鸭疫里氏杆菌与鸭坦布苏病毒双重PCR方法的建立

摘要

为建立一种能同时快速检测鸭疫里氏杆菌(RA)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)的PCR方法,根据NCBI公布的RA dnaB基因和DTMUV PrM基因分别设计并合成两对特异性引物,通过对双重PCR反应的引物浓度和退火温度进行优化筛选.优化引物浓度组合为:RA引物0.5μmol/L,DTMUV引物为1μmol/L,最佳退火温度为53°C.特异性试验表明,该方法对鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、番鸭细小病毒、I型鸭肝炎病毒、沙门氏菌、大肠杆菌的核酸扩增结果均为阴性,RA和DTMUV的检测结果为阳性.敏感性测定表明,该双重PCR方法最低能检出RA和DNAV-1的核酸量分别为6.7 pg和3.6 pg.本研究建立的检测方法检测实验室保存的8份临床病料,RA的阳性率为62.5％,DTMUV阳性率为37.5％.综上所述,建立的PCR方法特异性强、敏感性和稳定性良好,为RA和DTMUV的临床病料检测提供了技术支撑.