遗传转化

摘要： 端粒酶是真核生物中维持染色体末端DNA完整性的一类特殊逆转录酶,研究拟南芥AtTERT对大肠杆菌生长及非生物胁迫的影响,为深入研究TERT蛋白非端粒功能奠定基础。将拟南芥AtTERT转入大肠杆菌,成功构建pET32a-AtTERT原核表达载体,优化诱导条件,纯化并鉴定GST-AtTERT融合蛋白,运用Western blotting验证,同时采用点板法检测转AtTERT大肠杆菌的非生物胁迫抗性。结果表明,优化诱导条件为感受态细胞Transetta(DE3)诱导温度20°C、诱导剂(IPTG)浓度为0.5 mmol/L;纯化的GST-AtTERT融合蛋白相对分子量大小为156 kD;Western blotting验证结果显示在诱导全菌、上清及沉淀中均出现并与预期分子量大小结果一致的蛋白条带。转AtTERT重组菌在NaCl(400和500 mmol/L)、甘露醇(400和600 mmol/L)和H_(2)O_(2)(0.4 mmol/L)的LB固体培养基上的存活率显著高于空载对照菌,而利用液氮反复冻融6次时,转AtTERT重组菌存活率显著低于空载对照菌。转AtTERT大肠杆菌NaCl盐胁迫、甘露醇渗透胁迫、过氧化氢氧化胁迫抗性增强,但低温抗性减弱,表明拟南芥AtTERT具有抗非生物胁迫的非端粒功能。

摘要： 【目的】建立和优化苦荞愈伤组织遗传转化体系,为苦荞基因功能验证及分子育种提供研究工具。【方法】以苦荞品种“西荞二号”为材料,对苦荞愈伤遗传转化条件进行优化,包括苦荞外植体类型、诱导愈伤的激素比例、继代培养基的激素比例及农杆菌类型。利用苦荞类黄酮生物合成关键酶基因FtCHS1的过表达验证优化后的遗传转化体系。通过PCR筛选和荧光观察鉴定阳性株系,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法(high performance liquid,HPLC)测定花青素及黄酮醇支路代谢物含量,使用实时荧光定量PCR分析类黄酮合成相关基因的表达,比较FtCHS1过表达愈伤组织与对照组的差异。【结果】苦荞诱导愈伤组织的最佳外植体为下胚轴,其最适诱导培养基为MS+0.8 mg·L-1 6-BA+3.5 mg·L-1 2,4-D,诱导率达72%;最优继代培养基为MS+3 mg·L-1 6-BA+1 mg·L-1 KT,愈伤组织增殖率与增殖系数分别为98%和1.09;转化过程中的最佳农杆菌是GV3101,转化效率达31.3%;FtCHS1过表达愈伤组织中,花青素、芦丁和杨梅素的含量显著高于对照(P0.05),而FtCHI、FtF3H、FtFLS1、FtFLS2、FtFLS3和FtDFR1等黄酮合成途径关键酶基因均上调表达(P<0.05)。此外,特异性正调控黄酮醇合成的转录因子基因FtMYB5和FtMYB6上调表达,而花青素合成抑制子基因FtMYB8的表达降低(P<0.05)。【结论】建立了苦荞愈伤组织遗传转化体系,过表达FtCHS1的苦荞愈伤组织通过上调黄酮合成相关基因的表达增加类黄酮物质的积累。

摘要： 为探究钩藤(Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil.)组织培养与遗传转化适宜条件,以钩藤种子萌发的无菌苗叶片为外植体,筛选、优化钩藤再生体系建立条件。通过设置不同预培养时间、农杆菌浸染浓度、浸染时间、共培养时间、共培养基中AS浓度、抗生素浓度等,探究钩藤遗传转化的适宜条件。结果表明,钩藤愈伤组织诱导的适宜培养基为:WPM+3 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+30 mg/L蔗糖+避光培养;不定芽诱导培养基为:WPM+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;最适遗传转化因子组合为:预培养2 d,共培养基中添加AS的浓度为120μmol/L,OD_(600)=0.8,浸染时间10 min,共培养时间2 d。经PCR检测证明,GUS基因可顺利转入钩藤基因组中并作为其遗传转化的指示基因。

