胶质细胞源性神经营养因子

摘要： 目的观察丁苯酞治疗脑梗死伴认知功能障碍的临床疗效。方法选取2017年3月—2019年3月在我院神经内科住院的脑梗死伴认知功能障碍病人200例,随机分为研究组与对照组,每组100例。对照组给予常规药物治疗,研究组在对照组的治疗基础上给予丁苯酞治疗。比较两组临床印象变化量表(CIBIC-Plus)、老年性痴呆评定量表-认知分量表(ADAS-cog)、简易精神状态量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、临床痴呆评定量表(CDR)、日常生活活动能力量表(ADL)评分。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清脂蛋白相关磷脂酶A_(2)(LP-PLA_(2))、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平。结果治疗后,研究组CIBIC-Plus、ADAS-cog评分均较对照组明显下降,MMSE和MoCA评分均较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后,研究组血清Lp-PLA_(2)、MMP-9水平较对照组明显降低,GDNF水平较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞治疗能够明显改善脑梗死伴认知功能障碍病人的认知功能,有效降低血清Lp-PLA2、MMP-9水平,提高GDNF水平。

摘要： 目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(glail cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠行为学的影响及机制。方法将雄性SD大鼠50只随机分为对照组(N组,10只)、模型组(40只),造模后的模型组再随机分成DNP组(DC组,10只,仅给予10μl PBS缓冲液)、GDNF治疗组(DG组,10只,注射2μg GDNF+10μl PBS缓冲液)。各组大鼠均测造模前,造模后第3、21天,首次给药或PBS缓冲液后第1、3、7、14天的压尾机械阈值(TFT)与热痛缩爪潜伏期(PWL);处死大鼠后,取L_(4-6)脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓背角磷酸化PI3K、p-AKT、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)以及磷酸化核糖体S6蛋白激酶(p-S6K)蛋白表达水平。结果造模后第21天,与N组比较,模型组的血糖明显升高(P<0.01),且TFT与PWL也均明显缩短(P<0.01);给药后第14天,与DC组相比较,DG组TFT和PWL均明显升高(P<0.01),且磷酸化PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6K表达均明显降低(P<0.01);给药后第14天,与N组相比较,DC组TFT和PWL均明显降低(P<0.01),且磷酸化PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6K表达均明显升高(P<0.01);给药后第14天,DG组与N组相比较,在TFT、PWL以及磷酸化PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6K表达等方面的差异均无统计学意义。结论鞘内注射GDNF能够减轻大鼠DNP,其机制可能与GDNF通过调控PI3K-AKT信号通路,降低p-AKT表达水平,从而抑制p-mTOR和p-S6K的表达有关。

摘要： 目的:观察黄芩素对大鼠坐骨神经慢性压迫引起痛行为的抑制作用及初级感觉神经元中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的调控作用,阐明黄芩素对神经病理痛的镇痛机制。方法:48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芩素组,每组16只。各组大鼠麻醉后,假手术组大鼠仅暴露坐骨神经,模型组和黄芩素组大鼠行坐骨神经慢性缩窄手术建立大鼠慢性缩窄性神经损伤(CCI)模型。造模成功后黄芩素组大鼠腹腔连续注射黄芩素7 d。手术前后不同时间点分别检测各组大鼠患侧机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)以评价神经损伤引起的痛行为。第11天,每组选取6只大鼠,免疫荧光染色检测各组大鼠脊髓背角组织中c-Fos阳性细胞数;第28天检测各组其余大鼠背根神经节(DRG)中GDNF荧光强度。结果:手术前各组大鼠MWT和TWL比较差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,术后1 d模型组和黄芩素组大鼠MWT和TWL明显降低(P0.05);与假手术组比较,模型组大鼠脊髓背角组织中c-Fos阳性细胞数升高(P<0.05);与模型组比较,黄芩素组大鼠脊髓背角组织中c-Fos阳性细胞数降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠DRG中GDNF荧光强度降低(P<0.05);与模型组比较,黄芩素组大鼠DRG中GDNF荧光强度升高(P<0.05)。结论:黄芩素对大鼠神经病理痛具有镇痛作用。初级感觉神经元中GDNF参与坐骨神经损伤引起的神经病理痛,黄芩素对神经病理痛的镇痛作用可能与其调控GDNF的表达有关。

