禽流感病毒

摘要： H4N6亚型禽流感病毒(AIV)在全球多个地区的多种动物和鸟类中存在,为了解其对动物和人类健康的潜在威胁,本研究对H4N6亚型AIV A/chicken/Shanxi/S1452/2018(H4N6)(CK/SX/S1452/2018)株进行了病毒全基因组测序和遗传进化分析,结果显示该病毒具有明显的遗传多样性,其内部基因与鸭或水鸟体内分离的H2N8、H3N3、H3N8、H4N8或H7N3等亚型AIV的相关基因高度同源。HA蛋白存在T^(160)A突变,并且碱性裂解位点基序仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV分子特征。通过固相结合ELISA分析CK/SX/S1452/2018病毒株的受体结合特性,结果显示该病毒具有结合禽型α-2,3和人型α-2,6两种唾液酸受体的能力。以10^(6) EID_(50)/50μL剂量经鼻腔感染小鼠进行小鼠感染性评估实验,结果显示该病毒株可未经预先适应即可直接感染小鼠,并在小鼠鼻甲和肺脏中有效复制。以上研究结果对全面了解H4N6亚型AIV的生物学特性及其对公共卫生风险有重要意义,为对该亚型AIV流行病学的持续监测和对其感染防控措施的拟定提供了数据支持。

摘要： 高致病性禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的以禽类为主的急性传染病,禽流感病毒颗粒表面的血凝素蛋白具有识别红细胞表面受体并使红细胞凝集的特性,因此,禽流感抗体可以通过HA/HI(血凝/血凝抑制)试验来检测。笔者在多年的检测工作中分析了一系列影响HA/HI试验结果准确性的因素。现将这些因素加以总结,概述如下,希望为从事兽医实验室检测的从业者提供参考。

摘要： 随着人们生活水平不断地提高,对鸡类产品的要求也越来越高。为了避免禽流感病毒对我国的种鸡带来影响,需要加强对种鸡疫病预防的力度,结合疫病预防中的具体问题,完善防治方案,强化养鸡户的疫病防治意识,从而进一步提高种鸡的质量和产量。

摘要： 东兴市位于广西壮族自治区南部,与越南的芒街仅一河之隔,东兴市境内的北仑河口国家级自然保护区是国际间候鸟迁徙的重要通道,是候鸟的重要繁殖地和迁徙停歇地,每年有数十万只候鸟迁徙至此,存在较高的禽流感病毒释放和暴露风险。一旦暴发高致病性禽流感疫情,将对该地区经济、社会、环境等多方面造成巨大影响。本文通过深入分析了东兴市高致病性禽流感风险状态,提出了一系列降低禽流感发生和传播的风险管理措施,以期为完善东兴市高致病性禽流感防控体系的提供参考。

摘要： 目的:了解英德市活禽交易市场外环境禽流感病毒污染状况,为减少人感染禽流感的传播流行提供决策依据。方法:于2016—2020年监测期内采集活禽市场笼具表面擦拭物及粪便等环境标本,采用实时荧光RT-PCR法检测标本中甲型通用流感病毒核酸,阳性标本再进一步检测H5、H7和H9亚型核酸。采用Excel 2007进行数据录入,采用SPSS 20.0软件进行数据分析。结果:2016—2020年共采集标本300份,禽流感病毒总阳性率为26.67%。不同年份阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=27.480,P0.05);检出H7型阳性样本5份,检出率为3.57%,砧板表面擦拭标本占60.00%。结论:应加强英德市禽类交易的建档造册,完善溯源机制并增设关口前移的外环境监测点,完善市场准入及管理制度,强化人群健康教育,规范行业职业操守和人群监测工作,降低人感染禽流感的风险。

摘要： 流行性感冒病毒(influenza virus)是正粘病毒科(Orthomyxoviridae)的代表,简称流感病毒。以人、猪、马及各种家禽和野生禽类为自然宿主,海豹或水貂等其他动物也有罹患流感的情况,但这些动物作为自然宿主的结论还未特别明确。人和哺乳动物的流感一般呈急性呼吸道疾症状,但禽流感从隐性感染到急性致死性发病都有出现,症状变化范围广。

摘要： 随着我国农业经济的发展,我国养鸡业得到了快速发展,已成为世界上最大的鸡养殖大国和消费大国,在国际养殖业中占据重要地位。在养鸡过程中,由禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒感染引起的病毒性疾病是危害较大、传播能力较强的一类疾病。

