摘要：
目的探讨壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导兔膝滑膜巨噬细胞炎症反应的效应浓度。方法将12只新西兰大白兔随机分为壮骨健膝方组6只和空白组6只,壮骨健膝方组予壮骨健膝方药液灌胃,空白组予生理盐水灌胃,持续3 d。于末次给药后1 h进行腹腔注射麻醉,行腹主动脉采血,离心后获得壮骨健膝方兔含药血清和空白血清。分别制备5%、10%、15%、20%、25%壮骨健膝方兔含药血清完全培养液(含药完培)与兔空白血清完全培养液(空白完培)备用。(1)筛选含药血清干预浓度实验:体外培养兔膝滑膜巨噬细胞,随机分为对照组、空白血清组及含药血清组,分别采用普通完全培养基、空白完培(5%、10%、15%、20%、25%)和含药完培(5%、10%、15%、20%、25%)培养24 h,采用CCK8法检测各组细胞活性。(2)筛选LPS诱导致炎时间实验:将兔膝滑膜巨噬细胞随机分为空白组和LPS组,空白组加入普通完培,LPS组加入含1.0μg/mL的LPS培养液,分别培养12、24、36、48 h后,收集各组细胞上清液,ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量。(3)采用含1μg/mL的LPS培养液刺激兔膝滑膜巨噬细胞12 h诱导其炎症反应,诱导成功后随机分为模型组和5%、10%、15%含药血清组,另取正常兔膝滑膜巨噬细胞作为空白组。模型组采用10%兔空白完培干预,5%、10%、15%含药血清组分别采用5%、10%、15%壮骨健膝方兔含药完培干预,空白组采用10%兔空白完培干预,均干预24 h。ELISA法检测各组细胞上清中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13的含量。结果(1)筛选含药血清干预浓度实验结果显示,5%、10%、15%含药血清组细胞活性与同浓度下空白血清组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)筛选LPS诱导致炎时间实验结果显示,LPS组内各时间点比较,刺激12 h后滑膜巨噬细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量最高(P<0.05)。(3)与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,10%、15%含药血清组IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均明显降低(P<0.05)。结论10%、15%壮骨健膝方兔含药血清为干预LPS诱导兔膝滑膜巨噬细胞炎症反应的效应浓度,以10%浓度更为经济适宜。
