鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用

摘要

为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的TaqMan荧光定量RT-PCR方法.结果 显示,该方法仅能扩增DTMUV、NDRV及MDRV,与禽呼肠孤病毒(ARV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭瘟病毒(DEV)等主要禽源病毒均无交叉反应,特异性强;对DTMUV、NDRV及MDRV质粒标准品的检测下限均为7.5×101拷贝/μL,敏感性高;组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5％,重复性好.利用该方法与已报道的坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法及NDRV与MDRV双重RT-PCR方法同时检测82份临床疑似患病鸭的肝脾组织样品,结果检出阳性样品22份,其中,DTMUV阳性检出率为10.98％(9/82),NDRV阳性检出率为2.44％(2/82),MDRV阳性检出率为13.41％(11/82),检出阴性样品60份.与参考方法的检测结果一致,三者的符合率达100％.本研究建立的方法为临床DTMUV、NDRV及MDRV鉴别检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术支撑.