摘要： [目的]建立高效的金粳818成熟胚遗传转化体系。[方法]以直播稻品种金粳818成熟胚为外植体,设计4种诱导培养基,筛选适合金粳818的诱导条件;设计5种分化培养基,筛选适合金粳818的分化条件;获得的愈伤组织用农杆菌介导法进行转基因再生。[结果]最佳诱导培养基为4.10 g/L NB+2 mg/L 2,4-D,诱导率为89.3%;最佳分化培养基为MS+5.0 mg/L KT+0.5 mg/L NAA,分化率为81.1%,成苗率为52.1%;经PCR分子检测,再生幼苗100%为转基因阳性植株。[结论]该研究建立了金粳818成熟胚遗传转化体系,为品种定向改良奠定了技术基础。

摘要： 愈伤组织瞬时转化体系可初步快速地验证基因功能和鉴定相关表型。为提高板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,并鉴定板栗淀粉合成酶基因的功能,该研究以板栗‘燕山红栗’幼胚胚芽诱导形成的愈伤组织为材料,通过不同状态的愈伤组织和表达载体优化板栗愈伤组织瞬时转化体系;并构建板栗淀粉合成关键酶基因CmSSⅠ沉默载体,验证CmSSⅠ基因在板栗中的功能。结果表明:(1)愈伤组织可按照体细胞胚起动难易程度划分为胚性愈伤组织(EC_E)和胚性愈伤组织早期阶段(EC_DⅠ、Ⅱ、Ⅲ),且白色、外表相对分散的胚性早期阶段愈伤(EC_DⅢ)更适合板栗瞬时转化体系。(2)转化材料为胚性愈伤早期阶段(EC_DⅢ)时,RNAi沉默载体pK7GWIWG2(Ⅱ)RR-277的瞬时转化效率高达87.67%。(3)通过最适愈伤组织瞬时转化体系,基因CmSSⅠ在转基因愈伤组织中表达显著下调,且沉默CmSSⅠ阳性愈伤组织的总淀粉和支链淀粉含量显著降低,直链淀粉变化差异不显著。该研究提高了板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,证明基因CmSSⅠ正调控板栗淀粉的合成,这为板栗基因功能的研究奠定了基础,进一步为分子辅助育种提供了技术平台。

摘要： 为筛选标记基因用于植物遗传转化,采用组织培养、营养液筛选和叶面喷施等手段,综合评价了具有高催化活性的亚磷酸脱氢酶基因ptxDQ作为筛选标记基因用于水稻遗传转化的潜力。结果显示,ptxDQ基因作为筛选标记基因时,抗性愈伤的筛选效率为44.37%~47.28%,显著高于潮霉素和草胺磷等抗性基因的筛选效率。获得的转基因阳性幼苗,可利用以亚磷酸盐为唯一磷源的培养液,通过简单培养即可筛选出阳性转基因幼苗。此外,还建立了通过叶面喷施亚磷酸盐筛选转基因幼苗的方法。相比目前的抗生素和除草剂类筛选系统,亚磷酸盐更廉价且不会造成环境污染。同时,作为一种正向筛选系统具有较高的筛选效率,在农作物转基因研究和农业可持续发展中具有潜在价值。

摘要： 为了探究火龙果溃疡病病原菌的致病机理,笔者利用农杆菌介导的遗传转化技术,分析了根癌农杆菌浓度、分生孢子萌发时间以及共培养温度等3个主要因素对遗传转化效率的影响,建立火龙果溃疡病菌的遗传转化技术体系,并对转化子进行筛选。结果表明,当农杆菌浓度OD_(600)=0.5、分生孢子萌发时间24 h、共培养温度25°C时遗传转化效率最高(833个转化子/10^(6)分生孢子);随机挑选200个转化子进行筛选,获得3株菌落形态与野生型菌株差异较大的转化子,4株产孢量减少的转化子,5株产孢量增加的转化子,6株致病力下降的转化子。

摘要： 谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GSTs)在植物抵御逆境胁迫中具有非常重要的作用。从高羊茅叶片中克隆获得FaGST基因,对其进行酶切位点分析,设计酶切引物,通过BamHI和PstI双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pCAMBIA 1300-35 S上,成功构建pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体。将过表达载体转化感受态(DH 5α)细胞,利用农杆菌介导法遗传转化菊苣,通过潮霉素(Hyp)进行筛选后获得阳性植株。经PCR鉴定呈阳性,结果表明,pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体已成功导入菊苣中,获得转基因菊苣阳性苗9株,利用实时荧光定量PCR对其表达量进行检测,发现该基因表达量明显提高。这将为下一步分析该基因的抗逆性研究奠定基础。

