鹅细小病毒

摘要： 为了解鹅细小病毒(GPV)、鹅圆环病毒(GoCV)和鹅多瘤病毒(GHPV)的感染情况,本试验于2019年4—11月对山东某鹅场送检的1474份青年鹅脾脏采用PCR检测法,对样品中GPV、GoCV和GHPV的特异性基因片段进行检测。结果显示:该鹅群中GPV、GoCV及GHPV单一感染率分别为15.13%(223/1474)、20.15%(297/1474)和3.46%(51/1474),部分样品存在2种或3种病毒共感染。检测结果表明该鹅场青年鹅群存在较为严重的感染和带毒情况,有必要制定一些有效的防控措施。

摘要： 自2015年以来,我国华东地区陆续暴发樱桃谷鸭及半番鸭以生长迟缓,短颈,短喙,舌外露,胸骨及翅、腿易发生骨折等为主要症状的疾病,研究发现引起该病的病原为鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)。为更好地掌握该病相关知识,就该病的病原特征、流行病学、临床症状、病理剖检及诊断方法做概述,以期为该病的防治提供参考依据。

摘要： 小鹅瘟是引起雏鹅或者小番鹅发生以肠道病变为主要特征的疾病。病原是细小病毒科细小病毒属小鹅瘟病毒或鹅细小病毒。本病仅发生于鹅和番鸭的幼雏,主要侵害4~20日龄雏鹅,传染速度快且病死率高。本病可以感染成年鹅,但不表现症状,可以通过垂直传播影响下一代。雏鹅的易感性随日龄的增长而减弱,一般患病日龄为2~30天,以5~20日龄发病最多,病死率达75%~100%,一个月以上极少发病。本病毒有两种传播途径:水平传播和垂直传播。在我国南方和北方小鹅瘟的流行时间并不相同,这与南北方饲养鹅的季节和饲养管理方式差别较大有关。例如,每年的12月~次年7月,江苏省养鹅比较容易出现小鹅瘟;而东北地区小鹅瘟流行季节一般会是在4月~7月。文章介绍了一例雏鹅感染小鹅瘟病毒的诊断和治疗,以期为养殖户提供参考。

摘要： 水禽细小病毒是细小病毒科、依赖细小病毒属的成员,目前确定的有番鸭细小病病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)[1-2]。MDPV引起的疾病又称“三周病”,主要侵害3周龄以内的雏鸭,耐过的成年鸭主要表现为生长缓慢,逐渐成为“僵鸭”;GPV引起的疾病又称“小鹅瘟”,主要侵害7周龄以内的雏鹅和雏鸭,其中1周龄左右最为易感[3,4]。MDPV和GPV感染的临床症状相似,但MDPV只能感染番鸭,GPV既可以感染鹅又可以感染雏番鸭。

摘要： 小鹅瘟又称鹅细小病毒感染,是引起初生雏鹅出现急性或者亚急性败血性的传染病,可给养鹅业造成巨大损失。4~20日龄以下的雏鹅是本病的高发群体,以严重下痢和渗出性肠炎为特征,病死率可超过90%;成年鹅也可能感染本病,一般没有神经症状出现,表现为下痢和采食量减少。现阶段小鹅瘟在全世界各地均有流行,已经成为威胁养鹅业高质量发展的严重传染病。

摘要： 为了制备鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白的特异性单克隆抗体,将VP2基因克隆至大肠杆菌原核表达载体pET28a(+),构建了pET28a-VP2原核表达质粒,经过诱导表达并纯化获得了VP2蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备了3株可稳定分泌与GPV VP2蛋白结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:F5-B7、C4-4和B9-C5。抗体分型结果显示,3株单克隆抗体轻链均为κ链,F5-B7和C4-4重链亚类为IgG2b, B9-C5重链亚类为IgG1。以VP2蛋白为包被抗原,采用间接ELISA方法检测表明,F5-B7和C4-4两个单抗效价可达1∶240 000,B9-C5单抗为1∶20 000。间接免疫荧光和免疫印迹试验表明,这3株抗体皆能与GPV发生特异性反应。本研究为鹅细小病毒VP2蛋白表位鉴定、病毒和VP2蛋白结构功能研究、鹅细小病毒诊断试剂的开发及基因工程抗体的研究等奠定了基础。

