疫苗株

摘要： 为深入了解云南省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行现状及现有疫苗株的保护效果,从2017—2022年云南省PEDV感染临床阳性样品中扩增出9份样品的PEDV S1基因,利用生物信息学方法,对9份样品S1基因进行了遗传进化树构建、同源性分析和氨基酸突变位点分析等。结果显示:2份样品位于G1基因群,其余7份位于G2基因群的G2b基因亚群。7份G2b基因亚群样品的核苷酸和推导氨基酸同源性较高,与G2基因群的AJ1102和L/W/L疫苗株处于不同基因亚群且同源性较低,并在第13、139、289和363位发生了不一致的突变位点;与现有疫苗株相比,在抗原中和位点COE区域以及其他区域,有明显的抗原性变化。结果表明:云南省存在G1基因群和G2b基因亚群PEDV同时流行,但以G2b基因亚群为主;流行株和疫苗株间存在较远的遗传和亲缘关系,以及氨基酸突变和抗原性差异,这很可能是导致目前PED控制不理想的原因,因此需要研发安全有效的疫苗。

摘要： 水貂出血性肺炎是严重危害水貂健康的一类传染病,其中最主要的病原为铜绿假单胞菌。本研究对近些年流行于河北、山东及辽宁等地的水貂出血性肺炎的疑似铜绿假单胞菌感染病料进行了病原分离、鉴定,以便充分了解该类疫病病原的流行情况,为防控提供可靠科学依据。通过常规细菌分离鉴定方法分离病原,以玻片凝集反应鉴定其血清型,对分离菌株分别进行动物回归试验、毒力试验、免疫原性试验及攻毒保护试验。结果获得15株铜绿假单胞菌,分别命名为PA1~PA15,其中14株为血清G型,占93.3%,1株为血清B型,占6.7%。通过毒力试验确定致病菌株,然后分别进行了本动物回归试验、免疫原性试验及攻毒保护试验。致病力最强的1株为血清G型(PA4株,暂命名为DL1007株),肌肉注射致死率可达100%(5/5),经灭活后采用一定剂量免疫水貂后并攻毒,可对致死剂量菌株产生全部保护(5/5存活)。此次疑似水貂出血性肺炎病料分离的病原为铜绿假单胞菌,毒力最强株(DL1007)的自制疫苗对水貂具有较强的免疫保护作用。该毒株可作为后续水貂铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌与巴氏杆菌三联灭活疫苗研制的候选株。

摘要： 疫苗接种是预防传染病常用的主要手段.目前常用的减毒活疫苗具有感染的可能性,故鉴别野生株和疫苗株病毒是确定病原体和进行诊断的基础.传统的鉴别方法有基因测序、PCR-限制性片段长度多态性分析等,这些鉴别方法常用且准确性较高,但存在耗时长、要求高等缺陷.实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术是通过PCR反应体系中荧光物质与核酸片段的作用来反映扩增过程.qPCR技术除了能准确地检测、鉴别野生株和疫苗株外,还具有特异性强、灵敏度高、耗时短等优点,可以为快速鉴别和临床诊断提供帮助.

摘要： 目的 分析2019年辽宁省收集到的水痘-带状疱疹病毒(VZV)基因特征.方法 采集辽宁省2019年疑似水痘或带状疱疹患者的疱疹液样本共32份.采用实时荧光定量聚合酶链反应筛查疑似样本,通过检测分析阳性样本的三个开放阅读框(ORF)即ORF22、ORF38和ORF62上的单核苷酸多态性(SNP)位点,整理样本及序列资料并对基因序列对比分析,确定病毒株基因型别,进行疫苗株与野毒株鉴别.结果 32份疑似水痘或带状疱疹患者样本中,27份为VZV阳性,均为野毒株属Clade2遗传支,核苷酸与氨基酸的同源性分别为98.85％～ 100％和96.9％～ 100％.其中LN-14在37990位点发生A→G碱基突变,并且有1例疫苗突破病例.结论 2019年辽宁省流行的VZV基因型均属Clade2野毒株.

