实时定量

摘要： 目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法。方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果 特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1%;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01%。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%(55/58),高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果(75.86%,44/58);染料ASPCR方法检测MP耐药率为70.91%(39/55),高于探针ASCR方法的检测结果 63.64%(35/55)。结论新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。

摘要： 为探明芽孢杆菌处理对柑桔苗木黄龙病的抑制效果,本研究对复合菌剂进行分离得到单菌落,对No.4菌株进行细菌纯培养鉴定,通过序列测定确定其分类地位,并采用固体发酵方法制备菌剂,用该菌剂对3个品种的盆栽苗木进行灌根处理.结果表明:No.4菌株属芽孢杆菌属,革兰氏染色呈阳性;通过16S rDNA和recA基因测序分析,证明该No.4菌株与贝莱斯芽孢杆菌同源性达93％;该菌剂灌根21次时,'沃柑'和'沙糖橘'黄龙病阳性率由处理前的100％分别降低至50％和75％,而对照样品的阳性率均保持不变;No.4菌剂处理能促进'沃柑'、'沙糖橘'和南丰蜜橘3个品种的新生根系增多,褐变根系减少;扫描电镜和石蜡切片观察表明:南丰蜜橘韧皮部杆菌造成根系褐变,染病植株根系的表皮细胞易产生木栓化,表皮细胞上翘,内皮层产生空洞,结构破坏;No.4菌剂处理后,病原诱导启动子GST1及转录因子WRKY22和WRKY24基因的mRNA相对表达量提高.可见,No.4菌剂对柑桔苗木黄龙病有一定程度的抑制效果,对褐变根系有明显的缓解作用.

摘要： 目的 圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)能否感染人类细胞一直都是一个争论的话题.本研究通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术分析PCV2感染人源细胞后的差异表达基因及其相关的信号通路、生物学功能,以期为人源细胞对PCV2及其他病毒产生抗病毒效应的研究提供参考.方法 用PCV2感染HeLa细胞,然后进行RNA-seq技术分析,筛选与抗病毒反应相关的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并通过实时定量PCR进一步验证.结果 在感染PCV2的HeLa细胞中共注释到15402个UniGenes,其中有387个DEGs(包括267个上调基因和120个下调基因).对生物过程类DEGs进行GO富集和KEGG通路分析,发现富集基因要参与应激反应(97/291 DEGs)和免疫系统过程(80/291 DEGs),其中最显著两条途径的基因是NOD样受体信号途径(21/170 DEGs)和单纯疱疹病毒感染途径(22/170 DEGs)相关差异表达基因.结论 PCV2感染HeLa细胞之后,改变了细胞的表达谱,获得的DEGs及其功能注释信息有助于理解其抗病毒机制,对于了解PCV2感染人源细胞所产生的免疫反应及抗病毒效力提供依据.

摘要： 为研究鲟鱼主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因的分子特征和表达,利用RACE技术克隆获得了西伯利亚鲟 Acipernser baerii MHCⅡβ cDNA序列1443 bp,包括开放阅读框(OFR)801 bp,编码184个氨基酸。Blast分析显示,由MHCⅡβ cDNA基因推导的氨基酸序列同其他物种的一致性为46%~83%,通过Smart站点分析,该序列具有SMART MHC_Ⅱ_beta结构域、SMART IGc1结构域和跨膜螺旋结构域;实时定量分析表明,正常情况下 MHCⅡβ mRNA在西伯利亚鲟10种组织中均有表达,其中脾、头肾和血液中表达量较高,皮肤和肉中表达量极低( P<0.05 );感染维氏气单胞菌 Aeromonas veronii 40 h后,脾脏中 MHCⅡβ mRNA的表达量显著低于未感染的对照组( P<0.05 ),直至93 h时恢复至对照组水平且有显著性变化( P<0.05 )。研究表明, MHCⅡβ基因参与了西伯利亚鲟的免疫反应。

