聚合酶

摘要： 在DNA复制开始期间,寡核苷酸引物由引物酶从头合成,随后由复制聚合酶延伸以完成基因组复制。引物酶-聚合酶(Prim-Pol)超家族是一组多样性的引物酶,包括复制型引物酶和参与适应性免疫的与CRISPR相关的引物酶-聚合酶(CAPPs)。尽管对这些酶的活性了解很多,但引物酶用于启动引物合成的精确机制尚未阐明。在此,研究人员确定了通过CAPP启动引物合成的分子基础,并表明这一机制在复制型引物酶中也是保守的。

摘要： 美国发现甲肝病毒复制关键步骤,近日,美国研究人员发现,病毒复制需要人类蛋白ZCCHC14和TENT4 poly(A)聚合酶之间的特定相互作用。他们还发现,口服化合物RG7834能在一个关键步骤停止复制,使病毒无法感染肝细胞。这项研究首次在甲型肝炎的动物模型中展示了针对HAV的有效药物疗法。

摘要： 目的 原核表达GⅡ.P16型诺如病毒RNA依赖RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)蛋白,并对其进行生物活性测定和晶体制备.方法 首先通过RT-PCR方法获得GⅡ.P16 RdRp完整基因并将其克隆至携带His-Tag PET28a载体,构建重组表达质粒,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并用IPTG诱导RdRp的表达,最后利用SDS-PAGE和Western blot 的方法鉴定蛋白的表达情况;采用His-Tag亲和层析和分子筛的方法纯化目的蛋白;分别使用体外酶催化实验和Hampton结晶试剂盒进行蛋白活性测定和晶体筛选.结果 构建了原核表达重组体PET28a-RdRp,并大量表达了相对分子质量约60 kDa的可溶性蛋白;经两次纯化后,获得了高纯度的目的蛋白,纯度达到90％以上;体外酶催化实验显示RdRp重组蛋白具有良好的生物活性;通过多种生长条件的筛选,获得了优质的RdRp晶体.结论 本研究成功获得的GⅡ.P16 RdRp蛋白及其晶体,为理解其生物学功能和解析其晶体结构奠定了基础.

摘要： 病毒聚合酶是一类十分重要的合成病毒自身遗传物质的蛋白质,因其相对保守而成为抗病毒药物研发的重要靶点.不同病毒聚合酶的结构和功能有着许多相似之处,因此针对某一种病毒聚合酶设计的抑制剂往往对其他病毒也有较好的抑制作用.本文作者精选了近年以聚合酶为靶点的抗病毒药物的经典案例,介绍了不同病毒聚合酶的结构和功能,并从药物化学的角度综述了多种病毒聚合酶抑制剂的研究进展.

摘要： 人类社会高速发展产生的海量信息使传统磁、光介质的信息存储能力受到巨大挑战。DNA因具有信息存储密度高、保存时间长等优点,有望成为新一代信息存储介质。日前,清华大学的一个研究团队通过近5年的研究探索,全化学合成了分子量达90道尔顿的大型镜像蛋白质——PfuDNA聚合酶,利用该高保真镜像聚合酶组装出千碱基长度的长链镜像DNA,并开发了基于镜像DNA的信息存储技术。

摘要： 2018年10月24日(罗氏新闻)——罗氏公司今日宣布,美国食品药品监督管理局已批准Xofluza(baloxavir marboxil)用于12岁及12岁以上急性、无并发症流感患者的治疗。Xofluza是首个、单剂量口服药物,通过抑制流感病毒复制所必需的酸性核酸内切酶的聚合酶而发挥作用。在非临床研究中,Xofluza对多种流感病毒有效,包括奥司他韦耐药株和禽流感病毒(H7N9、H5N1)。

摘要： 生物计算具有存储海量信息和并行操作处理数据的功能.Haomiao Su等人利用DNA链置换和聚合酶实现了一个高效且复杂的DNA逻辑电路.本文在Haomiao Su等人的试验基础上进行了改进和创新.通过DNA聚合酶和DNA内切酶,形成输入信号的扩大,在低浓度输入的基础上,实现高信号输出.

