鸭坦布苏病毒

摘要： 【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。

摘要： 为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。结果显示:建立的荧光RT-LAMP最优反应条件为65°C25 min;只特异性扩增DTMUV,而不扩增其他几种禽类病毒;最低检测限为4×10^(2)copies/μL,与qRT-PCR方法敏感性一致,是普通RT-PCR的100倍;批内和批间重复性高;应用该方法检测DTMUV不同剂量人工感染鸭肝脏样品,对接毒剂量为10^(3-7)TCID_(50)和10^(2-7)TCID_(50)组的阳性检出率均为100%,对接毒量10^(1.7)TCID_(50)组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的荧光RT-LAMP检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可成为快速诊断DTMUV的方法之一。

摘要： 我国是养鸭大国,在众多鸭易感疫病中,鸭坦布苏病毒是最新发现的疫病,该病毒快速传播,导致养鸭业经济受到巨大损失。鸭坦布苏病毒是由黄病毒科的坦布苏病毒感染所引起的一种传染性疾病,该病具有传播快、发病急、死淘率高等特点。肉鸭和蛋鸭是该病毒的主要受感染群体,肉鸭感染后会出现站立不稳、倒地不起、头部震颤等神经症状,淘汰率为15%~30%,高者可达到80%;蛋鸭感染后会出现产蛋量下降的情况,产蛋率短时间内从90%下降至10%以内,严重者会出现绝产的状况。

摘要： 为了初步探究鸭坦布苏病毒(DTMUV)介导的鸭体天然免疫反应分子机制,本研究首先筛选出能显著激活IFN-β的DTMUV毒株,并将DTMUV的3个结构蛋白(C、PrM、E)克隆至真核表达载体pCAGGSHA,再分别与鸭源IFN-β启动子的双荧光素酶报告质粒duIFN-β-Luc、内参质粒pRL-TK共转染DEFs,使其在细胞内过表达,通过双荧光素酶报告试验检测DTMUV这3个结构蛋白激活鸭源IFN-β启动子的能力。结果显示,只有囊膜蛋白能显著激活IFN-β启动子,Western-blot试验证实这3个结构蛋白转染至DEFs均能正常表达。本研究结果表明,在DEFs中DTMUV的结构蛋白仅囊膜蛋白在激活机体天然免疫反应方面发挥了一定的作用。

摘要： 2020年5月以来,我县部分肉鸭养殖场陆续发生一种以脚软、站立困难、下痢及厌食为主要症状的疾病,并持续死亡,损失惨重。经过临床检查、解剖,初步诊断为鸭黄病毒感染。经综合性治疗7d以后,病情得到缓解,死亡停止,食欲好转,疫情得到有效控制。肉鸭黄病毒病是鸭坦布苏病毒引起鸭的一种急性传染病,以神经症状为主要特征。

摘要： 坦布苏病毒感染是由坦布苏病毒引起的鸭、鹅等多种禽类感染的一种急性传染病。该病自2010年春节开始在我国暴发,发病急,传播快,死淘率高,给中国的养禽业造成巨大的经济损失。本文围绕一起鹅坦布苏病毒感染案例的诊治,对坦布苏病毒的病原学、流行病学、传播方式、鉴别诊断进行概述,并提出针对性防控策略,以期为进一步研究坦布苏病毒提供参考。

摘要： 鸭坦布苏病毒自2010年在我国广泛流行,主要侵害鸭生殖系统,引起蛋鸭产蛋量下降,肉鸭发育延迟,并且还可以感染鹅群。本病具有传播快、发病急、死淘高等特点,严重危害我国养鸭业的生产。我国是传统的养鸭大国,近年来,养鸭场经常受到鸭坦布苏病毒病的困扰,由于其主要侵害蛋鸭生殖系统,造成卵巢损伤,曾被命名为“鸭出血性卵巢炎”,直到2011年8月才被正式命名为鸭坦布苏病毒病。