摘要： 目的 探讨高压氧联合早期肠内营养对脑梗死昏迷病人41例的疗效。方法 选取2014年1月至2020年1月湖北工业大学医院接诊的脑梗死昏迷病人82例为研究对象,按照随机数字表法分成对照组(n=41例)、研究组(n=41例)。所有病人均给予神经内科常规治疗及高压氧治疗,在此基础上对照组实施延迟性肠内营养支持,研究组则实施早期肠内营养支持。比较两组格拉斯哥昏迷评分(GCS)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、营养指标、血清D-二聚体(D-D)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平及包括消化道应激性溃疡出血在内的并发症发生率。结果 治疗3周后,两组GCS评分及血清GDNF水平与治疗前相比升高(P<0.05),且研究组GCS评分[(12.06±1.68)分比(10.83±1.49)分]及血清GDNF水平[(402.51±26.83)ng/L比(356.42±28.06)ng/L]均较对照组高(P<0.05);两组NIHSS评分及血清DD水平与治疗前相比均降低(P<0.05),且研究组NIHSS评分[(7.41±1.37)分比(12.16±1.59)分]及血清DD水平[(118.81±32.49)μg/L比(167.32±46.85)μg/L]均较对照组低(P<0.05);两组血红蛋白(Hb)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)等营养指标与治疗前相比均降低(P<0.05),但研究组Hb、TP、Alb均较对照组高(P<0.05)。结论 对脑梗死昏迷病人进行高压氧治疗联合早期肠内营养支持,可明显降低病人昏迷程度及神经功能缺损程度,显著改善机体营养不良状况,有效调节血清DD、GDNF表达水平,并大大减少消化道应激性溃疡出血、感染的发生。

摘要： 目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)修饰的神经干细胞(neural stemcells,NSCs)联合促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导帕金森小鼠的神经保护作用。方法C57BL/6雄性小鼠分为Normal组、Sham组、MPTP组、Sham+EPO组、Sham+GDNF-NSCs组、MPTP+EPO组、MPTP+GDNF-NSCs组和MPTP+GDNF-NSCs+EPO组。MPTP腹腔注射诱导建模后分别进行腹腔EPO注射、双侧纹状体移植GDNF-NSCs或者两者同时干预,Sham组在纹状体注射等体积生理盐水。在建模第7、14、28和42 d时检测行为学变化、纹状体多巴胺含量、线粒体膜电位及荧光定量PCR检测细胞内关键抗氧化蛋白NF-E2相关因子2(Nrf2)、环氧合酶2(COX2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达变化。结果EPO干预组(14、28、42 d时分别为946.09±48.71、773.88±7.80、703.88±12.45,P<0.001)和GDNF-NSCs干预组(14、28、42 d时分别为1266.32±77.17、1150.80±27.21、1202.48±65.71,P<0.001)较MPTP组(658.14±30.97)多巴胺含量显著增加;线粒体膜电位EPO干预组(14、28、42 d时分别为45.67±4.93、40.33±4.73、42.00±5.29,P<0.001)和GDNF-NSCs组(14、28、42 d时分别为48.33±6.66、53.33±2.89、52.00±6.24,P<0.001)线粒体膜电位较MPTP组(32.33±2.52)显著增加;也显著降低抗氧化相关基因Nrf2、iNOS和COX2的表达,随时间延长统计学差异更显著,但联合干预效果更明显;行为学实验也显示联合干预组较单一干预组行为学改善更佳。结论GDNF基因修饰的NSCs联合EPO可能通过增加氧化应激抵抗发挥帕金森小鼠神经保护作用。

摘要： 目的计算中性粒细胞-淋巴细胞比(NLR)和血小板-淋巴细胞比(PLR),检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的浓度,探讨其对双相障碍患者认知功能的影响。方法纳入双相障碍患者55例和健康对照者54例为研究对象,测量受试者的NLR、PLR和GDNF。采用言语流畅性测验(VFT)、连线测线(TMT)和Stroop试验评估患者的认知功能。结果观察组的NLR和PLR均比对照组高,而GDNF浓度降低(P<0.01)。观察组NLR和GDNF均与VFT-动作(r=-0.379,P=0.004;r=0.269,P=0.047)及TMT-B(r=0.597,P<0.001;r=-0.407,P=0.002)存在相关性。NLR与GDNF呈显著负相关(r=-0.415,P=0.002)。采用分层回归校正混杂因素后,NLR(β=15.475,P<0.001)、GDNF(β=-0.016,P=0.046)可以预测TMT-B的表现,其中NLR和GDNF交互项(β=0.166,P<0.001)可以正向预测认知功能(R^(2)=0.914),这表明两者的交互作用可以解释认知功能TMT-B总变异的30.5%。结论炎症因子、神经营养因子及其交互作用与认知功能密切相关。未来需要更大样本量的前瞻性研究以探索炎症因子和GDNF对认知功能的作用。

