双酶法

摘要： 双酶法生产海藻糖是指以淀粉为原料,在低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶两种酶的协同作用下,将一定链长的直链淀粉转化成海藻糖的技术.双酶法作为最早实现工业酶转化生产海藻糖的方法,起源于日本,具有原料便宜易得、工艺较成熟、不需要高能量化合物等优点.文章重点介绍了双酶法在国外(尤其是日本)及国内的发展及应用.随着生物基因工程技术的发展,越来越多性能优异的低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶被提取、优化和构建,为双酶法工艺的进一步完善和工业化提供了可能.

摘要： 以赤霞珠酿酒葡萄皮渣为原料,研究双酶法(纤维素酶和果胶酶)辅助浸提白藜芦醇工艺的最佳条件及其体外抗氧化活性.通过单因素试验及正交试验考察纤维素酶添加量、果胶酶添加量、酶解温度、酶解时间、液固比对白藜芦醇浸提工艺的影响.结果表明,最佳白藜芦醇浸提工艺为纤维素酶和果胶酶添加量分别为2.5％和1.2％,酶解温度为45°C,酶解时间为100 min,液固比为30:1(mL:g).在此优化条件下,白藜芦醇得率为927μg/g干质量.体外抗氧化试验结果可知,在质量浓度0.1～0.5 mg/mL的范围内,白藜芦醇对DPPH·和·OH的清除作用较好,最大清除率分别达到83.1％和74.0％.

摘要： 以大蒜为原料,采用双酶法提取大蒜水溶性膳食纤维,研究纤维素酶加酶量、木瓜蛋白酶加酶量、酶解时间、酶解温度对大蒜水溶性膳食纤维得率的影响,并对其抗氧化活性进行分析。结果表明,大蒜水溶性膳食纤维最佳提取条件为纤维素酶添加量2.2%,木瓜蛋白酶添加量2.2%,酶解时间180 min,酶解温度55°C,大蒜水溶性膳食纤维得率32.06%。大蒜水溶性膳食纤维对对O2-自由基和DPPH自由基均表现出较强的清除能力,且随其质量浓度的增加清除率增大,呈良好的量效关系。因此,大蒜水溶性膳食纤维是一种优质的食物纤维,可作为食品添加剂应用。

摘要： 以大蒜为原料,采用双酶法提取大蒜水溶性膳食纤维,研究纤维素酶加酶量、木瓜蛋白酶加酶量、酶解时间、酶解温度对大蒜水溶性膳食纤维得率的影响,并对其抗氧化活性进行分析.结果表明,大蒜水溶性膳食纤维最佳提取条件为纤维素酶添加量2.2％,木瓜蛋白酶添加量2.2％,酶解时间180 min,酶解温度55°C,大蒜水溶性膳食纤维得率32.06％.大蒜水溶性膳食纤维对对O2-自由基和DPPH自由基均表现出较强的清除能力,且随其质量浓度的增加清除率增大,呈良好的量效关系.因此,大蒜水溶性膳食纤维是一种优质的食物纤维,可作为食品添加剂应用.

摘要： 本试验采用双酶法(碱性蛋白酶+木瓜蛋白酶)制备羊栖菜多肽,研究了酶与底物浓度比、酶解温度、pH和酶解时间对水解度的影响。通过响应面设计,结果表明双酶法B(碱性蛋白酶∶木瓜蛋白=1∶1)水解羊栖菜蛋白的最佳酶解条件为酶底比为6%、酶解温度60°C、pH为6.5、酶解时间180 min、水解度为41.73%。

摘要： 本试验采用双酶法(碱性蛋白酶+木瓜蛋白酶)制备羊栖菜多肽,研究了酶与底物浓度比、酶解温度、pH和酶解时间对水解度的影响.通过响应面设计,结果表明双酶法B(碱性蛋白酶:木瓜蛋白=1:1)水解羊栖菜蛋白的最佳酶解条件为酶底比为6％、酶解温度60°C、pH为6.5、酶解时间180 min、水解度为41.73％.

摘要： 海藻糖作为具有特殊生物保护功能的非还原性双糖,被广泛应用在食品、医药等各个领域.以双酶法和单酶法为代表的生物酶转化技术是制备海藻糖的研究热点.双酶法以淀粉为原料,在低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶的协同作用下,将直链淀粉转化成海藻糖.双酶法具有原料便宜易得、工艺较成熟、转化率较高等优点,是最早实现酶法工业化生产海藻糖的方法.单酶法直接利用海藻糖合酶将麦芽糖转化为海藻糖.单酶法因为具有反应过程易控、工艺流程简单、副产物少等优点而受到广泛关注.提高酶的耐高温性能及转化效率是目前2种方法的主要研究方向.随着蛋白基因工程领域的发展,生物酶的优化构建技术日趋成熟,为双酶法的进一步完善和单酶法的工业应用奠定了基础.

