核酸内切酶

摘要： 鸡传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病-鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)。IBV nsp15蛋白具有核酸内切酶(EndoU)活性,EndoU活性缺失可使IBV复制出现缺陷,同时降低对鸡的致病性,表明nsp15蛋白是IBV重要的毒力因子。但是nsp15影响IBV复制及其与宿主相互博弈的分子机制尚不清楚。

摘要： 艾滋病是世界范围内的一类公共卫生问题和社会问题,目前主要采用抗反转录病毒治疗,虽然通过该方法在一定程度上达到了有效控制艾滋病的目的 ,但是并不能彻底清除潜伏状态的人类免疫缺陷病毒,并且患者耐药问题也日益严重.基于艾滋病治疗的现状,研究者利用免疫、细胞和基因工程技术发展了新型的防治方法.本研究基于辅助受体趋化因子受体5、跨膜蛋白gp41、TAT蛋白、p7核衣壳蛋白和核酸内切酶等在艾滋病治疗中较有潜力的靶点,阐述艾滋病治疗的研究现状和发展前景,为艾滋病的临床治疗提供参考.

摘要： 2018年10月24日(罗氏新闻)——罗氏公司今日宣布,美国食品药品监督管理局已批准Xofluza(baloxavir marboxil)用于12岁及12岁以上急性、无并发症流感患者的治疗。Xofluza是首个、单剂量口服药物,通过抑制流感病毒复制所必需的酸性核酸内切酶的聚合酶而发挥作用。在非临床研究中,Xofluza对多种流感病毒有效,包括奥司他韦耐药株和禽流感病毒(H7N9、H5N1)。

摘要： 核酸内切酶作为核酸酶家族中重要的“分子剪刀”之一,可以通过对核苷酸序列的特异性识别来切割核酸骨架中的磷酸二酯键,参与一系列重要的生物学过程,如DNA复制、重组和修复^([1])。因此,在疾病预防和药物开发过程中,开发更灵敏、更方便、背景信号低的检测方法进行核酸内切酶检测至关重要。然而,现存的常规检测方法中仍然存在许多不可避免和难以处理的非特异性识别问题。同时,分离的单个有机染料分子发出的荧光信号通常是光漂白的,这导致可获取的整个信号太差,无法在许多应用中量化目标表达^([2])。

摘要： 目的:以酿酒酵母W5为出发菌株,对其核酸内切酶基因HO进行克隆及生物信息学分析.方法:首先运用Primer 5.0软件,设计一对扩增HO基因序列的引物,并以酿酒酵母W5全基因组为模板进行PCR扩增,获得酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因片段,利用生物信息学技术对该序列进行验证及分析.结果:测序显示HO基因长度为1760 bp,无碱基缺失,且该基因序列具有完整的开放读框.该基因编码的HO蛋白包含586个氨基酸残基,强酸性和强碱性氨基酸残基数量有明显差异;HO蛋白等电点为9.56,存在激酶位点,疏水性最大值为1.722,亚细胞定位预测其位于细胞核内,属于碱性胞内蛋白质,并构建了其空间结构模型.结论:对酿酒酵母W5核酸内切酶HO基因序列进行了克隆及生物信息学分析,所得数据可为酿酒酵母遗传背景研究提供一定的理论支持.

摘要： 核酸酶作为具有特殊功能的蛋白质分子,在生物分析研究中起到很大的作用.该综述探讨了核酸酶的来源、独特的性质以及其在核酸传感器中的应用.基于核酸酶的核酸传感器因其具有特异性识别和切割作用,能够对信号进行放大,从而提高检测的灵敏度,被广泛应用于生物分析检测中.