摘要： 为快速鉴别诊断鹅星状病毒(GoAstV)和鹅细小病毒(GPV),根据GoAstV和GPV基因序列保守区域设计了两对特异性引物,通过PCR扩增目的片段并构建重组质粒,建立了一种可同时检测这两种病毒的PCR诊断方法.该方法能够特异性扩增出两种病毒的相应片段,而对鹅副粘病毒(GPMV)、鹅流感病毒(GAIV)、鹅腺病毒(GADV)、鹅圆环病毒(GoCV)均无扩增,对重组质粒的最低检测拷贝数分别为1.25×103copies和1.25×105 copies.应用该方法对50份鹅临床脏器样品进行检测,结果检测出GoAstV 35份、GPV 2份,GoAstV和GPV混合感染2份.结果 表明,研究建立的双重PCR检测方法快速、特异、敏感,可用于GoAstV和GPV的流行病学调查和疾病监测.

摘要： 本文阐述了一例小鹅瘟的发病情况与临床特征,介绍了剖检变化、诊断过程,并提出了治疗、免疫预防等具体防控措施,以期为养殖户科学做好该病的防控工作、减少经济损失提供参考.

摘要： 为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV)NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性.对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH.然后用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因.目的基因通过BamHⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH.重组质粒经BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定.重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku.纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白.间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1:200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断.

摘要： 2015年3月以来,我国山东、安徽、江苏等地肉鸭群出现了一种以鸭喙发育不良,舌头外伸为主要特征的疾病,该病被暂时根据症状命名为,鸭短喙长舌综合征,并被证明为新型鹅细小病毒感染.该病主要引起雏鸭发育迟缓,上下喙萎缩变短,舌头外伸、肿胀,感染后期胫骨及翅膀骨骼变脆,易发生骨折.导致肉鸭出栏合格率下降,对肉鸭养殖业造成较大的经济损失.而目前该病毒在感染鸭体内载量、具体分布规律以及排毒规律尚未有相关报道.为研究鸭源新型鹅细小病毒在樱桃谷肉鸭体内分布情况,排毒规律,本试验将60羽樱桃谷雏鸭随机分为两组,其中攻毒组40羽,对照组20羽.攻毒组通过胸部肌肉接种鸭源新型鹅细小病毒SDLC01株,对照组接种等量生理盐水.攻毒后,每天采集泄殖腔棉拭子,且每隔3d随机剖杀3羽,收取组织器官-20°C保存.应用荧光定量PCR方法检测排毒及病毒在组织中的载量变化.结果显示,樱桃谷雏鸭在感染鸭源新型鹅细小病毒后1-22d均可向外持续排毒,感染后7天出现排毒高峰,随后于感染后10d及15d出现两个缓慢降低的峰值.组织中病毒载量较高的器官有脾脏,胸腺,肝脏,法氏囊,肠道和肾脏;脑,肺脏和胰腺病毒载量相对较低,其中脾,胸腺,法氏囊及肠在感染后9d病毒载量升至高峰,随后逐渐降低;肾脏和肝脏的病毒载量在12d达到高峰,随后降低.研究表明,鸭源新型鹅细小病毒对樱桃谷鸭的感染能力较强,能够侵袭雏鸭体内脾脏,胸腺,肝脏,法氏囊,肾脏及肠道等组织器官,且能够通过泄殖腔向外排毒.

