效应蛋白

摘要： 【目的】由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)引起的猕猴桃细菌性溃疡病是全球猕猴桃产业最具毁灭性的病害。病原细菌主要通过Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)将多种效应蛋白(T3SS effector,T3SE)注入寄主植物细胞,进而促进病菌侵染和致病。本研究旨在解析Psa基因组中T3SE的信息并对其T3SS和T3SE的致病功能进行系统分析,为溃疡病菌致病机制的研究和防治策略的制定提供依据。【方法】利用marker-free同源重组基因敲除技术获得M228菌株的T3SS功能缺陷突变体ΔhrcS和ΔhrcC,观察突变体在寄主上的致病力,同时检测突变体诱导本氏烟产生细胞坏死的情况;随后利用从Pseudomonas-Plant Interaction数据库下载的T3SE数据库,本地BLAST多序列比对构建强、弱致病菌株M228和M227的T3SE库,并对二者的T3SE基因信息进行比对分析;另外,获得M228菌株T3SE单、多效应子突变菌株20株及2株HopR1基因回补菌株(共涉及19个T3SE),并将各突变体室内有伤接菌猕猴桃枝条,系统评价各突变体致病力变化并进行统计分析。【结果】通过对Psa的hrcS和hrcC基因进行突变,证明T3SS是其在寄主上致病以及非寄主上过敏性坏死反应(HR)所必需的。通过数据库同源比对,发现在强毒株系和弱毒株系中有31个T3SE基因具有100%的同源性,选取一些基因进行缺失突变,发现hopM1/avrE1和hopR1是Psa重要的毒性因子,且二者不存在功能冗余。另外,单独敲除avrPto5或avrRpm1均能提高Psa致病力。在缺失A-F-E基因簇和avrPto5的菌株中,敲除hopM1/avrE1和hopR1也分别导致Psa的致病力显著下降;而同时敲除hopM1/avrE1、hopR1、avrPto5和A-F-E基因簇导致病菌完全丧失致病力。【结论】HopM1/AvrE1与同家族HopR1均为Psa重要致病因子,且独立于其他效应子发挥作用;avrPto5和avrRpm1基因缺失可以增强Psa的致病力。

摘要： [目的]本文旨在通过建立棉铃虫效应蛋白HARP1体外表达纯化体系,对HARP1蛋白进行体外表达和纯化,为解析HARP1蛋白与植物茉莉酸信号途径中JAZ蛋白的互作分子机制奠定基础。[方法]对harp1基因序列进行密码子优化,使用蛋白预测软件预测HARP1中的信号肽和成熟肽。基于以上信息构建目的蛋白的表达质粒并进行诱导表达,使用亲和层析、酶切、透析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对目的蛋白进行纯化,使用SDS-PAGE和Western blot对蛋白进行分析和检测。[结果]通过优化将harp1基因密码子适应度值(CAI)从0.39提升到0.95。蛋白预测软件预测N末端21个氨基酸为信号肽,信号肽与成熟肽切割位点在第21位丙氨酸和第22位亮氨酸之间,成熟肽为第22位亮氨酸至第122位精氨酸。构建表达质粒pETDuet1-His6-MBP-3C-HARP1(22~122),IPTG能够诱导目的蛋白表达,使用Ni-NTA柱纯化出融合蛋白His6-MBP-3C-HARP1(22~122),3C蛋白酶能够切除His6-MBP标签,使用阴离子交换柱成功分离His6-MBP标签和HARP1(22~122)蛋白,使用Superdex 200 increase Gel Filtration Column进一步纯化获得单体HARP1(22~122)蛋白。[结论]成功建立HARP1蛋白体外表达与纯化体系。

摘要： 康奈尔大学Clare L. Casteel和Swayamjit Ray提出,载体-病毒相互作用中的分子协同作用发生在病毒和载体都受益的情况下,因为病毒和载体都使用效应蛋白来靶向宿主途径,并成功地定植宿主。在分子协同作用中,病毒或载体效应子可能已经进化到改变宿主植物,使双方在相互作用中受益。

