评估和改进一种快速区分猪丹毒杆菌弱毒疫苗株和本地野毒株的基于单核苷酸多态性的聚合酶链式反应方法

摘要

按照参考文献中的方法对中国猪丹毒弱毒疫苗株和本地野毒株的基因组模板进行扩增，比较扩增结果。比较使用高保真DNA聚合酶酶、无外切活性的DNA聚合酶酶、添加抑制外切活性抗体的DNA聚合酶时的扩增结果。发现该方法能够从中国猪丹毒杆菌本地分离株中将疫苗株区分出来，但是中国疫苗株的扩增结果与日本疫苗株的扩增结果不同。中国疫苗株仅在一个被捡基因上具有单核背酸多态性，而日本疫苗株在全部五个被捡基因上都有单核苷酸多态性。进一步的研究表明使用无3'-5'外切活性的DNA聚合酶或者使用添加抑制外切活性抗体的高保真酶是该检测方法的必要条件。结论是经过改进后基于单核苷酸多态性的PCR方法是区分猪丹毒杆菌疫苗株和野毒株有效方法，可以作为疫苗鉴别诊断的有效手段。