临床分离株

摘要： 为了解上海市猪丹毒杆菌流行株的耐药状况,对上海市2011—2017年分离到的猪丹毒杆菌采用纸片扩散法(K-B法)和微量肉汤稀释法(MIC法)进行药敏试验,同时对临床分离株与健康带毒株的MIC结果进行比较.结果显示:所有菌株对β-内酰胺类和大环内酯类药物敏感,而对林可霉素、四环素类、氯霉素类、喹诺酮类等原本敏感的药物,已产生较强耐药性;对临床分离株与健康带毒株的MIC结果比较分析发现,致病菌株和健康带毒株的耐药性存在较大差异.结果表明,上海市猪丹毒杆菌耐药情况较为严峻,除对β-内酰胺类和大环内酯类药物较为敏感外,对其他药物均出现不同程度的耐药.本研究为临床合理用药提供了有价值的参考资料.

摘要： P1578新加坡肠杆菌科临床分离株和高致病性肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶编码质粒的研究//Mel Gvin Yong,Yahua Chen,Guodong Oo,等碳青霉烯酶编码质粒在耐多药细菌中的水平基因传播是碳青霉烯酶耐药性上升的主要驱动因素,但其接合机制和进化尚不清楚.我们对2010-2015年在新加坡收集的1215株肠杆菌科临床分离株进行全基因组测序,共鉴定了1126个碳青霉烯酶编码质粒,发现pKPC2正超过pNDM1成为新加坡肠杆菌科新的优势质粒.pKPC2经常与包括高致病性肺炎克雷伯菌在内的肠杆菌科多属细菌接合,并在没有选择压力和最小适应性序列变化的情况下,在体外保持稳定.此外,与pKPC2相比,供体和受体对之间存在荚膜和分类学相关性降低造成了pNDM1更大的接合障碍.pKPC2在肠杆菌科各属细菌中的适合度代价低,可解释之前在其他生态环境中未能检出携带选择.pKPC2在高致病性肺炎克雷伯菌中的易接合性和稳定性可能会加速其向社区传播.

摘要： 目的 构建HBV临床分离株复制细胞系,为抗病毒药物筛选提供新的细胞模型.方法 从乙型肝炎患者血清中PCR扩增乙肝病毒全长基因组,经SapI酶切,T4连接酶连接环化后作为模板,PCR扩增0.2拷贝HBV基因组(nt1402-nt1989)及1.0拷贝HBV基因组(nt1402-nt3215-nt1407);依次克隆入pcDNA3(-)-EGFP-ΔCMV载体得到p1.2×HBV-EGFP质粒;用Lipofectamine 2000将重组质粒转染HepG2细胞,使用含G418(700μg/mL)培养基培养2～3周,挑选阳性克隆,进一步传代培养获得HBV复制细胞系(HepG2X15).收集细胞系培养上清ELISA检测HBsAg和HBeAg水平;Real-time PCR检测HBV病毒含量.收集培养细胞,Southern blot检测细胞内HBV复制中间体;免疫荧光检测细胞内HBsAg和HBcAg.结果 筛选出1株来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,在培养上清中检测到高水平HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体,免疫荧光检测到细胞内高水平HBsAg和HBcAg.与HepG2.2.15细胞系相比,上清中HBsAg和HBV DNA水平更高.结论 成功建立来源于临床分离株的HBV-C基因型复制细胞系,该细胞系稳定表达HBsAg、HBeAg和HBcAg,并支持高水平的HBV复制,可以用于抗HBV药物筛选及临床分离株的耐药机制等研究.

