探究StNPR4基因在马铃薯(Solanum tuberosum)中应对生物胁迫和非生物胁迫的功能,本研究通过克隆StNPR4的CDS序列和启动子序列,进行生物信息学分析;利用qRT-PCR进行组织表达特异性分析;同时构建了由其自身启动子驱动的StNPR4双元表达载体,转化马铃薯获得了转基因马铃薯,研究转基因马铃薯对水杨酸、致病疫霉和高盐胁迫的响应。结果显示:StNPR4具有典型的NPR1家族的功能结构域,启动子上具有响应于生物胁迫和非生物胁迫的顺式作用元件。StNPR4在叶中的表达量最高;StNPR4受SA诱导表达,且在转基因植株中的诱导表达程度高于对照;转基因马铃薯增强了对致病疫霉的抗性,在高盐胁迫下生根率更高。说明StNPR4不仅在马铃薯生物胁迫中发挥重要作用,而且在非生物胁迫中也扮演着重要角色。

摘要： 致病疫霉是导致马铃薯晚疫病的重要病原菌,该病原菌在侵染马铃薯时能够分泌效应蛋白致使寄主感病.筛选效应蛋白的植物互作靶标并研究靶标蛋白的功能对深入解析致病疫霉的致病机理具有重要意义.研究以致病疫霉效应蛋白Pi16275作为诱饵蛋白,筛选了酵母cDNA文库,最终获得2个能够与该效应蛋白产生互作的植物靶标蛋白.利用病毒介导的基因沉默技术在本氏烟草中进一步沉默这两个靶标蛋白基因,结果发现,沉默5号靶标蛋白基因使本氏烟草更易感病,证明该靶标蛋白在植物抗病免疫应答过程中发挥作用.

摘要： 致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯最具破坏性的病原体。本试验比较了不同培养基对致病疫霉生长、无性生殖、有性生殖的影响。结果显示,在黑麦培养基(RA)、胡萝卜培养基(CA)和放置玻璃纸的黑麦培养基(CP)上,菌株P7723的生长速率大小顺序为CP CA、RA;菌株HQK8-3的生长速率为RA CP CA。不同培养基对卵孢子的形态及发育过程无明显影响,两个菌株在CA上的卵孢子数量最高,为701个/cm2,是RA上的2.48倍,是CP上的70.1倍。卵孢子在CA上的存活率为55%,在RA上为67%,在CP上为48%。不同培养基对孢子囊的形态没有影响。不管是单独培养还是对峙培养,菌株HQK8-3和P7723在胡萝卜培养基上产的孢子囊数量最多,在RA上产得较少,在CP上不产孢子囊。不管是单独培养还是对峙培养,在CP上收集到的菌丝体生物量最多,CA上次之,RA上最少。因此,综合以上指标,胡萝卜培养基更适合在致病疫霉生长及有性、无性生殖研究中被用来收集生物样本,该实验结果为今后深入研究致病疫霉时能够获得足够量符合条件的生物样本奠定了基础。

摘要： 为探索致病疫霉游动孢子的最佳制备条件,将致病疫霉分别培养7～12 d后向其中加入Petri's溶液,收集孢子囊并统计其产量,之后收集不同培养时间的孢子囊,分别采用5种不同低温诱导组合方法(M1:10°C 静置30 min后18°C 静置30 min;M2:4°C 静置30 min后10°C 静置90 min;M3:4°C 静置30 min后10°C 静置60 min;M4:4°C 静置3 h;M5:4°C 静置2 h后18°C 静置1 h)制备游动孢子,研究不同培养时间及不同制备方法对游动孢子产量的影响.结果表明,随着培养时间的延长,致病疫霉孢子囊产量先迅速增加,后增加速度放缓直至基本不再增加;用不同制备方法得到的游动孢子产量随着孢子囊培养日龄的增加均呈先升高后降低的趋势,用培养9 d收获的致病疫霉孢子囊制备游动孢子时游动孢子产量最高,且不同制备方法得到的游动孢子产量差异不显著.综上,如要快速大量制备致病疫霉游动孢子,可用培养9 d的致病疫霉孢子囊在10°C 下静置30 min后再在18°C 下静置30 min,;如不考虑制备时间,可用培养9 d的致病疫霉孢子囊在4°C 静置2 h后再在18°C 静置1 h,可获得最大量游动孢子;孢子囊产量与游动孢子产量并不完全呈正相关.