摘要： Toxin-antitoxin体系在细菌中发挥着许多关键性的作用.作为唯一的typeⅤTA系统的代表,GhoS能够剪切GhoT蛋白的mRNA,进而抑制GhoT的毒性.GhoS在溶液中有单体和二体两种不同的存在形式,而且两种形式均具有催化活性.尽管目前有一个GhoS的NMR溶液结构已经报道,GhoS是如何二聚以及如何识别和降解底物的机制还不明确.本文中我们报道了GhoS F14A突变体的纯化和初步晶体学研究.GhoS晶体的衍射分辨率为1.5.晶体属于P21空间群,晶胞参数为a=51.0,b=37.3,c=52.3,α=90.0°,β=119.6°,γ=90.0°.晶体的溶剂含量为35%,每个不对称单元中含有两个蛋白分子.

摘要： 器官的严重短缺是开展移植手术面临的主要难题.经过基因修饰改造的低免疫源性猪有望成为合适的异种器官移植供体.人工核酸内切酶介导的基因组编辑技术,包括ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9技术,极大地促进了异种器官移植的发展,并且可用于高效定向的遗传改造.目前,基因修饰猪的研究正在朝临床应用的方向飞速发展.本文综述了利用基因组编辑技术培育的基因修饰猪的研究进展.

摘要： 本实验中将一端巯基修饰的具有发夹结构的DNA 探针用于完全互补以及单 碱基错配基因序列的区分检测。当发夹结构的固定探针与待测体系作用后，进行 酶切反应及金标探针放大。其特点在于结合使用限制性核酸内切酶ECoR I 及纳 米金标记的检测探针，能够很好的降低背景值并有效增强信号。实验中所设计的 发夹状结构固定探针，环状部分的互补序列与待测目标序列一致，发夹分子的茎 部有8 个碱基对互补并可以被ECoR I 特异性识别切割。在结合目标链打开以后 可以进一步和检测探针杂交（二者互补）。通过这一巧妙设计，实现了对目标DNA 用压电方法的检测，而且对错配的目标序列能够有效的区分，顺利实现最初的设 计思路。对一系列不同浓度的目标DNA 进行测试并得到其浓度校正曲线，结果表 明压电石英晶振频率变化与目标DNA 浓度在2-300pM 之间具有较好的相关性，该 方法检测限为2pM。实验结果表明，此方法是一种简单实用、价格低廉、灵敏度 高的适用于DNA 分析检测的技术。

摘要： 基于纳米金能猝灭不同荧光染料标记的发夹式DNA（含有内切酶的识别序列）的荧光及与核酸内切酶反应的特异性，本文构建了一新型纳米多色荧光生物传感器,并用于核酸内切酶活性测定及其抑制剂筛选。该传感器具有很高的灵敏度和选择性，成功实现了EcoRI、HaeIII和EcoRV三种核酸内切酶活性的同时检测及抑制剂筛选。

摘要： 本文构建了一种基于DNA链置换反应和核酸内切酶辅助信号放大的G四链体DNAzyme的催化化学发光检测腺苷的新方法.该方法灵敏度高,选择性好,检测限为0.5μmol/L,应用于人血清中腺苷的检测,结果满意.

摘要： 公开了一种生物化学和分子生物学领域的方法。该方法涉及改善被标记寡核苷酸探针的切割动力学，因此提高了检测核酸过程中的信噪比。

摘要： 本发明公开了一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的高特异性microRNA荧光检测方法。本发明通过使用短链DNA探针，结合DSN酶，在加速探针/miRNA杂交速率和杂交‑酶切循环速率的同时，提高了探针对杂交反应碱基错配的敏感性，实现人体温度下的miRNA高灵敏度、高特异性恒温检测；可敏感区分单碱基错配的同源相似miRNAs。本方法可在37°C下获得高效扩增反应，相比于其他基于DSN酶的扩增反应(温度需为55～60°C)，更适合用于细胞等原位或活体检测。该扩增反应为恒温反应，无需精确的控温或温度循环装置，操作简单，成本低，更适合市场推广。