摘要： 目的探讨首发精神分裂症患者血清同型半胱氨酸、胶质细胞源性神经营养因子水平与精神症状及认知功能的相关性。方法检测并比较58例首发精神分裂症患者(研究组)和55名健康体检者(对照组)的血清同型半胱氨酸、胶质细胞源性神经营养因子水平,采用阳性与阴性症状量表、成套神经心理状态评估工具评定精神症状及认知功能,采用Pearson相关分析探讨血清同型半胱氨酸、胶质细胞源性神经营养因子水平与精神症状、认知功能的相关性。结果研究组血清同型半胱氨酸水平显著高于对照组(P<0.01),血清胶质细胞源性神经营养因子水平显著低于对照组(P<0.01)。血清同型半胱氨酸高水平患者阳性与阴性症状量表评分显著高于低水平患者(P<0.01),成套神经心理状态评估工具评分显著低于低水平患者(P<0.01);血清胶质细胞源性神经营养因子高水平患者阳性与阴性症状量表评分显著低于低水平患者(P<0.01),成套神经心理状态评估工具评分显著高于低水平患者(P<0.01)。Pearson相关分析显示,精神分裂症患者血清同型半胱氨酸水平与阳性与阴性症状量表评分呈显著正相关(P<0.01),与成套神经心理状态评估工具评分呈显著负相关(P<0.01);血清胶质细胞源性神经营养因子水平与阳性与阴性症状量表评分呈显著负相关(P<0.01),与成套神经心理状态评估工具评分呈显著正相关(P<0.01)。结论首发精神分裂症患者血清同型半胱氨酸水平明显升高,胶质细胞源性神经营养因子水平明显降低,血清同型半胱氨酸、胶质细胞源性神经营养因子水平与患者的精神症状、认知功能密切相关。

摘要： 目的:探究葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)模型中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达以及雷公藤内酯醇(TL)对肠黏膜稳定性的影响。方法:将80只BALB/c雄性小鼠随机分成8组,其中10只为空白对照组(NC),其余70只饮用5%DSS溶液建立UC模型。建模第3天将70只小鼠随机分为模型组(M),丙二醇组(PG),雷公藤内酯醇低浓度组(TLL)、中浓度组(TLM)和高浓度组(TLH),地塞米松组(D),美沙拉嗪组(MS),分别给予相应药物治疗。7天后处死动物,取结肠组织进行病理学检查,采用实时定量PCR法及Western Blot法检测GDNF、ZO-1 mRNA及蛋白的表达。结果:与NC组比较,TL低中高剂量组从第4天至第7天体质量下降,但明显高于M组,差异有统计学意义(P<0.05)。病理检查显示M组小鼠肠黏膜明显受损,杯状细胞减少,出现大量炎性肉芽组织。TLM、TLH组结肠黏膜相对完整,大部分上皮细胞及腺体结构完整,极少量炎症细胞浸润,黏膜下层未见水肿。与NC组比较,模型组肠黏膜中GDNF、ZO-1 mRNA表达水平明显降低,而TLL组、TLM组、TLH组中GDNF、ZO-1 mRNA表达水平均升高,呈剂量依赖性,其中TLH组表达升高最为显著(P<0.01)。与NC组比较,模型组肠黏膜中GDNF、ZO-1蛋白表达水平明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05),TLL组、TLM组、TLH组中GDNF、ZO-1蛋白表达水平均升高,其中TLH组表达升高最为显著(P<0.01)。结论:雷公藤内酯醇治疗能显著减轻DSS诱导的结肠炎,可能通过增加GDNF、ZO-1的表达而保护肠黏膜结构稳定性,有望成为治疗UC的新方法。

摘要： 目的:研究梅花针治疗风寒袭络型面瘫的临床效果及对血清神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:选取风寒袭络型面瘫患者132例,随机分成对照组和观察组,每组66例。对照组采用普通针刺治疗,观察组在对照组治疗基础上联用梅花针治疗,1周为1个疗程,连续治疗4个疗程。比较两组患者治疗前后血清NGF、面神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、面神经兴奋阈值、面神经功能指数、焦虑自评量表(SAS)评分、抑郁自评量表(SDS)评分,并评价临床疗效。结果:治疗后,观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组NGF、GDNF水平及面神经功能指数均高于对照组(P<0.05);观察组面神经兴奋阈值低于对照组(P<0.05);观察组SAS、SDS评分均低于对照组(P<0.05)。结论:风寒袭络型面瘫患者采用普通针刺加梅花针治疗后,面神经功能评分及面神经兴奋阈值显著改善,血清NGF、GDNF水平升高,焦虑、抑郁情绪得到明显改善。