摘要： HBV长期感染是肝癌发生的原因之一.Pol作为HBV DNA聚合酶在病毒基因组复制,核衣壳的组装等生活周期中发挥至关重要的作用.本论文研究乙肝病毒Pol对肿瘤的产生以及相关的机制如细胞凋亡及细胞周期,细胞增殖,细胞癌基因表达的影响.在Trail诱导下,转染pCDNA3.1-Po1-FLAG至Hela细胞,检测Pol的对细胞凋亡和细胞周期的影响,并在caspase3活化情况下验证Pol的对细胞凋亡的影响.利用MTT检测在DOX抑制增殖的情况下Pol对细胞增殖的影响.癌症的发生、细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期等与病毒的感染相关,HBV的Pol蛋白能在Trail诱导的凋亡途径中,起抗凋亡作用，推测此作用有可能在病毒感染过程中起维持病毒的作用;DOX是一种抗肿瘤药物.在DOX抑制下,Pol有促进细胞增殖的作用,显示了Pol很可能与HBV感染引起的癌变有关.有文献报道,ROCK,VEGFC,MMP9三个癌基因与癌症的迁移和侵袭有关,当它们高表达时可以促进癌症的迁移和侵袭,所以HBV的Pol在体内与肿瘤的发生具有了相关的途径关系.以上对HBV的POL研究新结果提示进一步提示了POL的多功能效应。

摘要： 目的:构建HCV聚合酶基因的重组原核表达质粒后,研究了获得高效表达聚合酶蛋白的最适条件,同时摸索表达产物的纯化方法以及最佳变性和复性条件,研究建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的HCV聚合酶作用模板及酶浓度的最佳浓度,为筛选药物创造条件. 方法:使用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR扩增,从我国HCVRNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5bRNA聚合酶全长基因序列,构建了原核表达载体pET30aNS5b等.选择各种诱导表达条件.进一步利用Ni2+金属离子螯和亲和层析将其纯化,对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究.利用DNA-BAND96孔培养板,建立生物素标记检测HCVNS5b聚合酶活性的细胞外分子模型.同时,摸索了聚合酶作用模板以及酶浓度对聚合酶模型的影响的相关条件. 结果:测序及读码框架分析表明得到相关HCVNS5bRNA聚合酶全基因序列,在最佳表达条件下,诱导表达融合蛋白(65kDa),得到了纯度大干92.83﹪的酶蛋白,研究确定了HCV聚合酶作用模板及酶浓度的最佳条件. 结论:HCV聚合酶的高效表达和有效纯化,以及HCV聚合酶作用模板及酶浓度的最佳条件研究,为建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型及筛选药物奠定基础.

摘要： 本研究使用5'LongSAGE标签序列确定了一个新的西方蜜蜂YpsilonSchachtel(Yps)基因的转录起始位点，并进而预测了该基因的启动子序列。5’LongSAGE标签的蜜蜂基因组定位结果表明，在成年雄蜂的头部中，蜜蜂Yps基因存在23个转录起始位点，其中优势转录起始位点有4个，其起始频率分别为27.9％、23.1％、13.5％和11.5％。Yps基因TSS的碱基组成分析发现，此23个，TSS第一个碱基为A、G、T、C的概率分别为52％、39％、4％、4％。这些结果暗示RNA聚合酶和调控因子在Yps基因启动子的一个较宽范围内的互作控制了转录效率。

摘要： σs因子由rpσs基因编码，是大肠杆菌处在逆境条件下启动的复杂调控网中一个重要的控制因子。它几乎在快速生长期不表达，但是当细胞进入稳定期或者许多其他的压力情况下被强烈的诱导，控制着稳定期与逆境胁迫诱导有关的多种基因的表达。

摘要： YMDD变异是指HBV聚合酶的逆转录酶区的C亚区YMDD(酪氨酸-蛋氨酸-天门氡氨酸-天门氡氨酸)基序发生改变，其中的M(蛋氨酸)被Ⅰ(异亮氨酸)或V(缬氨酸)替代。本文总结分析了92例接受为期48周ADV联合LAM治疗的慢性乙型肝炎患者的临床资料。

摘要： 以九节茶叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,诸如dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和优化。结果表明,20 μL ISSR反应体系含：10×PCR Buffer、0.4mmol·L-1dNTPs、2U Taq DNA聚合酶、0.6μmol·μL-1引物、5 ng模板DNA。PCR扩增程序为：94°C预变性2 min,94°C变性30s,44.8°C退火30 s,72°C延伸1 min,35个循环,最后72°C延伸7min,置4°C保存。应用该ISSR体系对10份九节茶种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。

摘要： 根据Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的RNA聚合酶基因序列，设计合成了2对引物，建立了适合Ⅰ型DHV的快速检测的逆转录套式PCR法(RT-nested-PCR)。通过对Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒A66弱毒株或R85952强毒株进行反转录套式PCR检测，结果均能扩增到304 bp的条带，而正常鸭胚、健康鸭肝、鸭瘟病毒、鹅细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、法氏囊病毒、减蛋综合征病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌和鸭源多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性。该方法一次扩增的敏感性是100 pg，二次扩增的敏感性是1fg。结果表明所建立的反转录套式PCR方法适合Ⅰ型DHV的快速检测和流行病学调查，具有较好的临床应用价值。