摘要： 禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)属于正黏病毒科、A型流感病毒属、单股负链RNA病毒。水禽是禽流感病毒的天然宿主,部分禽流感病毒亚型不但能引起禽类致病,还能导致人类患病甚至死亡,严重危害公众健康。迄今为止,在自然界中共发现16种HA亚型和9种NA亚型的禽流感病毒,本文就我国禽流感病毒感染人病例的发生分布情况进行分析研究,为预测禽流感病毒的发病规律和制定防控措施提供科学依据。

摘要： 美国禽流感疫情快速扩大近日,《路透》报导,美国特德拉维尔州(Delaware)表示,该州一座养鸡场有120万羽鸡感染高度致命的禽流感病毒株,表明造成美国家禽死亡的禽流感疫情已明显扩大。截至目前,美国已有约165万羽家禽感染禽流感。美国最新一轮禽流感疫情明显扩大,让美国家禽养殖损失惨重,目前不仅需要扑杀感染的家禽,产品出口也受到限制,日本已禁止来自德拉维尔州的进口鸡蛋。

摘要： 为研制H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将目前流行的H5亚型2.3.4.4分支AIV代表株A/Duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6)[简称DK/GZ/S4184/2017(H5N6)]的HA基因经密码子优化后克隆至载体pCAGGs中构建重组质粒pCA-S4184,经PCR和测序鉴定正确后转染293T细胞,利用间接免疫荧光试验和western blot鉴定。结果显示,该HA基因可以在293T细胞中瞬时表达。将15μg/只的重组质粒pCA-S4184经肌肉注射免疫3周龄SPF鸡,3周后以相同的剂量加强免疫,1周后再通过滴鼻途径分别以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只的同源高致病性AIV(HPAIV)DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株和同分支异源HPAIV DK/GD/S1110/2019(H5N6)、DK/GX/1/2018(H5N6)、DK/HuN/SE0110/2018(H5N6)株攻毒,首免及攻毒后每周采血,检测每组鸡的HI抗体水平。在攻毒后14 d的观察期内每天记录各组鸡的发病和死亡情况,攻毒后第3 d、5 d和7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子进行病毒的分离及其滴度的测定。结果显示,加强免疫后各组鸡的平均HI抗体滴度为1:8~1:11,攻毒后HI抗体效价均显著增加;pCA-S4184可以对SPF鸡提供抵抗致死性同源病毒和同分支异源病毒攻击的能力,保护率达到100%,且能显著降低SPF鸡的排毒量甚至不排毒。随后以15μg/只的pCA-S4184两次免疫3周龄SPF鸡,免疫后每隔2周采血检测HI抗体的动态消长规律并在首免后第12周和24周,分别随机选取8只免疫鸡和8只对照鸡通过滴鼻途径以10^(5)EID_(50)/0.1 mL/只感染同源HPAIV DK/GZ/S4184/2017(H5N6)株,并在攻毒后第3 d、第5 d和第7 d采集所有鸡的喉头和泄殖腔拭子,分离病毒并测其滴度,以评估该重组质粒在免疫持续期间所诱导的免疫保护效果。结果显示,重组质粒仍可以使免疫鸡完全抵抗同源病毒的攻击。本研究为重组质粒pCA-S4184作为防控H5亚型2.3.4.4分支禽流感的候选DNA疫苗提供了实验依据。

摘要： 对2株血凝活性较弱的H9N2禽流感病毒进行病毒特性的研究.首先采用HA/HI、电镜观察、HA和NA测序等方法对2株分离株进行了病毒的鉴定;其次采用形态学、化学和生物学方法对这2株分离株进行研究.2株病毒被确定为A型H9N2亚型禽流感病毒;病毒粒子在透射电镜下为圆形、椭圆形、杆状并呈多型性,大小为80～120nm;血凝素(HA)均为中等耐热型;病毒50°C均耐热;均能凝集公鸡和人O型红细胞,但凝集作用开始并未出现,而是随着病毒的传代逐渐恢复,均不凝集猪、牛、羊、兔和马红细胞;2株病毒均对乙醚、氯仿不敏感,只有1株病毒对酸敏感;病毒对鸡胚无致死性,EID50都为1×10-7/0.2mL;经鼻腔途径感染小白鼠,均未导致小鼠出现症状和死亡,接种后第14d在小鼠血清中可检出相应病毒的抗体.上海地区活禽交易市场存在对环境条件具有较强耐受性的H9N2亚型禽流感病毒.