摘要： 目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、白细胞介素-2(IL-2)在注意缺陷多动障碍(ADHD)儿童血清中的表达变化及临床意义,并分析两者的相关性。方法选取2019年7月至2020年5月来宝鸡市中医医院和宝鸡市妇幼保健院就诊的85例ADHD儿童为ADHD组,按照病情分为注意力缺陷(PIT)为主型组(n=28)、多动-冲动(HIT)为主型组(n=21)、混合型(CT)组(n=36),同时选取60例体检的健康儿童为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测所有受检者血清中GDNF、IL-2表达水平,采用Pearson相关系数法分析GDNF与IL-2表达的相关性;利用受试者工作特征曲线(ROC)评价血清GDNF、IL-2水平对ADHD的诊断价值;采用Logistic回归分析法分析儿童ADHD发生的影响因素。结果ADHD组患儿血清中GDNF水平为(615.56±134.45)pg/mL,明显高于对照组的(510.13±121.37)pg/mL,且HIT组患儿血清中GDNF水平为(753.69±210.56)pg/mL,明显高于CT组的(655.47±190.58)pg/mL,CT组又明显高于PIT组的(605.56±170.35)pg/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);ADHD组患儿血清中IL-2水平为(6.44±1.65)μg/L,明显高于对照组的(3.52±0.81)μg/L,且CT组患儿血清中IL-2水平为(7.89±2.31)μg/L,明显高于HIT组的(6.53±1.85)μg/L,HIT组又明显高于PIT组的(6.47±1.91)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);ADHD组患儿血清GDNF与IL-2的表达水平呈明显正相关(r=0.363,P<0.05);GDNF、IL-2水平预测ADHD的曲线下面积(AUC)分别为0.639(95%CI:0.555~0.717)、0.922(95%CI:0.865~0.960),对应的敏感度分别为54.12%、80.00%,特异度分别为66.70%、98.33%,血清GDNF、IL-2水平联合预测ADHD的AUC为0.927(95%CI:0.872~0.964),敏感度为84.71%,特异度为95.00%;经Logistic回归分析结果显示,血清GDNF、IL-2水平、家庭教育方式、父母关系、儿童孤单均是ADHD发生的影响因素(P<0.05)。结论GDNF、IL-2在ADHD患儿血清中均呈高表达,两者呈明显正相关,均是影响ADHD发生的危险因素,表明两者可能参与了ADHD的发生、发展,且对注意缺陷多动障碍患儿的临床诊断有重要的辅助作用。

摘要： 脓毒症诱导的神经肌肉功能障碍是由γ-和α7-烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)表达的上调引起的.虽然神经胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)牵涉修复和支持神经元,但对于GDNF对败血症中神经脱髓鞘的影响知之甚少.在这项研究中,测试了GDNF可以通过在实验性大鼠神经肌病模型中降低γ-和α7-nAChR的表达来减轻脓毒症诱导的神经肌肉功能障碍的假设.

摘要： 目的:精神分裂症确切的病因及发病机制目前尚未明了,而神经发育异常假说认为精神分裂症是脑组织发育异常的结果.胶质细胞源性神经营养因子(glial derived neurotrophic factor,GDNF)对神经细胞的生长、分化、存活、可塑性及损伤后修复有重要作用.在电休克动物模型中发现ECT可以提高大鼠海马区脑源性神经营养因子以及GDNF受体mRNA水平的表达.本研究探讨无抽搐电休克治疗(modified electroconvulsive therapy,MECT)对精神分裂症患者血清GDNF水平的影响. 方法:采用酶联免疫吸附法，对48例正常人(正常组)和70例精神分裂症患者(患者组)在MECT前后进行血清GDNF水平检测，研究MECT对精神分裂症患者GDNF水平的影响。患者组MECT采用美国SPECT公司的醒脉通牌多功能电痉挛治疗监测仪。MECT治疗频率最初为每天1次，2-3次后改为每周3次，总疗程6-10次，治疗前后采用精神症状阳性和阴性症状量表(PANSS)进行精神症状评定。血清胶质源性神经营养因子(GDNF)浓度的检测:患者组MECT前后和正常组抽取空腹静脉血5m1，分离出血清，低温保存。购买Promega公司的血清GDNF检测试剂盒，在免疫酶标仪上一次性检测所有标本。 结果:MECT前，患者组血清GDNF水平[(34.98±20.36)ng/ml]显著低于正常组[(78.23±40.57)ng/ml](t=6.821,P0.05). 结论:精神分裂症患者可能存在血清GDNF水平低下，MECT可以提高患者的血清GDNF水平。