摘要： 儿童带状疱疹相对少见,其发病情况国内尚缺乏大规模的调查研究.儿童带状疱疹发生的明确诱因仍不太清楚,免疫功能受损或免疫缺陷相关疾病是其主要风险因素,尤其是白血病和艾滋病.具有正常免疫力和水痘疫苗免疫后的健康儿童依然可发生带状疱疹(包括疫苗株带状疱疹),尽管总的病情较轻,但少数患儿仍可表现为病情笃重、复发和出现严重并发症,值得警惕,因此,宜尽早给予抗病毒治疗.

摘要： 为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8.该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上.每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性.分别利用100 EID50剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID50,绘制其生长曲线.结果 显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659.利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析.结果 显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异.本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础.

摘要： [目的]分析猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)疫苗株和流行株S基因的遗传变异特征.[方法]利用RT-PCR方法对国内目前广泛使用的TGEV疫苗株A、B、C的S基因进行克隆并测序,将获得的序列与近年来公开发表的分离自不同地区的TGEV毒株S基因序列进行比对分析;选取NCBI中登录号为AF104420.1-Britain、AY587882.1-Nanjing、DQ811786.2-America、EU074218.2-Harbin、FJ755618.2-Harbin、JQ700304-fuzhou、KC609371.1-Shanghai、KX900411.1-United States、M94099.1-Spain和MK272773.1-Fushun的TGEV流行株S基因序列,与疫苗株A、B、C的S基因序列一起,利用MegAlign软件进行比对分析.[结果]疫苗株A、B、C的S基因序列两两间的同源性均在96.7％以上;疫苗株A、B、C的S基因序列与NCBI中流行株S基因序列的同源性分别在94.43％～99.82％、95.30％～99.64％、93.48％～98.38％;由遗传进化树可知,疫苗株A、C与国外流行株M94099.1-Spain在同一分支上,疫苗株B与国内流行株JQ700304-fuzhou在另一分支上.[结论]TGEV疫苗株的S基因与流行株同源性较高,变异性不大.

摘要： 为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对Gen Bank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证。结果显示,本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测,并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应,组内和组间检测变异系数均小于1%,敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1 000倍以上,且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/μL和1.58 copies/μL。应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测,结果,阳性符合率高达100%。本方法特异性强,稳定性和灵敏度高,不仅能够准确定量,并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测,为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段。

摘要： 根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)3'端非编码区和S1基因保守区域设计两对特异性引物,对H120、Ma5和4/91、M41等常用疫苗株以及26株广西田间分离株进行二重RT-PCR扩增,并进行该方法的特异性和敏感性试验,同时对此方法进行了初步应用.结果表明,经此两对引物扩增后,M41毒株得到约160bp的目的片段,Mass型毒株得到约370bp的目的片段,4/91型IBV毒株得到约480bp和345bp两条目的片段,其它24株广西分离株得到一条大小在260bp-345bp的目的片段;特异性试验表明此二重RT-PCR方法不能扩增NDV、AIV、MDV、IBDV、ALV等;敏感性试验表明最低检测量达到100pg.该方法的临床应用表明,攻毒鸡病料阳性率达90％.本研究结果表明了所建立的二重RT-PCR方法可以鉴别IBV疫苗株与广西流行野毒株,且特异性强、敏感度高.

摘要： 本研究通过RT-PCR获得电泳条带大小不同的PCR产物的方式以区分PRRSV经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株。结果显示本方法可以通过RT-PCR产物片段大小不同从而区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株。该方法与猪瘟病毒、圆环病毒等猪常见病毒无交又反应。建立了适合检测PRRSV经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的快速准确的方法，以期为中国防控猪繁殖与呼吸综合征提供了一定的技术支持。

摘要： 本研究通过RT-PCR获得电泳条带大小不同的PCR产物的方式以区分PRRSV经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株。结果显示本方法可以通过RT-PCR产物片段大小不同从而区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株。该方法与猪瘟病毒、圆环病毒等猪常见病毒无交义反应。建立了适合检测PRRSV经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的快速准确的方法，以期为中国防控猪繁殖与呼吸综合征提供了一定的技术支持。

