多重PCR

摘要： 为了准确快速鉴别检测牛源肉孢子虫的种类,本研究根据毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫5种牛源肉孢子虫的18S rRNA或COX1基因序列设计多重PCR引物,优化并建立了能够同时检测这5种牛源肉孢子虫的多重PCR方法。结果显示,多重PCR对毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫扩增产物的大小依次为1007 bp、643 bp、535 bp、400 bp和287 bp。特异性试验结果显示,该方法除了对毛样肉孢子虫、黑氏肉孢子虫、人肉孢子虫、枯氏肉孢子虫和罗氏肉孢子虫可扩增出相应大小的目的条带外,对米氏肉孢子虫、刚地弓形虫、犬新孢子虫的检测结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对5种牛源肉孢子虫重组质粒标准品的检测下限均为6拷贝/μL,敏感性较高。利用本研究建立的多重PCR方法对34份随机采集的牛肉样品检测,结果显示,多重PCR与肌肉压片镜检法的阳性符合率为100%,阴性符合率为92%,总符合率为94.1%,表明本实验建立的该多重PCR方法可用于临床检测。本研究首次建立了牛源肉孢子虫的多重PCR鉴别检测方法,为牛和人肉孢子虫病诊断和分子流行病学研究提供更有效的技术手段。

摘要： 芥菜型油菜细胞质雄性不育(CMS)系WJS01A是一种稳定不育系,其败育彻底,不受环境条件的影响。该研究从形态、细胞特征、遗传和分子生物学等方面对WJS01A进行鉴定,以揭示其败育机制,为该不育系在油菜育种中的应用提供理论基础。结果表明:(1)不育系WJS01A的花序结构与正常芥菜型油菜差异不大,但在花蕾饱满度、花朵张开度及花瓣长度和宽度方面略低于正常的芥菜型油菜;它的雌蕊发育正常,但花药、花丝缩短,致使雄蕊高度显著低于柱头,花药白化无花粉产生。(2)将WJS01A衍生的甘蓝型油菜背景不育系WNJ01A以及Polima(Pol)、Ogura(Ogu)和Kosena(Kos)不育系分别与其恢复系或保持系测交,结果显示来源于WJS01A的不育类型与Pol、Ogu和Kos等材料的恢保关系明显不同,仅Hui01可以恢复WNJ01A的育性。(3)不育系WJS01A属于无花粉囊型不育,败育时期为花药原基到孢原细胞时期。(4)线粒体不育基因多重PCR可以明显区分WJS01A、WNJ01A与Pol、Ogu、Kos,但是目前的引物组合不能区分WJS01A与正常的芥菜型油菜。(5)线粒体基因组的限制性片段长度多态性(RFLP)分析表明,在所检测的8个探针/酶组合中均可以将不育系WJS01A与其他4种细胞质雄性不育系区分开,说明WJS01A是一种显著不同于Pol、Ogu和Kos等的细胞质雄性不育类型。WJS01A的利用可以丰富和拓宽当前油菜杂种优势利用的遗传基础,为缓解当前油菜杂种优势利用中不育胞质单一性问题提供新的种质。

摘要： 为建立同时检测淡水鱼中华支睾吸虫、东方次睾吸虫和日本全冠吸虫的三重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的各吸虫参考序列中保守区域设计3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了3种吸虫囊蚴的多重PCR检测方法,并利用该方法对52尾淡水鱼样品中吸虫囊蚴的感染情况进行检测。结果显示,本研究所建立的方法对东方次睾吸虫、华支睾吸虫、日本棘隙吸虫能分别扩增到508 bp、311 bp和208 bp的目的条带,对鸭对体吸虫、舟形嗜气管吸虫、横川后殖吸虫和卷棘口吸虫的基因扩增结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对3种吸虫囊蚴重组质粒标准品检测下限均为104拷贝/μL。利用该三重PCR方法对淡水鱼临床样品进行检测,结果显示该方法与形态学检测方法结果一致。本研究在国内首次建立了淡水鱼3种吸虫囊蚴多重PCR检测方法,为鱼源性吸虫病的快速检测及鉴别诊断提供了技术手段,为鱼源性寄生虫病的防控奠定了基础。