摘要： 家禽能将禽流感(比如H5NI,H5N6和N7N9)传染给人类,而综合市场的活禽交易区是禽流感传播的重要场所之一.本研究选择了广州市的一家典型的综合市场,在市场内部采用NIOSH旋风分离器采集空气样本并做定量的RT-PCR分析,以评估禽流感空气传播的可能性.多数样本中都检测到禽流感病毒M基因,且主要从大于1微米的颗粒物中检出.鸡舍中的流感病毒M基因浓度高达4.4×107拷贝/立方米;活禽交易区下风向100米远处的流感病毒M基因的浓度也高达2.7×106拷贝/立方米.家禽18s RNA浓度更高(高达2.6×1010拷贝/立方米),可在禽流感爆发期间作为禽流感病毒浓度的重要指标.空气流体动力学(CFD)模拟可以作为禽流感病毒扩散的有效研究工具,揭示了风向和周边建筑在禽流感病毒扩散过程中的共同作用.

摘要： 2012年4月至9月期间,作者对东北地区开展了野生鸟类H5N1禽流感病原分子流行病学调查.从黄眉柳莺、琵嘴鸭及绿头鸭中分离到三株高致病性H5N1禽流感病毒.为了确定分离株的遗传背景,对其八个独立的基因片段进行了全基因组测序及遗传进化研究,结果表明三株病毒都属于2.3.2血统分支.分离株对鸡、鸭及小鼠的致病性试验表明:三株病毒对鸡都表现出高致病性,人工感染病毒后2-6天内死亡率为100％,分离株对鸭和小鼠的致病性差异较大.试验数据表明clade2.3.2.1分支高致病性H5N1禽流感病毒可能在野鸟迁徙路线上传播,因此加大对家禽及野鸟的H5N1病原的长期监测对预防其潜在的流行爆发意义重大.

摘要： 为建立一种灵敏、高效、高通量的鸡群H7N9亚型禽流感病毒抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法.通过昆虫杆状病毒表达系统分别表达了属于W1、W2-A和W2-B分支H7N9流感病毒的三种野生型血凝素(HA)蛋白,以及跨膜区(TM)置换为H3HA TM的W2-B分支HA蛋白(H7-53TM).四种HA蛋白经过离子交换层析纯化后作为抗原,通过ELISA检测H7N9禽流感病毒抗体.ELISA特异性、敏感性和重复性试验结果显示,跨膜区置换主要影响HA蛋白ELISA检测的重复性,以H7-53TM为抗原的ELISA方法具有较好的重复性,其批内和批间变异系数小于10％,而三种野生型HA蛋白与部分血清反应批内和批间变异系数大于10％,重复性较差,因此选择H7-53TM蛋白作为ELISA包被抗原.通过ROC曲线分析,以H7-53TM为抗原的ELISA方法线下面积为1.0±0.0(P＜0.0001),能够精准地区分H7N9亚型流感病毒抗体阳性和阴性血清.通过相关性分析,该ELISA方法与134份鸡血清HI试验结果具有显著强相关性,并且与3个分支疫苗株免疫血清的HI试验结果也具有显著相关性.因此,本研究表明跨膜区置换能够提高HA蛋白抗原检测H7N9禽流感病毒抗体的重复性,并应用跨膜区置换的HA蛋白建立了一种能够检测不同分支疫苗株免疫的H7N9亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测方法.

摘要： 根据H7N9亚型禽流感病毒(AIV)的HA和NA基因保守区域,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了基于高分辨率熔解曲线(HRM)分析的H7N9亚型AIV检测方法.结果显示,该方法特异性强,其他常见禽源病毒及非H7亚型和非N9亚型的AIV不能形成特异熔解峰形;灵敏度高,对H7和N9阳性质粒的最低检测限分别达到1.0×101copies/μL和1.0×100copies/μL;重复性好,熔解峰Tm1和Tm2的批内和批间变异系数均＜1％;临床样本检测与某商品化H7N9亚型AIV定量PCR检测试剂盒比较,符合率为100％.该方法可用于临床疑似病例的应急检测、早期诊断及养鸡场、活禽交易市场等外环境H7N9亚型AIV的监测.

摘要： H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流行地区广,病毒分离阳性率有逐年增多的趋势.为了解近年来我国H3N2亚型禽流感病毒的流行情况,评估该亚型禽流感病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,对2009-2014年间在我国南方省份的家禽交易市场、养殖场和家禽屠宰场的家禽群体中采集拭子样品,采集到的样品接种鸡胚后进行病毒分离,对不同群体分离到的H3亚型禽流感病毒进行病毒表面基因的序列测定和分析基础上,选取26株代表性病毒进行病毒的全基因组序列分析、抗原性分析、小鼠感染性和致病性实验、受体结合特异性分析以及病毒在豚鼠中的复制能力、直接接触传播和呼吸道飞沫传播能力的检测.