摘要： 以鄂马铃薯(Solanum tuberosum L.)3号为试验材料,将含有来源于黄芪的硒代半胱氨酸甲基转移酶基因(AbSMT)的质粒pBinAr进行PCR扩增以及酶切连接构建重组转化子pBI121-AbSMT,运用农杆菌转化法,设置农杆菌菌液浓度梯度、侵染时间以及共培养时间组合进行遗传转化,并且通过PCR鉴定以及GUS组织化学染色进行基因表达验证。结果表明,筛选抗生素是50.00 mg/L的Kan,农杆菌菌液浓度为0.50(OD600 nm),侵染时间为8 min,共培养时间为3 d,能够实现鄂马铃薯3号高效遗传转化,同时成功构建了AbSMT基因转化的鄂马铃薯3号。

摘要： 香菇是一种重要的食用菌,温度是影响香菇菌丝生长的重要因素,每年有大面积的香菇遭受到寒冷温度的威胁,导致其产量下降。OsICE1是水稻中的一种冷调控关键蛋白,在水稻抗寒种质创制中具有重要作用。本研究从日本晴水稻的芽中提取了RNA并克隆得到OsICE1的编码区序列,构建pCsV1300-OsICE1的表达载体,并成功完成香菇菌丝体的遗传转化,获得了2个转基因系。本研究为OsICE1在耐冷真菌种质创制中的潜在作用提供参考,也为香菇菌丝体抗寒冷的分子育种方面奠定基础。

摘要： 目的：获得稳定且无菌的石榴遗传转化体系受体材料. 方法：比较不同取材时期、灭菌时间对户外石榴茎段材料的污染及褐化情况,并进行分析.比较加入PVP和椰汁对石榴材料的影响,筛选不同激素种类和浓度的初代培养基,经过多次继代培养,筛选出稳定且无菌的石榴增殖培养基,得到稳定健壮的叶片受体材料. 结果：较利于石榴茎段初代生长的培养基为MS+1.0mg·L-16-BA+0.1mg?L-1NAA+1g?L-1PVP.经过2次继代培养筛选出较为合适的培养基：1.0mg·L-16-BA+0.1mg?L-1NAA+1mg?L-1PVP+200mg?L-1椰汁诱导成芽最佳,0.3mg?L-16-BA+0.1mg?L-1IBA+1mg?L-1PVP+200mg?L-1椰汁诱导茎伸长最佳.在生长的石榴植株上,能够获得翠绿、舒展健壮的'中农红'石榴叶片. 结论：筛选得到适合'中农红'石榴组织培养的培养基,获得了稳定健壮且无菌的石榴试验材料,为建立稳定的石榴遗传转化体系奠定了基础.

摘要： 近年来,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导遗传转化的应用越来越广泛.本文综述了影响根癌农杆菌介导遗传转化法(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)转化效率的因素,并结合其在食药用菌中的应用,以期为根癌农杆菌介导金针菇遗传转化体系的建立提供参考依据.

摘要： 传统桃树育种方法因受到周期长、工作量大等因素的限制导致进程缓慢.现代生物技术,尤其是植物组织培养和基因工程的发展,为缩短育种周期、加快桃性状改良提供了可能.本文从茎尖培养、胚培养、其他外植体培养等方面对桃组织培养研究及遗传转化现状进行了综述,为今后育种工作提供参考.

摘要： 现代农业可持续发展的关键问题在于协调好植物与环境之间的关系,现如今,土地盐碱化、水资源匮乏及冻害等因素严重影响着作物的生长发育.谷子是起源于我国的古老粮食作物,具有突出的抗旱节水特性,被认为是应对未来干旱形势的战略储备作物,在植物响应逆境的分子生物学研究方面具有其他作物所无法比拟的优势.rn 谷子(S.italica)属于黍亚科(Panicoideae)黍族(Paniceae)狗尾草属(Setaria)。谷子为二倍体(2n=2x=18)，基因组较小，约490Mb，是自花授粉植物。与水稻、玉米及小麦等禾谷类作物亲源关系近，且属于C4植物，有丰富的种质资源和广泛的多样性，生长周期短(50-90天)，易于栽种，植株相对矮小(20-215 cm)全基因组测序成功(基因组草图和精确的遗传图谱的绘制)，这些决定谷子将成为禾本科C4模式植物。高效稳定谷子遗传转化体系的建立是谷子功能基因组学研究的基础。谷子抗旱相关基因的功能和作用机制的研究，必将推动谷子抗旱调控网络的解析。这里介绍谷子农杆菌介导的遗传转化体系和谷子逆境相关基因SiARDP的功能和调控机制。

