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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

  • 召开年:2009
  • 召开地:贵阳
  • 出版时间: 2009-10

主办单位:中华医学会;中华预防医学会

会议文集:第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文集

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  • 摘要:目的:制备和筛选高亲和力和高中和活性的抗EV71病毒的单克隆抗体,并对其特异性和抗原表位进行鉴定。rn 方法:利用杂交瘤细胞系和有限稀释法挑选阳性克隆,用葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗,并进行抗体的中和效价、交叉反应性以及表位进行分析。rn 结果:获得阳性细胞克隆5株,筛选出1株抗EV71病毒的单克隆抗体,纯度大于95%,抗体滴度达到10-7,对EV71病毒具有广谱中和特性,与CA16无交叉反应,为VP1特异性,并识别EV71的构象型表位。rn 结论:筛选出1株具有高亲和力和中和活性的EV71病毒的单克隆抗体,为研制EV71病毒感染性疾病的诊断试剂提供了重要工具,并为研制治疗性单克隆抗体提供了条件。
  • 摘要:目的:建立志贺菌FaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术,为从患者、食品和环境中快速分离和鉴定志贺菌提供技术支撑。rn 方法:根据志贺菌ipaH基因序列设计一对特异性引物和TaqMan-MGB探针;通过对PCR扩增体系和反应条件的优化,建立志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR快速检测技术;用添加已知志贺菌浓度的样本验证方法敏感性;用志贺菌标准菌株、分离株以及大肠埃希菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性。rn 结果:用本研究建立的志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测方法检测志贺菌,其Ct值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系(Y=-3.93×LOG(X)+37.34,R=0.999),最低检测浓度为30 CFU/ml;3株志贺菌标准株,30株志贺菌分离株检测结果均为阳性;而沙门菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等91株其他细菌的Ct值均大于35或扩增曲线成一平滑直线。与常规分离鉴定方法比较无显著性差异(P>0.05,x2=0.27)。对于纯菌和食品样品整个检测过程仅需2 h和10 h。rn 结论:志贺菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,有很好的应用前景和研究价值。
  • 摘要:目的:以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用。rn 方法:福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠。以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18~24h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用。富含SPA的金黄色葡萄球菌(No 1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价。rn 结果:福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1:320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好。rn 结论:以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路。
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