摘要： 鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染是引起蛋鸭产蛋下降的疾病,给禽类养殖业带来极大的经济损失。本研究对DTMUV感染病鸭卵巢的病毒定位及产生的病理损伤进行观察,以了解DTMUV对病鸭卵巢的病理损伤。主要运用病理剖检、常规石蜡切片及HE染色、免疫组织化学等技术对自然感染DTMUV的病鸭进行研究。结果显示:感染蛋鸭临床表现主要以产蛋量骤然下降为特征,严重病例站立不稳,倒地抽搐,最后衰竭而死。剖检眼观病变表现为卵泡充血、出血,破裂,组织病理学变化主要是生长卵泡和成熟卵泡的颗粒细胞增生、凋亡或坏死;卵泡周围有大量空泡状细胞和小动脉增生,增生的动脉平滑肌细胞坏死,大量炎性细胞浸润;免疫组织化学检测结果显示增生的空泡状细胞为上皮细胞,DTMUV主要位于卵泡的颗粒细胞内。综上表明,DTMUV主要分布在颗粒细胞内,颗粒细胞发生增生、凋亡或坏死,导致卵泡闭锁,进而引起蛋鸭产蛋量下降,为阐明DTMUV的感染机制提供理论基础。

摘要： 鸭圆环病毒和新型呼肠孤病毒是鸭场常见的两种病毒,这两种病毒在近几年对于鸭的危害越来越严重。有很多养殖户反应,即便是注射了疫苗,仍然不能防止该病的发生和流行,主要原因是这两种病均属于免疫抑制性疾病。另外,新型小鹅瘟病毒、腺病毒、鸭坦布苏病毒、鸭星状病毒、鹅星状病毒和鸭肝炎病毒都可以垂直传播,以致养鸭业的发展受到严重的阻碍。以下,笔者重点介绍4种常见且对养鸭业危害严重的垂直传播疾病和防控措施。

摘要： 鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)是黄病毒科黄病毒属的新成员,主要引起蛋鸭的产蛋量急剧下降以及雏鸭的病毒性脑炎,感染鸭群发病率最高可达100%,死亡率为5%~20%。鸭坦布苏病毒病于2010年在我国福建、浙江等地区的鸭群中首次暴发,随后迅速蔓延至我国大部分水禽养殖地区,给我国水禽产业造成了严重的经济损失。

摘要： 为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.

摘要： 为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况,本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的基础上,建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法.棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.188μg/孔,待检血清1∶200稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1∶16000倍稀释时反应条件最佳.在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.467.用建立的间接ELISA方法对番鸭细小病毒、鹅细小病毒、鸭肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为6％和10％,显示该方法具有很好的稳定性.用建立的ELISA方法检测临床鸭坦布苏病毒感染鸭及攻毒蛋鸭的55份临床血清样品,测得52份为阳性,阳性率为94.5％,对36份阴性鸭群血清样品进行检测,36份为阴性,阴性率为100％.该方法为鸭坦布苏病毒的诊断和流行病学监测奠定了基础.

摘要： 2010年4月以来,由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给中国的养鸭业造成了巨大的经济损失.本研究针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法.该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8copies/μL,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增鸭坦布苏病毒RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增.该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测.

摘要： 以鸭坦布苏病毒E蛋白的主要优势抗原表位区E1蛋白作为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒中和抗体效价的间接ELISA方法.优化后确定最佳的抗原包被浓度为1.548mg·L-1,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶6000.特异性表明,用建立的ELISA方法对禽流感、新城疫病毒、1型鸭肝炎病毒、胰腺型鸭甲肝病毒、禽霍乱和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清进行检测,均未发生交叉反应;批内和批间重复试验的平均变异系数都小于10％;敏感性达1∶3200.该方法与以全病毒为包被抗原的间接ELISA检测结果相关性达到95.1％.利用该方法对237份来自福建省开产麻鸭的血清样品进行检测表明,其血清阳性率达77.9％,表明福建省开产麻鸭感染鸭坦布苏病毒阳性率很高.本试验建立的间接ELISA检测方法具有特异性强,重复性好,敏感性高,为鸭坦布苏病毒抗体检测提供了简单快捷的检测方法.

摘要： 本研究以鸭坦布苏病毒E蛋白的主要优势抗原表位区E1蛋白作为包被抗原,建立了检测鸭坦布苏病毒中和抗体效价的间接ELISA方法.优化后确定了最佳的抗原包被浓度为0.774mg/L,血清的最佳稀释度为1:100,酶标二抗的稀释度为1:6000.特异性表明,用建立的ELISA方法对禽流感、新城疫病毒、1型鸭肝炎病毒、胰腺型鸭甲肝病毒、禽霍乱和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清进行检测,均未发生交叉反应;批内和批间重复性试验的平均变异系数都小于10％;敏感性达1∶3200.该方法与以全病毒为包被抗原的间接ELISA检测结果相关性达到95.1％.利用该方法对237份来自福建省开产麻鸭的血清样品进行检测表明,其血清阳性率达77.9％,表明福建省开产麻鸭感染鸭坦布苏病毒阳性率很高.

