质粒

摘要： 高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKP)在临床分离株中检出率日益增加,携带多种毒力基因,致病力强,常导致严重的社区获得性感染。通常hvKP耐药率低,临床治愈率高,但碳青霉烯类耐药株(carbpenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae,CR-hvKP)的出现打破了这一平衡。CR-hvKP集合高毒力、高耐药等特性,亦有“超级细菌”之称,极易造成致命性传播,迅速引发全球高度关注。该文将hvKP对碳青霉烯类耐药机制作如下综述,旨在明确CR-hvKP的形成途径,为遏制CR-hvKP的出现及传播提供参考。

摘要： 黑龙江省齐齐哈尔市周边发生了仔猪腹泻情况,通过检测发现致病菌为致病性大肠杆菌。通过药敏试验发现其对恩诺沙星、左氧氟沙星等喹诺酮类药物耐药。通过PCR探究其携带的耐药基因,发现其含有喹诺酮耐药基因aac(6’)-Ib-cr。表明该株大肠杆菌为质粒介导的喹诺酮耐药菌株,通过aac(6’)-Ib-cr基因编码的变种氨基糖苷甲基转移酶修饰喹诺酮类药物,从而导致药物抗菌活性下降,菌株产生了药物耐药性。

摘要： 喹诺酮类属于合成的广谱抗菌药,用于治疗与肠杆菌科相关的各种感染性疾病。近几十年来,喹诺酮类药物的广泛使用和过度使用导致了喹诺酮耐药菌株的出现。喹诺酮类药物耐药的产生是一个复杂的多因素过程,主要的耐药机制包括染色体介导的一个或多个靶点基因突变改变靶点酶的药物结合力;AcrAB-tolC多耐药外排泵的过表达和孔蛋白的改变导致药物摄取减少,外排增加;以及质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr,aac(6′)-Ib-cr和crpP)、外排泵(如OqxAB和QepA)的存在。论文通过对喹诺酮类药物耐药机制进行综述,以期为探索抗耐药菌株的新药提供参考。

摘要： 目的观察转染过表达WW域的氧化还原酶(WWOX)质粒对胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法胆囊癌细胞株GBC-SD分为实验组、NEG组、空白对照组,实验组转染WWOX过表达质粒,NEG组转染空载质粒,空白对照组不做处理。采用细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。采用Transwell实验测算各组穿膜细胞数,以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中WWOX、P73、E-cadherin、Vimentin mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中WWOX、P73、Ecadherin、Vimentin蛋白。结果实验组、NEG组、空白对照组细胞迁移率分别为50.42%±3.47%、74.81%±1.04%、77.82%±2.71%,其中实验组细胞迁移率与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组、NEG组、空白对照组穿膜细胞数分别为(77.33±8.65)、(173.33±6.18)、(187.33±6.94)个,其中实验组穿膜细胞数与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组WWOX、P73、E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均高于NEG组和空白对照组(P均<0.05),实验组Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于NEG组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染过表达WWOX质粒的GBC-SD细胞株迁移、侵袭能力降低,其机制可能与P73表达上调进而抑制GBC-SD细胞的上皮-间充质转化过程有关。

摘要： 副溶血性弧菌是水产品中主要的致病菌之一,既可造成养殖水产品的疾病与死亡,也可引起人类的胃肠炎等疾病,不仅具有潜在的食品安全隐患,也对消费者健康造成潜在危害。该文主要阐述了副溶血性弧菌的毒力因子耐热直接溶血素(thermostable direct hemolysin,TDH)以及分泌系统T3SS1、T3SS2在菌株体内的作用机理,并对副溶血性弧菌产生耐药性的5种机制——产生生物被膜、质粒介导耐药、产生灭活酶或钝化酶类、外排泵主动排出抗菌药物、药物靶点发生改变进行了综述。