摘要： 鱼皮含有丰富的胶原蛋白,为优化胶原蛋白提取方法,本文以鲫鱼鱼皮作为提取材料,使用双酶法和超声-双酶法提取鲫鱼皮胶原蛋白,以料液比、风味蛋白酶加入量、碱性蛋白酶加入量和酶解温度为实验因素,探究最佳提取条件。结果表明,使用超声-双酶法在超声60 min,料液比为1∶10(g∶mL),2种蛋白酶加入量为4 000 U/g,酶解温度45 °C的反应条件下,胶原蛋白提取效果最好,得到的提取率为14.70%。使用双酶法在料液比例为1∶15(g∶mL),2种蛋白酶加入量为4 000 U/g,酶解温度50 °C的反应条件下,胶原蛋白提取效果最好,得到的提取率为10.53%。相较于双酶法,超声-双酶法提取鲫鱼鱼皮胶原蛋白效果更佳,在更低的料液比和酶解温度条件下提取率更高。

摘要： 为进一步提升苜蓿(Medicago sativa)的经济附加值和利用潜力,本研究以新鲜苜蓿为原料,采用碱溶酸沉法提取苜蓿蛋白,首先利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶和胃蛋白酶6种蛋白酶对其进行水解,制备苜蓿蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,发现中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解物的ACE抑制率相对较高,分别为71.48％ 和69.99％;然后采用复合酶法(中性蛋白酶和木瓜蛋白酶)对苜蓿蛋白水解,以ACE抑制率和水解度为指标,分别研究复合酶解过程中的温度、时间、pH和复合酶比例等因素对苜蓿蛋白ACE抑制肽制备效果的影响;最后在单因素的基础上,利用Box-Behnken中心组合试验设计原理,以ACE抑制率为响应值,选取pH(X1)、温度(X2)、时间(X3)3个变量,设计3因素3水平的响应面试验,对双酶法水解苜蓿蛋白制备ACE抑制肽的工艺条件进行优化.结果 表明,双酶法水解苜蓿蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数:中性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1,水解pH为8.12,酶解温度60°C,酶解时间6 h.在此条件下水解物的ACE抑制率可达到76.12％.综上所综,苜蓿蛋白具有制备ACE抑制肽的潜力,为进一步提高苜蓿的开发利用效率和经济附加值提供了参考.

摘要： 目的:对米类中药原料(碎米、大米与玉米)及双酶法制成注射葡萄糖的液化、糖化、活性碳吸附、阴阳离子交换等工艺过程产物的微生物进行菌落总数、霉菌酵母计数、可能的微生物种类及代谢产物HPLC进行检测分析,探讨全工艺的微生物生长状态及代谢产物的变化规律. 方法:采用GB47892-2010和GB478915-2010的国家安全微生物检测方法进行菌落总数和霉菌酵母菌菌落计数、可能的微生物种类进行分析;运用高效液相色谱法建立工艺样品代谢产物的指纹图谱,并按中国药典委员会推荐的2004A版中药指纹图谱相似度评价系统进行相似度分析. 结果:玉米和大米中菌落数量相似,碎米高二者一个数量级;三者原料及工艺产品中均存在霉菌和酵母菌,霉菌为曲霉属的黄曲霉、黑曲霉,青霉属的青霉菌,其微生物种类与数量差别很大,代谢产物的HPLC指纹图谱也存在很大的差别,但前述所创的双酶法工艺对去除微生物代谢产物有明显的作用. 结论:碎米、大米、玉米酶法制葡萄糖注射液工艺的优化方法简便可行,产品纯度高,符合中国药典要求;全过程的微生物存在状态与代谢规律可测、可控.

摘要： 目的：建立碎米质量控制的系统方法，通过对实验用碎米和结晶葡萄糖进行残留农药及黄曲霉毒素含量的测定，对工艺优化全过程起监督指导作用，保证工艺优化中碎米用料的合格性及经过双酶法制成的注射用葡萄糖原料的安全性，使最终产品符合国家质量标准。方法：1、参照《2010年版中国药典附录VD》，进行碎米及注射葡萄糖原料黄曲霉毒素的色谱条件与系统适用性试验，建立黄曲霉毒素含量测定的系统方法，测定碎米及注射用葡萄糖原料黄曲霉毒素的含量。2、参照《2010年版中国药典附录ⅨQ》，进行碎米及注射葡萄糖原料农药残留的色谱条件与系统适用性试验，建立农药残留含量测定的系统方法，测定碎米及注射用葡萄糖原料农药残留的含量。结果：实验用碎米及注射用葡萄糖样品黄曲霉毒素含量均小于5ng·ml-1，故碎米和注射用葡萄糖原料黄曲霉毒素符合标准;实验用碎米及注射用葡萄糖样品农药残留(有机氯、有机磷、拟除虫菊酯类)符合限量要求;结论：实验用碎米基本符合质量标准，可用于此优化工艺中。注射用葡萄糖原料符合药典标准，可用于注射液的生产。