摘要： 马铃薯晚疫病是由致病疫霉引发的重大毁灭性病害,长期在我国各马铃薯主产区暴发流行,是马铃薯产业发展的重要瓶颈因素.目前大田防控马铃薯晚疫病仍主要依赖化学防控.本文梳理了近年来我国市场防治晚疫病的杀菌剂产品发展趋势,对马铃薯晚疫病化学防控策略与应用现状进行了归纳.结合本课题组近年来的田间调研结果,探讨了我国马铃薯晚疫病防控中的新情况,并对未来化学精准防控的前景进行了展望,提出加快发展病菌致病型和抗药性监测技术,注重新型农药与精准施用技术的源头创新,以期为未来开展马铃薯晚疫病的可持续防控提供新思路.

摘要： 致病疫霉(Phytophthora infestans)侵染马铃薯引起的晚疫病是马铃薯生产上能造成巨大经济损失的毁灭性病害之一,每年在世界范围内造成的损失超过60亿美元,也是中国的一类对外检疫对象.选育和使用抗病品种防治农作物病害是防治晚疫病最经济有效的措施,但是由于病原物的变异进化快,抗病品种会迅速的丧失抗病性,其使用年限也越来越短.

摘要： 氟吗啉是沈阳化工研究院有限公司创制的新型杀菌剂,目前用于防治葡萄霜霉病与黄瓜霜霉病;氟啶胺是日本日本石原产业开发的广谱性杀菌剂,主要用防治马铃薯晚疫病;致病疫霉是马铃薯晚疫病和番茄晚疫病的致病病原菌,严重制约马铃薯与番茄的生产;试验结果表明氟吗啉与氟啶胺混配对致病 疫霉具有良好的抑菌效果,二者混配配比为5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5的共毒系数介于80至120之间,表现为相加作用;氟吗啉与氟啶胺混配防治作物病害显示良好的开发前景.

摘要： 晚疫病是我国马铃薯生产的重要限制因素.本文综述了致病疫霉的生物学和寄主抗性的研究新进展,以期为研究防治马铃薯晚疫病的方法提供有价值的理论参考依据.晚疫病由致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont)de Bary]引起,导致马铃薯茎叶死亡和块茎腐烂的一种毁灭性真菌病害.目前致病疫霉基因组的易变性和A2交配型在全球迅速蔓延,导致各地致病疫霉的群体遗传结构发生了快速的变化,使马铃薯晚疫病大发生和大流行的风险增加.

摘要： 从福建、广西、贵州、湖北、云南5个省份采集了380个菌株,并采用6对引物对其进行群体遗传结构分析.总的来说这些致病疫霉群体的遗传结构简单:在380份材料中一共只检测到17个等位基因,平均每个位点含有2.8个等位基因,群体内的Nei's基因多样性指数为0.36,有3个私有等位基因被发现.来自不同省份的群体在基因频率上存在显著差异很大(P＜0.0001).和其他省份相比,福建群体的平均等位基因数和基因多样性指数都较高,可能与福建省长期从外地调运种薯有关.

摘要： 2010～2012年从福建、云南、贵州和广西四省采集并分离纯化马铃薯致病疫霉,经交配型检测,其中云南92株(包括会泽大桥乡70株,谷律12株和团结乡10株),福建福州40株,青口79株,龙海42株,贵州安庆120株均为自育型菌株,即不需交配即能产生卵孢子.广西南宁55株中10株为自育型,其余为A1型.在检测的以上菌株中未发现A2型.以上结果说明马铃薯致病疫霉自育型菌株可能在我国南方大量出现.

摘要： 本研究测定了苯酰菌胺、烯酰吗啉、嘧菌酯、霜脲氰、甲霜灵和代森锰锌6种不同作用机制的杀菌剂对致病疫霉不同发育阶段的抑制作用,以期为致病疫霉病菌造成的晚疫病的田间化学防治提供参考.研究结果表明，甲霜灵、苯酰菌胺和嘧菌酯对致病疫霉病菌菌丝生长具有很好的抑制活性，其EC50分别为:0.0212μg/ml,0.0696μg/ml和0.0898μg/ml。不同供试药剂对抱子囊总量产生的影响结果表明，除代森锰锌的EC550为5.1867μg/ml外，其余各供试药剂EC50均小于1μg/ml，表现出很好的抑制效果。嘧菌酯和代森锰锌对抱子囊的萌发具有较好的抑制作用，其EC50分别为0.08642μg/ml和0.3864μg/ml,嘧菌酯和烯酰吗啉对游动抱子的萌发具有较好的抑制作用，其EC50分别为0.1459μg/ml和2.9622μg/ml。