摘要： 按照参考文献中的方法对中国猪丹毒弱毒疫苗株和本地野毒株的基因组模板进行扩增，比较扩增结果。比较使用高保真DNA聚合酶酶、无外切活性的DNA聚合酶酶、添加抑制外切活性抗体的DNA聚合酶时的扩增结果。发现该方法能够从中国猪丹毒杆菌本地分离株中将疫苗株区分出来，但是中国疫苗株的扩增结果与日本疫苗株的扩增结果不同。中国疫苗株仅在一个被捡基因上具有单核背酸多态性，而日本疫苗株在全部五个被捡基因上都有单核苷酸多态性。进一步的研究表明使用无3'-5'外切活性的DNA聚合酶或者使用添加抑制外切活性抗体的高保真酶是该检测方法的必要条件。结论是经过改进后基于单核苷酸多态性的PCR方法是区分猪丹毒杆菌疫苗株和野毒株有效方法，可以作为疫苗鉴别诊断的有效手段。

摘要： 禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)基因片段或全基因整合进鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)已成为国内外许多学者关注的焦点.但至今,FPV分离株的REV整合区全基因分析以及有关FPV分离株和疫苗株整合序列差异比较的报道尚属少见.本文旨在了解山东地区FPV流行株整合REV前病毒的情况,同时比较FPV分离株和弱毒疫苗株整合REV前病毒序列的差异.分离株整合区LTR序列变异最大，尤其是3'LTR明显缩短，这表明整合的REV序列经过了修饰，使之与FPV序列之间的结合更适于两者的生存和复制，整合过程中的这种修饰与REV-LTR尤其是3'LTR的明显缺失有关，国外也有类似报道。分离株5、10和14的整合区序列高度同源，无论是整合的LTR基因还是中间的gag、pol和env基因均差异甚微，这有可能如现在报道的两株MDV所体现出来的现象，即这3个分离株很有可能是来自同一个原始重组病毒，由该原始重组病毒在鸡群中形成的流行毒株。而分离株12由于gag基因出现较大面积缺失可能与其他3株来自不同的原始重组病毒。分离株整合几乎全长的REV序列，而疫苗株仅整合REV-LTR序列，这种现象如何解释呢？国内外均有研究将整合几乎全长REV序列的FPV分离株在CEF细胞上传代致弱过程中几乎全长的REV序列在FPV中不断丢失中间部分。但是，对于疫苗整合片段大小不同，在疫苗效力、安全性等方面究竟有无差异，有何差异，均有待进一步研究。

摘要： 为了系统比较我国现有布鲁氏菌病疫苗株A19、M5和S2的毒力，本研究分别用上述3种疫苗株以1×103CFU／只免疫Balb／c小鼠，免疫后每隔2周采集小鼠脾脏，分离细菌，测定各疫苗株在小鼠脾脏中的存留时间。结果A19、M5、52在小鼠体内存活时间依次为14周、大于16周、6周。将以上3种疫苗株分别以1×1 09CFU／只分别免疫Hartley豚鼠，1 5日后测定豚鼠脾脏含菌量，结果A19、M5、s2免疫后每克脾脏含菌量分别为2.8×104CFU、大于6.7×105CFU、3.8×103CFU。本研究结果表明，我国目前使用的布鲁氏菌疫苗中，52毒力最弱，A19其次，M5最强。

摘要： 根据GenBank上已发表的猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因的高度保守区设计一对特异性引物，在该引物对跨越区内部找出Shimen株独有的限制性内切酶酶切位点BgⅢ，采取酶切RT-PCR产物的方法鉴别Shimen株和疫苗株，对该方法的特异性和敏感性进行检测。结果表明，应用该方法从Shimen株和疫苗株中均扩增出一条大小为750bp的特异性片段，疫苗株的RT-PCR产物不能被BgⅢ切开，Shimen株的RT-PCR产物则被切为大小分别为520bp和230bp的两条带。此方法可以扩增猪瘟病毒的E2基因保守片段，最小病毒RNA的检出量为3.96×10-4μg/mL.采用此方法检查了8例临床疑似猪瘟病料，结果1例感染猪瘟病毒强毒，另7例为猪瘟阴性.