摘要： 目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治疗对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板-内皮细胞粘附分子-1 (platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)表达的影响.rn 方法:利用脑立体定位仪向大鼠脑尾壳核注射胶原酶和肝素建立脑出血动物模型,并随机将脑出血大鼠分为生理盐水对照组(NS组)、BMSCs移植组(BMSCs 组)和GDNF基因修饰的BMSCs移植组(BMSCs/GDNF组),建模后第3天在脑出血部位注射生理盐水或移植BMSCs和BMSCs/GDNF,每组动物术后按喂养时间不同(1W、2W)又分为2个亚组.采用免疫组织化学检测各组大鼠脑组织VEGF和PECAM-1的表达.rn 结果:与NS组相比,BMSCs组的VEGF和PECAM-1阳性细胞数均降低;与BMSCs组相比,MSCs/GDNF组的VEGF和PECAM-1阳性细胞数均明显减少.rn 结论:GDNF基因修饰的BMSCs移植较单纯BMSCs移植可能有助于抑制脑出血大鼠病灶周边区的血管形成.

摘要： 目的:观察丹参注射液对官内感染致早产仔鼠脑室周围白质软化组织中神经生长因子(nerve growth factor NGF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor GDNF)表达的影响.rn 方法:①动物模型制备:24只孕第16天的脂多糖(LPS)组大鼠予LPS 350μg·kg-1,连续2天腹腔注射,6只生理盐水组孕鼠腹腔注射同剂量的生理盐水.孕21分娩的仔鼠为早产仔鼠.随机选取生理盐水组足月产仔鼠10只作为空白对照组和LPS组早产仔鼠40只.LPS组仔鼠随机分为4组,每组10只,分别为:丹参注射液高剂量组、丹参注射液低剂量组、神经节苷酯组、模型组.出生第8天时分别给予丹参注射液或生理盐水腹腔注射共7天.②21日龄时对5组大鼠进行神经行为学检测(悬吊试验、斜坡试验、Cylinder试验),并取脑组织应用免疫组化方法对NGF、GDNF进行测定.rn 结果:①与模型组相比,丹参注射液低剂量组、高剂量组及神经节苷酯组干预治疗后脑损伤仔鼠行为学方面得到改善(P＜0.05);②模型组及丹参注射液低剂量组、高剂量组、神经节苷酯组NGF与GDNF阳性表达增强,对照组表达较少(P＜0.01);丹参注射液低剂量组、高剂量组、神经节苷酯组NGF与GDNF阳性表达均较模型组明显增强(P＜0.01);丹参注射液低剂量组、高剂量组及神经节苷酯组3组相比,相互间差异无统计学意义(P＞0.05).rn 结论:丹参注射液可改善宫内感染所致早产脑损伤,其减轻脑损伤机制可能与上调脑组织中NGF及GDNF表达有关;宫内感染所致早产脑损伤中医病理机制主要是"血瘀",活血化瘀可以作为其治疗方法.

摘要： 目的:分离、纯化及鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),干预大鼠骨髓间充质干细胞内源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因表达,并观察基因干预后细胞向神经样细胞分化特征.方法:全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),流式细胞技术鉴定细胞表型分子;获取第三代大鼠骨髓间充质干细胞后,实验分为A、B、C三组,A组以载鼠源性胶质细胞源性神经营养因子(rGDNF)与绿色荧光蛋白(GFP)基因重组腺病毒(Ad-rGDNF-GFP)感染BMSCs,B组以载GFP基因重组腺病毒(Ad-GFP)感染BMSCs,C组为非感染空白对照组.荧光显微镜观察三组中BMSCs表达GFP情况,荧光定量PCR (Q-PCR)比较各组GDNFmRNA在细胞内表达水平,MTT法测定三组中细胞活力,并分别在转染后5、10d后免疫荧光检测表达巢蛋白(Nestin)和微管蛋白-2(MAP-2)在BMSCs内的表达情况.结果:全骨髓贴壁法可获取贴壁细胞,连续半换液法可进一步分离、纯化该贴壁细胞,流式细胞技术鉴定结果表明该细胞为大鼠骨髓间充质干细胞,显微镜观察发现该细胞多为梭形,形态较为统一;荧光显微镜观察观察发现,Ad-rGDNF-GFP与Ad-GFP感染BMSCs 5d、10d后,均可观察到GFP的表达,空白对照组未见GFP表达;Q-PCR结果表明Ad-rGDNF-GFP感染组GDNF基因表达水平较Ad-GFP感染组与空白对照组显著提高,且Ad-rGDNF-GFP感染组中细胞活力亦高于其他两组;Ad-rGDNF-GFP感染BMSCs 5d后,免疫荧光鉴定结果证实细胞表达神经元干细胞标志物-巢蛋白,10d后,细胞表达成熟神经元标志物-微管蛋白-2(MAP-2),而Ad-GFP感染组与空白对照组细胞在相应检测时间定均未表达Nestin与MAP-2.结论:以全骨髓贴壁法为基础通过连续半换液法可分离、纯化骨髓间充质干细胞,Ad-rGDNF-GFP感染BMSCs后,细胞GDNF表达水平及细胞活力可显著提高,并在内源性GDNF作用下向神经样细胞定向分化.