摘要： 为了解我国新疆地区牛分枝杆菌的毒力基因变异情况并初步评估其毒力变化,利用聚合酶链式反应(PCR)检测临床分离的66株牛分枝杆菌的29个毒力基因,经Sanger测序后与标准株AF2122/97和本实验室保存的两株牛分枝杆菌(M.bovis C68004和M.bovis N)进行序列比对,对基因突变情况进行统计,分析基因突变对其编码蛋白功能和结构的影响.结果 表明:1)临床分离株与本实验室保存的高毒力菌株M.bovis N毒力基因突变位点具有很高的相似性,在检测的29个毒力基因中,50％以上临床分离株与M.bovis N共有25个基因序列一致;2)临床分离株广泛存在的Mb2958、Mb2982C和Mb1553C基因突变PROVEAN评分均低于-2.5,可能改变其编码的酶催化活性,进而影响细胞壁脂类合成;3)Mb0607、Mb0609、Mb0606、Mb2979C和Mb1214基因突变分别造成哺乳动物细胞入侵蛋白、甲基转移酶和酰基转移酶蛋白二级结构改变,或许对细菌的胞内生存产生影响.综上,本研究筛选出8个关键毒力基因,这些基因的突变可能在新疆地区牛分枝杆菌流行菌株的毒力变化中发挥重要作用;同时,本研究揭示了关键毒力基因的突变特征,为进一步研究牛分枝杆菌遗传多样性及进化规律奠定了基础.

摘要： 菌株资源化工程属微生物领域的基础建设,西方发达国家在19世纪末率先建立了经典的微生物资源化方法,不断完善的保藏体系、物种注释技术以及全球共享机制,实现了生物资源的扩充和储备.丰富的模式菌株、标准菌株及生产菌株保持了科学研究、生物经济(如抗菌药物、疫苗、检测试剂研发及标准制定等)及国家安全上的优势.但我国对其战略性认识不足,从顶层设计到资金投入远落后于发达国家,这与我国经济社会发展水平不相称.本文借鉴世界微生物菌种保藏联合会和世界生物数据中心(隶属WFCC)的做法,以临床新种/株收集为目的 ,对分离株鉴定、保存及上传体系建设提出建议.

摘要： 目的 了解呼和浩特地区住院腹泻患者艰难梭菌产毒情况和产毒艰难梭菌多位点序列分型(MLST)情况.方法 收集2018年7月—2019年12月内蒙古医科大学附属医院成人腹泻患者的粪便样本326份,进行艰难梭菌培养和鉴定,采用聚合酶链反应(PCR)扩增艰难梭菌毒素基因(tcdA和tcdB)和二元毒素基因(cdtA和cdtB),以明确是否为产毒艰难梭菌;对产毒艰难梭菌进行MLST.结果 共培养出艰难梭菌46株,其中35株为产毒艰难梭菌,毒素基因tcdA(-)、tcdB(+)型3株,tcdA(+)、tcdB(+)型32株,二元毒素基因检测均为阴性;产毒菌株包括13个不同ST型别(2、3、14、33、35、39、42、48、52、54、55、109、512),其中ST54型是最主要的型别,占22.9％(8/35),其次是ST2型和ST55型,各占14.3％(5/35),未检出核糖体027型(ST1型)和核糖体078型(ST11型)高产毒株.结论 呼和浩特地区成人腹泻患者感染的产毒艰难梭菌毒素以tcdA(+)、tcdB(+)为主,未检出产二元毒素的高产毒株.艰难梭菌基因型别较多(13种),ST54型、ST2型、ST55型为居前3位的ST型别.

摘要： P20132016年美国密歇根州弗林特市自来水和临床菌株中嗜肺军团菌的全基因组序列的比较//Emily Garner,Connor,L.Brown,David Otto Schwake等2014―2015年美国密歇根州弗林特市用水安全发生危机期间,在杰纳西郡暴发了2起嗜肺军团菌病.在第二次暴发期间,收集了10份来自临床的嗜肺军团菌分离株,及第二年收集的103份源于自来水的嗜肺军团菌分离株,提交给杰纳西郡实验室进行全基因组的序列比对.记录了来自临床和自来水分离出的嗜肺军团菌株的遗传多样性.分离株来自1个分支(3个临床分离株,3个来自弗林特医院自来水的分离株,1个来自弗林特住宅的自来水分离株,及参考的巴黎菌株)具有高度的相似性(2-1062个单核苷酸多态性),所有嗜肺军团菌均为序列1型,血清组1型.血清组6型分离株属于2518型序列,在弗林特医院的水样中广泛分布,但与临床分离株无相似之处.弗林特自来水中的嗜肺军团菌株在暴发后具有多样性,与某些致病菌株相似.