摘要： 为研究鸭源新型鹅细小病毒在樱桃谷肉鸭体内分布情况,排毒规律,本试验将60羽樱桃谷雏鸭随机分为两组,其中攻毒组40羽,对照组20羽.攻毒组通过胸部肌肉接种鸭源新型鹅细小病毒SDLC01株,对照组接种等量生理盐水.攻毒后,每天采集泄殖腔棉拭子,且每隔3d随机剖杀3羽,收取组织器官-20°C保存.应用荧光定量PCR方法检测排毒及病毒在组织中的载量变化.结果显示,樱桃谷雏鸭在感染鸭源新型鹅细小病毒后1～22d均可向外持续排毒,感染后7天出现排毒高峰,随后于感染后10d及15d出现两个缓慢降低的峰值.组织中病毒载量较高的器官有脾脏,胸腺,肝脏,法氏囊,肠道和肾脏;脑,肺脏和胰腺病毒载量相对较低,其中脾,胸腺,法氏囊及肠在感染后9d病毒载量升至高峰,随后逐渐降低;肾脏和肝脏的病毒载量在12d达到高峰,随后降低.研究表明,鸭源新型鹅细小病毒对樱桃谷鸭的感染能力较强,能够侵袭雏鸭体内脾脏,胸腺,肝脏,法氏囊,肾脏及肠道等组织器官,且能够通过泄殖腔向外排毒.

摘要： 短喙与侏儒综合征(SBDS)是半番鸭的一种疾病,病原是鹅细小病毒.该病在1971-1972年法国首次报道,随后在波兰和我国台湾地区也有报道.自2014年,在我国樱桃谷北京鸭群中也暴发了该病.为了解我国樱桃谷北京鸭群中的流行情况,在2015-2016年间,从4个省份采集了119份样品,从中检出了112份(94.1％)鹅细小病毒阳性样品.用VP1和VP3序列进行进化分析的结果均显示,樱桃谷北京鸭源毒株与导致半番鸭SBDS的毒株聚为一个分支,二者属GPV的同一类变异株.序列比对结果显示,我国SBDS流行株中存在一致的突变位点(NS:I50T、K131R、A140S、A350V、V468I、R553K、N555T、D594Y和V617A;VP1:S/R450N和H660N).NS蛋白氨基酸位点的突变可能与GPV对樱桃谷北京鸭的致病性有关.

摘要： 2015年我国沿海地区爆发了以北京樱桃谷鸭和半番鸭为宿主的新型细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV),NGPV能导致北京樱桃谷鸭和半番鸭患上严重短喙侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS).对山东送检病鸭的肝、脾、肠道进行病毒分离工作.病鸭表现为消瘦、短喙等症状,剖解内脏器官除胰脏有肿胀出血外其他器官均无明显病理变化.对病料抽提核酸而制备PCR模板,选取GPV的Rep和VP1基因进行PCR扩增,阳性产物送测序,基于获得的序列构建分子遗传进化树,分析发现该株与已报道QH15、DS15和SC16株新型鹅细小病毒遗传关系最为接近,并命名为NGPV/duck/SD/15株.将所分离的病毒在9日龄鸭胚、鸭胚成纤维细胞与鹅胚成纤维细胞上盲传十代以上以获得适应胚与细胞的病毒,发现NGPV/duck/SD/15株能在鸭胚和鸭胚成纤维细胞上有效增殖,但不能在GEF上增殖.

摘要： 本研究选取实验室最新分离的鹅细小病毒制备单克隆抗体及多克隆抗体,并在此基础上建立了用于快速检测GPV的胶体金免疫层析的方法.通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并将其标记于纯化的抗GPV单克隆抗体制备免疫胶体金,将兔抗GPV多克隆抗体及羊抗鼠IgG抗体分别喷涂于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,并按一定步骤组装后制成检测GPV的免疫胶体金试纸条.试验结果表明,所制备GPV检测试纸条敏感性比琼脂扩散试验高出100倍,且对GRV,AIV,NDV等主要水禽疾病的检测结果为阴性.将试纸条储存于4°C冰箱4月后重新进行试验,结果显示特异性及敏感性没有出现明显下降.对92份疑似病例分别进行PCR检测,琼脂扩散检测及免疫胶体金检测,其中PCR试验的检出率为94％,胶体金试验的检出率为82％,而琼脂扩散试验几乎没有检测出阳性样品.在本研究中建立的鹅细小病毒免疫胶体金试纸条检测方法具有良好的特异性,敏感性和稳定性,为鹅细小病毒的快速诊断提供了新的方法.

