脑微血管内皮细胞

摘要： 目的探讨木通皂苷D对脂多糖(LPS)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)凋亡和氧化应激的影响及作用机制。方法体外培养HBMEC,用不同剂量(12.5、25、50μmol/L)木通皂苷D干预LPS诱导的HBMEC 24 h后,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,比色法检测细胞中SOD活性和MDA含量,qRT-PCR检测细胞中circ_TTC3表达。转染circ_TTC3小干扰RNA或过表达载体至HBMEC细胞,上述相同方法观察circ_TTC3对LPS诱导的HBMEC凋亡和氧化应激的影响。结果与LPS组比较,木通皂苷D降低了LPS诱导的HBMEC增殖抑制率、凋亡率及细胞中MDA含量(P<0.05),而提高了SOD活性(P<0.05)。敲减circ_TTC3降低了LPS诱导的HBMEC增殖抑制率、凋亡率及细胞中MDA含量(P<0.05),而提高了SOD活性(P<0.05)。木通皂苷D降低了LPS诱导的HBMEC中circ_TTC3表达,过表达circ_TTC3逆转了木通皂苷D对LPS诱导的HBMEC增殖、凋亡及氧化应激的影响。结论木通皂苷D可能通过下调circ_TTC3抑制LPS诱导的HBMEC凋亡和氧化应激。

摘要： 目的 探讨丹酚酸A(SAA)对血管内皮细胞低氧损伤后体外血管新生能力的作用及其机制。方法 采用氧糖剥夺(OGD)的方法构建人脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺氧损伤模型,CCK-8法检测OGD2,4,6,8和10 h细胞存活率,确定OGD时间。HBMEC分为细胞对照组、OGD组、OGD+SAA 0.3,1.0和3.0μmol·L^(-1)组及OGD+依达拉奉10μmol·L^(-1)组,OGD 6 h后,用CCK-8法检测细胞存活率;Matrigel管腔形成实验观察OGD 2~10 h管腔形成;OGD 6 h后,检测管腔节点数、网眼数、分支数以及管腔长度;Ed U掺入实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移距离。HBMEC分为细胞对照组、OGD组、OGD+SAA 3.0μmol·L^(-1)组和OGD+依达拉奉10μmol·L^(-1)组,OGD 6 h后,Western印迹实验检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及其受体VEGFR2蛋白表达水平及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路蛋白磷酸化水平。结果 OGD 6 h细胞存活率为(56±6)%,确定为后续OGD时间。与细胞对照组相比,OGD组细胞存活率明显降低,形成管腔的节点数、网眼数、分支数以及管腔长度均显著减少(P<0.01,P<0.05),EdU阳性细胞比例和细胞迁移距离也明显下降(P<0.01)。与OGD组相比,OGD+SAA 3.0μmol·L^(-1)组和OGD+依达拉奉10μmol·L^(-1)组细胞存活率明显提高(P<0.05),形成管腔的节点数、网眼数、分支数以及管腔长度均显著升高(P<0.01,P<0.05),EdU阳性细胞比例和细胞迁移距离也明显增加(P<0.01,P<0.05);Western印迹结果显示,与OGD组相比,OGD+SAA 3.0μmol·L^(-1)组HIF-1α,VEGFA和VEGFR2蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05),PI3K,Akt和mTOR磷酸化水平明显升高(P<0.05)。结论 SAA可能通过激活HIF-1α/VEGFA/VEGFR2及其下游信号通路PI3K/Akt/mTOR发挥内皮细胞保护和促进血管生成的作用。