摘要： 【目的】建立能同时检测新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)、新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)和鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的方法。【方法】根据NDRV、NGPV和DTMUV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增NDRV、NGPV和DTMUV的片段大小分别为594、467、328 bp,建立可同时检测NDRV、NGPV和DTMUV的多重PCR检测方法,对其进行特异性、敏感性及重复性检验,并在临床上进行初步应用。【结果】特异性检测结果表明,该多重PCR方法可同时扩增NDRV、NGPV、DTMUV的目的片段,且未扩增出其他鸭常见病原;敏感性结果显示NDRV、NGPV和DTMUV的检测下限分别为8.80×10^(4)、4.03×10^(4)、2.15×10^(4)copies·μL^(−1);重复性试验表明该方法具有良好的重复性。采用建立的多重PCR方法对167份临床样品进行检测结果显示,其检测结果与该3种病毒的常规单一PCR检测结果符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,适用于临床样品中存在以上3种病原感染的检测和流行病学调查。

摘要： 为提高烟草白粉病隐性抗病基因(感病基因)NtMLO1(M1)和NtMLO2(M2)在分子标记辅助选择育种中基因型的选择效率,根据已报道的M1和M2突变基因序列,设计4对单基因特异性引物,组成2个双重PCR反应体系,分别用于同时扩增M1和M2突变型或M1和M2野生型等位基因。结果表明,建立的2个双重PCR体系扩增的特异性片段与单重PCR体系扩增的片段完全吻合,突变基因纯合体只在突变基因多重PCR体系中产生191和306 bp的特异性片段,野生基因纯合体只在野生基因多重PCR体系中产生437和652 bp的特异性片段,杂合体在2个反应体系中均有特异性片段。利用该体系可经过1次或2次PCR扩增准确检测出回交转育过程中回交或自交后代M1和M2的基因型,加快抗病品种育种进程。

摘要： 为了同时检测奶牛乳房炎中的6种主要致病菌,本试验分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、绿脓杆菌的eta基因、停乳链球菌的16srRNA基因、致病性大肠杆菌的Phoa基因、牛支原体的opp D/F基因设计合成了6对特异性引物。在建立并验证单一PCR的基础上,构建多重PCR反应体系,对其反应体系进行优化,验证了该方法的特异性和敏感性。结果表明,该6重PCR检测方法对奶牛乳房炎的其他病原菌没有特异性扩增,对牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌最低检出终浓度分别为1.1×10^(5)、1.41×10^(6)、1.6×10^(3)、3×10^(5)、3.8×10^(4)和7.3×10^(3)拷贝/μL。对采集的宁夏地区98份临床乳房炎病例乳样的检测结果显示:牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的检出率分别为10.2%(10/98)、14.2%(14/98)、14.2%(14/98)、12.2%(12/98)、18.3%(18/98)、18.3%(18/98)。本研究建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性及敏感性,可用于奶牛乳房炎6种主要致病菌的检测及流行病学调查。

摘要： 玉米杂交种纯度的优劣直接决定其产量,常规检测方法采用若干单引物进行若干次电泳检测,鉴定周期长,效率低,不能及时反映杂交种纯度,难以及时指导大田生产。为了提高玉米种子纯度检测的准确性,建立稳定高效的多重PCR检测技术,本研究以‘德美亚1号’、‘德美亚2号’、‘德美亚3号’及其父母本为试验材料,通过比较不同DNA提取方法,确定了适宜多重PCR检测的SDS法;同时针对‘德美亚’不同系列,从国标玉米核心40对引物中筛选多态性并适合组建多重PCR的引物,试验最终为‘德美亚1号’组建了两重PCR,‘德美亚2号’和‘德美亚3号’组建了3重PCR,并尝试了自交系4重和5重引物组合,采用适宜的琼脂糖凝胶电泳检测方法,都获得了很好的扩增效果,试验所采用的扩增体系和扩增程序适宜2~5重PCR反应,并能有效应用于玉米杂交种的种子纯度鉴定。为今后‘德美亚’系列玉米品种鉴定提供了便利,也为其它玉米品种鉴定提供了思路。

摘要： 国家蚕桑产业技术体系岗位专家、华南农业大学刘吉平教授带领的团队基于高通量测序技术与传统植物病原微生物研究方法,开展桑树真菌性病害褐斑病和轮纹病的病原菌分离鉴定及病原菌的检测技术研究。在确定桑树褐斑病的病原菌为桑新褐斑壳丰孢(Neophloeospora maculans,N.maculans)、桑树轮纹病的病原菌为桑膝节霉(Gonatophragmium triuniae,G.triuniae)的基础上,为快速且准确地检测这2种病害的病原菌,研究团队设计了灵敏度分别高达100 fg/μL和1 pg/μL的多重PCR特异性引物,用于对病原菌侵染早期桑树叶片的诊断,以及对桑园土壤和残留落叶中的病原菌检测。以上研究开发成果已经公开发表于《华南农业大学学报》。