摘要： 本研究测定了mV疫苗株H120的全基因组序列，通过与GenBank上公布的IBv全基因组序列进行比对，对其分子特征及系统进化分析。设计18对引物，用RT-PCR方法对IBV疫苗株H120的全基因组进行分段扩增、克隆和序列测定，测定结果表明，H120基因组全长27 631bp(不包括polyA)，包含有10个开放阅读框(ORF)。H120全基因组序列与GenBartk上公布的13株IBV基因组序列的同源率在84.6～94.5％之间，与ArkDPI11同源性最高为94.5％。本研究选择具有代表性的IBV H120疫苗株进行全基因组测序及序列分析，为对其分子特征及IBV的系统进化分析提供基础。

摘要： 本文构建羊种布鲁氏菌MS-90疫苗株bp26抗原表位55152和22191氨基酸区域的部分缺失株，并首次以小鼠肝脏为模型比较缺失株作为疫苗候选株的潜在价值，即是否能区分疫苗免疫与自然感染产生的抗体或/和降低疫苗株的毒力。本研究构建羊种布鲁氏菌表位缺失株MS-90bp26，以小鼠的肝脏为模型进行毒力评价。利用SacB负筛选标记的方法构建两株MS-90 bp26表位缺失株并进行生物学性状和Western Blot验证;用3.0×106CFU/0.2mL MS-90疫苗株及缺失株分别免疫BALB/c小鼠，在10d,20d,30d处死小鼠，HE染色观察肝脏的病理变化。经测序和Western Blot分析成功获得M5-90△bp261 M5-90△bp262两株突变株;常规生物学鉴定未发生生物学性状的改变;HE染色表明bp26缺失株毒力均低于疫苗株M5-90。结合CFU计数及脾脏指数首次证实肝脏可作为毒力判定的标准;构建的布鲁氏菌基因突变株M5-900bp262具有毒力弱，并具有血清学鉴别诊断的“标签”作用，可作为未来鉴别诊断新型布鲁氏菌疫苗的候选株。

摘要： 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强弱毒和PRRSV弱毒疫苗感染对外周血淋巴细胞亚群的影响,为疫苗的研制提供理论依据.本研究运用血常规技术和流式细胞技术分析了PRRSV感染SPF猪后,猪体内外周血淋巴细胞亚群变化.试验将30日龄20头SPF猪分成3组,1组感染PRRSVGD第5代强毒株,1组感染GDr180弱毒疫苗株,1组留作对照.与感染后第O、3、7、10、14、21、28、35天采血做外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化.结果表明: PRRSV GD 强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和丫6T细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态.从实验结果可以看出:与PRRSVGD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应.

摘要： 本发明公开了一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备，涉及生物医药技术领域，本发明基于高通量测序技术的宏基因组测序的手段，基于候选株中病原丰度和外源因子丰度对候选株进行筛选，能够更有效地检测外源因子的引入，为灭活疫苗的安全性提供了有利保障，且该方法具备高效、快捷的特点，适用于推广。

摘要： 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体菌株、由该菌株制备得到的疫苗及其应用。所述的绵羊肺炎支原体菌株是在发病绵羊上分离得到的，命名为WM01株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCC No.19979。将本发明分离得到的绵羊肺炎支原体WM01F6株制成灭活疫苗，或与羊副流感病毒3型制成二联灭活疫苗，安全性试验表明，单苗和二联苗的所有试验绵羊在接种疫苗后均无局部和全身不良反应。效力试验结果表明，疫苗免疫试验动物后，对强毒攻击可产生较好的保护作用，保护率至少为80％。因此，本发明的提出为预防羊呼吸道疾病提供了有效的技术手段。

摘要： 本发明提供一株具有高效价的狂犬病毒CTN-1V-T vero等细胞适应株；本发明还提供所述狂犬病毒CTN-1V-T在制备vero等细胞纯化灭活狂犬疫苗中的用途。CTN-1V-T是在CTN-1V株基础上经过一系列克隆分离方法而得到的，相对CTN-1V株，CTN-1V-T株在vero等细胞上病变速度更快、滴度略高、效力更高、免疫原性更好，氨基酸序列显示其没有改变CTN-1V株的分子特征，可用于狂犬灭活疫苗的制备。本发明还提供了CTN-1V-T株的全基因组序列。本发明还提供了基于CTN-1V-T株的灭活疫苗的制备过程，结果显示基于CTN-1V-T毒株经过简单工艺就可制备出符合当前药典质量标准的狂犬灭活疫苗。

摘要： 本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种血清4型禽腺病毒毒株，其疫苗、疫苗组合物和多联疫苗及应用。本发明的血清4型禽腺病毒毒株的保藏号为：CGMCC No.45070。本发明毒株的Hexon基因序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还涉及利用该毒株制备得到的疫苗、疫苗组合物和多联疫苗。本发明的毒株具有高致病力，对21日龄SPF鸡的致死率达100％，采用该毒株制备得到的疫苗和疫苗组合物具有良好的免疫保护力。

