人源化

摘要： 早期抗体药物是鼠源单克隆抗体,存在免疫原性强、半衰期短等问题。历经数十年的发展,抗体药物从最初的鼠源单抗,逐步发展为人鼠嵌合抗体、人源化抗体及全人源化抗体。通过片段重组、位点修饰、药物偶联等方法,科研人员研发了包括抗体融合蛋白、抗体偶联药物、双特异性抗体、小分子抗体片段等形式多样的抗体药物。抗体药物在恶性肿瘤、自身免疫病、感染性疾病的治疗上发挥重要作用。通过对抗体药物人源化历程,不同类型的抗体结构和特点,以及抗体药物在新型冠状病毒肺炎治疗中的应用进行综述,并对抗体药物的发展前景进行展望,以期为我国抗体药物的研发提供参考。

摘要： 以酵母作为宿主生产的蛋白在生活和医疗中有着广泛应用,但其特有的对蛋白进行高甘露糖基化修饰会造成蛋白免疫原性改变、半衰期缩短等负面影响。通过工程改造,能够减弱酵母中蛋白的甘露糖基化修饰程度,且在毕赤酵母(Pichia pastoris)中已经能够产生唾液酸化糖蛋白。介绍酵母系统在生产药物蛋白方面的应用,简述酵母N-糖基化修饰过程以及目前酵母人源化研究进展。

摘要： 目的建立BALB/c-Nude裸小鼠为背景的人源化ACE2(hACE2)转基因裸小鼠动物模型。方法利用hACE2转基因小鼠与雄性BALB/c-Nude裸小鼠杂交获得F1代,将F1代hACE2小鼠与BALB/c-Nude裸小鼠回交获得F2代,再将F2代hACE2小鼠互交获得F3代hACE2转基因裸小鼠。对F3代中hACE2转基因裸小鼠的生长发育、生理指标及免疫指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠和BALB/c-Nude裸小鼠对比分析。结果(1)hACE2转基因裸小鼠生长发育指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠和BALB/c-Nude裸小鼠无明显差异。(2)hACE2转基因裸小鼠生理指标中,建立的hACE2转基因裸小鼠与BALB/c-Nude裸小鼠相似,病理解剖观察发现,小鼠体内均无胸腺。脏器系数结果与BALB/c-Nude裸小鼠比较,脾系数和肝系数出现显著性差异(P<0.05)。血常规检测指标与C57BL/6J野生型小鼠、hACE2小鼠比较,中性粒细胞百分比(NEU)、淋巴细胞百分比(LYM)和单核细胞百分比(MONO)均出现显著性差异(P<0.01)。(3)hACE2转基因裸小鼠免疫指标中,与C57BL/6J野生型小鼠和hACE2小鼠比较,CD45+CD3+、CD45+CD3+CD4+、CD45+CD11B+和CD45+NK+均出现显著差异(P<0.01),与BALB/c-Nude裸小鼠无明显差异。结论成功建立了BALB/c-Nude为背景的hACE2转基因免疫缺陷裸小鼠动物模型。

摘要： 人肌肉基因首次插入面包酵母DNA刘霞研究人员成功将人类肌肉基因插入面包酵母的DNA中,这是科学家首次将如此重要的人类特征植入酵母细胞,得到的人源化酵母模型,可作为药物筛选和癌症研究工具。研究人员表示,与人类细胞或组织相比,酵母是一种神奇的有机体,因为它生长简单,其DNA可被很容易地修改,许多关键发现,如细胞分裂周期,都得益于酵母。

摘要： 目的 建立肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)基因人源化小鼠模型,同时建立TNFRSF4基因敲除小鼠模型,为针对TNFRSF4靶点的肿瘤治疗性抗体研发和筛选提供有效的小鼠模型,并为研究TNFRSF4在免疫过程中的作用机制提供小鼠模型.方法 利用CRISPR/Cas9技术,建立TNFRSF4基因人源化和敲除小鼠模型,利用PCR、RT-PCR、免疫组织化学、流式细胞术等方法鉴定及比较分析人源化小鼠、敲除小鼠和野生型小鼠的差异.结果 获得表达人源TNFRSF4基因小鼠和TNFRSF4基因敲除小鼠.在TNFRSF4人源化小鼠中稳定表达人源TNFRSF4,未检测到小鼠TNFRSF4表达.在TNFRSF4敲除小鼠中未检测到TNFRSF4表达.TNFRSF4人源化及敲除小鼠出生后6个月内均正常存活,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常.结论 利用CRISPR/Cas9技术构建TNFRSF4人源化小鼠及敲除小鼠,可用于筛选及评估与TNFRSF4基因相关的治疗性抗体及药物或研究TNFRSF4在免疫过程中作用机制.