摘要： H9N2亚型禽流感病毒感染可导致鸡的疫苗免疫失败,但该病毒对鸡的免疫抑制机理目前仍不清楚.本研究的结果显示,H9N2病毒感染可降低鸡对鸡新城疫、传染性支气管病毒活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而对外周血淋巴细胞的亚群分析显示,与对照组相比H9N2病毒感染可显著降低鸡外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的比率;并且,H9N2病毒感染鸡外周血T淋巴细胞的增殖活性与对照鸡相比显著下降(P＜0.05);另外,H9N2病毒感染还导致了鸡血清中的IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P＜0.05).以上结果说明,H9N2病毒感染可抑制鸡对疫苗的免疫应答,并且对细胞免疫应答的抑制更为明显.

摘要： 众所周知,PA蛋白作为禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的RNA聚合酶复合体重要组成成分对于病毒的转录和复制非常关键.PA蛋白不仅影响病毒的转录与复制,也是影响流感病毒致病性和宿主适应性的关键因子.然而,影响PA发挥其生物学效应的宿主机制尚不明确.已有研究表明病原与宿主的相互作用作为联系宿主与病原的重要方式对于病原的生命周期与致病能力十分重要.在流感病毒中,HAX1-PA的相互作用能降低PA蛋白的核聚集能力,并抑制病毒的复制;hCLE-PA的相互作用能够增强病毒的RNA聚合酶活性、提高病毒的复制能力.因此,本研究旨在继续挖掘和探索与PA蛋白相互作用的重要宿主因子,并尝试探索其相互作用的机制.

摘要： 禽流感(Avian Influenza)是一种由禽流感病毒引起的急性传染病,又名真性鸡瘟,其临床的表现症状随病毒亚型不同而不同,感染后主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等,多数伴有严重的肺炎严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡,至今已发现的甲型流感病毒血凝素15个亚型(H1～H15)和9个亚型(N1～N9)神经氨酸酶都能从禽中分离到.目前,能感染人的毒株有:H5N1、H7N2、H7N3、H7N7和H9N2亚型.本研究分离了北京密云地区13株禽流感H9N2病毒毒株,并对其进行HA基因以及NA基因的克隆和测序.结果表明:1.对北京密云地区的H9N2病毒的HA基因以及NA基因进行了遗传演化分析,研究表明,北京密云地区的13株H9N2毒株属于欧亚谱系.2.对北京密云地区分离的13株禽流感H9N2亚型病毒进行了HA基因以及NA基因的全长测定,并与中国大陆代表株CK/BJ/1/94以及香港代表株QA/HK/G1/97进行了比较,结果发现,裂解位点除了CK/BJ/B1/17与CK/BJ/B11/17毒株为PSKSSR之外,其余11株毒株均为PSRSSR.13株毒株均符合低致病性禽流感病毒的特征,属于低致病性禽流感病毒;HA受体结合位点比较可以看出,除了在198位时氨基酸的变化较大之外,其余位点都非常保守.13株毒株糖基化位点、受体结合位点都较为保守,具有着典型禽流感的特征.3.北京密云地区分离的13株禽流感H9N2亚型毒株在234位均为亮氨酸(L),具有着人类流感病毒的受体特性,该变异毒株在公共卫生上应该引起更大的重视.4.所提取的13株H9N2毒株NA蛋白上共有八个潜在的糖基化位点,13株毒株的NA基因在颈部均缺失了T、E、I3个氨基酸,该颈部缺失为中国大陆毒株的特性.

摘要： 禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类烈性传染病.根据其在6周龄雏鸡静脉内致病指数的不同,又可将其分为高致病性(HPAIV)和低致病性(LPAIV)两种,其中H5N1亚型禽流感属于高致病性禽流感,对家禽的致死率可达100％.除感染禽外,还可感染人和哺乳动物,引起人类死亡,具有重要的公共卫生学意义.近年,国内应用的H5亚型禽流感疫苗主要包括全病毒灭活疫苗和重组活载体疫苗.灭活疫苗一般选取与H5N1亚型接近的弱毒株或应用反向遗传技术构建减毒株,是目前我国主要免疫的疫苗种类,这种疫苗的缺点是产生的免疫效果维持时间短,生产成本较高,多次接种后应激反应大等;禽流感重组载体疫苗主要有重组鸡痘病毒疫苗和重组新城疫病毒疫苗,这两种疫苗受母源抗体的影响较大,实际大规模应用较难.火鸡疱疹病毒(HVT)为血清三型的马立克氏病毒(MDV).从二十世纪七十年初以来最早被广泛地用作防制马立克氏病的疫苗。它对鸡及其它动物均无致病性;基因组较大且含有病毒复制的非必需片段，可容纳较大外源基因片段的插入;在鸡体内可持续存在，有利于外源基因的持续表达;可刺激机体产生强烈细胞免疫反应和较高的抗体水平，免疫出现早，持续时间长;制备的疫苗可冻干保存，易于保存和运输;此外，还可以克服母源抗体干扰，显示出HVT作为疫苗载体良好的应用前景。