摘要： 葡萄根癌病是一种由葡萄根癌病病原菌引起的革兰氏阴性细菌病害。而革兰氏阴性细菌含有非致病相关效应蛋白Tae4,可以杀死其他竞争菌种。有些革兰氏阴性菌本身可表达免疫蛋白Tai4,使自身免受伤害。本研究鉴定了18个Agrobacterium tumefaciens和4个Agrobacterium vitis株系的Tae4和Tai4蛋白,结果显示,A.tumefaciens含有14个Tae4蛋白,A.vitis含有1个Tae4蛋白和1个Tai4蛋白。通过蛋白性质分析、进化树分析、蛋白结构分析和编码基因的选择压力分析表明,A.tumefaciens Tae4蛋白和A.vitis Tae4蛋白相似度不高;A.tumefaciens Tae4蛋白可分为2组;A.tumefaciens和A.vitis的Tae4基因间遭受正向选择。对葡萄根癌病病原菌株系Tae4蛋白和Tai4蛋白的鉴定与分析将为借助Tae4蛋白消灭致病菌,进而防治病害奠定基础。

摘要： 甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)是引起毁灭性病害甘蔗梢腐病(sugarcane pokkah boeng disease, PBD)的主要病原菌之一。病原菌分泌的效应蛋白在病原与植物互作中发挥至关重要的作用。本研究基于课题组前期甘蔗镰孢菌全基因测序数据,设计基因特异性引物,通过RT-PCR扩增得到一个新的含CBM4;结构域的效应蛋白基因,并对其功能进行了初步探索。序列分析表明Fs11724基因开放阅读框822 bp,编码273个氨基酸,分子量为28.24 kDa,理论pI值为4.29,亲水性平均系数–0.072,属于亲水性分泌蛋白;通过农杆菌介导的烟草瞬时表达系统证实Fs11724抑制由BAX诱导的细胞程序性死亡,表明Fs11724具有潜在抑制寄主防御反应的毒性功能;同时,利用酵母分泌系统对其编码蛋白信号肽的分泌功能进行验证,确定该基因编码蛋白为典型分泌蛋白;qRT-PCR结果分析表明Fs11724在甘蔗镰孢菌侵染前、后期上调表达,表达量在168 hpi达到峰值。该研究表明Fs11724编码蛋白为甘蔗镰孢菌F. sacchari的一个效应蛋白,其信号肽具有分泌功能,并且可以在非寄主植物烟草上抑制BAX诱导的细胞坏死,在真菌侵染植物过程中显著表达,可能在调控植物免疫反应中发挥作用。研究结果为进一步研究病原–甘蔗互作,揭示甘蔗镰孢菌发病机制奠定基础。

摘要： 致病疫霉是导致马铃薯晚疫病的重要病原菌,该病原菌在侵染马铃薯时能够分泌效应蛋白致使寄主感病.筛选效应蛋白的植物互作靶标并研究靶标蛋白的功能对深入解析致病疫霉的致病机理具有重要意义.研究以致病疫霉效应蛋白Pi16275作为诱饵蛋白,筛选了酵母cDNA文库,最终获得2个能够与该效应蛋白产生互作的植物靶标蛋白.利用病毒介导的基因沉默技术在本氏烟草中进一步沉默这两个靶标蛋白基因,结果发现,沉默5号靶标蛋白基因使本氏烟草更易感病,证明该靶标蛋白在植物抗病免疫应答过程中发挥作用.

摘要： 铜绿假单胞菌(PA)是一种引起院内感染的革兰阴性病原菌,PA可通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)将效应蛋白转入宿主细胞内而引起急性感染,并在效应蛋白的作用下逃避吞噬细胞的吞噬作用。因此,明确T3SS及其效应蛋白的激活、调控机制有助于为PA的治疗提供新的思路。本文对T3SS的组成和功能、效应蛋白的分泌方式及作用机制进行综述,旨在为新型抗菌药物的研发提供理论基础。

摘要： 稻瘟病菌引起的水稻稻瘟病是粮食作物上最大的毁灭性病害,威胁着我国乃至全世界粮食安全,发生严重时甚至颗粒无收。稻瘟病菌与水稻互作早期,水稻通过活性氧迸发、胼胝质积累等免疫策略,抑制病原菌的侵染,而病菌则分泌大量效应蛋白到水稻中干扰其免疫反应。

摘要： 卵菌是一类可以侵染动植物以及微生物的病原菌.植物病原卵菌会导致很多农作物、经济作物产生病害,造成巨大的经济损失.效应蛋白在植物病原卵菌侵染寄主的过程中发挥关键作用.本文概述病原卵菌分泌的效应蛋白RXLR和CRN的挖掘方法、转运机制以及靶标蛋白筛选的最新研究进展.这些信息可为深入揭示效应蛋白RXLR和CRN的致病机理和与寄主互作机制等提供理论指导,也为未来植物抗病育种和绿色防控等提供研究方向和策略.