摘要： 目的 建立细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)基因人源化小鼠模型,为靶向CTLA4的肿瘤治疗性抗体研发和筛选提供有效的小鼠模型.方法 利用CRISPR/Cas9技术,建立CTLA4基因人源化和敲除小鼠模型,利用PCR、RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学和流式细胞术的方法对其进行鉴定及分析.将小鼠黑色素瘤细胞株(B16)注射到CTLA4人源化小鼠皮下,观察腹腔注射CTLA4单克隆抗体伊匹木(ipilimumab)的抗肿瘤效果.结果 CTLA4人源化小鼠可以稳定表达人源CTLA4,而不表达鼠源CTLA4.CTLA4人源化小鼠出生后6个月内正常存活,组织病理学及免疫系统未见明显异常.同时在CTLA4人源化小鼠中,伊匹木减缓肿瘤生长速度.CTLA4基因敲除小鼠不表达CTLA4基因,在出生后3～5周内由于自身免疫疾病死亡.结论 同时建立了CTLA4人源化和敲除小鼠.CTLA4人源化小鼠可用于筛选与CTLA4基因相关的治疗性抗体或药物.

摘要： 目的 建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法.方法 利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物纯度,Western blot检测产物特异性,同时比较重组抗体的活性.结果 筛选得到1株稳定表达的细胞株,收液后蛋白BCA定量为135.9 mg·L-1.纯化后获得的目的蛋白相对分子质量约为185 kD,蛋白纯度在99％以上,与商品化的"赫赛汀"一致;活性检测显示其活性与"赫赛汀"相当,细胞实验揭示其能显著抑制BT-474细胞增殖及胞内HER2的表达.结论 该方法筛选获得的重组蛋白,与商品化药物性质基本一致,这为重组抗体药物的大规模悬浮培养放大和工业化生产奠定了基础.

摘要： 目的 比较人源化CD19嵌合抗原受体(CAR)-T细胞与鼠源CD19 CAR-T细胞的功能.方法 收集8名健康志愿者的外周静脉血T细胞,行人源化和鼠源CD19 CAR慢病毒感染,制备人源化和鼠源CD19 CAR-T细胞,采用细胞计数8法检测细胞增殖情况.以急性淋巴细胞白血病Nalm-6细胞作为靶细胞,采用乳酸盐脱氢酶法检测对照CD3+T细胞、人源化及鼠源CD19 CAR-T细胞的细胞杀伤活性.将30只Nalm-6细胞荷瘤裸鼠采用随机区组法随机分为3组,每组10只,分别经尾静脉注射人源化CAR-T细胞、鼠源CAR-T细胞和对照CD3+T细胞悬液.采用流式细胞术检测内眦静脉血Nalm-6细胞占外周血细胞比例和CD19 CAR-T细胞占T细胞比例.观察裸鼠的生存时间.结果 体外培养24h,鼠源和人源化CAR-T细胞的增殖率分别为(68.50±0.93)％和(80.63±1.41)％,差异有统计学意义(t=20.353,P＜0.001);共培养48 h时,分别为(91.38±1.41)％和(148.13±1.25)％,差异亦有统计学意义(t=85.364,P＜0.001).效靶比为1∶1时,共培养24 h,人源化CD19 CAR-T细胞组与鼠源CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性差异无统计学意义(P=0.169);共培养48 h,人源化CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性高于鼠源CD19 CAR-T细胞组(P＜0.01).效靶比为4∶1时,共培养24和48 h,人源化CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性均高于鼠源CD19 CAR-T细胞组(均P＜0.01).CAR-T细胞治疗第7天,人源化CD19 CAR-T细胞组、鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中Nalm-6细胞比例下降至最低;21 d后,鼠源CAR-T细胞组裸鼠体内Nalm-6细胞比例高于人源化CAR-T细胞组(P21 d =0.001,P28d＜0.001,P35d＜0.001).人源化CD19 CAR-T细胞组和鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞比例均于CAR-T细胞治疗第7天达到峰值,人源化CD19 CAR-T细胞组高于鼠源CAR-T细胞组(P7d=0.002).鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞于第14天消失,人源化CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞至第21天消失.鼠源CAR-T细胞组和人源化CD19 CAR-T细胞组裸鼠的中位生存时间分别为42和63 d,差异有统计学意义(x2=15.382,P＜0.001).结论 人源化CD19 CAR-T细胞比鼠源CD19 CAR-T细胞增殖能力强、对急性淋巴细胞白血病细胞的杀伤活性高、体内存留时间长,用于急性淋巴细胞白血病的临床疗效可能会优于鼠源CD19 CAR-T细胞.