摘要： 目的：探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制.rn 方法：采用复方地芬诺酯灌胃法进行功能性便秘造模,造模成功的动物随机分为模型组、针刺组和EGC抑制组,另选取8只作为空白对照组.针刺组和EGC抑制组以电针刺激"天枢"、"大肠俞",每次30min,共治疗5次.运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等技术,观察电针治疗前后胃肠道传输功能情况、结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平.rn 结果：模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(与对照组比较均P＜0.01).电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(与模型组比较均P＜0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能.EGC抑制组在应用EGC抑制剂破坏EGC细胞后再进行电针刺激,结果显示结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无差异(P＞0.05),与针刺组比较显著降低(P＜0.05),GDNFmRNA的表达水平高于模型组(P＜0.05),但与针刺组比较其表达水平较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变与针刺组相比较为严重.rn 结论：从正反两方面论证电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞分泌的GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能.

摘要： 目的：探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制.rn 方法：采用复方地芬诺酯灌胃法进行功能性便秘造模,造模成功的动物随机分为模型组、针刺组和EGC抑制组,另选取8只作为空白对照组.针刺组和EGC抑制组以电针刺激"天枢"、"大肠俞",每次30min,共治疗5次.运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等技术,观察电针治疗前后胃肠道传输功能情况、结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平.rn 结果：模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(与对照组比较均P＜0.01).电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(与模型组比较均P＜0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能.EGC抑制组在应用EGC抑制剂破坏EGC细胞后再进行电针刺激,结果显示结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无差异(P＞0.05),与针刺组比较显著降低(P＜0.05),GDNFmRNA的表达水平高于模型组(P＜0.05),但与针刺组比较其表达水平较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变与针刺组相比较为严重.rn 结论：从正反两方面论证电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞分泌的GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能.

摘要： 目的：探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制.rn 方法：采用复方地芬诺酯灌胃法进行功能性便秘造模,造模成功的动物随机分为模型组、针刺组和EGC抑制组,另选取8只作为空白对照组.针刺组和EGC抑制组以电针刺激"天枢"、"大肠俞",每次30min,共治疗5次.运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等技术,观察电针治疗前后胃肠道传输功能情况、结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平.rn 结果：模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(与对照组比较均P＜0.01).电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(与模型组比较均P＜0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能.EGC抑制组在应用EGC抑制剂破坏EGC细胞后再进行电针刺激,结果显示结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无差异(P＞0.05),与针刺组比较显著降低(P＜0.05),GDNFmRNA的表达水平高于模型组(P＜0.05),但与针刺组比较其表达水平较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变与针刺组相比较为严重.rn 结论：从正反两方面论证电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞分泌的GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能.

摘要： 目的：探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制.rn 方法：采用复方地芬诺酯灌胃法进行功能性便秘造模,造模成功的动物随机分为模型组、针刺组和EGC抑制组,另选取8只作为空白对照组.针刺组和EGC抑制组以电针刺激"天枢"、"大肠俞",每次30min,共治疗5次.运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等技术,观察电针治疗前后胃肠道传输功能情况、结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平.rn 结果：模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(与对照组比较均P＜0.01).电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(与模型组比较均P＜0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能.EGC抑制组在应用EGC抑制剂破坏EGC细胞后再进行电针刺激,结果显示结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无差异(P＞0.05),与针刺组比较显著降低(P＜0.05),GDNFmRNA的表达水平高于模型组(P＜0.05),但与针刺组比较其表达水平较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变与针刺组相比较为严重.rn 结论：从正反两方面论证电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞分泌的GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能.