摘要： 白粉菌通过在植物细胞内形成吸器,产生大量的效应蛋白,从而实现在寄主细胞内的侵染.前期有研究人员对Oidium heveae进行基因组和转录组测序分析,预测出133个潜在的效应蛋白.笔者克隆了其中的一个基因OhEP2 (Oidium heveae Effector Protein 2),并构建了OhEF 2基因在拟南芥Col-0背景下的过表达转基因植株.通过接种发现,过量表达OhEF 2可以明显促进拟南芥对橡胶树白粉菌的感病性,但不能提高假单胞菌DC 3000的毒性功能,表明OhEF 2可能只在白粉菌侵染的过程中发挥作用.进一步研究发现,OhEF 2显著降低了橡胶树白粉菌在拟南芥上激发的胼胝体沉积和PRl (Pathogen-Related Gene1)基因表达,这为进一步研究效应蛋白OhEF 2在植物体内的毒性作用机理奠定了基础.

摘要： 由青枯菌引起的青枯病是世界范围内严重危害马铃薯产业的细菌性病害,青枯菌能够通过Ⅲ型分泌系统分泌效应蛋白来促进侵染.因此,鉴定效应蛋白的分泌是研究其功能的重要基础.研究建立了基于腺苷酸环化酶(CyaA)报告基因的鉴定体系,克隆了Ⅲ型分泌系统效应蛋白的启动子区域及其分泌信号区域,融合表达带有CyaA报告基因及FLAG标签的重组质粒.克隆了3个不同效应蛋白的启动子区域,比较了3个启动子在转录水平上的表达差异,并鉴定了其在蛋白水平的表达丰度,并利用高效表达的启动子进行了分泌性鉴定.结果显示,rip6效应蛋白的启动子启动效率较高且蛋白表达丰度高.进一步利用rip6效应蛋白启动子进行分泌鉴定,结果显示野生型转化质粒的马铃薯接种块茎中的cAMP显著高于Ⅲ型分泌系统突变体菌株接种的马铃薯块茎的cAMP含量,证明该系统可以有效检测效应蛋白的分泌.研究为马铃薯青枯菌效应蛋白分泌建立了高效稳定的体系,为深入研究效应蛋白毒力功能奠定基础.

摘要： 植物寄生线虫在侵染寄主过程中分泌许多与寄生相关的蛋白质,这些蛋白在植物细胞内发挥各种作用,从而有利于线虫侵染、寄生和生长发育.研究这些效应蛋白的功能对于掌握线虫和植物之间的互作机制非常重要,也为植物线虫病害的防控提供了理论依据.本文对目前研究发现的植物寄生线虫效应蛋白的功能进行了概述.

摘要： 植物寄生线虫是一类重要的植物病原物,对于其寄生机制的研究主要集中在效应蛋白上.本文主要简述了效应蛋白的发掘、功能研究以及机制研究方面的常用方法.并且介绍了一些效应蛋白研究的前沿技术.

摘要： 固着性植物寄生线虫能与宿主维持长达几周的活体寄生关系,同时诱导正常的根部细胞形成专性取食位点,而线虫效应蛋白在这一过程中起到重要作用.它们由食道腺细胞合成,通过口针运输到植物组织中.研究结果表明,植物线虫在侵入宿主过程中,效应蛋白主要作用于细胞壁;而在形成和维持取食位点阶段,则主要作用于细胞质等作用位点.随着研究的不断深入,越来越多促进侵染的线虫效应蛋白被发现,这也表明对线虫效应蛋白的研究变得更加复杂.本文则主要对固着性植物线虫效应蛋白在细胞中作用靶标位点进行概述.

摘要： 在植物病原真菌侵染寄主的过程中,寄主会启动先天免疫反应来抵御病菌的侵染,而植物病原真菌则可以通过分泌效应蛋白到胞外来克服寄主植物的先天免疫反应.由于效应蛋白主要通过真菌分泌系统被分泌至寄主的细胞间质或细胞质中,因此,许多分泌蛋白在这个过程中可能会被N糖基化修饰.