摘要： 大豆(Glycine max L.Merr.)GmFTL3和GmFTL5基因具有很高的序列相似性,均参与大豆开花调节,但表达模式并不相同,本研究以启动子为突破口,分析这两个基因之间的表达差异.从大豆品种天隆1号中克隆Gm-FTL3和GmFTL5的启动子,构建载体pGmFTL3pro::GUS和pGmFTL5pro::GUS,转化拟南芥进行GUS染色分析.结果显示:无论长日条件还是短日条件,苗期和花器官中GmFTL3启动子均不驱动GUS基因的表达,而GmFTL5启动子则驱动GUS基因在拟南芥中表达,且在苗期的不同阶段呈现组织表达特异性.在花器官中,GmFTL5启动子驱动GUS基因主要在花萼、花瓣、花药和花粉粒中表达.实时定量结果显示,在大豆中,GmFTL3和GmFTL5基因均有表达.综上所述,大豆GmFTL3启动子在大豆中有活性但在拟南芥中无活性;GmFTL5启动子在大豆和拟南芥中均有活性,但表达可能存在差异;GmFTL5启动子在花器官中表达可能暗示GmFTL5基因与花器官发育有关.

摘要： In this research,we cloned and analyzed the sequence of Epstein-Barr virus-induced gene 3 (EBI3) in large yellow croaker (Larimichthys crocea).The open reading frame of LycEBI3 consists of 747 bp encoding a polypeptide of 248 amino acids.The predicted amino acid sequence showed that LycEBI3 contains a signal peptide of 23 amino acids and 2 Fibronectin type 3 (FN3) (residues 37 ～ 130,145 ～230) domain that is preserved in lower and higher vertebrates.Multiple sequence alignment showed that the LycEBI3 shares 27.68％ ～ 57.53 ％ amino acid sequence identity with other known EBI3.LycEBI3 were constitutively expressed in different organs with the higher expression in spleen and blood.The up regulation of LycEBI3 in spleen and head kidney after bacterial infection indicated its involvement in innate immune regulation of suppressing the inflammation during bacterial infections.%通过克隆大黄鱼(Larimichthys crocea)的EBI3(Epstein-Barr virus-induced gene 3)基因并对其进行了序列分析.大黄鱼EBI3(LycEBI3)基因开放阅读框长747bp,编码248个氨基酸,存在1个信号肽序列和2个FN3结构域(37 ～ 130,145 ～ 230).多序列比对发现LycEBI3分子与其他已知EBB氨基酸水平一致性为27.68％ ～57.53％.Real-time PCR结果表明,LycEBI3基因在脾脏和血液中表达量最高,且溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)刺激后,大黄鱼头肾和脾脏中LycEBI3基因的转录水平会显著升高,说明LycEBI3基因可能参与了抑制由细菌引起的炎症反应.

摘要： Objective:To establish the polymerase spiral reaction(PSR) real-time quantitative method for detection of Streptococcus mutans in oral cavity.Methods:The 4 sets of primers for S.mutans gtfB genes were designed and subjected to the PSR to select the optimal set,and then the result was determined by the real-time turbidity method and chromogenic method.Results:The best primer from 4 sets of primers was selected out,and the best temperature was determined to be 65°C.The specificity was indicated by the further experiments showing that there was no cross reaction with 13 other pathogen nucleic acid with the best primers.The sensitivity is up to 10 copies/μL.Conclusion:We established the PSR method of real-time quantitative detection of S.mutans.This method has the characteristic of simpleness and quickness,strong specificity and high sensitivity,which provides a new method for real-time quantitative detecting S.mutans.%目的:建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应(PSR)方法.方法:针对变形链球菌的gtfB基因设计4套引物,通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果.结果:从4套引物中筛选出最佳引物,并确定最佳温度为65°C;进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌,与13种其他病原核酸无交叉反应,敏感性达10拷贝/μL.结论:建立了实时定量检测变形链球菌的PSR方法,该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高的特点,为实时定量检测变形链球菌提供了新技术.