摘要： 目的建立黄连素逆转mcr-1阳性大肠杆菌耐药性的方法,为中药抗多重耐药菌感染提供新线索。方法通过肉汤稀释法分别测定黄连素和氯丙嗪对大肠杆菌EMCRR45的最低抑菌浓度,并以此浓度进行质粒消除实验。利用棋盘培养实验确认耐药质粒的消除,计算消除率,使用SPSS 17.0软件与对照组氯丙嗪组进行消除率比较。利用K-B法或微量肉汤稀释法检测质粒消除前后耐药性的变化。采用荧光定量PCR检测耐药质粒消除前后细菌中mcr-1含量的变化。结果黄连素和氯丙嗪对大肠杆菌EMCRR45的最低抑菌浓度分别为1.25 mg/ml和68μg/ml,72 h的质粒消除率分别为26.9%和6.0%,差异有统计学意义(P=0.001)。质粒消除后,耐受抗生素种类从8种下降至4种,同时逆转了对多黏菌素的耐药性。荧光定量PCR显示,质粒消除后mcr-1的CT值从28.55变为34.50。结论黄连素可以消减大肠杆菌mcr-1基因,并逆转细菌对多黏菌素的耐药性。

摘要： 目的制备含重组质粒涂层,提高介入医疗器材生物相容性和耐腐蚀性,降低再狭窄率。方法将人脐静脉内皮细胞分别接种到涂布基质胶+黏连蛋白和基质胶+黏连蛋白+人血管内皮细胞生长因子(VEGF)重组质粒的镍钛合金丝上,37°C培养48 h后用正置荧光显微镜观测。结果基质胶+黏连蛋白包被的镍钛合金丝表面细胞无绿色荧光,含人VEGF重组质粒包被的镍钛合金丝表面细胞有绿色荧光,表明人VEGF重组质粒转染成功。结论人VEGF重组质粒转染成功,此种涂层具有可行性,可用于介入医疗器材表面改性。

摘要： 目的 构建Survivin shRNA重组干扰质粒。方法 设计并构建针对4个靶点的Survivin shRNA重组干扰质粒,并转染至A549细胞,qRT-PCR、Westen blot检测Survivin表达。结果 4个PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA质粒中Survivin mRNA及蛋白水平均明显降低,其中PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA-2质粒中Survivin表达更低。结论 成功构建了4个PGP-U6-GFP-neo-survivin-shRNA质粒。

摘要： 全基因组测序(whole genome sequencing,WGS)从1977年发展至今,已成为一种快速、低成本获取生物体全基因组的方法[1]。WGS可发现基因组变异,在微生物的分类鉴定中应用广泛[2]。WGS经历了三代技术革新,二代测序和三代测序的结合已成为目前最广泛的杂交测序方法[3-4]。杂交测序一方面使用长读长跨越重复序列或缺口,另一方面使用短读长纠正测序中错误的碱基[5]。GenBank数据库中完成WGS的菌株越来越多,用传统的DNA文库或PCR扩增的方法无法获得的质粒可由WGS数据进行组装,但组装质粒的正确性和完整性需要进一步鉴定和分析。

摘要： 目的探究DYS460基因座因引物不同导致分型异常的原因。方法对DYS460基因座分型异常的样本,测序其DYS460所在区域,比较序列,查找分型异常原因。结果经比对分析,发现DYS460基因座序列中有相邻的两段[CTAT]重复序列,因引物选择扩增此两段重复序列的不同,分型结果就不一样。结论对于复杂重复序列的基因座分型,除应按照STR基因座通用命名标准外,还需考虑已有商品试剂盒的命名方式,若基因座包含两段完全相同的重复序列,尤须仔细甄别,确定通用的核心重复序列位置,并相应调整引物结合部位,使其目的片段及其等位基因标准品中只包含唯一的核心重复序列,从而避免因核心重复序列选择差异导致分型异常。

摘要： 本文以中国分离到的1533株不同来源大肠杆菌为目的菌，对其进行MIC测定，运用PCR法和基因测序检测PMQR基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxAB、qepA和aac(6》、Jb-cr)，通过接合和转化实验获得基因阳性的接合子，对其进行MIC、PFGE和Southern blot等试验。研究发现，二十年来，大肠杆菌对多数喹诺酮类药物和喹噁啉类药物的耐药性提高了两倍以上，猪源分离株对喹乙醇耐药率最高，人源株也出现了一定程度耐药。PMQR基因在1533株大肠杆菌中的阳性率为33%左右，oqxAB为最流行的PMQR基因，其它较低。猪源菌株中oqxAB pg性率为52.2%，首次在1994年鸡源及鸭源、鹅源和鸽源菌株中检测到oqxAB基因。本研究中共分离到qnrA亚型2种，qnrB亚型5种及qnrS亚型2种。共获得66个菌株的接合子，六类药物耐药基因可随oqxAB基因一起转移。染色体突变和其它PMQR基因都不影响喹乙醇的耐药性，oqxAB基因是影响喹乙醇耐药性的关键因素。大肠杆菌oqxAB基因主要位于可转移的质粒上，成为oqxAB散播的重要因素。同一养殖场内，存在丰富多样的qnrS阳性质粒，新进的雏鸡可迅速从养殖场中获得qnrs基因并在鸡群中流行。qnrJ基因主要通过质粒播散或整合子等水平模式进行传播流行，也可在小范围内以克隆形式传播。

