双重PCR
双重PCR的相关文献在2000年到2022年内共计338篇,主要集中在畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂、水产、渔业、植物保护
等领域,其中期刊论文203篇、会议论文7篇、专利文献30132篇;相关期刊107种,包括生物技术通报、中国人兽共患病学报、农业生物技术学报等;
相关会议6种,包括2012第四届中国兽药大会、中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会、第二届全国人畜共患病学术研讨会等;双重PCR的相关文献由1479位作者贡献,包括张晓君、沈志强、王芳等。
双重PCR—发文量
专利文献>
论文:30132篇
占比:99.31%
总计:30342篇
双重PCR
-研究学者
- 张晓君
- 沈志强
- 王芳
- 陈红英
- 刘春
- 吴淑勤
- 曾伟伟
- 林裕胜
- 毕可然
- 王庆
- 胡奇林
- 姜世金
- 李凯彬
- 李天芝
- 梁利国
- 江锦秀
- 游伟
- 程振涛
- 阎斌伦
- 乔涵
- 于新友
- 俞丽
- 刘梅
- 周碧君
- 尹文林
- 张瑞华
- 徐伟丽
- 徐洋
- 李启明
- 杨斌
- 梁红茹
- 沈锦玉
- 潘世扬
- 潘晓艺
- 王英英
- 王金良
- 石存斌
- 秦蕾
- 贺东生
- 赵世华
- 邱琼
- 郝贵杰
- 马莺
- 万超群
- 仇丽亚
- 付小哲
- 冯旭飞
- 冯洁
- 冯黎霞
- 凤英
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王涛;
张子君;
张逸鸣;
王晓峰;
邹庆道
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摘要:
研究利用双重PCR技术同时鉴定番茄抗斑萎病毒病基因Sw-5和抗番茄黄化曲叶病毒病基因Ty-2,鉴定结果与单引物PCR完全吻合。其中Sw-5的连锁标记在纯合抗病和感病材料中分别扩增出574 bp和464 bp的特异条带,在杂合抗病材料中可同时扩增出以上两条带;Ty-2的连锁标记在纯合抗病和感病材料中分别扩增出900 bp和800 bp的特异条带,在杂合抗病材料中同样扩增出两条带。利用双重PCR方法对17份待检测番茄材料进行鉴定,条带清晰,且辨识度高。该技术极大地提高了Sw-5和Ty-2基因的鉴定效率。
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刘月苹
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摘要:
为建立有效鉴别副溶血性弧菌及携带耐热相关溶血毒素基因的毒性弧菌的方法,用副溶血性弧菌种属特异性基因tlh及毒性基因trh设计引物进行双重PCR检测,对双重PCR体系进行优化,并对其特异性及PCR灵敏度进行检测,验证双重PCR体系检测能力及对人工污染样品的灵敏度。结果表明,该方法对海产品中的副溶血性弧菌及携带trh毒性基因的弧菌具有检测特异性,且灵敏度较高,可为食品检测提供一定的参考依据。
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王新港;
王彦辉;
周欣;
丁丽萍;
陈圆圆;
李厚伟;
张先锋
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摘要:
鸭2型腺病毒(Ducka denovirus2,DAdV-2)病和鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)病是严重影响我国水禽养殖的两种病毒性疾病。雏鸭阶段两种疾病的发病路和死亡率高。鸭腺病毒感染主要表现为精神萎靡、沉郁和消瘦,排浅黄白色的粪便。病理变化为肝脏肿大并有白色针尖状坏死点灶,肾脏及脾脏肿大充血,胰腺有白色点状坏死。而鸭圆环病毒常呈潜伏感染,并入侵鸭的免疫系统,导致机体的免疫功能下降,对多种条件性病原抵抗力减弱,使其更易遭受其他致病因素的侵袭。
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朱桓奕;
罗亮;
张璇;
李照伟;
浦同灿;
王慧;
曾红;
杨晓伟;
刘霞;
赵光伟
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摘要:
为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和弓形虫(Toxoplasma gondii)的双重PCR方法,根据GenBank上已登录的PCV2和弓形虫基因的保守序列,设计了2对特异性引物,并对反应体系及条件进行了优化。首先对单一PCR检测条件进行摸索,确定其最佳检测条件和灵敏性;进而建立两种病原的双重PCR检测方法,通过对退火温度、灵敏性和特异性进行测试,最终确定该方法的反应体系及条件。结果显示:双重PCR方法对PCV2和弓形虫的最低检出限分别为78.16和29.19μg/mL;对伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)等均无扩增,特异性良好。利用该方法对来自川渝地区部分猪场的63份临床样本进行检测,并与单一PCR检测结果进行比对,两种方法的符合率为100%。以上结果说明,本试验建立的双重PCR方法灵敏度高、特异性强、结果可靠、方便经济,可用于PCV2和弓形虫的实验室快速检测。
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江丹丹;
林昶;
黄志坚;
肖世峰;
王劭;
林锋强;
程晓霞;
朱小丽;
陈秀琴;
董慧;
陈少莺;
陈仕龙
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摘要:
番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1°C,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。
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方振华;
蒙美姑;
党朝晖;
洪美玲;
丁利
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摘要:
为建立龟源致病性鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌双重PCR诊断方法,应用鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因的特异性引物,对单重和双重PCR反应的退火温度、引物浓度、MgCl2浓度、dNTP浓度等进行优化.试验结果显示,鲍曼不动杆菌rpoB基因和摩氏摩根菌gyrB基因引物分别进行PCR扩增后,均获得特异性条带,与预期结果一致;rpoB和gyrB基因的上、下游引物各为0.3μmol/L,退火温度为59.3°C,dNTP浓度为0.5 mmol/L,MgCl2浓度为5 mmol/L时,PCR扩增效果最佳;特异性试验结果显示,本方法仅对摩氏摩根菌和鲍曼不动杆菌有扩增,对其他病原菌如肺炎克雷伯氏菌、维氏气单胞菌及恶臭假单胞菌等无扩增;灵敏性结果表明,本方法对鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌最低检测质量浓度分别为4.12×10-3 ng/μL和1.257×10-3 ng/μL.通过对临床病料样本的检测分析证明,本方法与单重PCR检测结果一致.本试验所建立的针对两种病原菌检测的双重PCR方法特异性强、灵敏度高,可为龟鳖类鲍曼不动杆菌和摩氏摩根菌的鉴别诊断和临床调查提供帮助.