摘要： Objective To evaluate the expression of Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP) and Regulated on Activation in Normal T-Cell Expressed and Secreted (RANTES) in nasal polyposis,discuss the effects of TSLP and RANTES in the development of nasal polyposis,and explore the correlations between TSLP and EOS infiltration and between RANTES and EOS infiltration respectively.Methods Hematoxylin-eosin staining,immunohistochemistry and real-time RT-PCR were used to detect the expression of TSLP,RANTES and EOS,and to analyze the correlations among them.Results The percentage of eosinophils observed by microscopy was 73.33 ± 9.33 in the experimental group and 21.50 ± 5.67 in the control group (P <0.05).The number of TSLP positive cells was 34.65 ± 9.25 in the experimental group and 15.56 ± 6.35 in the control group (P <0.05).The number of RANTES positive cells was 49.50 ± 8.35 in the experimental group and 9.67 ± 5.25 in the control group (P <0.05).The relative value of TSLPmRNA was 27.18 ± 6.11 in the experimental group and 7.14 ± 4.29 in the control group (P<0.05).The relative value of RANTESmRNA was 19.14 ± 7.18 in the experimental group and 3.04 ± 1.37 in the control group (P<0.05).Conclusion In nasal polyposis composed of EOS,TSLP protein,RANTES protein and mRNA expression are obviously higher than those in the normal tissues.Moreover,TSLP and RANTES have close correlations with the occurrence and development of EOS in the nasal polyposis.%目的 检测胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、正常T细胞激活分泌调节因子(RANTES)在鼻息肉组织中的表达,探讨其在鼻息肉发病过程中的作用,两者与嗜酸粒细胞(EOS)浸润的关联性.方法 苏木素-伊红染色,免疫组化和实时定量PCR.结果 显微镜下观察嗜酸性粒细胞百分比实验组为73.33±9.33,对照组为21.50±5.67,两组比较P<0.05;TSLP阳性细胞计数实验组为34.65±9.25,对照组为15.56±6.35,两组比较P<0.05;RANTES阳性细胞计数实验组为49.50±8.35,对照组为9.67±5.25,两组比较P<0.05;TSLP mRNA相对值实验组为27.18±6.11,对照组为7.14±4.29,两组比较P<0.05;RANTES mRNA相对值实验组为19.14±7.18,对照组为3.04±1.37,两组比较P<0.05.结论 以EOS为主的鼻息肉中,TSLP和RANTES的蛋白和mRNA表达明显高于正常组织,TSLP和RANTES与鼻息肉组织中EOS的发生发展有密切关系.

摘要： 利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的拟南芥瞬时转化体系影响因素来确定最佳转化条件.以生长15日龄的拟南芥幼苗为试验材料,以转化pCAMBIA1301空载体的根癌农杆菌EHA105为目的菌株进行瞬时转化.研究了吐温20、菌液OD值、乙酰丁香酮(AS)及转化时间等对拟南芥瞬时转化效率的影响.结果表明:以体积分数为0.05％的吐温、菌液OD600值为1.0和120 μmol/L的AS侵染拟南芥2.5 h后,再共培养72 h,能够得到高瞬时转化效果.

摘要： 目的:对比在检验EB病毒中实时定量方法以及酶联免疫吸附试验的临床效果.方法:选取自2015年4月至2016年4月期间来我院就诊的44例疱疹病毒患者作为实验组,将同期来我院就诊的44例皮肤科疾病患者作为参照组,两组患者检测分泌物、疱液以及血液中均予以酶联免疫吸附试验、实时定量方法,分析两种方式的阳性检出率.结果:在实验组中实时定量法检验结果与酶联免疫吸附试验法之间差异显著,P<0.05,统计学有意义.实验组患者采取酶联免疫吸附试验与实时定量两种方式检测结果对比参照组存在显著性差异,P<0.05,统计学有意义.结论:在疱疹病毒检验中实时定量方法以及酶联免疫吸附试验均存在一定效果,但实时定量方法检出率高,可以在临床上作为检验EB病毒的基本方式.

摘要： MicroRNAs为19-22个核苷酸的非编码小调控RNA，对基因表达进行转录后调控。miR-103序列在己知脊椎动物中高度保守，在人、鼠的各种组织中呈广泛性表达，参与脂类代谢、红细胞生成、免疫、发育、肿瘤形成和冷热应激等调节。猪miR-l03最早由Wernersson R等通过基因组扫描和序列同源性比对鉴定获得，但有关它的组织表达分析尚未见报道。miRNA检测定量是功能研究的前提。近几年，实时定量PCR已逐渐成为miRNA检测定量的主要方法之一。而结合特定生物学背景，选择适宜内参对照归一化者(Normalizer)，对数据进行正确归一化处理是保证miRNA实时定量PCR分析准确性的关键。

摘要： 目的建立一种快速有效地检测由牛分支杆菌引起的出口牲猪结核病的实时定量双重荧光PCR检测方法。方法以牛分支杆菌16S rRNA基因和IS6110因为靶序列，建立实时定量双重荧光PCR方法;通过敏感性实验、特异性和干扰实验等验证所建方法的敏感性、特异性、稳定性;尝试用5种方法对牲猪结核病疑似病料组织进行DNA提取;用建立的方法对搜集的猪结核病疑似病料进行检测并与剖解方法和分离培养方法进行比较。结果建立的方法稳定性强、特异性和敏感性好。结论建立的实时定量双重荧光PCR方法可快速、敏感，特异地检测由牛分支杆菌引起的出口牲猪结核病。