摘要： 为有效确定引起鸡痛风的病原,本试验建立了同时检测鸡星状病毒(CAstV)、禽肾炎病毒(ANV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的多重PCR方法。针对IBV的N基因、CAstV和ANV的ORF-1b基因分别设计了3对特异性引物,通过优化退火温度等反应条件建立了多重PCR检测方法,并评估了该方法的特异性和敏感性,而后对临床痛风样本进行了检测。结果显示,多重PCR方法对3种病毒扩增产物的大小分别为1 600 bp(IBV)、794 bp(ANV)和350 bp(CAstV);该多重PCR检测禽马立克氏病毒、血清4型禽腺病毒、减蛋综合征病毒和J亚型禽白血病病毒均为阴性;病毒最低检测限IBV为1.96×10^(2) copies/μL,ANV为2.10×10^(2) copies/μL,CAstV为1.33×10^(5)copies/μL;多重PCR对临床病料的检测结果与单项PCR的检测结果一致。结果表明,本试验建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和可靠性,为临床鸡痛风的诊断提供了准确、有效的技术手段。

摘要： 为了建立同时检测引起奶牛乳房炎的主要4种致病菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和肺炎克雷伯氏菌)的多重PCR检测方法,根据参考菌株合成了4种细菌的特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,多重PCR试验特异性地检测了这4种病原菌;敏感性试验显示,对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和肺炎克雷伯氏菌基因组DNA的最低检测量依次为17.11、19.16、109.6、20.89 pg/μL;临床样品检测显示,该方法对送检的35份临床奶样进行检测,阳性检出率为51.4%,比细菌分离检出率高。建立的多重PCR方法对乳房炎病原检测和临床治疗用药具有指导意义。

摘要： 根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法.敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV).该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性.200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80％(160/200),PRV感染率为21％(42/200),PRRSV的感染率为78％(156/200).200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0％(112/200).该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义.

摘要： 根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法.敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV).该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性.200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80％(160/200),PRV感染率为21％(42/200),PRRSV的感染率为78％(156/200).200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0％(112/200).该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义.

摘要： 根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法.敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV).该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性.200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80％(160/200),PRV感染率为21％(42/200),PRRSV的感染率为78％(156/200).200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0％(112/200).该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义.

摘要： 根据GenBank登录的猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的参考基因序列,设计3对引物分别用于扩增PCV2的ORF2基因、PRV的gE基因、PRRSV的N基因的目的片段,通过优化反应中各个影响因素,建立了PRV、PCV2、PRRSV的多重PCR(mPCR)检测方法.敏感性和特异性的结果表明,该方法对这3种病毒的最低核酸检出量分别为32.5(PRV)、25.2(PCV2)、35.9pg(PRRSV).该方法对猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒1型(PCV1)、大肠杆菌、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(TGE)等病毒的检测结果均为阴性.200份临床样品的多重PCR结果表明,PCV2感染率为80％(160/200),PRV感染率为21％(42/200),PRRSV的感染率为78％(156/200).200份临床样品主要为PCV2和PRRSV混合感染,阳性率达56.0％(112/200).该方法的建立对这3种病毒病的早期快速检测和指导临床实践具有十分重要的意义.

摘要： 选取13个微卫星标记组合建立了2个四重PCR体系和1个五重PCR体系,对鄱阳湖水系草鱼野生与增殖放流群体的遗传多样性进行了检测.研究结果表明,3个多重PCR体系中13个微卫星位点共检测到等位基因194个,野生群体与增殖放流群体草鱼的平均期望杂合度(He)为0.7172-0.9339之间.群体间遗传分化指数(Fst)及AMOVA分析表明，群体间遗传分化并不显著(Fst=0.050)，野生群体与增殖放流群体间遗传分化不明显，而且大部分的变异来自于群体内。因此，鄱阳湖水系野生草鱼及增殖放流草鱼具有较高的遗传多样性，但野生群体遗传多样性高于增殖放流群体，野生群体与增殖放流群体之间遗传分化并不明显。