摘要： 目的 探讨多位点序列分型(MLST)技术在新疆人间布鲁氏菌病分离株遗传进化研究中的应用价值,了解分离株的种群结构和遗传进化关系.方法 采用MLST对2015、2016年分离自新疆7个地州的24株人间布鲁氏菌病分离株和3株布鲁氏菌标准参考菌株进行分析,统计各菌株序列型(STs),运用BioNumerics软件构建菌株最小进化树,分析菌株间遗传关系;收集过往研究的186株全国不同地区布鲁氏菌分离株MLST结果,分析各ST型分布特点.结果 24株人间布鲁氏菌分离株全部为ST8型,3株标准参考菌株(羊种16M、牛种544A、猪种1330S)分别为ST7型、ST1型、ST14型;24株人间布鲁氏菌分离株的9个MLST位点变异完全相同,分离株种群结构单一.ST8型菌是我国主要流行的布鲁氏菌,且以北方流行为主;MLST能较好的区分布鲁氏菌种别,但不能有效区分生物型别.结论 ST8型菌(羊种3型)是新疆人间布鲁氏菌病的主要流行菌株,MLST技术可作为人间布鲁氏菌种群结构和遗传进化关系研究的补充手段.

摘要： 了解北京地区儿童金黄色葡萄球菌皮肤软组织感染(skin and soft tissue infections,SSTIs)临床分离株的分子学分型、相关毒力基因携带和耐药情况.

摘要： 丙型肝炎病毒感染是慢性肝病及肝细胞癌的主要致病因素之一.JFH-1是第一个被报道能在细胞水平上产生感染性颗粒的cDNA克隆,它的成功构建极大促进了丙肝领域的基础研究.此后,其它基于JFH-1的基因型内或型间的重组克隆多为共有序列克隆.为了探索能否从临床分离株出发直接构建感染性克隆,设计了一个功能性克隆筛选策略:以JFH-1的cDNA作为起始的分子骨架,从一株基因型2a的临床分离株PR63的准种序列中筛选有功能的Core-NS3、NS3-NS5A及NS5B片段,然后把这些片段组合起来,通过进一步的优化及细胞内适应,得到了全长的PR63感染性克隆PR63cc.PR63cc是第一例源自中国丙肝患者血清的感染性克隆,它可以在Huh7来源的肝癌细胞系中高效扩增,最高感染性滴度达到1.6×105ffu/mL,也可以被HCV-E2抗体中和.和JFH-1相比，PR63cc对IFN-β和NS5B的抑制剂2-CMA的敏感性相似，但PR63cc对NS5A的抑制剂Daclatasvir高度耐受。反向遗传学分析表明NSSA第31位的甲硫氨酸残基是PR63c。对Daclatasvir不敏感的原因，这说明构建更多的感染性克隆对HCV抑制剂开发的重要性。综上所述，开发了一种从临床分离株出发直接构建感染性克隆的方法，将得到的PR63cc，从感染性、被E2抗体中和的能力及对一些HCV抑制剂的耐受性方面都和JFH-1做了一一对比。这种构建HCV全长感染性克隆的方法，不仅能应用于其他临床分离株，还可能为今后丙型肝炎患者的个性化治疗带来便利。

