淡水鱼中3种吸虫囊蚴多重PCR检测方法的建立

摘要

为建立同时检测淡水鱼中华支睾吸虫、东方次睾吸虫和日本全冠吸虫的三重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的各吸虫参考序列中保守区域设计3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了3种吸虫囊蚴的多重PCR检测方法,并利用该方法对52尾淡水鱼样品中吸虫囊蚴的感染情况进行检测。结果显示,本研究所建立的方法对东方次睾吸虫、华支睾吸虫、日本棘隙吸虫能分别扩增到508 bp、311 bp和208 bp的目的条带,对鸭对体吸虫、舟形嗜气管吸虫、横川后殖吸虫和卷棘口吸虫的基因扩增结果均为阴性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对3种吸虫囊蚴重组质粒标准品检测下限均为104拷贝/μL。利用该三重PCR方法对淡水鱼临床样品进行检测,结果显示该方法与形态学检测方法结果一致。本研究在国内首次建立了淡水鱼3种吸虫囊蚴多重PCR检测方法,为鱼源性吸虫病的快速检测及鉴别诊断提供了技术手段,为鱼源性寄生虫病的防控奠定了基础。