摘要： 目的探究miR-181a对缺氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞(rBMECs)增殖、凋亡的影响及可能的作用机制。方法取对数生长期的rBMECs分为对照组、模型组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组、miR-181a inhibitor+si-NC组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组。体外模拟脑缺氧微环境,qRT-PCR法检测6组细胞中miR-181a和沉默信息调节因子1(SIRT1)mRNA的表达;MTT法、流式细胞术分别检测6组细胞增殖、凋亡情况;荧光分光光度计检测6组细胞荧光强度,并通过计算透过Transwell小室的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)的浓度评价rBMECs的屏障功能;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;Western blot检测血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)、SIRT1和凋亡相关蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组rBMECs中miR-181a的表达、细胞凋亡率、FITC-Dextran浓度、ROS、MDA水平、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达显著升高(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖率、SOD、GSH水平、VE-cadherin、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,miR-181a inhibitor组细胞中miR-181a的表达、细胞凋亡率、FITC-Dextran浓度、ROS、MDA水平、Bax、Caspase-3表达明显降低(P<0.05),SIRT1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖率、SOD、GSH水平、VE-cadherin、Bcl-2表达明显升高(P<0.05);使用si-SIRT1干扰SIRT1的表达能明显逆转miR-181a inhibitor对缺氧诱导的rBMECs增殖、凋亡及屏障功能的作用。结论下调miR-181a的表达可促进缺氧诱导的rBMECs增殖、抑制rBMECs凋亡;其作用机制可能与上调SIRT1的表达有关。

摘要： 目的:右美托咪定(Dex)调控miR-132-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的脑微血管细胞(HBMEC)损伤的影响。方法:体外培养人HBMEC,用低、中、高剂量(0.01、0.10、1.00μmoL/L)Dex干预后,建立H/R损伤模型;转染miR-NC、miR-132-3p至HBMEC,建立H/R模型;转染anti-miR-NC、anti-miR-132-3p,用1.00μmoL/L Dex干预后,建立H/R损伤模型。ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α水平;试剂盒检测MDA、SOD、CAT水平;RT-qPCR检测细胞miR-132-3p表达。结果:HBMEC经H/R诱导后,IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平升高(P<0.05),SOD、CAT水平降低(P<0.05),miR-132-3p表达水平降低(P<0.05);Dex干预后,H/R诱导的HBMEC中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平降低(P<0.05),SOD、CAT水平升高(P<0.05),miR-132-3p表达水平升高(P<0.05)。上调miR-132-3p后,H/R诱导的HBMEC中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平降低(P<0.05),SOD、CAT水平升高(P<0.05)。下调miR-132-3p逆转Dex对H/R诱导的HBMEC炎症因子表达及氧化应激的影响。结论:Dex上调miR-132-3p抑制H/R诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

摘要： 目的观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制。方法将30只SD大鼠随机均分为空白组(同体积蒸馏水)、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清。将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含药血清、尼莫地平+格列齐特含药血清、FPS-ZM1、PDTC干预。通过形态学观察及CCK-8法检测细胞存活率,采用Western blot、RT-PCR法检测RAGE、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白和mRNA表达情况。结果与空白组比较,模型组细胞存活率明显下降(P0.05)。结论左归降糖通脉方可能通过抑制AGEs与RAGE的结合,抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活,下调下游炎症因子的释放,对BMECs起到保护作用。

摘要： 目的 探讨lncRNA TSPOAP1-AS1对缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理的脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)存活的影响。方法 收集10例缺血性脑卒中(ischemic stroke, IS)患者血清样本和10名同期进行健康体检者血清样本,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测样本中TSPOAP1-AS1的表达水平;小鼠BMECs进行正常培养和OGD诱导,RT-PCR检测2组BMECs中TSPOAP1-AS1相对表达水平;干扰OGD诱导的BMECs中TSPOAP1-AS1表达(si-TSPOAP1-AS1+OGD组),对照组为si-NC+OGD组。RT-qPCR检测细胞中TSPOAP1-AS1相对表达水平,MTS法检测细胞培养24、48、72 h后细胞的存活率。结果 IS患者血清TSPOAP1-AS1表达水平显著高于健康体检者(P<0.01);OGD组细胞中TSPOAP1-AS1表达水平显著高于正常培养组(P<0.01);转染si-TSPOAP1-AS1能够显著下调OGD处理后的BMECs中TSPOAP1-AS1相对表达水平(P<0.001)。与si-NC+OGD组相比,si-TSPOAP1-AS1+OGD组细胞在培养24、48、72 h后的存活率均增大(均P<0.01)。结论 干扰TSPOAP1-AS1表达可促进OGD处理BMECs的存活。