摘要： 目的:OqxAB外排泵是近年发现的质粒介导喹诺酮类耐药机制，本文对oqxAB基因在肠杆菌科细菌中的发生率进行研究。rn 方法:收集2010年临床分离株大肠埃希菌136株、肺炎克雷伯菌154株和其他克雷伯菌属细菌18株，琼脂稀释法测定11种抗菌药物对其最低抑菌浓度。PCR法检测其中oqxAB基因的发生率，并进行序列分析。rn 结果: 136株大肠埃希菌对环丙沙星和左氧氟沙星的敏感率分别为28.7％和29.4％，而154株肺炎克雷伯菌对两药的敏感率分别为26.0％和30.5％。6.6％的大肠埃希菌oqxAB基因阳性，除1株变栖克雷伯菌外，oqxAB在所有克雷伯菌属细菌中均为阳性。所有oqxAB基因阳性大肠埃希菌和随机选取肺炎克雷伯菌的PCR产物进行测序，均与源自大肠埃希菌质粒pOLA52的oqxAB序列有高度同源性；2株大肠埃希菌中发现的OqxA或OqxB存在氨基酸改变，其编码基因分别命名为oqxA2、oqxB2和oqxB3。rn 结论:本研究在2株大肠埃希菌中发现3种oqxAB基因新亚型。所有肺炎克雷伯菌临床株中均存在oqxAB基因，该基因可能位于染色体，因此肺炎克雷伯菌可成为oqxAB基因的贮藏库。

摘要： 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，Ct)是一种严格的细胞内寄生的微生物，是常见的性传播疾病病原体，可以引起尿道炎、宫颈炎、盆腔炎，可并发不孕、不育、异位妊娠等。因此，及时有效的治愈沙眼衣原体感染有重要的临床意义。近年来，有关衣原体临床治疗失败的个例屡有报道。为了解广州地区沙眼衣原体临床株的药物敏感性和基因型分布以及二者之间的关系，笔者用6种常用抗生素对40株临床分离株进行体外抗菌活性检测及基因测序分型，以期为临床用药提供依据。

摘要： 水貂出血性肺炎是由绿脓杆菌引起的毛皮动物的一种急性细菌性传染病,属人兽共患病,以肺部出血和败血症为主要特征.该病发病急,死亡快,出现呼吸困难、鼻孔流出红色带泡沫液体等症状.水貂出血性肺炎死亡率为10％ - 54％,目前,已经成为严重威胁养貂业的重要疾病之一,给养殖户造成了严重的直接或间接经济损失.本病常呈地方性暴发流行,以沿海气候潮湿的地区发病较多,我国流行的血清型以G、B型为主.目前用于防治水貂出血性肺炎的疫苗产品以灭活疫苗为主.

摘要： 为了解动物源大肠杆菌O157∶H7临床分离株的生长动力学规律及生物学特性,以及动物源大肠杆菌O157∶H7临床分离株的生物学差异,利用紫外分光光度计测量细菌OD600值,绘制其生长动力学曲线;通过生化试验研究动物源各临床分离株与标准株的生物学特性.结果显示动物源大肠杆菌O157∶H7各临床分离株的生长曲线基本一致,与标准株相比,动物源分离株进入对数期较早.生化试验有14项结果显示动物源大肠杆菌O157∶H7各临床分离株均符合典型的大肠杆菌生化特性,有5项结果表明动物源大肠杆菌O157∶H7各临床分离株和标准株之间存在差异性,其中动物源大肠杆菌O157∶H7各临床分离株均产尿素酶,发酵山梨醇.以上结果表明,动物源大肠杆菌O157∶H7各临床分离株的生物学特性有一定差异,本研究为进一步研究大肠杆菌O157∶H7的致病机制提供了理论依据.