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廖晓夏;
田志革;
胡晓亮;
李映春
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摘要:
以PRRSV、PRV的核酸为模板,基于优化的单重PCR扩增体系,建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的双重PCR检测方法。结果表明,引物对PRRSV、PRV能进行特异性扩增,目的片段大小分别为261、401 bp,单重PCR方法特异性好,对PRRSV、PRV的检测限分别为0.1412、6.96 pg。应用建立的双重PCR方法对58份临床样品进行检测,与单重PCR方法检测结果的符合率为100%。研究建立的双重PCR方法可用于临床上PRRSV和PRV的病原学诊断。
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董雯雯;
张世栋;
王春玲;
艾洪新;
朱伟;
李峰
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摘要:
为建立一种能同时快速检测鸭疫里氏杆菌(RA)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)的PCR方法,根据NCBI公布的RA dnaB基因和DTMUV PrM基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度进行优化筛选.优化引物浓度组合为:RA引物0.5μmol/L,DTMUV引物为1μmol/L,最佳退火温度为53°C.特异性试验表明,该方法对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、番鸭细小病毒、I型鸭肝炎病毒、沙门氏菌、大肠杆菌的核酸扩增结果均为阴性,RA和DTMUV的检测结果为阳性.敏感性测定表明,该双重PCR方法最低能检出RA和DNAV-1的核酸量分别为6.7 pg和3.6 pg.本研究建立的检测方法检测实验室保存的8份临床病料,RA的阳性率为62.5%,DTMUV阳性率为37.5%.综上所述,建立的PCR方法特异性强、敏感性和稳定性良好,为RA和DTMUV的临床病料检测提供了技术支撑.
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苗艳;
朱庆贺;
陈亮;
兰世捷;
冯万宇;
李丹;
黄宝银;
沈思思;
史同瑞
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摘要:
为快速鉴别诊断鹅星状病毒(GoAstV)和鹅细小病毒(GPV),根据GoAstV和GPV基因序列保守区域设计了两对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测这两种病毒的PCR诊断方法.该方法能够特异性扩增出两种病毒的相应片段,而对鹅副粘病毒(GPMV)、鹅流感病毒(GAIV)、鹅腺病毒(GADV)、鹅圆环病毒(GoCV)均无扩增,对重组质粒的最低检测拷贝数分别为1.25×103copies和1.25×105 copies.应用该方法对50份鹅临床脏器样品进行检测,结果检测出GoAstV 35份、GPV 2份,GoAstV和GPV混合感染2份.结果 表明,研究建立的双重PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于GoAstV和GPV的流行病学调查和疾病监测.
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朱小甫;
吴旭锦;
李怡婷;
孙凯
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摘要:
为建立鸡毒支原体(MG)与滑液囊支原体(MS)双重PCR检测方法,一次反应即可诊断鸡毒支原体与滑液囊支原体感染情况.根据GenBank公开的MG和MS基因序列,设计了2对质粒构建引物和2对检测引物,优化检测反应体系与条件,进行灵敏性试验、特异性试验和临床检测应用.结果显示,该方法对MG和MS阳性质粒的最低检测限为10拷贝/μL;与常见的H 9禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、Ⅰ群禽腺病毒4型、副鸡嗜血杆菌和鸡大肠埃希氏菌6种病原无交叉反应;应用该方法检测335份样品,MG单阳性率为7.8%,MS单阳性率为31.3%,MG和MS双阳性率为17.0%,两种支原体总的感染率为56.1%.成功建立了检测MG和MS的双重PCR检测方法,为流行病学调查和诊断提供了可靠的技术手段.