摘要： 随着马铃薯主粮化战略在中国的大力推进,马铃薯的安全生产变得更加重要.针对当前马铃薯晚疫病菌的防控，应从群体遗传结构进行系统研究，从中国四大主要种植区系统获取样本，从表型（生理小种、交配型、抗药性、温度紫外线适应性）和基因型结构进行系统研究，同时对现有品种和抗性种质资源及时进行抗病评价，为该病害的综合防控提供重要的理论依据。有关马铃薯晚疫病的防治不仅需要关键的理论指导，还应因地制宜，结合当地的气候环境，及时采取恰当的防治措施，坚持“预防为主，防治结合”，农业防治为主，化学防治为辅，采用生态防控和绿色防控的理念，创造有利于马铃薯生长和发育，不利于致病疫霉繁殖和传播的生态环境，将晚疫病带来的损失和控制的生态成本、社会成本和经济成本降到最小，实现农业生产和植物病害防控的多功能效应。

摘要： 马铃薯晚疫病是由致病疫霉(Phytophtora infestans)引起的毁灭性病害，生物防治是解决该病害的一条理想途径。本文概述了国内外用于晚疫病生物防治的生防因子种类及其作用机制的研究进展，同时提出了目前晚疫病生防工作中存在的主要问题及今后研究的重点：加强生防资源的挖掘与优化，同时加强活性成分和生防机制的研究，并研制抗菌活性高的生物农药，培育转基因抗病植物。

摘要： 由致病疫霉(Phytophthora infestans)侵染马铃薯引起的晚疫病是严重危害全球马铃薯生产的第一大病害.晚疫病菌群体结构及其演替规律的变化直接影响着该病害的发生与流行.本研究连续三年从内蒙古、四川和云南马铃薯晚疫病高发区采集P.infestans样品,对其表型(交配型、生理小种、甲霜灵抗性)和基因型(线粒体DNA单倍型)进行研究.结果表明:生理小种组成复杂多样,27个测试菌株有24个生理小种;118个供试菌株中104株为A1交配型,14株为自育型,没有A2交配型;123个供试菌株中对甲霜灵高抗、中抗和敏感的菌株所占比例分别为52.0％,24.4％和23.6％;线粒体DNA单倍型分布具有明显的地区性,内蒙古的晚疫病菌株以Ⅱa型为主,云南和四川的晚疫病菌株则以Ia型为主.

摘要： 本文首先对不同马铃薯品种的抗病性进行了离体鉴定，在此基础上选择抗病和感病品种的离体叶片进行接种，检测接种前后叶片中过氧化氢和超氧阴离子水平的变化、各种防御酶活性的变化( CAT,SOD,POD,PAL等)、叶片中DNA的降解程度、抗性相关基因在转录水平上的变化以及可溶性蛋白谱的变化。目前的结果表明，抗性品种紫花白接种晚疫病菌后的不仅过氧化氢、超氧阴离子和防御酶系的活性水平显著高于对照；同时，叶片DNA的降解程度和抗性相关基因的转录水平均显著高于对照。

摘要： 本发明属于基因工程领域，公开了一种检测致病疫霉的环介导等温扩增引物组合物及其应用。致病疫霉病菌的检测靶标为PiSMC，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该靶标序列特异性的LAMP引物组合物，正向内引物FIP如SEQ ID NO.2所示，反向内引物BIP如SEQ ID NO.3所示，正向外引物F3如SEQ ID NO.4所示，反向外引物B3如SEQ ID NO.5所示，反向环引物LB如SEQ ID NO.6所示。本发明的检测体系在LAMP扩增条件下，能快速、高效、高特异、高灵敏地检测到致病疫霉病菌，同时可以肉眼观察检测结果。因此，对于田间马铃薯晚疫病病害的检测具有重要的应用价值。

摘要： 在温室条件下和田间试验中诱导马铃薯植物防御的甜菜提取物(SBE)，对植物无明显毒性。用SBE处理导致致病疫霉(

摘要： 本发明公开了一种致病疫霉菌的LAMP检测引物组合物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法。该LAMP检测引物组合物由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和反向环引物LB组成。本发明的检测方法准确性高、特异性强、操作方便、实用性好、实现了恒温扩增，同时还为致病疫霉菌的检测提供了新的技术平台，可用于致病疫霉菌的高灵敏度快速检测，同时在病害侵染初期鉴定出病原物，能够对田间土壤中的病原物进行检测，本发明对马铃薯、番茄的晚疫病防治和对减少农药盲目使用，降低生产成本，减少农药的环境污染也具有重要意义。

