基于通用引物PCR以及多重PCR方法的五种生物恐怖细菌悬浮芯片检测模型的建立以及初步评价

摘要

目的：分别运用引物PCR和多重PCR方法结合编码微球悬浮芯片技术，建立炭疽芽胞杆菌(Bacillusanthracis，B.a)、鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis Y.p)、布鲁菌(Brucellaspp.Bru)、上拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis、Ft)和类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.)的通用型基悬浮芯片和多垂PCR悬浮芯片检测模型，用于生物恐怖细菌的快速、高通量筛检。方法：针对几种生物恐怖细菌的16SrDNA序列，设计种/属特异性探针，选择16SrDNA通用引物341a，519b扩增基因组DNA，建立通用型基因悬浮芯片方法;针对几种细菌特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针，经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段，建立基于多重PCR的悬浮芯片检测方法：并通过对白色粉末介质中模拟添加目的菌进行检测，考察了两种方法对实际样本的检测能力。结果：基于多重PCR的悬浮芯片检测体系能够正确的捡测和鉴定五种生物恐怖因子，通用型基因悬浮芯片仅能在属的水平对五种生物恐怖因子进行鉴定，两种方法检测灵敏度相似，均能满足恐怖样本的高通量筛查。结论：建立了五种生物恐怖因子通用基因悬浮芯片和基于多重PCR的基因悬浮芯片的快速检测方法。