摘要： 稻瘟病菌能够侵染以水稻为主的重要农作物,同时也是研究丝状真菌的重要模式生物.Rab GTPase是Ras超家族的成员之一,它作为分子开关在囊泡的形成、运输、融合等过程中发挥着至关重要的作用.酿酒酵母有三类Rab5家族蛋白,分别为Ypt51,Ypt52,Ypt53,它们参与早期内吞途径.在稻瘟病菌中,MoRab5A和MoRab5B是酿酒酵母中Ypt51和Ypt52的两个同源蛋白.我们的前期研究表明MoRabSA和MoRabSB是稻瘟病菌的生长发育及致病性所必须的，并与稻瘟病病的胞吞作用相关。为初步筛选其下游效应蛋白，本研究对MoRab5组成型激活的菌株MoRab5A-CA, MoRab5B-CA进行了转绿组测序(RNA-seq),结果表明只在MoRab5A-CA状态下上调表达的基因有1351个，而只在MoRab5B-CA状态下上调表达有317个，对其中的一些基因进行了荧光定量PCR验证，其结果与RNA-seq中的上调是相一致的，对其中已在稻瘟病菌数据库注释的基因利用GO(gene ontology)分类进行分析，发现大部分基因与细胞的发育，新陈代谢，细胞内组分运输等过程相关。进一步将结合其他生物信息学分析和同源比对，筛选假定效应蛋白，并利用基因敲除、酵母双杂交及Pull down等方法研究这些基因的功能及验证他们与MoRab5A和MoRab5B的互作关系，从而寻找出调控MoRab5蛋白通路中下游效应因子，为深入了解该病菌的致病机制提供依据。

摘要： 植物寄生线虫能够在不激活其寄主先天免疫反应的情况下,调控寄主细胞的形态与功能,从而与寄主植物保持长期的寄生关系.其中,侵染性幼虫的分泌物在线虫侵入寄主,体内迁移以及诱导寄主细胞形成取食位点中发挥了至关重要的作用.之前的研究主要集中在植物寄生线虫调控寄主的发育途径上,而最近研究表明植物寄生线虫还通过效应蛋白调控寄主的防御反应.故本文对植物寄生线虫调控寄主防御反应进行概述.

摘要： 小麦条锈菌作为一种专性寄生真菌,侵染时会通过吸器向寄主细胞分泌效应蛋白,调控寄主的防御反应发挥毒性功能,增强病菌的致病性.因此,在小麦条锈菌基因组测序完成的基础上,通过生物信息学分析获得大量分泌蛋白(Zheng et al.,2013).通过系统筛选,对其中150个分子量较小或富含半胱氨酸的分泌蛋白进行验证,获得14个在烟草中能够抑制由BAX诱导的细胞坏死的候选效应蛋白.

摘要： 植物寄生线虫病害是威胁农作物生产安全的主要病害之一,对于植物线虫寄生和致病机制的研究是目前植物线虫学研究的热点之一.目前,公认植物线虫食道腺分泌物在线虫侵染寄主组织、在植物组织中迁移、建立取食位点、形成取食管、消化寄主细胞原生质、促进寄主细胞的形态和功能发生改变等过程中具有重要的作用(Hussey et al.,2002).

摘要： Coronatine (COR),在我国被称为冠菌素,是一种主要由丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)分泌的非寄主专一性的植物毒素.COR由两部分组成:一部分为α-氨基酸的冠烷酸(Coronamic Acid, CMA),另外一部分是聚酮结构的冠菌酸(Coronafacic Acid,CFA),这两部分通过酰胺键联接而成.

摘要： 本发明涉及产生结合角蛋白的效应分子的方法，并涉及本发明方法的中间体和终产物以及涉及根据本发明产生的结合角蛋白的效应分子在皮肤化妆品中的用途。

摘要： 本公开内容一般性地涉及与免疫效应细胞相关的治疗，所述免疫效应细胞例如经改造以表达抗原受体例如T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。本文中表明，这样的抗原受体改造的免疫效应细胞可通过使用包含编码抗原受体以进行遗传修饰的核酸和用于靶向该免疫效应细胞的靶向分子的颗粒将该核酸递送至细胞而在体外/离体以及体外产生，其中该靶向分子是经设计锚蛋白重复蛋白(DARPin)。特别地，本文中所述的DARPin是针对CDS与人和非人灵长类(NHP)细胞上的CDS受体结合的高亲和力结合物。用CD8靶向DARPin(CDS‑DARPin)官能化的纳米粒可在体外和体内将基因专门且特异性地递送至人CD8+T细胞。

摘要： 本发明涉及一种表达嵌合蛋白的免疫效应细胞及其应用，具体提供了表达含有TGF‑β受体的胞外域和IL‑2家族蛋白的受体的胞内信号域的嵌合蛋白的免疫效应细胞、包含所述免疫效应细胞的药物组合物以及上述免疫效应细胞或药物组合物在制备预防或治疗肿瘤或病原微生物感染的药物中的用途。本发明的表达嵌合蛋白的免疫效应细胞能够将TGF‑β的刺激转变为IL‑2、IL‑7或IL‑21的积极信号、抑制TGF‑β诱导的Treg分化，从而促进免疫细胞的增殖和存活；并且还能够降低TGF‑β对细胞杀伤能力的影响，展现出了较好的抗肿瘤能力。