摘要： 目的探讨基于microRNA-92a-3p(miR-92a-3p)靶向调控SIRT1氧糖剥夺再灌注(OGD/R)诱导小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)炎症反应的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定miR-92a-3p、SIRT1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达;Western blotting明确SIRT1、核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65、TNF-α和IL-1β蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证miR-92a-3p与SIRT1靶向关系;划痕实验检测bEnd.3细胞的迁移能力。结果OGD/R组miR-92a-3p相对表达量较对照组升高(P<0.05)。M_SIRT1 WT+mimics+TK组荧光素酶活性较M_SIRT1 WT+mimics NC+TK组低(P<0.05)。OGD/R组SIRT1蛋白和mRNA相对表达量较对照组降低(P<0.05),OGD+92a抑制剂组较OGD+92a抑制剂内参组升高(P<0.05)。miR-92a-3p模拟物组NF-κBp65/p-NF-κBp65蛋白较模拟物内参组高,SIRT1蛋白和mRNA表达较模拟物内参组低(P<0.05)。miR-92a-3p模拟物组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA相对表达量较模拟物内参组高(P<0.05)。miR-92a-3p模拟物组伤口愈合率较模拟物内参组低(P<0.05)。结论miR-92a-3p通过靶向抑制SIRT1表达,促进OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞炎症反应。

摘要： 目的 观察黄芪甲苷(AST IV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)增殖、凋亡及线粒体功能的影响.方法 差速密度梯度离心法提取BMECs,免疫荧光检测血管性血友病因子(vWF)表达对细胞进行鉴定,取第3代BMECs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立正常组和模型组.CCK8法测定细胞增殖情况,LDH漏出率检测细胞损伤,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡,TraKineTMPro活细胞线粒体染色试剂盒对线粒体进行染色,激光共聚焦观察线粒体结构,JC1染色测定线粒体膜电位变化情况.结果 成功培养分离BMECs,阳性表达vWF,与正常组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05),LDH漏出率显著增加(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01);与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMECs增殖、抑制LDH的释放和抑制细胞凋亡(P<0.05,P<0.01).与正常组比较,模型组线粒体荧光强度明显降低,分布不均;与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组深红色荧光强度有所增强.与正常组比较,模型组线粒体膜电位水平下降(P<0.01),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组线粒体膜电位明显增强(P<0.05,P<0.01).结论 AST IV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BEMCs细胞增殖,抑制细胞凋亡,降低LDH漏出率,其机制与保护线粒体,增加线粒体膜电位有关.

摘要： 采用氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,建立内皮细胞氧化损伤模型,通过瑞氏染色观察细胞形态变化,利用试剂盒检测细胞上清液中内皮细胞损伤相关的一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和内皮素-1(ET-1)变化,采用Western blot法检测与内皮细胞凋亡相关的Bax、Bcl-2、caspase3表达变化,系统分析山茱萸多糖对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3氧化损伤的保护作用.结果 表明经过山茱萸多糖处理后的ox-LDL刺激bEnd.3细胞形态逐渐恢复,细胞上清液中ET-1和MDA显著含量下降(P＜0.01),NO和SOD含量上升(P＜0.01);凋亡抑制蛋白Bcl-2表达升高,促凋亡蛋白Bax和caspase3表达下降.说明山茱萸多糖能够在一定程度上保护ox-LDL引发的内皮细胞氧化损伤.

摘要： 目的 探讨茯苓酸(PA)对过氧化氢(H2O2)诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及增殖的影响.方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,随机分为NC组(正常培养细胞)、H2O2组(H2O2浓度为100 μmol/L)、H2O2+PA 10 μmol/L 组(H2O2浓度为100 μmol/L,PA 浓度为10 μmol/L)、H2O2+PA 20 μmol/L 组(H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为20 μmol/L)、H2O2+PA 40 μmol/L 组(H2O2浓度为100 μmol/L,PA 浓度为40 μmol/L).采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)的表达量.结果 与NC组比较,H2O2组细胞存活率及CAT、SOD、GSH-Px的水平显著降低(P＜0.05),LDH、MDA、ROS的水平显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P＜0.05);与H2O2组比较,H2O2+PA 10 μmol/L 组、H2O2+PA 20μmol/L组、H2O2+PA 40 μmol/L组细胞存活率及CAT、SOD、GSH-Px的水平显著升高(P＜0.05),LDH、MDA、ROS的水平显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率与Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P＜0.05).结论 茯苓酸可抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活.