摘要： 葡萄糖酸钠的生产方法很多,催化氧化法和发酵法现在比较普遍,酶法生产是一种新兴的工艺.酶法生产工艺采用葡萄糖为起始原料,利用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶将葡萄糖直接转化为葡萄糖酸,然后用碱中和而制得葡萄糖酸钠.该方法具有生产操作简单、节能降耗、产品纯度高的优点.试验结合相关资料和试验阐述了葡萄糖初始浓度,反应温度、pH和加酶量对酶法生产葡萄糖酸钠工艺的影响,并通过工厂生产实践证明了酶法生产葡萄糖酸钠新工艺的优越性.

摘要： 采用双酶法(碱性蛋白酶、风味蛋白酶)水解棉籽蛋白,制备棉籽多肽.以水解度为响应指标,对水解工艺条件进行了优化,得出优化水解条件为:水解pH值10.0,温度60°C,加酶量6420u/g.在此条件下,水解度优化值为29.27％.采用双酶法制备的棉籽多肽必需氨基酸含量丰富,且风味蛋白酶的加入脱去了小分子肽的苦味,使棉籽多肽具有特殊的风味.

摘要： 葡萄糖酸钠的生产方法很多,催化氧化法和发酵法现在比较普遍,酶法生产是一种新兴的工艺.酶法生产工艺采用葡萄糖为起始原料,利用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶将葡萄糖直接转化为葡萄糖酸,然后用碱中和而制得葡萄糖酸钠.该方法具有生产操作简单、节能降耗、产品纯度高的优点.试验结合相关资料和试验阐述了葡萄糖初始浓度,反应温度、pH和加酶量对酶法生产葡萄糖酸钠工艺的影响,并通过工厂生产实践证明了酶法生产葡萄糖酸钠新工艺的优越性.

摘要： 小肽的高营养易吸收性对于促进幼雏消化系统早期发育及维护动物肠道健康具有重要意义.本文采用双酶法对玉米蛋白进行二次酶解获得小肽产品,并对其肠吸收进行了初步研究,结果表明:玉米蛋白经二次酶解后的三氯乙酸氮溶指数(TCA-NSI)高达94.1％,小肽得率在73％以上,经豚鼠离体肠囊实验法测定玉米小肽的肠吸收表明,其1h内在5cm回肠内的平均吸收量为47.25μg,平均吸收率为26.45％.

摘要： 目的：本文对碎米采用双酶法制取注射用葡萄糖的工艺进行研究，使制得的葡萄糖注射液符合国家质量标准，碎米代替大米进行葡萄糖的生产。方法：在原有酶解法的基础上，对碎米进行双酶法液化糖化制得葡萄糖溶液，再进行除杂环节(活性炭脱色、离子柱交换、纳滤等)，结晶制注射用葡萄糖原料。结果：最终制得符合国家质量标准的注射用葡萄糖。结论：运用碎米双酶解法制注射用葡萄糖工艺的优化与改进，切实可行，最终可得到纯度99.5％的注射用葡萄糖。

摘要： 人类使用糖品的历史大约已有5000多年，真正人工制糖的原料就是从用含有淀粉的谷物粗料开始的，因粗料杂质较大，裂解时物料粘度相对偏高，1811年德国化学家柯乔夫采用硫酸处理马铃薯首开水解糖先河。由酸解法后又过渡到酸酶法，直至今天流行的双酶法，水解制糖趋于成熟。就所得的糖品目前主要有两个用途:一是作为食品或药品直接进入商业市场;二是作为发酵或其它工业原料，其中用途最大的首推谷氨酸发酵，莲花味精就是其中的典型代表，它同时还是国内双酶法制糖的发源地。近年来又先后使用过木薯全粉和大麦全粉制糖用于发酵生产，都取得过良好的效果，本文就心得体会进行总结。