摘要： 目的 探讨人源化B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗鼠源BCMACAR-T后疾病再进展的难治性多发性骨髓瘤(RRMM)患者临床疗效及安全性.方法 采集两例患者自体外周血单个核细胞,制备BCMA CAR-T细胞,FC方案(氟达拉滨+环磷酰胺)预处理后分别予鼠源/人源化BCMA CAR-T细胞输注.输注后监测CAR-T细胞扩增、细胞因子变化及不良反应.体外试验检测鼠源/人源化BCMA CAR-T转染效率、对MM细胞株的杀伤活力及炎症细胞因子释放水平.结果 例1及例2输注鼠源CAR-T后3个月分别为完全缓解(CR)及疾病稳定(SD).16个月及18个月后出现疾病再进展,且例1出现髓外病变,输注入源化BCMA CAR-T细胞挽救治疗后,分别达到部分缓解(PR)及非常好的部分缓解(VGPR)的疗效,例1髓外病变4个月消失.两例患者在人源化BCMA CAR-T细胞治疗期间,CAR-T细胞体内扩增峰值、体内持续时间均较鼠源输注期间水平升高.人源化BCMA CAR-T治疗期间IL-6、IL-8、IFN-γ、IL-10及TNF-α峰值高于鼠源CAR-T峰值.两例患者输注鼠源CAR-T期间细胞因子释放综合征(CRS)均为1级,无神经系统毒性(ICANS);人源化CAR-T治疗例1 CRS为3级,ICANS为2级,支持对症治疗后好转,例2CRS2级,无ICANS发生.体外试验证实48 h效靶比为1:1时,人源化BCMACAR-T、鼠源CAR-T细胞分别与例1、例2患者共培养,BCMA+肿瘤细胞残余比例分别为(17.38±5.18)％对(28.27±4.58)％、(13.25±1.62)％对(22.77±1.77)％,人源化BCMA-CAR-T对原代MM的细胞毒作用优于鼠源CAR-T细胞(P＜0.001),且IFN-γ、TNF-α及IL-6释放水平均高于鼠源CAR-T细胞(P值均＜0.001).结论 鼠源BCMACAR-T治疗后复发进展的RRMM患者再次输注入源BCMA CAR-T可能有效且安全性可控.

摘要： 回顾治疗性抗体药物从鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体到全人抗体的演进历程,以及用于全人单克隆抗体发现的人源抗体转基因动物的发展过程,重点介绍目前全球常用的人源抗体转基因动物平台的特点及其核心专利保护.分析人源抗体转基因动物利用基因工程技术,利用表达人抗体的免疫球蛋白基因替换动物的免疫球蛋白基因,能够直接表达人类的抗体蛋白,研究其在全人抗体药物开发中的广泛应用.展望为解决转入的人免疫球蛋白基因与动物B细胞发育的匹配性问题,获得多样性更丰富、亲和力更高的候选抗体,需要对动物抗体产生的机制进行更加深入的基础研究,同时,在面临突发性生物安全事件时,如何快速大量的生产全人抗体,也是未来人源抗体转基因动物培育需要重点考虑的问题.

摘要： 探讨抗CD22人源化基因工程多价微型抗体在杆状病毒表达系统中的表达。构建含有抗CD22人源化基因工程多价微型抗体基因的重组杆状病毒表达质粒pAcSG2-CH3，并在Sf9细胞中表达。通过对表达产物进行PCR和免疫荧光反应鉴定，证实获得了可以稳定表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体的重组杆状病毒并通过空斑试验纯化病毒，其中一株纯化病毒的滴度达到4.5×107pfu/mL；结论杆状病毒表达系统能够很好的表达抗CD22人源化基因工程多价微型抗体分子，这就为这治疗白血病药物的开发和应用打下了基础。

摘要： 作者通过已成功表达的鼠源单链Fv的V、V基因通过计算机辅助设计.用人源FR基因替换鼠源非保守的FR区,扩增出人-鼠嵌合的Fv全基因片段,构建出噬菌体展示抗体库.

摘要： 抗体工程药物是生物技术及其生物药物最重要的部分之一，它是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术产品，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品，它们集成了20世纪50年代以来生命科学发展最前沿的成果和生物工程最关键的技术，是生物制药实现产业化的重要标志。本文就将基于抗体药物的生物 制药产业化发展前景予于阐述。

摘要： 抗体工程药物是生物技术及其生物药物最重要的部分之一，它是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术产品，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品，它们集成了20世纪50年代以来生命科学发展最前沿的成果和生物工程最关键的技术，是生物制药实现产业化的重要标志。本文就将基于抗体药物的生物 制药产业化发展前景予于阐述。

摘要： 抗体工程药物是生物技术及其生物药物最重要的部分之一，它是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术产品，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品，它们集成了20世纪50年代以来生命科学发展最前沿的成果和生物工程最关键的技术，是生物制药实现产业化的重要标志。本文就将基于抗体药物的生物 制药产业化发展前景予于阐述。