摘要： 目的：探讨电针大肠俞募穴治疗功能性便秘的作用机制.rn 方法：采用复方地芬诺酯灌胃法进行功能性便秘造模,造模成功的动物随机分为模型组、针刺组和EGC抑制组,另选取8只作为空白对照组.针刺组和EGC抑制组以电针刺激"天枢"、"大肠俞",每次30min,共治疗5次.运用光镜、电镜、免疫组化及原位杂交等技术,观察电针治疗前后胃肠道传输功能情况、结肠组织上皮细胞形态学改变,结肠组织中GDNF蛋白及mRNA表达水平.rn 结果：模型组结肠组织GDNF蛋白及mRNA表达水平显著降低(与对照组比较均P＜0.01).电针刺激大肠俞募穴可提高结肠中GDNF蛋白及其mRNA的表达水平(与模型组比较均P＜0.05),光镜和电镜发现针刺可修复受损上皮细胞,进而改善肠道传输功能.EGC抑制组在应用EGC抑制剂破坏EGC细胞后再进行电针刺激,结果显示结肠中GDNF蛋白表达与模型组比较无差异(P＞0.05),与针刺组比较显著降低(P＜0.05),GDNFmRNA的表达水平高于模型组(P＜0.05),但与针刺组比较其表达水平较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).光镜和电镜下EGC抑制组结肠组织形态改变与针刺组相比较为严重.rn 结论：从正反两方面论证电针刺激大肠俞募穴可提高EGC细胞分泌的GDNF蛋白及其mRNA的表达水平,修复受损结肠上皮细胞,进而改善肠道传输功能.

摘要： 本发明公开了种脑源性神经营养因子(BDNF)测定试剂盒，包括：固相载体、BDNF特异性抗体、标记物和BDNF校准品。本发明还公开了本发明提供的试剂盒在制备诊断抑郁症产品中的应用。本发明还进一步提供了一种BDNF特异性抗体，由BDNF特异性抗原表位肽偶联载体蛋白后免疫动物制备，其中所述BDNF特异性抗原表位肽的氨基酸序列为下列两个序列之一：Tyr‑Glu‑Trp‑Val‑Thr‑Ala‑Ala‑Asp‑Lys‑Lys‑Thr‑Ala‑Val‑Asp‑Met‑Ser(1)或Tyr‑Lys‑Lys‑Arg‑Ile‑Gly‑Trp‑Arg‑Phe‑Ile‑Arg‑Ile‑Asp‑Thr‑Ser(2)。本发明制备的试剂盒需具有良好的诊断敏感性、特异性和重复性，符合临床应用需求。

摘要： 本发明涉及神经胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF),一种表现出对中枢神经系统和外周神经系统的各种类型的细胞具有广谱生物学活性的神经营养素。本发明涉及克隆和表征GDNF的高亲和性受体。该分子被命名为GDNF受体(GDNFR),因为它是受体系统的第一个已知组分。描述了GDNFR蛋白产物的核酸和氨基酸序列。在氨基末端发现具有信号肽特征的疏水性域,而羧基末端的第二个疏水性域谵语该受体与细胞膜的连接。缺少跨膜域和胞质区表明GDNFR需要一个或多个辅助分子以介导跨膜信号发生。GDNFRmRNA广泛分布于神经系统和非神经组织中,与发现的GDNF的类似分布一致。

摘要： 本发明涉及一种生物技术，具体是胶质细胞源生神经营养因子基因修饰的胚胎神经干细胞构建。它是按如下步序操作：(1)质粒的转化；(2)质粒的消化纯化；(3)目的基因和载体的克隆；(4)重组质粒的包装；(5)重组质粒的鉴定；(6)病毒滴度测定；(7)干细胞培养；(8)病毒感染干细胞；(9)转基因干细胞鉴定；(10)转基因干细胞的目的蛋白含量测定；(11)转基因干细胞生物活性检测。本发明构建的转基因胚胎神经干细胞不仅对多巴胺能神经元具有很强的促存活作用，而且还保留了原来的神经干细胞的特性。本发明不仅对运动神经元损伤性疾病，也对神经元变性性疾病的具有很好的治疗作用。

摘要： 一种测定重组人胶质细胞源性神经营养因子活性的细胞学方法,包括如下步骤：构建表达质粒pcDNA3.1-hGFRα1，然后制备稳定表达hGFRα1的HEK293细胞；构建表达质粒pcDNA3.1-hRET，再制备能够同时表达hGFRα1和hRET以及荧光素酶报告系统的HEK293细胞；将待测rhGDNF加入到同时表达hGFRα1和hRET以及荧光素酶报告系统的HEK293细胞中，培养后测定荧光强度F1；同时设置没有加入待测rhGDNF的空白对照组，培养后测定荧光强度F2；将F1、F2进行比较。本发明能够有效测定重组人胶质细胞源性神经营养因子（rhGDNF）活性，测定结果准确可靠。