摘要： 本发明公开了一株羊副流感病毒3型疫苗株、由该疫苗株制备的疫苗组合物及其制备方法和应用。所述的羊副流感病毒3型疫苗株是从绵羊分离得到的，与目前的山羊源副流感病毒株属于不同谱系。本发明还提供了一种用该毒株为抗原制备的疫苗组合物及其制备方法。经灭活疫苗免疫原性试验证明，该副流感病毒3型灭活疫苗具有良好的免疫效力。本发明的提出为预防和治疗羊副流感病毒3型感染提供了有效的技术手段。

摘要： 一种乙型脑炎减毒活疫苗株SA14‑14‑2在人二倍体细胞2BS上的适应株及其疫苗，其特点是，通过将流行性乙型脑炎病毒SA14‑14‑2接种于人二倍体细胞上，通过不同的方式连续传代，使病毒能够在细胞上很好的适应和稳定的增殖，获得较高滴度的病毒，建立病毒的三级毒种库，通过对毒种库全基因序列测定，获得其全基因组序列。对病毒进行有效性和安全性检查，符合规定的乙型脑炎减毒活疫苗的标准。本发明乙型脑炎毒种病毒滴度较高、安全性符合规定、免疫原性良好和遗传稳定，符合《中国药典》第三部(2010版)关于乙型脑炎毒株安全性和有效性的要求，适合作为乙型脑炎疫苗的生产用毒种。

摘要： 本发明公开了一株羊副流感病毒3型疫苗株、由该疫苗株制备的疫苗组合物及其制备方法和应用。所述的羊副流感病毒3型疫苗株是从绵羊分离得到的，与目前的山羊源副流感病毒株属于不同谱系。本发明还提供了一种用该毒株为抗原制备的疫苗组合物及其制备方法。经灭活疫苗免疫原性试验证明，该副流感病毒3型灭活疫苗具有良好的免疫效力。本发明的提出为预防和治疗羊副流感病毒3型感染提供了有效的技术手段。

摘要： 本发明公开了非洲猪瘟病毒疫苗株以及含有疫苗株的疫苗。本发明提供了减毒重组病毒，为：以非洲猪瘟病毒SY18株为出发毒株，用序列5第1058‑2074位核苷酸所示DNA分子取代出发毒株基因组DNA中序列1第1058‑2377位核苷酸所示DNA分子，并且，用序列6第1113‑1975位核苷酸所示DNA分子取代出发毒株基因组DNA中序列2第1113‑9132位核苷酸所示DNA分子，得到的重组病毒。本发明提供的非洲猪瘟疫苗，其制备原料包括病毒液和杜仲多糖；所述病毒液为TCID50值为103以上的病毒液；所述病毒液为重组病毒的病毒液；每毫升所述病毒液配比15‑30微克杜仲多糖。本发明对于非洲猪瘟的防控具有重大应用推广价值。

摘要： 本发明提供了一株可适用于人用疫苗细胞基质培养的柯萨奇病毒A组10型疫苗株及其应用，属于生物制品技术领域。本发明基于全病毒疫苗的开发策略，获得一株YNKG1‑7病毒株可适应到人用疫苗细胞基质Vero上，并且具备良好的遗传稳定性和免疫原性，可助力CV‑A10全病毒疫苗的成功开发。

摘要： 一种乙型脑炎减毒活疫苗株SA14-14-2在人二倍体细胞2BS上的适应株及其疫苗，其特点是，通过将流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2接种于人二倍体细胞上，通过不同的方式连续传代，使病毒能够在细胞上很好的适应和稳定的增殖，获得较高滴度的病毒，建立病毒的三级毒种库，通过对毒种库全基因序列测定，获得其全基因组序列。对病毒进行有效性和安全性检查，符合规定的乙型脑炎减毒活疫苗的标准。本发明乙型脑炎毒种病毒滴度较高、安全性符合规定、免疫原性良好和遗传稳定，符合《中国药典》第三部(2010版)关于乙型脑炎毒株安全性和有效性的要求，适合作为乙型脑炎疫苗的生产用毒种。