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。

摘要： 一种禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗。本发明属于生物技术领域，涉及分离的禽流感病毒新毒株，本发明公开了三种H9N2禽流感病毒。本发明还公开了三种检测H9N2禽流感病毒的试剂盒，以及三种用于预防的H9N2禽流感病毒的疫苗，以及抗H9N2禽流感病毒的抗体。通过本发明的试剂盒，可以迅速的检测或者排除是否是由本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒所致的禽流感，从而尽快的控制禽流感疫情。同时，接种本发明的疫苗，可以预防本发明的三种基因型的H9N2禽流感病毒的感染。并且本发明还可以为禽流感病毒监测系统提供生物信息。

摘要： 一种抗禽流感病毒剂，含有作为活性成分的组分，所述组分使用主要由水和亲水性有机溶剂的至少一种的组成的萃取溶剂从番石榴中萃取的番石榴提取物经过高效液相色谱(HPLC)在特定条件下分离而获得。所述特定条件包括使用ODS柱，所述番石榴提取物施加至ODS柱后的15分钟内以甲醇的浓度为20％的水-甲醇混合物作为流动相洗脱，随后的15到30分钟期间使用甲醇浓度为40％的水-甲醇混合物作为流动相。供选地，特定条件还包括所述番石榴提取物施加至ODS柱后的第30到45分钟时间内使用甲醇浓度为60％的水-甲醇混合物作为流动相。包含在抗禽流感病毒剂中的组分在番石榴提取物施加到ODS柱后第20分钟内或在随后的第20到35分钟期间内从该柱洗脱。

摘要： 本发明属于生物技术领域，提供了一种检测H7亚型禽流感病毒的引物对及其引用、检测H7亚型禽流感病毒的方法。本发明提供的引物对包括序列为SEQ ID NO.1所示的上游引物和序列为SEQ ID NO.2所示的下游引物，能够快速检测H7亚型禽流感病毒，可以用于H7亚型禽流感病毒的科学研究，也可以用于动物或人的临床诊断检测。

摘要： 本公开涉及一种用于检测禽流感病毒和/或禽流感病毒耐药性的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑15所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测禽流感病毒及其携带的常见耐药基因的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对禽流感病毒及其耐药性进行检测的敏感性、特异性和简便性。

摘要： 本发明提供一种同时检测和区分H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，通过分析近年来分离到的H5亚型高致病性禽流感病毒、H7N9亚型高致病性禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸序列，在其保守区设计了引物和探针，建立了针对H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光定量RT‑PCR核酸快速检测方法。本发明所提供的H5和H7N9亚型高致病性禽流感病毒以及H9亚型禽流感病毒实时荧光RT‑PCR方法具有灵敏度高、检测时间短，不需要电泳等开放环节，只需一台荧光PCR仪即可在一个密闭反应管中完成三种亚型禽流感病毒的检测，且在检测过程中可实时查看反应曲线，对结果作出快速判断。

摘要： 本发明公开了一种适应在无血清全悬浮培养的MDCK细胞系生长的禽流感病毒的制备方法及通过该方法获得的禽流感病毒，包括以下步骤：1)制备待接种的MDCK细胞；2)准备毒种：准备鸡胚源禽流感病毒；3)F1代病毒驯化：4)F2代病毒驯化：取F1代中禽流感病毒血凝效价最高的时间点所留取的上清液样本，重复步骤3)；5)F3代病毒驯化：培养F3代病毒的温度为35°C；6)F4～F10代病毒驯化：重复步骤5)，得到驯化完成的禽流感病毒；本发明的驯化方法将禽流感病毒从使用鸡胚培养直接驯化到完全适应在无血清悬浮培养的MDCK细胞上高效繁殖，驯化效率高，禽流感病毒可在MDCK细胞中高效感染复制，病毒特性稳定。

摘要： 本发明公开了用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组。利用本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒的引物对组建立的二重RT‑PCR，可准确鉴定H9亚型禽流感病毒和/或H6亚型禽流感病毒，且特异性好，灵敏度高，对H9亚型禽流感病毒和H6亚型AIV的最小检出限均达到5×10