摘要： 为了构建稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的哺乳动物细胞系及研制鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗,本研究构建了鸭坦布苏病毒prM-E蛋白基因真核表达质粒,转染BHK-21细胞后经免疫荧光与western blot筛选,获得了稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的细胞系.分析细胞表明细胞系表达蛋白分泌至细胞培养上清液中,表达量高且稳定,细胞传代结果分析表达该细胞系在经多次传代后仍保持大于90％的阳性细胞率.表达产物与佐剂配制成疫苗免疫鸭后能诱导免疫鸭产生病毒中和抗体,免疫鸭能抵抗病毒攻击.该细胞系的构建为鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研制提供了基础.

摘要： 建立可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒的双重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.根据GenBank中DTMUV E基因和DPV UL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的双重RT-PCR.优化后的双重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,加ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95°C 5 min; 95°C 1 min,54.4°C 1 min,72°C 1 min,35个循环;72°C 10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500 fg和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.建立的双重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.

摘要： 目的:研究鸭坦布苏病毒对雏鸭的致病性、病变特征及发病机制.rn 方法:对1周龄雏鸭经肌肉途径接种病毒,观察临床症状,于感染后1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天采血致死、剖检,对心、肝、脾等器官进行病理组织学观察及病毒定量检测,应用ELISA方法检测血清中和抗体变化规律.rn 结果:攻毒雏鸭感染后第3天食欲减退,不愿活动,部分鸭拉黄白色稀粪,后期出现神经症状.剖检病鸭可见心内膜出血,脾脏肿胀,肝脏肿大、易脆并有出血,脑膜充血.感染雏鸭多数组织器官出现不同程度的病理变化，主要表现心肌纤维变性、坏死，间质有炎性细胞浸润，心内膜下出血;肝细胞空泡变性、坏死;脾脏局部淋巴细胞减少，并伴有大量异嗜性粒细胞浸润;肾小管上皮细胞颗粒变性;大脑可见血管“袖套现象”，嗜神经现象和胶质细胞结节，呈典型的病毒性脑炎病变。雏鸭感染后第1天在心脏、肝脏、脾脏等主要器官都能检测到坦布苏病毒，除脾脏外攻毒后第3天器官的病毒含量达峰值，随后逐渐下降。同时，雏鸭攻毒后第5天血清中出现微弱的中和抗体，第17天时达峰值随后下降。rn 结论:坦布苏病毒感染雏鸭后能迅速入侵机体各主要器官组织并大量复制，造成全身多器官的病理性损伤，导致感染鸭出现临床症状，甚至死亡。同时，雏鸭接种病毒后能快速产生中和抗体抵抗感染并清除病毒。

摘要： 目的：从雏鸭体内分离坦布苏病毒,进行病毒的生物学特性和理化特性研究,为坦布苏病毒病的防制提供理论基础.rn 方法：采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从山东某地区以瘫痪为主要特征的雏鸭脑组织中分离到一株病毒,并对分离病毒的生物学特性和理化特性进行研究.rn 结果：该病毒与GenBank上已发表的坦布苏病毒核苷酸同源性均高于98％,最高可达99.7％;病毒的ELD50为10-3.17/0.2 mL,接种9日龄鸭胚,68h左右鸭胚死亡,胚体出血,肝脏肿大出血,尿囊膜增厚;病毒对胰蛋白酶、酸、氯仿和热敏感,0.5％的胰蛋白酶、pH＜5和4.8％的氯仿条件下可将其灭活,56°C水浴20 min或60°C水浴15min可将其灭活,37°C处理24h毒力由10-3.17/0.2mL下降至10-1.8/0.2mL; Mg2+不能提高病毒在50°C60min的稳定性;病毒未经酸碱处理不具有凝集鸡、鸭、鸽等红细胞的特性.接种7日龄雏鸭,48 h后陆续发病,表现为病毒性脑炎;剖检变化为雏鸭脑水肿,脑部毛细血管充血、肝脏出血、腺胃出血、肺出血水肿,临床表现与自然发病相同.rn 结论：确定该病毒分离株为坦布苏病毒.