摘要： 空气中存在着许多对人体健康有害的微生物(称为生物气胶(bioaerosols))。近年来许多针对室内及室外作业场所生物气胶之研究，大部分多使用培养法作为其分析环境中总细菌浓度之方法；然部分气胶显现具活性但不可培养(viable butnon-culturable (VBNC))之特性，造成以培养法定量时低估实际暴露浓度。rn 本研究以核酸染剂结合实时定量聚合酶连锁反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR)，透过比较两种核酸染剂(ethidium monoazide，EMA) 及propidium monoazide，PMA)于不同浓度之效能、测试其线性关系范围，并于高浓度细菌暴露之职场进行方法验证，以建立分子生物学定量空气中活性细菌的方法。rn 结果显示，相较于未添加核酸染剂之对照组，加入EMA 或PMA之受热组（死菌）样本，其qPCR 所得之DNA 浓度显著较低，显示EMA 与PMA 皆可有效抑制受热组细菌DNA 于qPCR之放大。进一步观察不同浓度核酸染剂间之反应，发现1.5 μg/mL之PMA 可有效抑制受热组细菌DNA 于qPCR 放大，且在此浓度下，不会对活性细菌造成以qPCR 定量其浓度之显著干扰，显示1.5 μg/mL之PMA 结合qPCR 为定量空气中活性细菌之最佳条件。rn 进一步以1.5 μg/mL PMA 评估定量细菌浓度之范围，结果显示良好之线性关系(R2=0.9925) 可介于1×105 ~ 1×108cfu/mL。再将此PMA-qPCR 方法应用于分析畜牧场、家禽舍及医疗院所采样之空气样本，发现所得活性细菌浓度介于可培养浓度与总细菌浓度之间，显示PMA-qPCR 于定量环境空气中总细菌是一可行的方法。

摘要： 本研究通过RT-PCR方法检测TLRs在绵羊肺泡巨噬细胞分布情况，建立TLR2, 4的实时定量PCR检测方法，对脂多糖诱导绵羊肺泡巨噬细胞过程中TLR2, 4的表达规律进行监测，为感染性疾病的分子机理研究提供理论依据。

摘要： 蒙古羊中多脊椎个体比例达到25%，其胸椎和腰椎比普通羊多1-2枚，因而体型大，身躯长，具有优良的肉质特性和出色的产肉性能。虽然人们早己知道蒙古羊的这个解剖特征，但一直没有发现其形成的原因以及这种变异的传递规律和表达方式，至今仍未找到简便而又可靠的鉴别和选择的方法，因而无法系统选育这个有利性状。研究推断蒙古羊的多脊椎遗传变异与HomeoBox基因变异有关。这种变异具有基因组印记(genomic imprinting)遗传特征，CpG岛中胞嘧啶的甲基化是印记所必需的。本研究表明，多脊椎性状与该片段的甲基化程度显著相关，可作为鉴别蒙古羊多脊椎个体分子标记。

摘要： 微小RNAs(microRNA,miRNA)是一种19～24核苷酸非编码RNA，其主要通过与靶mRNAs的3-未翻译区域完全(在植物)或部分(在哺乳动物)碱基配对在转录后水平调节靶mR-NA。目前研究已证实miRNA在急性白血病(AL)发生过程中起重要作用。本研究采用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测AL细胞miR-128、1et-7b,miR-223、miR-155、miR-181a的表达，以及CLL患者miR-15a和miR-16-1表达，及其与del(13q14)和BCL-2的关系。

摘要： 本文通过对旱稻65及旱稻/稗草//高粱杂交后代进行蛋白质组分析，利用RT PCR克隆到干早胁迫诱导蛋白DIP3(DroughtInduced Protein 3)，此蛋白的cDNA全长894bp，编码297个氨基酸，通过网上比对发现，其与水稻中几丁质酶III的同源性达82%，PEG胁迫条件下，2h表达量达到最高，随后表现降低的趋势。PEG胁迫条件下，短时间内出现明显的增加，随后降低，待处理24h后又出现明显的升高。低温处理条件下，在1h和5h出现两个小的峰值，随后出现较大程度的降低。由此表明，DIP3基因的表达受千旱、高盐和低温的诱导，且不同胁迫处理下该基因的表达模式存在明显的不同。