摘要： 目的：探讨脑髓康对糖氧剥夺(OGD)诱导损伤大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)保护作用的机制原理. 方法：构建RBMEC损伤模型,按实验分组给予含相应血清的培养液处理,应用CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度法检测细胞中氧化应激相关因子超氧化物歧化酶(SOD)、符胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,Western Blot法检测细胞中内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(Caspase12)的表达情况. 结果：与糖氧剥夺组比较,脑髓康能够显著提高OGD诱导损伤RBMEC的存活率(P＜0.01),并且显著抑制其凋亡率(P＜0.01);能够缓解OGD诱导损伤RBMEC中的氧化应激,显著提高细胞中SOD和GSH-Px的活性(P＜0.01,P＜0.05),同时降低细胞中MDA的含量(P＜0.01);此外,脑髓康显著降低了内质网应激相关因子CHOP和Caspase12的表达水平(P＜0.01). 结论：脑髓康可能通过缓解氧化应激以及抑制内质网应激介导的细胞调亡途径,对OGD诱导损伤RBMEC发挥保护作用.

摘要： 目的:研究活血定眩胶囊含药血清对抗缺氧致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤的作用.rn 方法:将30只大鼠随机分为空白对照组1 5只、活血定眩胶囊组15只,采集2组大鼠血清.将bEnd.3细胞分为空白血清正常组、缺氧模型组、阳性对照组、低剂量、中剂量、高剂量活血定眩胶囊血清组,给药后,bEnd.3细胞缺氧6h.显微镜下观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,按试剂盒方法检测细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量.rn 结果:中剂量活血定眩胶囊组可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善bEnd.3细胞的形态,使缺氧所致细胞凋亡数明显减少,有效抑制缺氧诱导的bEnd.3细胞发生G1/S期阻滞,抑制MDA生成,增强SOD活性.rn 结论:活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显的对抗作用,其机制与增强细胞抗氧化能力、抑制细胞凋亡有关.

摘要： 目的:研究活血定眩胶囊含药血清对缺氧致小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3损伤的保护作用.rn 方法:将30只大鼠随机分为空白对照组15只、活血定眩胶囊组15只,采集两组大鼠血清.将bEnd.3分为空白血清正常组,缺氧模型组,尼莫地平对照组,低剂量、中剂量、高剂量活血定眩胶囊血清组,给药后,bEnd.3缺氧6h.应用荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架微丝的结构;MTT法检测细胞活性;按试剂盒方法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和VEGF水平.rn 结果:中剂量活血定眩胶囊血清组可显著对抗缺氧造成的损伤,明显改善bEnd.3细胞骨架微丝紊乱,抑制细胞上清液中LDH的增加(P＜0.01),并显著增强NO分泌和GSH-PX活性(P＜0.01),以及促进VEGF分泌.rn 结论:活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3损伤具有明显的保护作用,机制可能与抑制细胞凋亡、保护细胞膜完整性和通透性等关,对CAS致脑内皮细胞增殖及毛细血管新生的研究亦有指导意义.

摘要： 目的：探讨补脑Ⅰ号、骨髓间充质干细胞对缺氧复氧小鼠脑微血管内皮细胞及其分泌的血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的影响. 方法：将小鼠脑微血管内皮细胞培养至第二代,制备缺氧复氧模型,然后分别用补脑Ⅰ号含药血清、骨髓间充质干细胞培养基、10％胎牛血清来进行干预.WB检测脑微血管内皮细胞VEGF、ICAM-1蛋白含量. 结果：1.与正常组比较,模型组ICAM-1的蛋白、基因表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,BMSCs组、BMSCs+10％正常血清组、10％补脑Ⅰ号含药血清、10％补脑Ⅰ号含药血清+BMSCs组ICAM-1蛋白及基因表达呈逐渐下降趋势,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论：缺氧复氧后,脑微血管内皮细胞部分凋亡,ICAM-1应激性增多,VEGF降低.