摘要： 坦布苏病毒（TMUV）最早分离于马来西亚蚊子中，随后在2002年泰国鸭血清中同样分离到该病毒，但当时均未见其对人和动物存在致病性。然而，自2010年以来，TMUV感染却成为危害我国养鸭业的主要疾病之一。序列分析显示，我国鸭源TMUV与早期蚊源毒株具有较大的基因序列差异。由此可见，TMUV的基因变异可能是其致病性发生改变的主要原因。本研究旨在以TMUV PS株为材料，构建全长感染性克隆，以便为深入研究该病毒的复制以及致病机制提供技术平台。将转录本RNA转染BHK-21细胞96 h后，可见细胞病变。用RT-PCR可从第7代培养物中检出TMUV核酸。测序结果证明，除遗传标记基因外，拯救病毒基因组序列与PS株原始序列一致。IFA结果显示，拯救病毒感染的BHK-21细胞可产生特异性的荧光信号。另外，病毒感染BHK-21细胞的生长曲线显示，拯救病毒和亲本毒具有相似的生长趋势和病毒滴度。以上结果表明坦布苏病毒PS株全长感染性克隆构建成功。据文献报道，构建黄病毒感染性克隆时，病毒序列在宿主菌中易发生突变，因此，难以获得稳定的全长克隆。本研究先后选用几种低挎贝质粒和宿主菌，亦未能构建出覆盖基因组全长的cDNA克隆。而改用融合PCR方法则扩增得到了TMUV PS株的全长cDNA，并且除遗传标记基因以外所拯救病毒序列与亲本毒株序列完全一致。

摘要： 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒的多重PCR检测试剂盒，其中试剂组合包括针对鸭坦布苏病毒的引物、针对新型鸭呼肠孤病毒的引物、针对新型鹅细小病毒的引物、DreamTaq Green PCR预混液、谷氨酰胺和扩增促进剂，各类引物的序列如下：针对DTMUV的引物：上游：5’‑GCAGGGTTTGAAGCTGAAAG‑3’；下游：5’‑CCCACTTCTATGCCACTGGT‑3’；针对NDRV的引物：上游：5’‑TCGTCACTACTGTCAAGCTC‑3’；下游：5’‑TATGTATGAGAGGAGCCACA‑3’；针对NGPV的引物：上游：5’‑GGCTCACTGAGAACCGAGAC‑3’；下游：5’‑AGACCCTCCCAAAATTGCTT‑3’。本发明通过建立新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒的同步快速检测技术，对鸭群进行新型呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒的检疫净化，能提高核心鸭群的生产能力，减少疫病的发生，促进我国养鸭业健康发展。

摘要： 本发明提供一种表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗，其保藏号为CCTCC？V201214，命名为rDEV-TE-tPAS，及其构建方法和应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含SV40启动子、鸭坦布苏病毒E蛋白和tPA(Tissue？plasminogen？activator)信号肽序列的基因片段SV40-E-tPA插入到鸭病毒性肠炎病毒的US7和US8基因之间的间隔区中，构建获得在US7和US8基因之间插入SV40-E-tPA表达框架的粘粒，由其拯救获得表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC？V201214。本发明还涉及构建该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的方法，以及该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株用于制备预防鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病的疫苗的应用。

摘要： 本发明提供一种表达分泌型鸭坦布苏病毒M/E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC？V201215，命名为rDEV-TME-tPAS，及其构建方法和应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含SV40启动子、鸭坦布苏病毒M及E蛋白和tPA(Tissue？plasminogen？activator)信号肽序列的基因片段SV40-TME-tPA插入到鸭病毒性肠炎病毒的US7和US8基因之间的间隔区中，构建获得在US7和US8基因之间插入SV40-TME-tPA表达框架的粘粒，由其拯救获得表达分泌型鸭坦布苏病毒M/E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC？V201215。本发明还涉及构建该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的方法，以及该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株用于制备预防鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病的疫苗的应用。

摘要： 本发明涉及灭活疫苗领域，针对鸭体免疫效果较差的问题，提供了一种鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒和鸭腺病毒三联灭活疫苗及其制备方法，该技术方案如下：由鸭呼肠孤病毒抗原、鸭坦布苏病毒抗原、鸭腺病毒抗原以及含有浓度为8mmol/L‑11mmol/L酪蛋白的佐剂组成，其中鸭呼肠孤病毒抗原含量为10

摘要： 本公开涉及鸭圆环病毒、鸭腺病毒和鸭坦布苏病毒的三重PCR检测引物组，所述三重PCR检测引物组包括第一引物对、第二引物对和第三引物对：所述第一引物对具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列对；所述第二引物对具有SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列对；所述第三引物对具有SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示核苷酸序列对。本公开还提供了鸭圆环病毒、鸭腺病毒和鸭坦布苏病毒的三重PCR检测试剂盒，本公开的检测试剂盒可以同时检测鸭圆环、鸭腺病毒和鸭坦布苏病毒的混合感染或者单一感染情况，减轻工作量且极大程度缩短检测时间，达到快速检测病原的目的。