摘要： 本发明属于致病疫霉线粒体基因型和异质性的鉴定技术领域。本发明的目的是提供一种基于聚合酶链式反应（PCR）的快速、准确检测致病疫霉线粒体基因型和异质性的试剂盒及检测方法。试剂盒包含PCR扩增所需要的两对专一性引物对和Mix，其中，两对引物对分别为：InDel‑F：5'‑GTG GGT TCG AGT CCC ACT AA‑3'，InDel‑R：5'‑CTC ACC CGT TCG CTA TGT TT‑3'，和RSU‑F：5'‑ACG GAA TTA TCG GAA GAT TT‑3'，RSU‑R：5'‑AAA TCC CTT TTA TAC TGT AAT TTG AT‑3'。检测过程如下：提取致病疫霉菌株的基因组DNA；利用两对专一性引物和试剂盒进行PCR扩增；PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果；条带的观察与条带模式的命名；线粒体基因型的确定；线粒体异质性的判定。该试剂盒可用于国家动植物检验检疫部门对外来致病疫霉和农业部门对不同区域致病疫霉群体的监测，也可用于各大种薯生产企业对于基地致病疫霉特征确定和动态变化的监测。

摘要： 本发明涉及肉桂酸及阿魏酸在抑制致病疫霉、防治植物病害中的应用，属于生物农药技术领域。肉桂酸和阿魏酸对致病疫霉的生长具有显著的抑制效果，且在同等添加浓度情况下，肉桂酸的抑制率显著高于丁香酚，具有作为生物农药用于致病疫霉防治的应用推广价值，肉桂酸和阿魏酸作为生物农药使用具有施用简单、易于推广的优势。

摘要： 本发明属于生物农药技术领域，具体涉及异丁子香酚及其甲基化衍生代谢产物在抑制致病疫霉、防治植物病害中的应用。异丁子香酚及其甲基化衍生代谢产物对致病疫霉具有高效的抑制作用，且在同等添加浓度情况下，其抑制效果显著高于丁子香酚。异丁子香酚及其甲基化衍生代谢产物可作为生物农药用于防治马铃薯晚疫病和/或番茄晚疫病，具有安全、环保，施用方法简单，成本低，易于推广应用的优势。

摘要： 本发明通过在本对试验基地马铃薯种植的土壤中，筛选出了具有抑制马铃薯致病疫霉的短状杆菌，得到具有明显抑制效果的拮抗细菌WZ‑502，并通过进一步的实验，比较出它们在不同菌液浓度下，对致病疫霉的菌丝生长、游动孢子释放、休止孢萌发和孢子囊萌发表现出的不同程度的抑制作用。实验表明，WZ‑502对致病疫霉具有显著的抑制效果，其对致病疫霉游动孢子释放、休止孢萌发和孢子囊萌发也有相对较好的抑制作用。该菌株对马铃薯晚疫病的具有实际的较好的防治效果。

摘要： 本发明公开了一种检测致病疫霉抗药性的方法，选择实验用马铃薯块茎组织规格；配制不同浓度的甲霜灵试剂；以上表面滴药法向马铃薯块茎组织上进行甲霜灵试剂的滴加；在马铃薯块茎组织上放置活化好的敏感、中抗和高抗的致病疫霉菌饼，20°C黑暗处理5天；根据菌丝体在马铃薯块茎组织表面占有的面积以及腐烂程度，确定致病疫霉的抗药性。本发明用于对马铃薯块茎组织进行致病疫霉抗药性检测，与传统方法相比较，准确性为99％以上，检测成本可降低85％，大大提高了检测效率。

摘要： 本发明属于基因工程领域，公开了一种检测致病疫霉的环介导等温扩增引物组合物及其应用。致病疫霉病菌的检测靶标为PiSMC，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该靶标序列特异性的LAMP引物组合物，正向内引物FIP如SEQ ID NO.2所示，反向内引物BIP如SEQ ID NO.3所示，正向外引物F3如SEQ ID NO.4所示，反向外引物B3如SEQ ID NO.5所示，反向环引物LB如SEQ ID NO.6所示。本发明的检测体系在LAMP扩增条件下，能快速、高效、高特异、高灵敏地检测到致病疫霉病菌，同时可以肉眼观察检测结果。因此，对于田间马铃薯晚疫病病害的检测具有重要的应用价值。

摘要： 本实用新型涉及一种用于与方形培养皿匹配的致病疫霉生理小种检测垫，其特征在于：包括三根横向间隔设置的横杆和垂直固定连接于三根横杆中部的竖杆，所述横杆与竖杆所形成的架体放置在方形培养皿中，横杆与竖杆的长、宽小于方形培养皿的内尺寸，在架体上表面垂直设有便于取放架体的凸柱。本实用新型申请该检测垫，不仅能够快速放置含有水琼脂的方形培养皿中，且不随液态水琼脂移动，同时避免被刚倒入的水琼脂烫伤，且可以循环利用，节约环保，缩短了摆放时间，提高生理小种检测的效率，特别是较大群体的致病疫霉群体生理小种的检测，同时一定程度的提高了安全性。