摘要： 在农杆菌介导的遗传转化体系中,利用抗生素进行筛选培养和抑菌培养是获得转基因植株的关键环节.本研究以红掌品种'阿拉巴马'的愈伤组织与组培幼苗为外植体,探讨其对卡那霉素(Kan)、潮霉素(Hyg)和头孢霉素(Cef)3种抗生素的敏感性差异.结果表明,在试验设置的培养条件下,当Hyg添加浓度为20mg/L时,能够显著抑制红掌的生长及分化,愈伤组织褐化率高达80％,不定芽分化率仅为10％,组培幼苗致死率达60％以上;当Hyg添加浓度为30mg/L时,愈伤组织和幼苗全部褐化死亡.当Kan添加浓度为125mg/L时,仅显示部分抑制作用,愈伤组织褐化率为40％,不定芽分化率为10％,仅有60％的组培幼苗出现新叶黄化或白化.而Cef即使添加浓度500mg/L,红掌外植体仍能正常生长与分化,表明红掌对3种抗生素敏感性的强弱依次为Hyg＞Kan＞Cef.可见在以红掌愈伤组织为受体材料进行遗传转化时,筛选培养以添加20-30mg/L Hyg为宜,抑菌培养时可使用500mg/L的Cef.

摘要： 在农杆菌介导的遗传转化过程中,抗生素不同程度地抑制山茶转化体的生长与分化.本研究以木糖异构酶基因xylA为筛选标记,试图建立杜鹃红山茶(Camellia azalea)遗传体系过程中的非抗生素筛选系统.从大肠杆菌Top10中扩增出xylA基因,并用其替换经改造的植物表达载体pCAMBIA1300中的hptⅡ基因,获得植物表达载体pCAMBIA 1300-xylA并导入根癌农杆菌EHA105中.经农杆菌介导转化烟草,结果表明xylA标记基因可以替代卡那霉素应用于烟草转化体中,且效果更优.以杜鹃红山茶带柄叶片、茎段、子叶为外植体诱导的愈伤组织,生长状态均表现良好,愈伤组织启动诱导的日期比对照组提前约10d,生长量为对照组的1.5～2.5倍.可以认为25 g·L-1的木糖浓度是适合杜鹃红山茶愈伤组织诱导及生长的筛选浓度.

摘要： 为探讨高山被孢霉(Mortierellaalpina)对氨苄青霉素、红霉素、潮霉素B、卡那霉素、氯霉素5种常用抗生素的敏感性,以固体培养基上菌落数为指标,研究高山被孢霉在五种抗生素的不同浓度下的生长情况.结果表明,与空白对照组相比,Mortierellaalpina对潮霉素B最敏感,浓度300μg/mL时,致死率为91.7％;对卡那霉素和红霉素较敏感,在400μg/mL卡那霉素中的致死率为73.3％,在400μg/L红霉素中的致死率达到70％;对氨苄青霉素和氯霉素不敏感,在300μg/mL氨苄青霉素、250μg/mL氯霉素中不能抑制其生长,致死率只有20％以下.

摘要： 为探讨高山被孢霉(Mortierellaalpina)对氨苄青霉素、红霉素、潮霉素B、卡那霉素、氯霉素5种常用抗生素的敏感性,以固体培养基上菌落数为指标,研究高山被孢霉在五种抗生素的不同浓度下的生长情况.结果表明,与空白对照组相比,Mortierellaalpina对潮霉素B最敏感,浓度300μg/mL时,致死率为91.7％;对卡那霉素和红霉素较敏感,在400μg/mL卡那霉素中的致死率为73.3％,在400μg/L红霉素中的致死率达到70％;对氨苄青霉素和氯霉素不敏感,在300μg/mL氨苄青霉素、250μg/mL氯霉素中不能抑制其生长,致死率只有20％以下.