摘要： 本文通过对旱稻65及旱稻/稗草//高粱杂交后代进行蛋白质组分析，利用RT PCR克隆到干早胁迫诱导蛋白DIP3(DroughtInduced Protein 3)，此蛋白的cDNA全长894bp，编码297个氨基酸，通过网上比对发现，其与水稻中几丁质酶III的同源性达82%，PEG胁迫条件下，2h表达量达到最高，随后表现降低的趋势。PEG胁迫条件下，短时间内出现明显的增加，随后降低，待处理24h后又出现明显的升高。低温处理条件下，在1h和5h出现两个小的峰值，随后出现较大程度的降低。由此表明，DIP3基因的表达受千旱、高盐和低温的诱导，且不同胁迫处理下该基因的表达模式存在明显的不同。

摘要： 本文通过对旱稻65及旱稻/稗草//高粱杂交后代进行蛋白质组分析，利用RT PCR克隆到干早胁迫诱导蛋白DIP3(DroughtInduced Protein 3)，此蛋白的cDNA全长894bp，编码297个氨基酸，通过网上比对发现，其与水稻中几丁质酶III的同源性达82%，PEG胁迫条件下，2h表达量达到最高，随后表现降低的趋势。PEG胁迫条件下，短时间内出现明显的增加，随后降低，待处理24h后又出现明显的升高。低温处理条件下，在1h和5h出现两个小的峰值，随后出现较大程度的降低。由此表明，DIP3基因的表达受千旱、高盐和低温的诱导，且不同胁迫处理下该基因的表达模式存在明显的不同。

摘要： 本文通过对旱稻65及旱稻/稗草//高粱杂交后代进行蛋白质组分析，利用RT PCR克隆到干早胁迫诱导蛋白DIP3(DroughtInduced Protein 3)，此蛋白的cDNA全长894bp，编码297个氨基酸，通过网上比对发现，其与水稻中几丁质酶III的同源性达82%，PEG胁迫条件下，2h表达量达到最高，随后表现降低的趋势。PEG胁迫条件下，短时间内出现明显的增加，随后降低，待处理24h后又出现明显的升高。低温处理条件下，在1h和5h出现两个小的峰值，随后出现较大程度的降低。由此表明，DIP3基因的表达受千旱、高盐和低温的诱导，且不同胁迫处理下该基因的表达模式存在明显的不同。

摘要： 本发明提供了一种定量检测机体中mRNA含量的实时荧光定量PCR试剂盒及检测方法和应用，涉及mRNA检测技术领域。本发明所述试剂盒建立在RT‑PCR基础上，以mRNA作为标准品构建标准曲线，稀释的系列标准品溶液通过与待测样本同样的反转录、qPCR过程，更好的模拟样本检测过程，直观展示mRNA药物含量，减少质粒的构建工作，实现了生物样本中mRNA药物的快速、准确的定量检测，具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽，特异性强等优点，可用于mRNA类药物临床前药物生物分布研究、临床研究生物样品检测和临床治疗患者的药物分布监测。

摘要： 本发明公开了一组定量检测柑橘半穿刺线虫的实时荧光定量PCR引物和探针及其应用。所述引物包括上游引物TsF1和下游引物TsR2，序列分别如SEQ ID NO.1～2所示；所述探针为Tspro1，探针Tspro1的序列如SEQ ID NO.3所示。利用上述引物和探针建立的实时荧光定量PCR方法不仅能够特异的从混合线虫样品或基质中检测并定量柑橘半穿刺线虫，而且检测灵敏性可达到单条线虫的灵敏度，对实际应用工作，如检验检疫工作，有着重要的推广应用价值。

摘要： 本发明提供了一种定量检测机体中mRNA含量的实时荧光定量PCR试剂盒及检测方法和应用，涉及mRNA检测技术领域。本发明所述试剂盒建立在RT‑PCR基础上，以mRNA作为标准品构建标准曲线，稀释的系列标准品溶液通过与待测样本同样的反转录、qPCR过程，更好的模拟样本检测过程，直观展示mRNA药物含量，减少质粒的构建工作，实现了生物样本中mRNA药物的快速、准确的定量检测，具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽，特异性强等优点，可用于mRNA类药物临床前药物生物分布研究、临床研究生物样品检测和临床治疗患者的药物分布监测。