摘要： 脑微血管内皮细胞(CMECs)介于血流、血液和脑组织之间,与细胞外基质、星形胶质细胞共同构成血脑屏障.CMECs具有鲜明的组织结构学特点,即细胞与细胞之间形成紧密连接,履行着独特的功能.利用原子力显微技术(AFM),建立了体外培养大鼠CMECs高分辨成像及力学行为表征的方法.系列研究发现,当CMECs之间形成紧密连接后,细胞内应力纤维彼此之间相互紧密连接,形成稳定的应力网络,能对抗相对大的侧向力(剪应力).当利用AFM的接触模式连续扫描,定量施加侧向力(15-42nN)时,应力纤维可产生适应性改变,即沿施力方向重新组装排列.在局部微区(纳米尺度)施加法向力（～70nN)时，细胞应力纤维网络中可出现应力敏感点，从而对整个细胞的应力纤维网络，甚至细胞核区结构产生影响。当经过氧化氢(300μmo1/L)处理25分钟后，细胞应力纤维网络结点减少，在相同侧向力(15-42nN)作用下，细胞皱缩。上述实验提示，微血管内缺血再灌注损伤中力学因素不容忽视。另外，在实验动物体内以及体外研究均发现，缺血状态可引起细胞内应力纤维重组，从而使过多形成的细胞内囊泡相互连接，最终形成跨细胞的微米级通道，相关研究为血脑屏障的跨细胞大物体传递提供了新的信息。中医血癖证中气血运行不畅的突出表观描述即为血流剪应力下降，涉及微血管内皮生物力学行为的改变。因此，中医“补气以活血”理论的逻辑表述可以理解为生物力学因素的调整。基于中医补气活血理论，我们在国际学术界提出了“生物力药理学”这一新兴的理论体系，一方面重视生物力学因素的等效药理作用，另一方面强调药物通过改变力学行为而发挥作用。同时重点突出力学因素与药物的联合作用。因此，微区力学表征手段与方法学的建立，将中医整体理论框架的研究与目前科学前沿一纳米科技相对接，从新的层次拓展中医核心逻辑，有望为中医理论的客观化研究提供新的手段与视角。

摘要： 目的:本研究利用不同形貌金纳米颗粒多重标记法在纳米尺度上对原代培养的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMECs)表面粘附相关蛋白进行定位和定量分析。方法：本研究通过种子生长法合成直径约60nm、长径比约4: 1的金纳米棒(Au NRs)和边长约51 nm的金八面体颗粒(Au NOs)，并利用静电吸附法在Au NRs和Au NOs表面分别修饰ICAM-1和Integrin-β1蛋白。结果：结果显示利用1vSEM可清楚地分辨rCMECs表面的Au NRs(棒状)和Au NOs(类球形)的形貌。结论：基于不同形貌金纳米颗粒的生物多重标记法是一种简单可行的在纳米尺度上研究微血管内皮细胞表面多种蛋白相互作用的方法。该方法不仅可以定量分析微血管内皮细胞表面不同蛋白的表达量，还可以定位不同蛋白在细胞表面的相对空间位置，为研究粘附相关蛋白之间的相互作用及募集效应提供新手段。

摘要： 目的：观察通络救脑注射液对正常及拟缺血大鼠脑微血管内皮细胞的活性影响，并初步探讨细胞条件培养液内蛋白分泌的时效特征、奠定可溶性蛋白深入分析的技术基础。rn 方法通络救脑注射液作用于正常及拟缺血脑微血管内皮细胞之后，用MTS/PMS比色分析法测定细胞的活性，Bradford法测定细胞培养液总蛋白含量，比色分析法测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)漏出值，同步观察了5个时间点的细胞活性及条件培养液总蛋白量及LDH释放量。rn 结果：通络救脑注射液能够提高拟缺血细胞的活性，且抑制LDH释放量;正常组分泌总蛋白量3 h达到高峰，此时细胞活性最佳，LDH释放量亦少。拟缺血组分泌总蛋白量是6h达到高峰，此时LDH释放量最少，但细胞活性与3 h比较有所下降。rn 结论：通络救脑注射液对拟缺血细胞损伤具有保护作用;以3 h至6 h的细胞条件培养液做为收集目标是研究条件培养液的最佳时间段。