摘要： 短喙与侏儒综合征(SBDS)是半番鸭的一种疾病,病原是鹅细小病毒.该病在1971～1972年法国首次报道,随后在波兰和我国台湾地区也有报道.自2014年,在我国樱桃谷北京鸭群中也暴发了该病.为了解我国樱桃谷北京鸭群中的流行情况,在2015～2016年间,从4个省份采集了119份样品,从中检出了112份(94.1％)鹅细小病毒阳性样品.用VP1和VP3序列进行进化分析的结果均显示,樱桃谷北京鸭源毒株与导致半番鸭SBDS的毒株聚为一个分支,二者属GPV的同一类变异株.序列比对结果显示,我国SBDS流行株中存在一致的突变位点(NS:I50T、K131R、A140S、A350V、V468I、R553K、N555T、D594Y和V617A;VP1:S/R450N和H660N).NS蛋白氨基酸位点的突变可能与GPV对樱桃谷北京鸭的致病性有关.

摘要： 为制备鹅细小病毒(GPV)弱毒株并研究其传代致弱前后的基因变化情况,本研究将GPV YG株病毒在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)中交替传代培养至72代次,并且对F0、F24,F48和F72代次病毒进行PCR全基因组扩增,测序,序列比对结果显示,F72代与F0代相比,5'和3'非编码区存在163个核苷酸差异,多数集中于反向终端重复序列(ITR)中,5'和3'两端均有6段碱基插入;编码区氨基酸序列比对结果显示,与F0代次病毒相比,F72代次病毒共有23个氨基酸位点突变,18个位于VP蛋白,5个位于非结构蛋白.病毒致病性试验表明,随着传代次数的增加,其毒力呈减弱趋势,并且F72代次病毒已完全致弱.本研究对GPV致弱后基因变化情况的分析及动物致病性试验结果将为研究GPV毒力致弱机制的研究奠定了基础.

摘要： 为了监测番鸭群中鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)的血清学状况,本研究表达了鹅细小病毒NS1蛋白,并建立了检测番鸭血清中鹅细小病毒抗体的间接ELISA方法.通过PCR方法克隆了NS1基因,经亚克隆至pET32a表达载体,该重组质粒经IPTG诱导表达蛋白的相对分子质量约为92kDa.Westernblot分析表明,该重组蛋白能与鹅细小病毒弱毒疫苗免疫的番鸭阳性血清发生特异性反应.随后,通过棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.5μg/孔,待检血清1∶50稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1∶10000倍稀释时反应条件最佳.在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.399.该方法特异性强,与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应;重复性高,批内和批间重复试验的变异系数分别小于5％和10％.用建立的ELISA方法检测养殖场中免疫过鹅细小病毒的番鸭血清样品88份,测得81份为阳性,阳性率为92％.该方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础.

摘要： 2014年以来,在我国樱桃谷北京鸭主要养殖地区(山东、河北、安徽、江苏)相继出现了短喙与侏儒综合征(SBDS).该病病原为鹅细小病毒(GPV),以喙短、舌头伸出、生长发育严重受阻为特点,严重影响肉鸭增重以及骨骼发育.在明确其病原的基础上,在3个鸭场开展了免疫预防试验.结果显示,在3-8日龄时接种小鹅瘟抗体制品(0.5-0.8ml/只),可大幅度减少典型病例以及残鸭的出现,相对于未免疫对照组,免疫组的增重、料重比的改善以及由此产生的经济效益非常明显.结果表明,用小鹅瘟抗体制品可有效控制樱桃谷北京鸭短喙与侏儒综合征.