摘要： 本文在温度敏感型质粒pKSV7中插入了内源质粒的复制蛋白以及复制起始位点片段构建了不形容性质粒pKSV7-rp-zp4。将此质粒转入到LL3中，30°C培养12h，转接15天后检测，得到质粒消除率为93%。对质粒消除后的细菌进行芽孢形成实验发现此菌株仍然可以形成芽孢，可能细菌染色体中有天冬氨酸磷酸反应调控酶同工酶在芽孢形成起始阶段起作用。生长曲线对比发现消除后的菌在对数生长期前期生长明显比野生型高，几乎为野生型的两倍。但是在对数生长中期以后两个菌株生长曲线几乎重叠。实验证明质粒不相容方法是一种非常高效、安全的质粒消除方法，可被用于遗传背景清楚的质粒的消除。质粒上rap基因对菌株芽孢形成没有影响。消除菌株的生长性能与出发菌株也无明显差异。

摘要： 本文对来自赣州不同地区果园的柑橘溃疡病菌进行了菌系鉴定，并通过质粒图谱分析，探讨了该病菌的遗传多样性。结果表明：来自中国同一柑橘地区的柑橘溃疡病菌存在高度的多样性，可能与近些年柑橘种植结构的不断改变，地区间引种和种质交换导致病菌相互扩散有关。

摘要： 目的：分析临床分离红霉素耐药的肠球菌携带ermB、mefA基因与携带转座子Tn1545和Tn917之关系,证实肠球菌红霉素耐药性、耐药基因及转座子在同种同属、同种不同属和异种细菌之间的传递。方法 采用琼脂稀释法进行细菌红霉素最低抑菌浓度(MIC)的测定,用聚合酶链反应(PCR)及测序检测肠球菌ermB基因、mefA基因、Tn1545和Tn917,用ERIC对进行接合试验的30株肠球菌进行基因分型,通过滤膜接合法对耐红霉素的肠球菌进行质粒接合转移试验。结果 158株儿童临床标本分离的肠球菌,红霉素MIC50和MIC90为256ug/ml,红霉素耐药率为94.9﹪(150株/158株)。在150株红霉素耐药株中,ermB基因的总携带率为70.7﹪,粪肠球菌ermB基因的携带率高于屎肠球菌(P=0.009);粪肠球菌未检测到mefA基因,只有一株屎肠球菌检测到mefA基因。106株ermB基因阳性红霉素耐药株中,ermB基因有46.2﹪的菌株同时存在于转座子Tn1545和Tn917;单纯存在于转座子Tn1545的43株,占40.6﹪;单纯存在于转座子Tn917的1株,占0.9﹪。粪肠球菌之间的质粒接合转移试验结果:13株接合子,红霉素MIC≥512ug/ml,除原供体菌一株粪肠球菌阴性外,其余的12株接合子全部携带ermB基因,ermB基因全部同时存在于转座子Tn1545和Tn917;屎肠球菌、海氏肠球菌与粪肠球菌之间的质粒接合转移试验结果:17株接合子,红霉素MIC≥512ug/ml,除原供体菌一株屎肠球菌阴性外,其余的16株接合子携带ermB基因,ermB基因有11株同时存在于Tn1545和Tn917,4株仅存在于Tn1545,1株仅存在于在Tn917;肠球菌和金黄色葡萄球菌之间的质粒接合转移试验结果:30株金黄色葡萄球菌接合子,红霉素MIC≥512ug/ml,除原供体菌一株粪肠球菌和一株屎肠球菌阴性外,其余的28株接合子全部携带ermB基因,其中ermB基因有23株同时存在于Tn1545和Tn917,4株仅存在于Tn1545,1株仅存在于Tn917。结论 儿科肠球菌分离株红霉素耐药主要机制是ermB基因编码的23SrRNA甲基化酶致靶位改变,Tn1545和Tn917基因与ermB基因存在密切相关,肠球菌红霉素的耐药性既可以在同种同属、同种不同属和异种之间进行传递。