摘要： 臭鼻克雷伯菌是重要的条件致病菌,常引起老人及婴幼儿重症护理病房的交叉感染及爆发流行,对某进行流行病学监测有重要的医学意义.用随机引物聚合酶链式反应(RAPD)对37株臭鼻克雷伯菌临床菌株基因组DNA进行分型,分析扩增产物的指纹图谱.实验结果表明,37株臭鼻克雷伯菌RAPD后可出现不同的指纹图谱,根据特异泳带C,J,F,Q的有无,可将其分7型(Ⅰ~Ⅶ).RAPD可用于检测臭鼻克雷伯菌基因组DNA的异质性,是医院内感染分子流行病学研究的好方法.

摘要： 筛选人肝脏高凝状态相关基因的全长cDNA序列.采用差异筛选法对本室建立的高凝状态大鼠肝脏差异表达基因消减cDNA文库进行筛选;以获得的差异cDNA克隆为模板,采用PCR方法扩增目的片段;以PCR产物作探针,用噬菌斑原位杂交法筛选人肝脏cDNA文库,经初筛、二筛和三筛后,将获得的阳性克隆转入E.coli BM 25.8,使λTripIEx环化成质粒pTripIEx,经酶切鉴定后进行DNA测序.

摘要： 筛选人肝脏高凝状态相关基因的全长cDNA序列.采用差异筛选法对本室建立的高凝状态大鼠肝脏差异表达基因消减cDNA文库进行筛选;以获得的差异cDNA克隆为模板,采用PCR方法扩增目的片段;以PCR产物作探针,用噬菌斑原位杂交法筛选人肝脏cDNA文库,经初筛、二筛和三筛后,将获得的阳性克隆转入E.coli BM 25.8,使λTripIEx环化成质粒pTripIEx,经酶切鉴定后进行DNA测序.

摘要： 本发明涉及一种便携式实时PCR装置及利用便携式实时PCR装置的PCR测量方法，根据本发明的实施例的便携式实时PCR装置包括：底座部，形成有设置空间；多个下部加热部，设置于所述底座部的所述设置空间中；下部光学测量部，设置于所述底座部，并布置在与所述下部加热部不同的位置，提供测量光或接收所述测量光；腔室组件，包括分别安置于所述下部加热部及所述下部光学测量部的多个腔室部，所述腔室部配备为能够从任意一个所述下部加热部移动到另一个所述下部加热部或所述下部光学测量部，其中，所述腔室部包括：腔室部主体，用于收容腔室单元，在所述腔室单元形成有在内部收容检体单元的检体单元收容空间，其中，所述腔室单元包括：腔室单元主体，形成有所述检体单元收容空间；及盖单元，从上方遮挡所述腔室单元主体的所述收容空间，其中，所述检体单元的作为宽度对比高度的比例的纵横比形成为大于0且小于1。

摘要： 本申请涉及生物工程的技术领域，具体公开了一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及应用，包含该抗体的聚合酶反应体系及应用。所述Taq DNA聚合酶单克隆抗体为单克隆抗体1C4；所述单克隆抗体1C4包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区和轻链可变区均由决定簇互补区和框架区组成；所述重链可变区和轻链可变区的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；以及该Taq DNA聚合酶单克隆抗体的应用；包含该Taq DNA聚合酶单克隆抗体的反应体系和试剂盒及各自的应用。本申请提供的Taq DNA聚合酶单克隆抗体能够很好的达到热启动的效果，且成本较低，可有效替代进口抗体。

摘要： 本发明提供了一种融合Bsu DNA聚合酶和Bsu DNA聚合酶突变体及其基因、质粒、基因工程菌，涉及生物技术领域。本发明提供的融合Bsu DNA聚合酶，含有Bsu DNA聚合酶片段和融合于所述Bsu DNA聚合酶片段N端的蛋白片段，能够在大肠杆菌中高效表达，表达纯度可达到95％以上。本发明提供的Bsu DNA聚合酶突变体，将融合Bsu DNA聚合酶中Bsu DNA聚合酶片段的第41位Aps突变为Glu，第194位Val突变为Ala，缺失了3′→5′核酸外切酶活性，能够在大肠杆菌中高效表达，表达纯度可达到97％以上，能够和其他相关蛋白相互作用实现恒温扩增。