摘要： 用哺乳动物细胞生产高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子的方法，包括如下步骤：构建哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1-hGDNF；选用HEK293细胞作为工程细胞，利用细胞转染方法将pcDNA3.1-hGDNF导入所述HEK293细胞内，得到稳定表达hGDNF的HEK293细胞；用ELISA方法筛选出高产率稳定表达hGDNF的HEK293克隆细胞株作为生产hGDNF的工程株；在DMEM培养基中培养所述工程株，将上清液不断收集，并更换新的DMEM培养基，收集后的上清液经过离心、过滤、调pH值为8.2，得到含hGDNF上清液；通过离子交换层析法和凝胶过滤层析法对蛋白质进行纯化。利用本发明生产的重组人胶质细胞源性神经营养因子糖基化程度和纯度均高于用原核细胞生产的同类产品。

摘要： 本发明公开了中脑星形胶质细胞源性神经营养因子在治疗溃疡性结肠炎中的应用。本发明研究发现了MANF在人溃疡性结肠炎患者以及小鼠溃疡性结肠炎模型中表达上调，说明MANF在溃疡性结肠炎中表达增加。本发明通过动物实验表明，MANF能显著缓解溃疡性结肠炎造成的血便，增加模型小鼠体重，改善腹泻状况。MANF能减少溃疡性结肠炎的炎性巨噬细胞浸润，减少炎性因子的表达。MANF可用于治疗或者缓解或改善溃疡性结肠炎。

摘要： 本发明提供一种提高人脐带间充质干细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的方法，包括在添加了细胞因子bFGF和FGF8的neurobasal medium培养基中培养人脐带间充质干细胞的步骤。本发明能够明显增加间充质干细胞的胶质细胞源性神经营养因子分泌量，安全且易产业化。通过细胞因子诱导的方法，而非基因修饰、共培养和条件培养基培养的方法提高其分泌胶质细胞源性神经营养因子的能力，避免了其它方法所带来的风险和不确定性，更适用于产业化和临床应用。与现有文献中所报道的刺激或诱导的技术相比，使用本方法培养间充质干细胞6天后，胶质细胞源性神经营养因子的分泌量较之前培养方法有明显的增多。

摘要： 用哺乳动物细胞生产高纯度糖基化的重组人胶质细胞源性神经营养因子的方法，包括如下步骤：构建哺乳细胞表达质粒pcDNA3.1-hGDNF；选用HEK293细胞作为工程细胞，利用细胞转染方法将pcDNA3.1-hGDNF导入所述HEK293细胞内，得到稳定表达hGDNF的HEK293细胞；用ELISA方法筛选出高产率稳定表达hGDNF的HEK293克隆细胞株作为生产hGDNF的工程株；在DMEM培养基中培养所述工程株，将上清液不断收集，并更换新的DMEM培养基，收集后的上清液经过离心、过滤、调pH值为8.2，得到含hGDNF上清液；通过离子交换层析法和凝胶过滤层析法对蛋白质进行纯化。利用本发明生产的重组人胶质细胞源性神经营养因子糖基化程度和纯度均高于用原核细胞生产的同类产品。

摘要： 一种测定重组人胶质细胞源性神经营养因子活性的细胞学方法,包括如下步骤：构建表达质粒pcDNA3.1-hGFRα1，然后制备稳定表达hGFRα1的HEK293细胞；构建表达质粒pcDNA3.1-hRET，再制备能够同时表达hGFRα1和hRET以及荧光素酶报告系统的HEK293细胞；将待测rhGDNF加入到同时表达hGFRα1和hRET以及荧光素酶报告系统的HEK293细胞中，培养后测定荧光强度F1；同时设置没有加入待测rhGDNF的空白对照组，培养后测定荧光强度F2；将F1、F2进行比较。本发明能够有效测定重组人胶质细胞源性神经营养因子（rhGDNF）活性，测定结果准确可靠。

摘要： 本发明公开了中脑星形胶质细胞源性神经营养因子在治疗溃疡性结肠炎中的应用。本发明研究发现了MANF在人溃疡性结肠炎患者以及小鼠溃疡性结肠炎模型中表达上调，说明MANF在溃疡性结肠炎中表达增加。本发明通过动物实验表明，MANF能显著缓解溃疡性结肠炎造成的血便，增加模型小鼠体重，改善腹泻状况。MANF能减少溃疡性结肠炎的炎性巨噬细胞浸润，减少炎性因子的表达。MANF可用于治疗或者缓解或改善溃疡性结肠炎。