稻瘟病菌中MoRab5下游效应蛋白的初步筛选

摘要

稻瘟病菌能够侵染以水稻为主的重要农作物,同时也是研究丝状真菌的重要模式生物.Rab GTPase是Ras超家族的成员之一,它作为分子开关在囊泡的形成、运输、融合等过程中发挥着至关重要的作用.酿酒酵母有三类Rab5家族蛋白,分别为Ypt51,Ypt52,Ypt53,它们参与早期内吞途径.在稻瘟病菌中,MoRab5A和MoRab5B是酿酒酵母中Ypt51和Ypt52的两个同源蛋白.我们的前期研究表明MoRabSA和MoRabSB是稻瘟病菌的生长发育及致病性所必须的，并与稻瘟病病的胞吞作用相关。为初步筛选其下游效应蛋白，本研究对MoRab5组成型激活的菌株MoRab5A-CA, MoRab5B-CA进行了转绿组测序(RNA-seq),结果表明只在MoRab5A-CA状态下上调表达的基因有1351个，而只在MoRab5B-CA状态下上调表达有317个，对其中的一些基因进行了荧光定量PCR验证，其结果与RNA-seq中的上调是相一致的，对其中已在稻瘟病菌数据库注释的基因利用GO(gene ontology)分类进行分析，发现大部分基因与细胞的发育，新陈代谢，细胞内组分运输等过程相关。进一步将结合其他生物信息学分析和同源比对，筛选假定效应蛋白，并利用基因敲除、酵母双杂交及Pull down等方法研究这些基因的功能及验证他们与MoRab5A和MoRab5B的互作关系，从而寻找出调控MoRab5蛋白通路中下游效应因子，为深入了解该病菌的致病机制提供依据。