摘要： 为探讨高山被孢霉(Mortierellaalpina)对氨苄青霉素、红霉素、潮霉素B、卡那霉素、氯霉素5种常用抗生素的敏感性,以固体培养基上菌落数为指标,研究高山被孢霉在五种抗生素的不同浓度下的生长情况.结果表明,与空白对照组相比,Mortierellaalpina对潮霉素B最敏感,浓度300μg/mL时,致死率为91.7％;对卡那霉素和红霉素较敏感,在400μg/mL卡那霉素中的致死率为73.3％,在400μg/L红霉素中的致死率达到70％;对氨苄青霉素和氯霉素不敏感,在300μg/mL氨苄青霉素、250μg/mL氯霉素中不能抑制其生长,致死率只有20％以下.

摘要： 为探讨高山被孢霉(Mortierellaalpina)对氨苄青霉素、红霉素、潮霉素B、卡那霉素、氯霉素5种常用抗生素的敏感性,以固体培养基上菌落数为指标,研究高山被孢霉在五种抗生素的不同浓度下的生长情况.结果表明,与空白对照组相比,Mortierellaalpina对潮霉素B最敏感,浓度300μg/mL时,致死率为91.7％;对卡那霉素和红霉素较敏感,在400μg/mL卡那霉素中的致死率为73.3％,在400μg/L红霉素中的致死率达到70％;对氨苄青霉素和氯霉素不敏感,在300μg/mL氨苄青霉素、250μg/mL氯霉素中不能抑制其生长,致死率只有20％以下.

摘要： 本发明公开了一种利用潮霉素抗性基因

摘要： 本发明公开了一种老芒麦遗传转化体系的建立方法及遗传转化方法，属于植物生物工程技术领域。所述老芒麦遗传转化体系的建立方法对五种外植体愈伤诱导能力进行测试和统计，确定幼穗诱导的愈伤为最佳转化受体；用基因枪法进行介导转化老芒麦幼穗以及幼穗愈伤，分别挑选老芒麦幼穗诱导25d、35d的胚性愈伤组织作为靶愈伤，轰击前对靶愈伤进行两种方法预处理：高渗处理和滤纸干燥，轰击后的愈伤组织上继代培养基于暗培养条件进行恢复培养。最终确定了以25d的幼穗愈伤为转化受体，滤纸干燥预处理2h的基因枪介导川草2号老芒麦的遗传转化方法。所述方法能够获得再生效率为63％的老芒麦幼苗以及转化效率约40％的老芒麦阳性愈伤。

摘要： 本发明公开了一种获得谷子用于遗传转化的胚性愈伤组织和遗传转化的方法。本发明提供了获得谷子用于遗传转化的胚性愈伤组织的方法，包括：a1)将谷子的外植体接种于诱导培养基上进行诱导培养，获得初生愈伤组织；a2)将所述初生愈伤组织进行悬浮培养和继代，得到胚性愈伤组织细胞悬浮系；所述胚性愈伤组织细胞悬浮系即为用于遗传转化的胚性愈伤组织。本发明首次提供了一种谷子成熟种子来源的胚性愈伤组织，通过该胚性细胞的悬浮培养扩增；可以实现快速、高效、稳定的谷子遗传转化。本发明为开展谷子高光效(C4)和耐旱抗逆等功能基因研究奠定了技术基础，为加快谷子的遗传育种研究和现代化农业发展提供了技术支持。

摘要： 本发明提供了一种基于双菌株/双质粒遗传转化柑桔的共转化方法，包括外植体预培养，农杆菌浸染步骤，其特征在于：预培养基础培养基为MS培养基，添加4mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤（6‑BA）、1mg/L吲哚乙酸(IAA)、100μM乙酰丁香酮（AS）。本发明填补了国内外柑桔多基因共转化的空白，解决了如何实现双菌株/双质粒共转化柑桔的问题。

摘要： 本发明提供了一种芸香科植物的遗传转化体系、遗传转化方法和应用，涉及遗传转化技术领域。本发明提供一种以发根农杆菌K599介导的，直接对芸香科植物的枝条进行遗传转化的遗传转化体系。利用本发明所述遗传转化体系可进行遗传转化和基因编辑，能够有效克服农杆菌转化法的诸多缺陷；遗传转化体系周期为14～28天，节省时间，有效缩短柑橘基因功能研究周期；遗传稳定性高，可以避免嵌合体的形成。利用本发明所述遗传转化体系进行遗传转化或基因编辑，获得的转化再生植株或基因编辑植株可以实现基因功能的验证，且所述遗传转化或基因编辑方法，无需无菌环境培育无菌苗，并且免除愈伤组织的诱导及组织培养的过程，简化实验操作，降低实验成本。