摘要： 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒的多重PCR检测试剂盒，其中试剂组合包括针对鸭坦布苏病毒的引物、针对新型鸭呼肠孤病毒的引物、针对新型鹅细小病毒的引物、DreamTaq Green PCR预混液、谷氨酰胺和扩增促进剂，各类引物的序列如下：针对DTMUV的引物：上游：5’‑GCAGGGTTTGAAGCTGAAAG‑3’；下游：5’‑CCCACTTCTATGCCACTGGT‑3’；针对NDRV的引物：上游：5’‑TCGTCACTACTGTCAAGCTC‑3’；下游：5’‑TATGTATGAGAGGAGCCACA‑3’；针对NGPV的引物：上游：5’‑GGCTCACTGAGAACCGAGAC‑3’；下游：5’‑AGACCCTCCCAAAATTGCTT‑3’。本发明通过建立新型鸭呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒和鸭坦布苏病毒的同步快速检测技术，对鸭群进行新型呼肠孤病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒的检疫净化，能提高核心鸭群的生产能力，减少疫病的发生，促进我国养鸭业健康发展。

摘要： 本发明公开了一种H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒三重RT‑PCR检测试剂盒，该试剂盒含有三对特异性引物。实验证明，应用本发明仅需一次RT‑PCR反应就能同时检测H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒三种病原体，具有特异性强、灵敏度高、低成本、高效率等优点；而且本发明在引物设计上利用扩增片段长度的不同可直接判定扩增结果，更简便、直观和实用。本发明最低能同时检出1pg H9亚型禽流感病毒RNA、50pg鸭坦布苏病毒RNA和10ng鸭圆环病毒DNA，为以上三种病毒的发病早期提供了准确的检测方法，对及时切断病毒的传播具有重要意义，具有广阔的应用前景，对鸭养殖业可持续发展有着重要的现实意义。

摘要： 本发明提供一种表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗，其保藏号为CCTCC V201214，命名为rDEV-TE-tPAS，及其构建方法和应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含SV40启动子、鸭坦布苏病毒E蛋白和tPA(Tissue plasminogen activator)信号肽序列的基因片段SV40-E-tPA插入到鸭病毒性肠炎病毒的US7和US8基因之间的间隔区中，构建获得在US7和US8基因之间插入SV40-E-tPA表达框架的粘粒，由其拯救获得表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC V201214。本发明还涉及构建该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的方法，以及该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株用于制备预防鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病的疫苗的应用。

摘要： 本发明提供一种表达分泌型鸭坦布苏病毒M/E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC NO：V201215，命名为rDEV-TME-tPAS，及其构建方法和应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含SV40启动子、鸭坦布苏病毒M及E蛋白和tPA(Tissue plasminogen activator)信号肽序列的基因片段SV40-TME-tPA插入到鸭病毒性肠炎病毒的US7和US8基因之间的间隔区中，构建获得在US7和US8基因之间插入SV40-TME-tPA表达框架的粘粒，由其拯救获得表达分泌型鸭坦布苏病毒M/E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗CCTCC V201215。本发明还涉及构建该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的方法，以及该重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株用于制备预防鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病的疫苗的应用。

摘要： 本发明提供了核苷酸序列、fiber2蛋白及表达方法、鸭3型腺病毒和鸭坦布苏病毒二联灭活疫苗。核苷酸序列，用于编码鸭3型腺病毒抗原性片段fiber2蛋白，其核苷酸序列如SEQ NO：2所示，鸭3型腺病毒抗原性片段fiber2蛋白的氨基酸序列如SEQ NO：3所示；将fiber2蛋白基因片段和pET‑32a载体片段通过T4DNA连接酶连接，得pET‑32a‑fiber2重组表达载体，然后转化至表达菌株E.coli BL‑21(DE3)感受态细胞培养，从培养物中获得所述的fiber2蛋白，鸭3型腺病毒和鸭坦布苏病毒二联灭活疫苗，其使用的抗原包鸭3型腺病毒抗原性片段fiber2蛋白和灭活的鸭坦布苏病毒；在二联灭活疫苗中两种抗原的体积比为1：1，鸭坦布苏病毒为鸭坦布苏病毒DF2株，其保藏编号为CCTCC NO：V201635。