摘要： 为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布，用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性，建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA，L4，L22和四环索耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明，31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23％，17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24％，泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59％。48株猪链球菌对四环素均耐药，但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主，占75％(12/16)，mefA/E、msrD占25％(4/16)，16株红霉索耐药菌株中，tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25％(4/16)、62.5％(10/16)、31.25％(5/16)和31.25％(5/16)，没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。

摘要： 目的：了解新疆地区2012年～2014年结核分枝杆菌对耐药情况,为本地区结核病的诊断、治疗以及防控提供参考.方法：用BACTEC MGIT-960系统对不同来源的临床标本进行药物敏感试验.结果：总耐药率2012年至2014年分别为70.56％,26.56％,27.47％,耐SM、INH、REP率由2012年的11.48％、11.15％、4.57％降至2014年的5.13％、3.83％、2.77％.多耐药率由2012年的10.81％降至2014年的4.68％.结论：尽管新疆近3年结核分歧杆菌耐药率呈下降趋势,但仍高于全国平均水平,耐药性结核需引起高度重视.

摘要： 目的：了解新疆地区2012年～2014年结核分枝杆菌对耐药情况,为本地区结核病的诊断、治疗以及防控提供参考.方法：用BACTEC MGIT-960系统对不同来源的临床标本进行药物敏感试验.结果：总耐药率2012年至2014年分别为70.56％,26.56％,27.47％,耐SM、INH、REP率由2012年的11.48％、11.15％、4.57％降至2014年的5.13％、3.83％、2.77％.多耐药率由2012年的10.81％降至2014年的4.68％.结论：尽管新疆近3年结核分歧杆菌耐药率呈下降趋势,但仍高于全国平均水平,耐药性结核需引起高度重视.

摘要： 目的：了解新疆地区2012年～2014年结核分枝杆菌对耐药情况,为本地区结核病的诊断、治疗以及防控提供参考.方法：用BACTEC MGIT-960系统对不同来源的临床标本进行药物敏感试验.结果：总耐药率2012年至2014年分别为70.56％,26.56％,27.47％,耐SM、INH、REP率由2012年的11.48％、11.15％、4.57％降至2014年的5.13％、3.83％、2.77％.多耐药率由2012年的10.81％降至2014年的4.68％.结论：尽管新疆近3年结核分歧杆菌耐药率呈下降趋势,但仍高于全国平均水平,耐药性结核需引起高度重视.

摘要： 本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供一株禽源H9N2亚型禽流感毒株分离鉴定及应用。该H9N2亚型禽流感毒株已于2019年07月02日保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC No.18172。本发明从分子水平阐述分离毒株的抗原变异情况；甲醛灭活后，与605佐剂制备灭活疫苗，免疫21日龄SPF鸡，通过血清学方法和免疫攻毒方法对免疫效果进行评价，证实该毒株保护效果较好，可用作禽流感H9N2亚型疫苗候选毒株。本发明为禽流感防控提供思路，为禽流感候选毒株筛选提供技术教导，具有重要的公共卫生意义。

摘要： 本发明提供了H9亚型禽流感HF株以及其灭活抗原制备的疫苗组合物物，该株具有良好的免疫原性，在低含量条件下即能对现有的H9亚型禽流感完全保护，且能与多种其他抗原制备联苗和复合疫苗。

摘要： 本发明公开一株临床分离的放线菌样菌种，是从一名男性肺炎患者的痰中分离到的，该菌株为IFM10348，在中国典型培养物保藏中心保藏的菌株保藏号：CCTCC NO:M 2011245，于2011年7月10日保藏。培养方法是将分纯的放线菌样菌株IFM10348以分区划线法接种于培养基平板上，置于温箱中需氧培养；之后取培养物涂片，分别进行革兰染色和抗酸染色；再将菌株点种于凹玻片的培养基内，覆盖盖玻片，置湿盒内于温箱中需氧培养；待菌体生长后，取出盖玻片，经固定、脱水、干燥后在盖玻片上喷金；又将菌株接种于培养基平板上进行需氧培养。本发明菌株的培养方法从而为加深对临床病原放线菌的认识，为将来更好地预防和治疗相关疾病提供依据。