摘要： 本公开内容提供了用于核酸聚合的组合物、方法、试剂盒、系统和装置。具体地，提供了允许核酸扩增的修饰的聚合酶及其生物活性片段。在一个方面，本公开内容涉及用于核酸测序、基因分型、拷贝数变异分析、双端测序和其它形式的遗传分析的修饰的聚合酶。在一些方面，本公开内容涉及用于产生用于各种下游过程的核酸文库或核酸模板的修饰的聚合酶。在一些方面，本公开内容涉及可跨聚合酶的种类或家族转移以提供具有改变的催化性质的新型聚合酶的同源氨基酸突变的鉴定。在一些方面，本公开内容提供了相较于参照聚合酶具有增强的催化性质的修饰的聚合酶。

摘要： 本发明提供了一种融合Bsu DNA聚合酶和Bsu DNA聚合酶突变体及其基因、质粒、基因工程菌，涉及生物技术领域。本发明提供的融合Bsu DNA聚合酶，含有Bsu DNA聚合酶片段和融合于所述Bsu DNA聚合酶片段N端的蛋白片段，能够在大肠杆菌中高效表达，表达纯度可达到95％以上。本发明提供的Bsu DNA聚合酶突变体，将融合Bsu DNA聚合酶中Bsu DNA聚合酶片段的第41位Aps突变为Glu，第194位Val突变为Ala，缺失了3′→5′核酸外切酶活性，能够在大肠杆菌中高效表达，表达纯度可达到97％以上，能够和其他相关蛋白相互作用实现恒温扩增。

摘要： 本发明公开了一种修饰的DNA聚合酶、用于调控DNA聚合酶活性的核酸适配体和热启动DNA聚合酶，修饰的DNA聚合酶包括DNA聚合酶片段和修饰在DNA聚合酶片段N端的G‑四链体结合肽；核酸适配体的序列的二级结构包含一个G‑四链体；热启动DNA聚合酶包括修饰的DNA聚合酶和核酸适配体，核酸适配体用于在第一预设温度时结合于DNA聚合酶的G‑四链体结合肽，以抑制DNA聚合酶的活性，并用于在第二预设温度时脱离于DNA聚合酶的G‑四链体结合肽，以恢复DNA聚合酶的活性；其中，第二预设温度高于第一预设温度。将本发明构建的热启动DNA聚合酶应用于等温扩增时，不会产生非特异性扩增，这在分子诊断中具有很大的应用价值。

摘要： 本发明涉及具有DNA聚合酶和3'‑5'外切核酸酶活性的酶。具体而言，本发明涉及具有海洋来源的DNA聚合酶II活性和3'‑5'外切核酸酶活性的热不稳定酶。此外，本发明涉及主要发挥3'‑5'活性，即不存在聚合酶活性的DNA聚合酶。本发明还涉及外切核酸酶活性用于降解双链DNA的3'‑5'链从而例如在重组克隆过程中或在去除污染核酸分子的过程中进行单链悬突的用途。

摘要： 本申请涉及生物工程的技术领域，具体公开了一种Taq DNA聚合酶单克隆抗体及应用，包含该抗体的聚合酶反应体系及应用。所述Taq DNA聚合酶单克隆抗体为单克隆抗体1C4；所述单克隆抗体1C4包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区和轻链可变区均由决定簇互补区和框架区组成；所述重链可变区和轻链可变区的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；以及该Taq DNA聚合酶单克隆抗体的应用；包含该Taq DNA聚合酶单克隆抗体的反应体系和试剂盒及各自的应用。本申请提供的Taq DNA聚合酶单克隆抗体能够很好的达到热启动的效果，且成本较低，可有效替代进口抗体。

摘要： 本发明的主题是融合单链DNA聚合酶Bst及其制备方法，该融合单链DNA聚合酶Bst在该聚合酶的N端使用由氨基酸序列Gly‑Ser‑Gly‑Gly‑Val‑Asp的六个氨基酸组成的接头与NeqSSB蛋白连接，其中给定的聚合酶以三种不同的变体存在。此外，本发明的主题是编码融合DNA聚合酶NeqSSB‑Bst全长、大片段、短片段的核酸分及它们的用途。

摘要： 本申请实施例提供了一种数字聚合酶链式反应芯片聚合酶链式反应芯片及其制备方法和数字聚合酶链式反应装置，以解决现有聚合酶链式反应芯片加工工艺复杂、操作复杂、容易产生气泡、以及使用起来工艺成本高的技术问题。该数字聚合酶链式反应芯片包括：第一功能层，所述第一功能层的表面构造为对聚合酶链式反应溶液具有排斥性；以及多个第二功能区域，分别设置在所述第一功能层的表面，构造为对所述聚合酶链式反应溶液具有亲和性。