摘要： 选取13个微卫星标记组合建立了2个四重PCR体系和1个五重PCR体系,对鄱阳湖水系草鱼野生与增殖放流群体的遗传多样性进行了检测.研究结果表明,3个多重PCR体系中13个微卫星位点共检测到等位基因194个,野生群体与增殖放流群体草鱼的平均期望杂合度(He)为0.7172-0.9339之间.群体间遗传分化指数(Fst)及AMOVA分析表明，群体间遗传分化并不显著(Fst=0.050)，野生群体与增殖放流群体间遗传分化不明显，而且大部分的变异来自于群体内。因此，鄱阳湖水系野生草鱼及增殖放流草鱼具有较高的遗传多样性，但野生群体遗传多样性高于增殖放流群体，野生群体与增殖放流群体之间遗传分化并不明显。

摘要： 选取13个微卫星标记组合建立了2个四重PCR体系和1个五重PCR体系,对鄱阳湖水系草鱼野生与增殖放流群体的遗传多样性进行了检测.研究结果表明,3个多重PCR体系中13个微卫星位点共检测到等位基因194个,野生群体与增殖放流群体草鱼的平均期望杂合度(He)为0.7172-0.9339之间.群体间遗传分化指数(Fst)及AMOVA分析表明，群体间遗传分化并不显著(Fst=0.050)，野生群体与增殖放流群体间遗传分化不明显，而且大部分的变异来自于群体内。因此，鄱阳湖水系野生草鱼及增殖放流草鱼具有较高的遗传多样性，但野生群体遗传多样性高于增殖放流群体，野生群体与增殖放流群体之间遗传分化并不明显。

摘要： 选取13个微卫星标记组合建立了2个四重PCR体系和1个五重PCR体系,对鄱阳湖水系草鱼野生与增殖放流群体的遗传多样性进行了检测.研究结果表明,3个多重PCR体系中13个微卫星位点共检测到等位基因194个,野生群体与增殖放流群体草鱼的平均期望杂合度(He)为0.7172-0.9339之间.群体间遗传分化指数(Fst)及AMOVA分析表明，群体间遗传分化并不显著(Fst=0.050)，野生群体与增殖放流群体间遗传分化不明显，而且大部分的变异来自于群体内。因此，鄱阳湖水系野生草鱼及增殖放流草鱼具有较高的遗传多样性，但野生群体遗传多样性高于增殖放流群体，野生群体与增殖放流群体之间遗传分化并不明显。

摘要： 选取13个微卫星标记组合建立了2个四重PCR体系和1个五重PCR体系,对鄱阳湖水系草鱼野生与增殖放流群体的遗传多样性进行了检测.研究结果表明,3个多重PCR体系中13个微卫星位点共检测到等位基因194个,野生群体与增殖放流群体草鱼的平均期望杂合度(He)为0.7172-0.9339之间.群体间遗传分化指数(Fst)及AMOVA分析表明，群体间遗传分化并不显著(Fst=0.050)，野生群体与增殖放流群体间遗传分化不明显，而且大部分的变异来自于群体内。因此，鄱阳湖水系野生草鱼及增殖放流草鱼具有较高的遗传多样性，但野生群体遗传多样性高于增殖放流群体，野生群体与增殖放流群体之间遗传分化并不明显。

摘要： 结核病对畜牧业及人类健康带来了极大的威胁，快速准确诊断对防治该病具有重要意义。本研究针对结核分枝杆菌群四个特异性基因16sRNA、IS6110、RV2652、RV3873设计引物，建立了一种多重PCR方法。通过筛选优化引物浓度、退火温度、M92+浓度和dNTP浓度，确定了最佳反应条件，扩增产物的大小分别为824 bp、621 bp、418 bp和254 bp，能特异性检测并鉴别出非结核分枝杆菌(824 bp I条带)、卡介苗(824 bp和621 bp 2条带)、牛分枝杆菌(824 bp、62l bp和254 bp3条带)和结核分枝杆菌(4条带).检测灵敏度达到50个菌／模板。对42份牛结核菌素皮内变态反应阳性牛的肺淋巴结样本和115份肺结核病人的痰液样品进行了检测，其检出率或准确率明显高于传统方法。

摘要： 本发明提供了一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物，包括多重PCR特异性引物组1和多重PCR特异性引物组2，所述多重PCR特异性引物组1为SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:32所示的核苷酸序列组成的引物组，所述多重PCR特异性引物组2为SEQ ID NO:33～SEQ ID NO:64所示的核苷酸序列组成的引物组。本发明还提供了一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物和方法，本发明检测方法通用性更高，本发明检测方法能够在仅部分知晓或未知晓融合基因结构的情况下，准确灵敏地检测融合基因。