摘要： 目的：调查质粒介导喹诺酮耐药基因qnrA、qnrB、gnrS在我国产ESBLs的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中的流行情况。方法：采用聚合酶链反应扩增qnr各亚型基因(qnrA、qnrB、qnrS)、ESBLs基因及氨基糖苷类耐药基因AAC(6')-Ib，琼脂稀释法测定细菌对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)，接合试验、质粒抽提确定qnr基因位置，鸟枪法测定质粒全序列，扩增测序分析qnr基因所处基因环境。结果：总共362株临床分离菌中qnr基因阳性共29株，占8.0％。其中大肠埃希菌中qnrA、qnrB、qnrS三种亚型阳性菌株数分别为5株(占1.9％)、4株(占1.5％)、5株(占1.9％)，肺炎克雷伯菌中qnrA、qnrB、qnrS3种亚型阳性菌株数分别为8株(占8.1％)、4株(占4.0％)、4株(占4.0％)。序列测定证明qnrA基因位于Ⅰ类整合子中。结论：qnr基因在产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中的阳性率为8.0％，最主要的是qnrA基因。喹诺酮类耐药基因qnr可以和氨基糖苷类耐药基因aac(6')-Ib或其突变体aac(6').Ib.cr、ESBLs基因经同一质粒共同传播。

摘要： 本文从我国16个地区规模化鸭场1999～2005年间疑似感染沙门氏菌的病雏鸭及病死雏鸭的心血和肝脏中分离出200株致病性沙门氏菌,用56种沙门氏菌属诊断血清进行了血清学定型,对46株沙门氏菌进行了质粒指纹图谱分析,利用变温-SDS质粒消除法对13株沙门氏菌的质粒进行了消除.结果表明,200株分离菌有47株能定型,分属O9群和O4群,其中有32株肠炎沙门氏菌和15鼠伤寒沙门氏菌.来源同一地区的菌株,其血清型相同,来源不同地区的,其血清型也可以相同.部分菌株的致病性试验表明分离菌有很高的致病性.46株沙门氏菌的质粒获得率为100％,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱,菌株携带的质粒多少和大小与其耐药性没有明显对应关系.13株沙门氏菌中有2株细菌的质粒被部分消除,质粒消除前后的药敏试验间接表明三种质粒(22.63kb、2.72kb、2.55kb)未携带耐药基因.

摘要： 随着氟喹诺酮类药物在临床上的广泛使用,细菌对该类药物的耐药日益增多,给临床治疗带来很大威胁.本文就国内外关于氟喹诺酮类药物耐药机制的研究进展作一综述.目前已知的细菌对氟喹诺酮类的耐药机制有三种：基因突变导致药物作用靶位酶-DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ突变;基因突变导致药物在菌体内的蓄积浓度下降;质粒介导的耐药机制.

摘要： 目的：qnr相关的质粒介导细菌对喹诺酮类药物的耐药是近年新发现的一种耐药机制，但在食品动物源和宠物源肠杆菌科细菌中尚未见此类报道，本研究的目的是了解动物源肠杆菌科细菌中qnr的流行状况;探讨其耐药和扩散机制。方法：采用PCR方法对2005-2007年采集的36株宠物源和18株患病食品动物源对头孢噻呋耐药的肠杆菌科细菌以及49株对氨基糖苷类药物高度耐药的猪源大肠埃希菌(48株)和阴沟肠杆菌(1株)进行qnrA、qmB、qnrS基因的检测，测序确定基因亚型;以耐叠氮钠的EcoliJ53R为受体菌，进行质粒的接合转移实验;E试验方法测定环丙沙星对阳性接合子的MIC;采用ERIC-PCR分析菌株之间的相关性。结果：在36株宠物源肠杆菌科细菌中，检测到3株qmrB阳性菌，阳性率为9.33％，经PCR产物测序，NCBI上BLAST比对分析确定为qnrB4、qnr-B6和qnrB9;18株头孢噻呋耐药的患病食品动物源肠杆菌中有2株qnr阳性，为qnrB3和qnr-B6，阳性率为11.1％，49株对氨基糖苷类药物高度耐药的食品动物源肠杆菌科细菌中有6株qnr阳性，其中5株qnrS和l株qnrB，阳性率为12.2％，基因型分别为qnrS(4株)、qnrS1和qnr-B6。均未检测到qnrA基因。通过接合转移试验，成功获得5株qnrB的接合子，环丙沙星对接合子的MIC值为0.064～1mg/L，较受体菌上升8～125倍;qnrB基因位于大约60kb～＞180kb的可接合质粒上;ERIC-PCR结果显示有3株来源于同一猪场的大肠埃希菌谱带完全一致，提示该猪场存在耐药菌株的克隆传播。结论：在不同动物的分离株中均检测到qnr基因，包括qnrB和qnrS基因;首次从食品动物源和宠物源菌株中检测到qnr基因，而且携带qnr基因的质粒菌株存在水平传播和克隆传播现象;qnr基因位于质粒上，具有易于传播扩散的特点，宠物和食品动物携带的qnr基因有可能通过各种方式传给人类，应加强动物源肠杆菌科细菌对质粒介导氟喹诺酮类药物耐药机制和传播机制的研究。