摘要： 本发明公开了一种检测核酸内切酶酶切位点的方法。本发明利用芯片上数以十亿计的核酸序列来高通量系统性的检测核酸内切酶对DNA的识别切割位点及核心序列特征，采用两次测序分别获取碱基序列及正常的双链DNA，同时根据酶切前后荧光信号的改变，运用生物信息分析方法得到内切酶的识别切割位点。通过对内切酶识别切割位点的研究，可检测内切酶的识别切割位点的倾向性，并且可以提前预测内切酶的星号活性及基因组编辑技术中内切酶的脱靶效应，同时，也可用于大规模筛选新型基因组编辑系统中使用的内切酶所需要识别的PAM序列。与现有技术中的测序方法相比，本发明的检测方法具有速度快且通量高的优势。

摘要： 披露了核酸内切酶1核糖核酸酶多肽和含有这些多肽的清洁组合物。还披露了用于使用这些多肽和清洁组合物的方法。还披露了编码这些多肽的多核苷酸以及含有这些多核苷酸的载体和细胞。

摘要： 本发明涉及基于利用链置换扩增(SDA)进行核酸的等温扩增的分子生物学试验的设计及其各种实施方案和方法改进。本发明描述了一种用于SDA的新方法，称为核酸内切酶介导的移动平衡扩增(EM‑SEq)，该方法改进了反应的指数动力学和特异性，并且使得能够在固体表面上进行扩增。

摘要： 本发明公开了一种基于短链核酸探针和双链特异性核酸内切酶的高特异性microRNA荧光检测方法。本发明通过使用短链DNA探针，结合DSN酶，在加速探针/miRNA杂交速率和杂交‑酶切循环速率的同时，提高了探针对杂交反应碱基错配的敏感性，实现人体温度下的miRNA高灵敏度、高特异性恒温检测；可敏感区分单碱基错配的同源相似miRNAs。本方法可在37°C下获得高效扩增反应，相比于其他基于DSN酶的扩增反应(温度需为55～60°C)，更适合用于细胞等原位或活体检测。该扩增反应为恒温反应，无需精确的控温或温度循环装置，操作简单，成本低，更适合市场推广。

摘要： 本发明涉及一种核酸检测技术，具体而言是一种依赖核酸内切酶活性的核酸检测技术和试剂。本发明所使用的分子探针在没有和目的核酸片段结合时，保持一种二级结构，此时在该结构上没有特定的核酸内切酶的切点。而当有目的核酸片段存在时，探针DNA分子能够和目的片段结合改变其二级结构，具有能够被特定DNA内切酶识别的识别位点和能够被该内切酶切开的酶切位点。内切酶切开探针后可被检测。该方法具有识别序列较短，对引物位置要求较低，检测体系简单，检测效率较高，DNA和RNA均能直接检测等特点。

摘要： 本发明提供用于编辑细胞中特定染色体序列的方法和试剂盒。具体而言，将靶向核酸内切酶和单链核酸用来编辑所述染色体序列。

摘要： 本发明涉及克隆和生产Af1 II限制性核酸内切酶的方法，其包括1)向宿主内引入由水花鱼腥藻(Anabaena flos-aquae)得到的限制性核酸内切酶基因以便该限制基因得以表达；2)培养含编码并表达Af1 II限制性核酸内切酶活性之质粒的宿主；以及3)由发酵培养的、含编码和表达Af1 II限制性核酸内切酶活性之质粒的宿主中纯化得到Af1 II限制性核酸内切酶。

摘要： 本发明公开了一种检测核酸内切酶酶切位点的方法。本发明利用芯片上数以十亿计的核酸序列来高通量系统性的检测核酸内切酶对DNA的识别切割位点及核心序列特征，采用两次测序分别获取碱基序列及正常的双链DNA，同时根据酶切前后荧光信号的改变，运用生物信息分析方法得到内切酶的识别切割位点。通过对内切酶识别切割位点的研究，可检测内切酶的识别切割位点的倾向性，并且可以提前预测内切酶的星号活性及基因组编辑技术中内切酶的脱靶效应，同时，也可用于大规模筛选新型基因组编辑系统中使用的内切酶所需要识别的PAM序列。与现有技术中的测序方法相比，本发明的检测方法具有速度快且通量高的优势。