摘要： 根据本发明的一实施例，揭示一种多重PCR装置。上述多重PCR装置，其特征在于，包括多重PCR芯片，上述多重PCR芯片同时探测相互不同的多个核酸分子，将与上述核酸分子的相互不同的扩增的序列特异性地杂交的多个杂交反应用探针相隔而固着在上述多重PCR芯片。

摘要： 本发明提供了一种扩增BRCA1/2基因的多重PCR引物及一种多重PCR引物的设计方法，所述多重PCR引物包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:234所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种多重PCR引物的设计方法。本发明提供的多重PCR引物可以快速的完成BRCA1/2目标序列的富集，进而进行NGS文库构建和测序，实现高度自动化、高通量的遗传性乳腺癌BRCA1/2基因检测。

摘要： 本发明公开一种水稻上两种种传病害的多重PCR检测试剂盒及其专用引物和多重PCR检测方法。本发明所述两种种传病害是水稻白叶枯病和水稻细菌性条斑病。本发明试剂盒及方法设有一对检测水稻白叶枯病菌的专用引物X‑b，其目标产物片段长度为461bp。一对快速检测水稻细菌性条斑病菌的专用引物X‑t，目标产物片段长度为348bp，在同时检测该两种病的病原时的最优多重PCR反应体系和反应条件。本发明同时检测该两种病原的检测程序、操作简便，快速准确，成本较低，无需再进行克隆、测序和序列比对。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 本发明公开了用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合和多重PCR试剂盒及检测方法。该多重PCR引物组合包括：用于特异性扩增杂色曲霉素A脱氢酶基因ver‑1的引物对，该引物对包括具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的上游引物及具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的下游引物；用于特异性扩增杂色曲霉素B基因verB的引物对，该引物对包括具有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的上游引物及具有如SEQ ID No.4所示核苷酸序列的下游引物；用于特异性扩增真菌ITS序列的引物对。本发明的多重PCR引物组合特异性强、灵敏度高，相互之间不存在干扰。

摘要： 本发明涉及一种能够同时检测多个靶基因的多重PCR芯片及利用其的PCR方法，更详细地，提供如下多重PCR芯片及利用其的多重PCR方法，即，在一个或多个反应室的内部形成在空间上分离的多个粒子形成槽，并将溶液状态的探针注入所述粒子形成槽后，施加物理刺激以形成探针粒子，且使所述粒子形成槽的平面形状不同或使形成于所述粒子形成槽的内侧面的粒子固定体的形态和图案不同，并且，通过将包括与彼此不同的核酸分子的序列特异性杂交的引物的探针注入所述粒子形成槽，能够基于所述探针粒子的位置和形态以及形成于所述探针粒子的内部的所述粒子固定体的形态和图案来检测多个靶基因，从而能够进行同时多重检测。

摘要： 本发明公开了用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合和多重PCR试剂盒及检测方法。该多重PCR引物组合包括：用于特异性扩增杂色曲霉素A脱氢酶基因ver‑1的引物对，该引物对包括具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列的上游引物及具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的下游引物；用于特异性扩增杂色曲霉素B基因verB的引物对，该引物对包括具有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的上游引物及具有如SEQ ID No.4所示核苷酸序列的下游引物；用于特异性扩增真菌ITS序列的引物对。本发明的多重PCR引物组合特异性强、灵敏度高，相互之间不存在干扰。

摘要： 本发明提供一种TERT基因全外显子二代测序多重PCR引物组合物、试剂及多重PCR‑打断控制系统。所述用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQ ID NO：01至SEQ ID NO：32所示的引物。本发明提供的所述TERT基因全外显子二代测序多重PCR引物组合物、试剂及多重PCR‑打断控制系统，解决了以下现有的技术问题:1.现有技术主要检测TERT基因的点突变，检测范围有限；2.实时荧光定量PCR检测、基因芯片只能检测已知位点；3.Sanger测序检验长度小于800bp的范围；4.不能检测低频突变；5.检测多个位点时操作繁琐、费用高。

摘要： 本发明提供一种用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及多重PCR‑打断控制系统。所述用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQ ID NO：01至SEQ ID NO：36所示的引物。本发明提供的所述用于BRAF基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及多重PCR‑打断控制系统，解决了以下现有的技术问题:1.现有技术主要检测BRAF基因的点突变，检测范围有限；2.实时荧光定量PCR检测、基因芯片只能检测已知位点；3.Sanger测序检验长度小于800bp的范围；4.不能检测低频突变；5.检测多个位点时操作繁琐、费用高。