摘要： 淀粉生产葡萄糖使用双酶法生产是1960年日本最先研制成功，后来各国相继开发，逐步取代了酸酶法的生产，也使葡萄糖的生产水平得到了进一步的提高，提高了淀粉的转化率，使葡萄糖的DE值由酸酶法时的93%，提高到98%以上，经过四十多年的发展，葡萄糖的工艺己经很成熟，要使葡萄糖的生产水平有大的提高，必须进行工艺更新，现各个生产厂家均在从细节上做文章，力争节约成本。在淀粉糖生产中，原采用的过滤方法是采用聚丙烯板框压滤机对糖化液进行过滤，本文对这种过滤方法存在的缺点进行分析，本公司从2009年1月进行改造，改造后效果明显，现对改造前和改造后助滤剂消耗进行了对比。

摘要： 4-氯-3-羟基丁酸乙酯(ChBE)是多种药物的手性中间体,可由4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)选择性还原制备,而辅酶高效再生是绝大多数氧化还原酶实际应用的瓶颈。本研究将辅酶NADPh再生关键酶葡萄糖脱氢酶(GDh)和乙醛还原酶(ARI)偶联表达。采用双启动子构建乙醛还原酶基因(alr)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh)的重组质粒,导入大肠杆菌BL21(DE3),获得重组菌BL21/pET-alr-T7-gdh。经过诱导时间、诱导温度参数的优化,ARI酶活达到2.13U/mg,GDh酶活达到19.06U/mg。SDS-PAGE电泳分析表明重组蛋白乙醛还原酶表达量占全菌胞内可溶性蛋白的13%,而葡萄糖脱氢酶表达量占全细胞内可溶性蛋白的39%,实现了乙醛还原酶和葡萄糖脱氢酶基因的高效共表达。采用该重组菌还原COBE在无辅酶添加的体系中转化22h摩尔转化率达到70.778%,产物R-ChBE的e.e.值为92%以上,较好地实现了一菌双酶偶联制备ChBE。

摘要： 本发明提供一种用于检测ADC药物活性的双荧光素酶法、细胞及试剂盒。本发明基于双荧光素酶活性检测，提供一种新的用于检测ADC药物活性的双荧光素酶法，该方法将抗原阴性细胞和抗原阳性细胞在ADC药物存在的条件下共培养，检测ADC药物对抗原阴性细胞的旁杀伤率和ADC药物对抗原阳性细胞的杀伤率。本发明的检测方法与现有流式检测法的结果一致，具有操作简单、准确度高、通量高、重复性好、适用性广等优势。

摘要： 本申请提供了一种固定β‑呋喃果糖苷酶和葡萄糖氧化酶双酶的方法，包括如下步骤：(1)β‑呋喃果糖苷酶的生产；(2)β‑呋喃果糖苷酶的分离纯化；(3)纯化后的β‑呋喃果糖苷酶和葡萄糖氧化酶溶液在硅烷偶联剂的存在下通过溶胶凝胶法固定在凝胶上。与传统的固定化β‑呋喃果糖苷酶生产低聚乳果糖相比较，本发明首次采用溶胶凝胶法固定β‑呋喃果糖苷酶和葡萄糖氧化酶双酶以提高酶的稳定性，得到较高的酶活回收率，提高低聚乳果糖得率，与传统方法相比操作简单，条件温和，为一种环境友好型的绿色方法。

摘要： 本发明提供一种用于检测ADC药物活性的双荧光素酶法、细胞及试剂盒。本发明基于双荧光素酶活性检测，提供一种新的用于检测ADC药物活性的双荧光素酶法，该方法将抗原阴性细胞和抗原阳性细胞在ADC药物存在的条件下共培养，检测ADC药物对抗原阴性细胞的旁杀伤率和ADC药物对抗原阳性细胞的杀伤率。本发明的检测方法与现有流式检测法的结果一致，具有操作简单、准确度高、通量高、重复性好、适用性广等优势。

摘要： 本发明属于农产品加工技术领域，特别涉及一种双酶法酶解制备青麦仁汁的工艺。所述工艺步骤如下：将青麦仁打浆并糊化后冷却备用；在前述获得的浆料中加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解；取酶解后的上清液灭菌、灌装。本发明的原料青麦仁色泽碧绿、口味独特，含有丰富的蛋白质、叶绿素、膳食纤维和α、β两种淀粉酶,具有帮助人体消化、降低血糖的功能，是一种高营养的纯绿色食品；本发明所制备的青麦仁汁经酶解后含有丰富的氨基酸、多肽及多糖等，营养丰富，利于吸收，适合各年龄层次人群饮用；本发明工艺简单，成本低廉，适合大规模推广。