摘要： 肿瘤pVHN疫苗具有潜在的临床治疗肿瘤的应用前景.大规模纯化制备是质粒DNA应用于基因治疗的关键步骤.质粒的大规模纯化流程包括:发酵,离心收集细胞,碱性裂解,QSephroseXL富集质粒,浓缩,Source15Q精制质粒.所得质粒DNA中的残留蛋白含量、RNA含量、残留菌体基因组DNA含量均符合质量标准.本文介绍了对抗肿瘤疫苗pVHN的大规模纯化制备的研究.

摘要： 目的:研制猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的单克隆抗体(McAb).方法:将GP5基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,利用构建成的重组真核质粒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSVGP5蛋白单抗.建立间接ELISA方法筛选阳性克隆.并对杂交瘤细胞株进行鉴定,分析单抗特性.结果:获得3株可分泌特异性抗PRRSVGP5蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12.其中5D10的Ig亚类为IgM.ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:64～1:1024,腹水效价为1:3200～1:10240,同时用Westernblot、IFA和IPMA检测,结果均为阳性.5D10和5F12的相对亲和力不同,证明其识别不同的抗原位点.5D10、5F12具有病毒中和活性,中和效价分别为1:40和1:80.结论:获得2株抗PRRSVGP5蛋白的单克隆抗体,为进一步对PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础.

摘要： [课题]本发明提供具有可在细胞内分解的结构的生物降解性化合物、含有其的脂质粒子、以及含有该脂质粒子的药物组合物。[解决手段]实施方式的化合物的特征在于，由下述式(1)表示，P‑[X‑R‑Y‑R’‑Q]

摘要： 本发明涉及硬质粒子和使用了该硬质粒子的烧结滑动构件。目的在于提供耐磨损性提高了的硬质粒子和使用了该硬质粒子的烧结滑动构件。该硬质粒子包含La：1质量％～7质量％、Mo：30质量％～50质量％、Ni：10质量％～30质量％、Mn：10质量％以下、C：1.0质量％以下、余量：不可避免的杂质和Co。

摘要： 本发明提供了一种磁珠法提取质粒DNA的试剂盒，包括质粒提取试剂和羟基磁珠，质粒提取试剂包括溶液I、溶液II、溶液III、磁珠结合液、漂洗液和洗脱液。溶液I、溶液II、溶液III的混合比例为1：1：1.4。还提供了利用上述磁珠法提取质粒DNA的试剂盒来提取高纯度质粒DNA的方法。本发明所述的磁珠法提取质粒DNA的试剂盒及提取质粒DNA的方法，缩短了质粒提取时间，提取的质粒能够满足后续PCR、酶切、转化和转染等实验的大量需求，减少了时间和经济成本。

摘要： 本发明公开了一种磁珠法质粒提取试剂盒，包括SⅠ溶液、SⅡ溶液、磁珠Ⅰ溶液、磁珠Ⅱ溶液和洗脱液；所述SⅠ溶液用于裂解细胞，释放核酸；所述SⅡ溶液用于将蛋白等杂质沉淀；所述磁珠Ⅰ溶液中含有磁珠Ⅰ和多羧基化合物，所述磁珠Ⅰ包括第一磁芯和其表面修饰的多个羧基基团，所述磁珠Ⅰ能够吸附蛋白等杂质沉淀，从而将其去除；所述磁珠Ⅱ溶液中含有磁珠Ⅱ，用于结合质粒。本发明还提供了所述磁珠法质粒提取试剂盒的制备方法。本发明还提供了利用该试剂盒进行质粒提取的方法。