摘要： 抗体工程药物是生物技术及其生物药物最重要的部分之一，它是以基因工程、细胞工程、发酵工程为工艺研发的生物技术产品，也是全球生物技术领域产业化最为成功的产品，它们集成了20世纪50年代以来生命科学发展最前沿的成果和生物工程最关键的技术，是生物制药实现产业化的重要标志。本文就将基于抗体药物的生物 制药产业化发展前景予于阐述。

摘要： 本发明公开了一种抗补体因子D的人源化Fab和人源化抗体及其用途，该人源化Fab和人源化抗体含有轻链可变区和重链可变区，所述用途为人补体因子D相关疾病为由人补体因子D升高引起的疾病。

摘要： 本发明公开了一种抗人肿瘤坏死因子α的人源化Fab和人源化抗体及其用途。本发明所提供的人源化Fab含有氨基酸序列如序列27的第1-120位、序列25的第1-120位、序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列31的第1-109位、序列29的第1-109位、序列15、序列9、序列11、序列7、序列13或序列5所示的轻链可变区。本发明所提供的人源化抗体含有氨基酸序列如序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列15、序列9、序列11、序列7、序列13和序列5中的任一种所示的轻链可变区。本发明所提供的人源化Fab和人源化抗体具有较高的亲和力和生物活性，能很好地中和人TNFα，有效的治疗TNFα相关疾病。

摘要： 进行已知序列的动物抗体的VH和VL可变区的人源化的方法，根据该方法可以获得的人源化动物抗体，特别是抗NGF和抗TrkA人源化动物抗体。

摘要： 本发明描述了针对血管内皮生长因子(VEGF)的人源化抗体。还描述了快速产生和鉴定可提高人源化抗体与其相关抗原结合力的构架突变的方法。在一优选例中，非人CDR被移植于人VLκI-VHIII构架上。还对一小组关键构架残基进行随机诱变，然后在丝状噬菌体表面上单价展示所产生的抗体分子文库。再用亲和力选择法鉴别出最佳构架序列。还可任选地用匹配非人亲代抗体的残基来替换位于VL-VH界面处的游标残基，从而对选出的抗体进一步突变。该方法可用于任何非人抗体。由此提供了人源化抗体。

摘要： 本发明涉及结合人gp39的人源化抗体及其作为治疗剂的用途。这些人源化抗体尤其可用于治疗自身免疫病;并且为异源细胞、组织或器官移植、细胞治疗和基因治疗期间的免疫抑制剂。

摘要： 本发明涉及含本发明的人源化CD37‑CAR。本发明还涉及双特异性CD19‑人源化CD37CAR，包括：(i)CD19VL，(ii)人源化CD37ScFv，(iii)CD19VH，(iv)跨膜结构域，(v)至少一个共刺激结构域，和(vi)激活结构域。本发明的CAR在血液系统肿瘤的过继免疫基因治疗领域中是有用的。

摘要： 本发明公开了一种抗补体因子D的人源化Fab和人源化抗体及其用途，该人源化Fab和人源化抗体含有轻链可变区和重链可变区，所述用途为人补体因子D相关疾病为由人补体因子D升高引起的疾病。

摘要： 本发明公开了一种抗人肿瘤坏死因子α的人源化Fab和人源化抗体及其用途。本发明所提供的人源化Fab含有氨基酸序列如序列27的第1-120位、序列25的第1-120位、序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列31的第1-109位、序列29的第1-109位、序列15、序列9、序列11、序列7、序列13或序列5所示的轻链可变区。本发明所提供的人源化抗体含有氨基酸序列如序列1或序列3所示的重链可变区，和氨基酸序列如序列15、序列9、序列11、序列7、序列13和序列5中的任一种所示的轻链可变区。本发明所提供的人源化Fab和人源化抗体具有较高的亲和力和生物活性，能很好地中和人TNFα，有效的治疗TNFα相关疾病。

摘要： 进行已知序列的动物抗体的VH和VL可变区的人源化的方法，根据该方法可以获得的人源化动物抗体，特别是抗NGF和抗TrkA人源化动物抗体。

摘要： 抗TF的人源化抗体,是由下面的A和B构成的。其中A.是由(1)小鼠抗组织因子(TF)单克隆抗体的H链CDR和人抗体的H链FR构成的H链V区、以及(2)含有人抗体H链C区构成的人源化H链;而B.由(1)小鼠抗组织因子(TF)单克隆抗体的L链CDR和人抗体的L链FR构成的L链V区、以及(2)含有人抗体L链C区构成的人源化L链构成。对将小鼠单克隆抗体的CDR移植到人抗体上制作人源化V区后,通过对其中的FR用同源性高的其它人抗体对应的FR进行置换而获得活性高的人源化抗体进行了探索。