摘要： 本发明涉及采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物、探针和方法，可有效解决人类血液中布鲁氏菌定量检测的问题，其解决的技术方案是，采用实时荧光定量PCR技术定量检测人类血液中布鲁氏菌的引物和探针，引物和探针序列是：上游引物:5’‑GGAAGGTTCAGAAACAACCAC‑3’，下游引物：5’‑GTTGTAACCGGCCTGAACAC‑3’，探针：5’‑FAM‑TGCTGCTCCAGTTGACACCTTCTCG‑BHQ1‑3’，本发明稳定性良好、灵敏度高、特异性强，采用实时荧光定量PCR技术，可准确检测出人类血液中布鲁氏菌含量，对布病的准确诊断及防控策略的制定有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种HIV‑1RNA定量检测的实时荧光定量PCR引物和探针，所述引物包括上游引物HIV F1和下游引物HIV R1，所述上游引物HIV F1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物HIV R1的序列如SEQ ID NO.2所示；所述探针为HIV probe1，所述HIV probe的序列如SEQ ID NO.3所示。该引物组和探针对HIV‑1具有高特异性，可用于实时荧光定量RT‑qPCR技术检测HIV‑1。还公开了一种HIV‑1病毒载量的实时荧光定量PCR检测方法，以及上述引物和探针、试剂盒在定量检测HIV‑1病毒载量方面的应用。

摘要： 本发明涉及核酸分子定量的方法，具体而言，涉及适用于石蜡组织切片(FFPE)样品的基因表达定量的实时定量PCR方法，该方法包括1)反转录反应阶段；2)预扩增反应阶段；和3)巢式内扩增qPCR反应阶段。与传统的反转录qPCR相比，本发明的方法即保证了反转录、qPCR反应的特异性，又降低了反应所需底物的浓度，可以使qPCR的检测灵敏度提高500倍以上，尤其适用于低质量和/或低浓度的石蜡组织切片提取的mRNA的定量检测。本发明的方法可以极大地提高此类检测的灵敏度和可靠度。

摘要： 本发明涉及基因技术领域，特别涉及应用于肝细胞癌的一组实时定量PCR相对定量的内参基因及其筛选方法。本发明得出TFG和SFRS4可作为肝细胞癌细胞株研究中较稳定的内参基因。常用的内参基因的表达稳定性经过评估后发现ACTB可作为内参进行应用，而GAPDH、HPRT1和TUBB则不适合作为肝细胞癌研究相关的内参基因。

摘要： 本发明涉及基因技术领域，特别涉及应用于肝细胞癌的一组实时定量PCR相对定量的内参基因及其筛选方法。本发明得出TFG和SFRS4可作为肝细胞癌细胞株研究中较稳定的内参基因。常用的内参基因的表达稳定性经过评估后发现ACTB可作为内参进行应用，而GAPDH、HPRT1和TUBB则不适合作为肝细胞癌研究相关的内参基因。

摘要： 本发明涉及核酸分子定量的方法，具体而言，涉及适用于石蜡组织切片(FFPE)样品的基因表达定量的实时定量PCR方法，该方法包括1)反转录反应阶段；2)预扩增反应阶段；和3)巢式内扩增qPCR反应阶段。与传统的反转录qPCR相比，本发明的方法即保证了反转录、qPCR反应的特异性，又降低了反应所需底物的浓度，可以使qPCR的检测灵敏度提高500倍以上，尤其适用于低质量和/或低浓度的石蜡组织切片提取的mRNA的定量检测。本发明的方法可以极大地提高此类检测的灵敏度和可靠度。

摘要： 本实用新型公开了一种定量炉实时定量装置，包括炉体、坩埚、自动供料装置和液位检测装置，所述炉体内设有坩埚，所述坩埚下方出料口设有抽液泵，所述炉体上方表面设有坩埚进料口，所述进料口与自动供料装置出料口连接方便料进入坩埚内，所述自动供料装置设有电机、减速机、减速机齿轮、输送带和输送带齿轮，所述液位检测装置位于炉体内坩埚一侧表面，所述液位检测装置下方通过联通口与坩埚内部连接。本实用本实用结构简单，操作自动化，实用性强，可长时间保持炉体坩埚内料的量，有效的做到了实时定量的效果，能够维持稳定生产保证质量的定量炉实时定量装置。