摘要： 本发明公开了一种老芒麦遗传转化体系的建立方法及遗传转化方法，属于植物生物工程技术领域。所述老芒麦遗传转化体系的建立方法对五种外植体愈伤诱导能力进行测试和统计，确定幼穗诱导的愈伤为最佳转化受体；用基因枪法进行介导转化老芒麦幼穗以及幼穗愈伤，分别挑选老芒麦幼穗诱导25d、35d的胚性愈伤组织作为靶愈伤，轰击前对靶愈伤进行两种方法预处理：高渗处理和滤纸干燥，轰击后的愈伤组织上继代培养基于暗培养条件进行恢复培养。最终确定了以25d的幼穗愈伤为转化受体，滤纸干燥预处理2h的基因枪介导川草2号老芒麦的遗传转化方法。所述方法能够获得再生效率为63％的老芒麦幼苗以及转化效率约40％的老芒麦阳性愈伤。

摘要： 本发明公开了一种获得谷子用于遗传转化的胚性愈伤组织和遗传转化的方法。本发明提供了获得谷子用于遗传转化的胚性愈伤组织的方法，包括：a1)将谷子的外植体接种于诱导培养基上进行诱导培养，获得初生愈伤组织；a2)将所述初生愈伤组织进行悬浮培养和继代，得到胚性愈伤组织细胞悬浮系；所述胚性愈伤组织细胞悬浮系即为用于遗传转化的胚性愈伤组织。本发明首次提供了一种谷子成熟种子来源的胚性愈伤组织，通过该胚性细胞的悬浮培养扩增；可以实现快速、高效、稳定的谷子遗传转化。本发明为开展谷子高光效(C4)和耐旱抗逆等功能基因研究奠定了技术基础，为加快谷子的遗传育种研究和现代化农业发展提供了技术支持。

摘要： 本发明公开一种用于桑黄遗传表达的重组载体及构建方法和遗传转化方法。载体序列如SEQ ID No:13所示。构建方法：将双元载体pCAMBIA‑1301的CaMV35S启动子替换为桑黄同源启动子,获得适用于桑黄的双元载体。遗传转化方法：利用冻融法将重组双元载体转入根癌农杆菌，获得阳性菌；利用农杆菌侵染桑黄菌丝，并在培养基上共培养，随后覆盖低熔点PDA培养基；随后将菌落转移至新的培养基，选取长势旺盛的菌落提取DNA，利用PCR技术鉴定阳性菌株。本发明具有操作简单，转化率高等优点，成功实现了桑黄的遗传转化，使得在桑黄中进行同源敲除、过表达、异源表达成为可能，解决了无法建立桑黄遗传转化体系的问题。

摘要： 本发明公开了一种基于细菌遗传转化的纳米材料遗传毒性检测方法，其步骤：A、将待检测的纳米材料与质粒DNA共同孵育：将质粒DNA等量分装于经过灭菌的管中，分别加入待检测的纳米材料，混匀后，将微量离心管置于黑暗条件下孵育；B、质粒DNA回收：孵育后，通过胶回收试剂盒回收质粒DNA并除去纳米材料；C、大肠杆菌感受态状态细胞制备：使用标准的氯化钙方法制备大肠杆菌DH5α菌株的感受态状态细胞；D、大肠杆菌感受态状态细胞的转化：利用回收得到的质粒DNA转化大肠杆菌DH5α菌株的感受态状态细胞；E、转化子计数及转化效率计算；本方法检测装置简单，操作方便，全面提高了纳米材料遗传毒性的分析速度和精确度，易于实现纳米材料遗传毒性数据库的建立。

摘要： 本发明公开了一种检测橡胶树白粉菌遗传转化效率的方法，所述方法包括如下步骤：将重组丝状真菌接种至橡胶树古铜期叶片上进行培养后喷施潮霉素B进行筛选，取发病叶片连同菌丝用GUS染色液进行染色，被染成蓝色的菌丝所对应的重组丝状真菌即为转化成功的转化子。本发明提供了一种可用于转化橡胶树白粉菌等丝状真菌且可用于评估橡胶树白粉菌转化体系转化效率的重组质粒，此重组质粒携带由橡胶树白粉菌核糖体蛋白编码基因RP60启动子序列融合GUS基因序列的重组报告基因。使用此重组质粒转化橡胶树白粉菌时，可对转化后获得的转化子菌丝进行简单的GUS染色来判断报告基因是否转化成功，相比以往传统检测转化子的方法检测效率更高。