摘要： 2012～2013年,上海、江苏、安徽等东南几个省份爆发流行小鹅瘟,造成了严重的经济损失.本研究利用MAGA对东南几个省份NCBI中的27个毒株和12经典毒株的VP3核酸进行序列分析.发现VP3核酸序列保守性为94％,可分为三个基因型(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),1型的19株毒株与台湾株和中国流行毒株比较相近,Ⅱ型与标准强毒株和台湾疫苗株同源性较高,Ⅲ型与鸭细小病毒核酸序列同源性较近.表明2012年～2013年中国大陆流行毒株可能来源于不同毒株,为小鹅瘟的防治提供理论依据.

摘要： 本发明涉及一种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法，主要是设计并筛选了新的特异性引物，优化了反应过程中的各种参数，利用本组引物建立的针对鹅细小病与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法特异性强、敏感性高，可以快速准确地进行鹅细小病毒和新型樱桃谷鸭源细小病毒的鉴定。本发明建立的双重PCR方法重复性好、可信度高，同时又价格低廉、操作相对简单，适用于大规模流行病学调查。本发明经过1500份样品的检测证明具有很好的可信度，并且只需要普通PCR仪即可进行，由于引物合成价格已经非常便宜，本专利反应成本与普通PCR反应相差无几，实验操作也相对简单，适用于目前我国的畜牧业生产实际。

摘要： 本发明公开了一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法，该方法是利用NS基因序列酶切位点差异来进行区别的，包括DNA的提取，PCR扩增得到NS基因片段，EcoRⅠ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。

摘要： 本发明公开了一种一管PCR式鉴别诊断鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)的试剂盒，所述试剂盒包括引物、处理待检样品的试剂、PCR试剂和使用说明，其中所述引物为SEQ ID NOs：1-3。本发明的试剂盒适合鉴定鹅或番鸭动物的肝、脾和肾脏组织样品、泄殖腔棉拭子、鸭或鹅胚尿囊液以及细胞培养物样品中的GPV和MDPV。所述试剂盒在使用时包括下述步骤：(1)从待检鹅或番鸭动物获取待检样品，并对待检样品提取基因组DNA；(2)将步骤(1)获得的待检样品的基因组DNA与三种引物SEQ ID NOs：1-3一起以适量放置在一个PCR管中，进行PCR反应；和(3)电泳检测PCR产物，并根据PCR产物大小鉴别鹅细小病毒和番鸭细小病毒，其中约700bp的特异性DNA条带表示存在鹅细小病毒，约300bp的特异性DNA条带表示存在番鸭细小病毒，同时存在约700bp和约300bp的条带表示同时存在鹅细小病毒和番鸭细小病毒。

摘要： 本发明公开了一种番鸭细小病毒和鹅细小病毒的HRM鉴别方法、试剂盒和引物组，所述检测方法包括如下步骤：（1）设计一组可同时扩增番鸭细小病毒和鹅细小病毒的通用PCR引物；（2）从待测样品中提取病毒基因组DNA作为模板DNA；（3）利用步骤（1）的引物组对模板DNA进行PCR扩增；（4）对扩增产物进行HRM分析，鉴别MDPV和GPV。本发明方法：可快速、有效鉴别MDPV和GPV；检测速度快且高通量：5～10分钟即可完成96/384孔板的PCR产物检测，极大缩短了检测时间；对PCR产物无损害，检测后还可以进行后续分析，如测序和凝胶电泳等。