摘要： 目的：通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)的检测，观察解毒通络药物干预后的脑微血管内皮细胞条件培养液(conditioned medium of cerebralmicrovascular endothelial cells，CMECs-CM)特征及其抗缺血及再灌皮质神经元损伤的效应，探讨脑微血管内皮细胞(cerebralmicrovascular endothelial cells，CMECs)调控神经元功能的机制。rn 方法通络救脑注射液(Tongluo Jiunao Injection，TLJNI)作用于正常、缺血和缺血再灌三种培养状态的大鼠CMECs，分别收集有药物干预及无干预的三对无血清内皮细胞条件培养液，并测定其LDH值。同步原代培养大鼠脑皮质神经元，亦分为正常、缺血、缺血再灌三组，用低(10％)、中(50％)、高(100％)三种浓度的各类CMECs-CM分别作用上述三种培养状态的神经元，测定其LDH漏出率。rn 结果：比较TLJNI干预后的CMECs-CM与无干预的CMECs-CM中LDH漏出值，CMECs缺血组与缺血再灌组经药物干预后均明显降低(P<0.01)。对于缺血神经元，缺血内皮细胞条件培养液(conditioned medi-um ofischemic CMECs，Is-CM)高浓度(100％)和TLJNI干预后的缺血内皮细胞条件培养液(conditionedmedium of ischemicCMECs with drug treatment，IsT-CM)高浓度(100％)作用后表现为增加LDH漏出率(P<0.01)，而低浓度10％的IsT-CM则降低LDH漏出率(P<0.05);对于缺血再灌神经元，与对照组比较，各类CMECs—CM作用后均能降低神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异，均以10％或50％的CM降低损伤为佳，正常内皮细胞条件培养液(conditioned mediumofnormal CMECs，N-CM)及缺血再灌内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic/reperfusionalCMECs，Rp-CM)组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对于正常神经元，各类CMECs—CM作用后均增加了神经元LDH漏出率(P<0.05或P<0.01)。比较每种条件液相邻浓度间的效应差异，N—CM组间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。rn 结论：TLJNI能够防御CMECs缺血及缺血再灌的损伤，可以通过内皮细胞介导发挥抗缺血及缺血再灌神经元损伤的效应。提示CMECs-CM及TLJNI干预后的CMECs-CM均存在着抗缺血再灌神经元损伤的活性物质。

摘要： 目的：探讨体外模拟脑缺血再灌注损伤条件下及通络救脑注射液干预下脑微血管内皮细胞条件培养液(CMECs-CM)时体外正常培养神经元的影响。rn 方法先分别进行大鼠大脑微血管内皮细胞和神经元的分离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型，然后用收集的CMECs-CM 1：1和1：5的浓度作用于体外培养的神经元，MTT法测定神经元的活性、存活率，western-blot检测NF-KB的表达。rn 结果：脑微血管内皮细胞条件培养液可影响神经元生存活性，应用中药通络救脑注射液作用于脑微血管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提高神经元的生存活性，可以提高神经元中NF—κB的表达。

摘要： 目的：探讨通心络对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的人脑微血管内皮细胞中NO及其eNOs表达的影响。方法：采用人脑微血管内皮细胞，给予不同剂量的通心络预处理后，予20μmoL/L的Aβ1-42干预24 h诱导细胞损伤，检测细胞中NO分泌及eNOs表达。结果：Aβ1-42可诱导人脑微血管内皮细胞中NO分泌降低及eNOs表达减少，而通心络可有效遏制Aβ1-42诱导的NO、NOs减少。结论：Aβ1-42可通过降低eNOs的表达，减少NO的分泌，而通心络可在一定程度上逆转这种现象。

摘要： 本发明提供了永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子在制备修复组织皮肤全层缺损生物制剂和制备治疗缺血缺氧性组织损伤生物制剂中的应用，所述的复合细胞因子为低氧培养永生化人肺微血管内皮细胞所分泌的细胞因子，所述的复合细胞因子不含有遗传物质（DNA或RNA）。用低氧培养的永生化人肺微血管内皮细胞复合细胞因子局部应用，促进局部血管的形成，具有明显的效果。并且对于皮肤组织缺损等损伤疾病具有明显的组织再生作用。复合细胞因子具有多种促进血管生成的有效成分，能够促进血管再生，并对损伤组织进行修复，促进损伤组织的生长愈合，调节免疫反应等等。