摘要： 本发明公开了一种双酶法酶解大豆蛋白制备大豆多肽的方法，包括如下步骤：(1)先以大豆分离蛋白为原料，按1：6(w/v)‑1：10(w/v)的料液比加入相应纯化水，搅拌均匀，制成大豆蛋白匀浆；(2)调整pH，水浴加热到50‑60°C后，按蛋白重量4％‑6％的比例加入碱性蛋白酶，酶解后调pH，降温，按比例加入酸性蛋白酶，酶解；(3)酶解结束后，调pH，加热至90‑100°C并维持，灭酶活；酶解液冷却至50‑60°C，加1％‑2％的活性炭匀速搅拌，离心，过滤，浓缩后进行喷雾干燥，制得大豆多肽。本发明的大豆多肽苦涩味低，大豆多肽得率高，酶解效率高，得到大豆肽苦涩味低，其中300‑1000Da的肽段占比最高。

摘要： 本发明属于农产品加工技术领域，特别涉及一种双酶法酶解制备青麦仁汁的工艺。所述工艺步骤如下：将青麦仁打浆并糊化后冷却备用；在前述获得的浆料中加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解；取酶解后的上清液灭菌、灌装。本发明的原料青麦仁色泽碧绿、口味独特，含有丰富的蛋白质、叶绿素、膳食纤维和α、β两种淀粉酶,具有帮助人体消化、降低血糖的功能，是一种高营养的纯绿色食品；本发明所制备的青麦仁汁经酶解后含有丰富的氨基酸、多肽及多糖等，营养丰富，利于吸收，适合各年龄层次人群饮用；本发明工艺简单，成本低廉，适合大规模推广。

摘要： 以纤维素酶及其复合酶协同双酶法提高木薯原料出酒率的方法，本发明以木薯粉为原料生产酒精，液化阶段按10U/g木薯粉添加α‑淀粉酶，糖化阶段按10U/g木薯粉添加纤维素酶或按200U/g木薯粉添加糖化酶同时添加由果胶酶14U/g木薯粉、纤维素酶10U/g木薯粉、植酸酶8U/g木薯粉组合酶。与双酶法制备木薯酒精工艺比较，本发明所述的方法能提高木薯原料的出酒率，降低了木薯酒精生产成本、节约能耗。

摘要： 本发明公开了一种双酶法天然VE提取预处理工艺及装置，包括以下步骤：步骤一、甲酯化：通过固定化脂肪酶在过量甲醇条件下催化脱臭馏出物中的脂肪酸和甘油酯转化为脂肪酸甲酯，过滤、冷析、静置分离回收下层的甘油、甲醇溶液；步骤二、二次甲酯化：上层油相中含有一部分游离脂肪酸未彻底反应，补加甲醇，通过固定化脂肪酶继续催化上层油相中的游离脂肪酸转化为脂肪酸甲酯，通过去除体系里的生成水推动反应连续进行，待底物酸价降至要求值后进入天然VE蒸馏精制过程，最终得到所需VE组分。本发明通过两步酶法工艺提高脂肪酸甲酯的转化率，实现酶的重复使用，成本低廉，反应条件温和，减少酸碱废水的产生，降低天然VE提取浓缩难度，环保节能。

摘要： 本发明属于植物成分提取技术领域，公开了双酶法从制糖后废弃的甜菜粕中提取果胶的方法。所述方法为：将甜菜粕清洗、烘干、粉碎后用高温蒸煮提取再将其混合物加入纤维素复合酶溶液，酶法提取后得到甜菜果胶溶液，加入95%乙醇沉淀，所得沉淀物依次经乙醇‑水溶液洗涤和烘箱干燥，得到甜菜果胶。本发明率先提出了采用两步法提取甜菜粕中的果胶，即高温蒸煮+酶法提取法，相比现有技术的酸提取法、草酸‑草酸铵提取法和发酵法等，果胶提取率由10％～12％提升到13％～19％，并提高了甜菜果胶的乳化活性和乳化稳定性。

摘要： 本发明涉及一种双酶法生产多糖的压滤机及其过滤工艺,包括底座以及固定安装在所述底座上的支撑板，所述支撑板上固定安装有呈对称设置的固定板，所述底座上还固定有过滤箱，其特征在于，所述双酶法生产多糖的压滤机及其过滤工艺还包括：活动板，设置在所述固定板上且呈等距设置有多组，所述活动板两侧固定有过滤垫，所述底座上设置有用于输送原料至所述过滤垫内的输送组件；压滤机构，设置在所述固定板上且与所述活动板连接，所述支撑板上设置有用于承接过滤后产品且与所述过滤箱连接的导料机构，所述导料机构包括呈对称设置的导料组件和导料板；清洁组件，设置在所述底座上，所述清洁组件可在所述过滤垫过滤完成后，输送水至所述过滤垫处。