摘要： 本发明属于PCR检测领域，具体涉及一种番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型的三重PCR检测方法，S1、根据番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型的基因保守序列，分别设计3对特异性扩增引物；S2、提取番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型DNA；S3、将S2中获取的所有的DNA混合后进行PCR扩增；S4、通过电泳检测S3中的PCR产物。本发明建立的三重PCR检测方法，能同时检测番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型，三种病毒核酸模板的最低检测量分别为2pg/μL、20pg/μL和2pg/μL。

摘要： 本发明提供一种番鸭细小病毒（MDPV）和鹅细小病毒（GPV）双重实时荧光定量PCR检测引物及方法，其中，MDPV引物序列如下：上游引物P1：TAATGGTGGCAGGAATGCACAGTTC，下游引物P2：TGTTACCATGATGTCTGAAAT；GPV引物序列如下：上游引物P3：GAGGTAGACAGCAACAGAAA，下游引物P4：GCTCGTCCGTGACCATA。目前，还没有基于SYBR Green II的双重实时荧光定量PCR检测引物及方法可以同时将GPV各种基因亚型完全地和MDPV区分开来的相关研究报道和发明专利，本发明的建立可填补相关领域空白。

摘要： 本发明涉及一种快速鉴定鹅细小病毒与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法，主要是设计并筛选了新的特异性引物，优化了反应过程中的各种参数，利用本组引物建立的针对鹅细小病与樱桃谷鸭源细小病毒的双重PCR方法特异性强、敏感性高，可以快速准确地进行鹅细小病毒和新型樱桃谷鸭源细小病毒的鉴定。本发明建立的双重PCR方法重复性好、可信度高，同时又价格低廉、操作相对简单，适用于大规模流行病学调查。本发明经过1500份样品的检测证明具有很好的可信度，并且只需要普通PCR仪即可进行，由于引物合成价格已经非常便宜，本发明反应成本与普通PCR反应相差无几，实验操作也相对简单，适用于目前我国的畜牧业生产实际。

摘要： 本发明公开了一种番鸭细小病毒和鹅细小病毒的HRM鉴别方法、试剂盒和引物组，所述检测方法包括如下步骤：（1）设计一组可同时扩增番鸭细小病毒和鹅细小病毒的通用PCR引物；（2）从待测样品中提取病毒基因组DNA作为模板DNA；（3）利用步骤（1）的引物组对模板DNA进行PCR扩增；（4）对扩增产物进行HRM分析，鉴别MDPV和GPV。本发明方法：可快速、有效鉴别MDPV和GPV；检测速度快且高通量：5～10分钟即可完成96/384孔板的PCR产物检测，极大缩短了检测时间；对PCR产物无损害，检测后还可以进行后续分析，如测序和凝胶电泳等。

摘要： 本发明公开了一种一管PCR式鉴别诊断鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)的试剂盒，所述试剂盒包括引物、处理待检样品的试剂、PCR试剂和使用说明，其中所述引物为SEQ ID NOs：1-3。本发明的试剂盒适合鉴定鹅或番鸭动物的肝、脾和肾脏组织样品、泄殖腔棉拭子、鸭或鹅胚尿囊液以及细胞培养物样品中的GPV和MDPV。所述试剂盒在使用时包括下述步骤：(1)从待检鹅或番鸭动物获取待检样品，并对待检样品提取基因组DNA；(2)将步骤(1)获得的待检样品的基因组DNA与三种引物SEQ ID NOs：1-3一起以适量放置在一个PCR管中，进行PCR反应；和(3)电泳检测PCR产物，并根据PCR产物大小鉴别鹅细小病毒和番鸭细小病毒，其中约700bp的特异性DNA条带表示存在鹅细小病毒，约300bp的特异性DNA条带表示存在番鸭细小病毒，同时存在约700bp和约300bp的条带表示同时存在鹅细小病毒和番鸭细小病毒。

摘要： 本发明公开了一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法，该方法是利用NS基因序列酶切位点差异来进行区别的，包括DNA的提取，PCR扩增得到NS基因片段，EcoRⅠ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。