摘要： 本发明提供包含用于细胞型特异性靶向的免疫球蛋白型结合区和用于志贺毒素效应子功能(例如，细胞内化、指导亚细胞按路线发送、和/或细胞毒性)的志贺毒素A亚基效应子区的蛋白，其中结合区和志贺毒素效应子区组合，使得志贺毒素效应子区邻近该蛋白的氨基端。本文公开的蛋白可以包含另外的外源物质，诸如例如，抗原、细胞毒性剂和检测促进剂，并且能够将这些外源物质靶向递送到靶细胞内部。本发明的蛋白具有在下述方法中的用途：诸如例如，涉及靶细胞的靶向杀伤、将外源物质递送到靶细胞内、标记靶细胞的亚细胞区室、和诊断和/或治疗多种病患的方法，所述病患包括癌症、肿瘤、其他生长异常、免疫病症和微生物感染。

摘要： 本发明提供包含一个或多个免疫球蛋白Fc区铰链、CH2和/或CH3结构域的结合蛋白，其中所述一个或多个铰链和/或恒定区CH2和/或CH3结构域被修饰，以改变结合蛋白对关联受体(例如Fc受体)的结合亲和力和/或特异性，和/或赋予该铰链和/或恒定区一种或多种新的结合特异性，这些新的结合特异性是相应的未修饰结合蛋白所不具有的(例如对与未修饰结合蛋白所特异性结合的关联受体类别不同的关联受体类别的亲和力)。根据本发明的结合蛋白包括例如经修饰的抗体、抗体片段、重组结合蛋白和分子工程改造的结合结构域－免疫球蛋白融合蛋白，包括小模块免疫药物产品(SMIPTM产品)在内。

摘要： 本发明涉及一种用于对角蛋白材料、特别是人毛发染色的方法，该方法包括以下步骤：‑将试剂(a)施用于所述角蛋白材料，其中所述试剂(a)包含至少一种有机硅化合物，以及‑将试剂(b)施用于所述角蛋白材料，其中所述试剂(b)包含：(b1)包含至少一种效应颜料的至少一种染色化合物，该效应颜料包含α)基材片和β)涂层，其中所述涂层包括通过使用金属醇盐和具有碱性基团的有机硅化合物而湿化学制备的至少一个层；和(b2)至少一种成膜聚合物。本发明还涉及一种多组分包装单元，其含有在两个单独包装的容器中的两种试剂(a)和(b)。

摘要： 本发明涉及植物培育技术领域，具体公开了效应因子RxLR129113表达的效应蛋白在促进植物生长方面的应用。本发明通过对效应因子RxLR129113表达的效应蛋白的深入研究，将植物种子浸泡到含有效应蛋白的溶液中，欣喜地发现了其在促进植物种子萌发和幼芽生长方面具有显著的积极作用，并发现将含有效应蛋白的溶液加入至植物育苗基质中，能激发植物根系的生长与发育，进而促进幼苗的发育壮大。

摘要： 本发明涉及植物培育技术领域，具体公开了效应因子RxLR129113表达的效应蛋白在促进植物生长方面的应用。本发明通过对效应因子RxLR129113表达的效应蛋白的深入研究，将植物种子浸泡到含有效应蛋白的溶液中，欣喜地发现了其在促进植物种子萌发和幼芽生长方面具有显著的积极作用，并发现将含有效应蛋白的溶液加入至植物育苗基质中，能激发植物根系的生长与发育，进而促进幼苗的发育壮大。

摘要： 本发明涉及嵌合的结合角蛋白的效应蛋白，并涉及其在皮肤化妆品中的用途。

摘要： 本发明提供一种橡胶树白粉菌无毒基因的筛选方法、效应蛋白及应用，该筛选方法，包括：(1)由橡胶树白粉菌基因中选取潜在效应蛋白的编码基因A；(2)构建橡胶树白粉菌效应蛋白表达载体，在胶孢炭疽菌中表达转化该白粉菌的潜在效应蛋白基因A，得炭疽菌转化子；(3)将效应蛋白表达程度高的炭疽菌转化子培养，接种至离体的橡胶叶片，测定其致病能力；若相比野生型，胶孢炭疽菌转化子的致病力下降，则表明该效应蛋白编码基因A为无毒基因。本发明的筛选方法，可直接通过不同效应蛋白基因转化子的致病力筛选出白粉菌无毒基因，实现橡胶树白粉菌无毒基因的更加快速地筛选和鉴定，有利于加强橡胶白粉病的防控以及抗病品种选育。