摘要： 本发明提供的一株新的牛肠道病毒1型EV‑E‑HN1817株，该毒株对于乙醚、氯仿等脂溶性溶剂及胰蛋白酶具有一定的抵抗能力，可以耐受pH=3.0和5.0的酸性环境，然而，对pH=9.0和10.0的碱性环境较为敏感，50°C处理30min会使得病毒活性明显下降，表明其对热较为敏感。将牛肠道病毒1型EV‑E‑HN1817病毒灭活后制备得到的灭活疫苗能够刺激犊牛产生一定浓度的中和抗体，在首次免疫后14天可以达到1:64以上的中和抗体效价，加强免疫后14天，其中和抗体效价最高可以达到1:256。

摘要： 本发明涉及一株同时表达F4和F18菌毛的猪源大肠杆菌无毒分离株及其应用，所述猪源大肠杆菌无毒分离株F418的保藏编号为CCTCC M 2022089，保藏日期为2022年1月18日。本发明分离菌株为大肠杆菌，能同时表达F4和F18两种菌毛抗原，为猪源自然分离株，PCR测试表明该菌株缺乏LT和STb肠毒素基因，不产生肠毒素，能够良好地黏附定植于宿主猪，该菌株具有开发成细菌无毒活疫苗候选株的潜力，通过口服该毒株能够良好地黏附定植于宿主猪，诱导仔猪产生抗F4和F18两种菌毛抗原的免疫应答，发挥一定免疫效力，安全性具有保障，有望成为防控F4和F18大肠杆菌感染的潜在活疫苗候选株。

摘要： 本发明公开了一株能同时黏附定植和改变小鼠易感性的大肠杆菌分离株F4NT，所述大肠杆菌分离株F4NT保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022090，保藏日期为2022年1月18日。该分离株同时表达Peg和F4两种菌毛黏附素抗原，在小鼠体内持续定植7天并诱导小鼠产生针对Peg菌毛和F4菌毛的特异性抗体，其中Peg菌毛抗体滴度在21天达1:8，具有作为诱导小鼠宿主产生免疫应答的大肠杆菌活疫苗候选株的潜在应用价值。值得注意的是，产肠毒素致病性大肠杆菌（ETEC）F4 ETEC标准株C83902仅能在小鼠体内1天内存在（黏附定植），且无特异性抗体产生。

摘要： 本发明公开了一株人诺如病毒(human norovirus，HuNoV)GII.4中国临床分离株序列及其感染性克隆，以及感染性克隆的构建方法与应用，该临床分离株序列和目前公开的国内外HuNoV GII.4序列存在一定的差异，且该克隆能够在多种真核细胞系中有效增殖，并能够产生子代感染性的病毒粒子；灭活后的病毒粒子可以作为HuNoV的一种新型疫苗开发研究。

摘要： 本发明公开了一株人诺如病毒(human norovirus，HuNoV)GII.4中国临床分离株序列及其感染性克隆，以及感染性克隆的构建方法与应用，该临床分离株序列和目前公开的国内外HuNoV GII.4序列存在一定的差异，且该克隆能够在多种真核细胞系中有效增殖，并能够产生子代感染性的病毒粒子；灭活后的病毒粒子可以作为HuNoV的一种新型疫苗开发研究。

摘要： 本发明是微生物研究领域新疆地区结核病人痰标本中结核分枝杆菌临床分离株结核分枝杆菌PhoP的天然突变株。通过采集多个新疆地区的传染科结核病人的痰标本得到438例临床分离株，提取总DNA、普通PCR、荧光定量PCR，发现临床分离株中PhoP的天然突变株。

摘要： 本发明涉及一种构建基因2a型丙型肝炎病毒临床分离株细胞培养模型的方法。本发明还提供了能在病毒包装细胞中高效感染和复制的重组丙型肝炎病毒。本发明的技术方案可应用于对HCV病人的个性化治疗，开发具广谱活性的疫苗，筛选抗HCV的特异性药物等。