摘要： 本发明提供一种原代脊髓微血管内皮细胞的分离培养方法及由其得到的脊髓微血管内皮细胞，所述方法包括如下步骤：（1）将脊髓组织与平衡盐溶液混合，进行研磨，离心，收集沉淀；（2）将步骤（1）得到的沉淀与富集试剂混合，离心，弃上清，得富集的脊髓微血管片段；（3）将得到的脊髓微血管片段与酶混合，消化，得脊髓微血管内皮细胞；（4）将脊髓微血管内皮细胞与增殖培养基混合，接种于蛋白质和/或多肽包被的细胞培养板上，进行一次培养，后换用选择培养基进行二次培养，即得。所述方法稳定性高、可重复性好、简便快速、成本低、得到的脊髓微血管内皮细胞纯度高且产量高，具有重要的应用价值。

摘要： 本说明书提供：一种分离血管内皮细胞的纯培养物的方法，该方法能够在从由人多能干细胞分化的内皮细胞谱系的细胞系中分离在特定时间粘附在基质上的同质内皮细胞；一种维持血管内皮细胞特性的培养基，其包括通过该方法分离的高纯度血管内皮细胞，4ng/ml至6ng/ml的FGF2、5ng/ml至10ng/ml的EGF、10ng/ml至30ng/ml的VEGF‑A、20ng/ml至50ng/ml的抗坏血酸和DMEM/F‑12作为活性成分；以及包括它们的培养方法。

摘要： 本发明涉及一种体外分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法，取7～10日龄SD大鼠分离的大脑皮质，经Ⅱ型分散酶消化、两次加入15％葡聚糖溶液三次离心后获得大鼠脑微血管段，用胶原酶/分散酶消化后，在37°C、5％CO

摘要： 本发明提供一种小鼠脑微血管内皮细胞与周细胞联合提取培养方法，该方法新颖而简单，采用“两步酶解法”可从小鼠中枢神经系统中分离和培养大量内皮细胞与周细胞，该方法易于建立，并在较短时间内提供大量高纯度的内皮细胞和周细胞，进而用于多种下游应用，包括体外和体内实验，转录组学、蛋白质组学、代谢组学、表观基因组学和单细胞分析。

摘要： 本发明公开了脑微血管内皮细胞在制备用于修复血脑屏障损伤的药物中的应用，涉及细胞制剂领域。本发明解决了目前技术下缺血性脑卒中后血脑屏障不可逆开放引发了损伤扩大化，改善了卒中治疗的预后；本发明中的细胞制剂来源广泛，易于获得，且可以快速修复脑血屏障。本发明中的细胞制剂能够靶向至脑缺血部位，可采用简单的静脉注射进行给药便于临床操作。

摘要： 本发明公开了一种脑微血管内皮细胞提取纯化方法，涉及细胞纯化的技术领域。其提取纯化方法，包括以下步骤：S1、粗提小鼠脑组织中的脑微血管内皮细胞；S2、对S1处理后的脑微血管内皮细胞混合物进行第一次CD31免疫磁珠分选以纯化；S3、对S2处理后的脑微血管内皮细胞进行第二次CD31免疫磁珠分选以纯化，即得纯化后的脑微血管内皮细胞。本申请采用CD31磁珠二次分选的方式，降低对脑微血管内皮细胞活性的损伤，分离纯化效率高，操作步骤相对简单，可以获得高纯度、高产量及高活性的脑微血管内皮细胞。

摘要： 本发明提供一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑；(b)在无菌条件下，剥离解剖去除小脑、间脑以及去除软脑膜和脑膜大血管等，保留大脑皮质；(c)通过机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段；(d)将纯化的脑微血管片段铺置特制的细胞培养皿，并使用两种不同的培养基分离培养脑微血管内皮细胞。本发明提供的大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法可获得产量高、纯度高且生存时间较长的大鼠脑微血管内皮细胞。

摘要： 本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。现阶段常采用大鼠大脑皮质直接进行原代分离，但由于鼠龄较大，细胞活力较弱，因此分离出来的细胞纯度相对较低，同时活力也相对较差。本发明针对上述问题，提供一种方法简单且细胞成活率高的分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法。本发明提供的一种分离大鼠脑微血管内皮细胞的方法步骤简单，更方便于实际应用，且分离出的原代细胞活力强、纯度高以及存活率高。

摘要： 本发明涉及一种体外分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞的方法，取7～10日龄SD大鼠分离的大脑皮质，经Ⅱ型分散酶消化、两次加入15％葡聚糖溶液三次离心后获得大鼠脑微血管段，用胶原酶/分散酶消化后，在37°C、5％CO