摘要： 本发明涉及生物制品技术领域，具体而言，涉及一种制备质粒的连续碱裂解系统以及质粒的制备方法。所述的制备质粒的连续碱裂解系统，包括：第一储存装置、第二储存装置、第一泵送装置、第二泵送装置、第一混合装置、第一雾化装置、第二雾化装置、螺旋裂解装置、第三储存装置、第三泵送装置、第二混合装置、螺旋混合装置、连续流离心装置和在线过滤装置。所述的制备质粒的连续碱裂解系统，能够避免混合不均匀引起的质粒裂解的效率低，以及长时间搅拌混合的剪切力引起的基因组DNA污染；还能实现大规模的连续生产，并且具有较高的质粒收率。

摘要： 本发明公开了Periostin特异性干扰质粒和PD‑1特异性干扰质粒的组合及其应用。本发明利用RNAi技术从基因表达源头上进行阻断Periostin和PD‑1的产生，利用减毒沙门氏菌运载Periostin特异性干扰质粒和PD‑1特异性干扰质粒来治疗结直肠癌，将为临床上结直肠癌的治疗提供新的策略及制剂。

摘要： 本发明提供一种rAAV重组包装质粒、用于rAAV包装的质粒系统和rAAV的制备方法。rAAV重组包装质粒包含pAAV‑RC质粒，以及插入所述pAAV‑RC质粒的P5启动子、真核启动子和mir342基因；P5启动子位于pAAV‑RC质粒rep基因上游，用于调控rep基因的表达；真核启动子位于mir342基因的上游，用于调控mir342基因的表达。本发明通过在pAAV‑RC质粒中插入mir342基因及调控其表达的真核启动子，并同时在其所含rep基因的上游引入P5启动子用于调控rep基因表达，从而构建得到一种rAAV重组包装质粒，采用包含该rAAV重组包装质粒的三质粒产品包装病毒，能够有效提升病毒滴度，提高产生效率，降低生产成本。

摘要： 本发明提出一种无内毒素质粒快速提取试剂盒及质粒提取方法，属于分子生物学领域，能够解决现有的内毒素去除方法存在操作复杂、成本高、去除效果差且有RNA残留的技术问题。其中，本发明无内毒素质粒快速提取试剂盒包括裂解试剂组、杂质去除试剂、内毒素清除试剂、洗脱试剂组和至少一个吸附柱；质粒提取方法包括：样品重悬与裂解、内毒素清除、杂质去除、杂质漂洗和质粒DNA洗脱步骤。利用本发明的无内毒素质粒快速提取试剂盒提取的质粒内毒素含量低于0.1EU/μg，能够满足细胞转染、基因治疗、基因工程等需较低水平内毒素的实验和研究要求。

摘要： 本发明提供一组用于活体荧光标记类鼻疽伯克霍尔德菌的表达质粒，同时还进一步提供了包含红、绿或蓝荧光蛋白的表达质粒。本发明还公开了荧光表达质粒的组成元件、酶切位点和基因序列，以及其在类鼻疽菌中活体荧光标记的方法，并进一步公开了红色荧光标记类鼻疽菌在其感染致病研究中的应用。本发明提供了一组活体荧光标记类鼻疽菌的质粒，有助于对类鼻疽菌感染致病过程的动态研究。

摘要： 本发明涉及一种含有CAR核酸片段的表达质粒，所述CAR核酸片段为嵌合抗原受体CD105 Nb‑CD8‑CD137‑CD3ζ片段，由CD105 Nb、CD8铰链区和跨膜区、CD137的胞内信号结构域和CD3ζ的胞内信号结构域串联构成。本发明还涉及转染有本发明第一方面所述的表达质粒的工程化CD105靶向性CAR‑T细胞及其制备方法。本发明还涉及所述表达质粒在制备所述CAR‑T细胞中的应用以及所述CAR‑T细胞在制备用于治疗肿瘤制剂中的应用。本发明的CAR‑T细胞在对CD105阳性肿瘤细胞具有显著的杀伤作用，从而为肿瘤的过继治疗提供了新策略。