噬菌体抗体库

摘要： Bt蛋白制剂及其转基因作物长时间推广应用,害虫抗药性等问题日益凸显,探索新型安全抗虫材料已成为竞先研究的热点。基于抗体免疫网络学说的抗独特型抗体技术被证实可用于研发抗原生物活性类似物,有望成为靶向创制模拟Bt蛋白抗虫功能材料的新途径。以Bt Cry1C蛋白多克隆抗体为包被抗原,从人源化噬菌体单链抗体库中获得9个阳性单克隆,其中E8-Anti-Id scFv经鉴定为β型抗独特型基因工程单链抗体。Bt Cry1C蛋白多克隆抗体、小菜蛾(Plutella xylostella)刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)蛋白和稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)BBMV蛋白对E8-Anti-Id scFv的竞争抑制中浓度(IC_(50))分别为2.625、3.638和4.605μg/mL。室内生物测定显示,噬菌体展示形式的E8-Anti-Id scFv在滴度为1.2×10^(8) CFU/mL浓度条件下,对供试的小菜蛾和稻纵卷叶螟在72 h内的校正死亡率为58.69%和52.82%,其抗虫活性分别达到浓度为20μg/mL的原Bt Cry1C蛋白的77.87%和73.21%。由此表明,获得的E8抗独特型基因工程单链抗体材料初步具备模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的特性,为后期深入研究和推进应用奠定了技术和材料基础。

摘要： 目的 对DNA电转化条件进行优化,以达到高的转化效率.方法 测定不同生长阶段的大肠杆菌TG1、不同电压、不同外源基因(噬菌体质粒pCANTAB5e与驼源VHH片段的连接产物)质量、T4 DNA连接酶去除前后及转化孵育后不同培养温度等条件下的电转化效率,寻找最适电转化条件.结果 当大肠杆菌TG1处于生长对数期(OD600为0.4左右)时制备电感受态细胞,取用乙醇沉淀法去除T4 DNA连接酶后的0.7μg连接产物,在电压2.3 kV、电容25μF、电阻200Ω的条件下,采用0.2 cm的电击杯进行电转化,将获得高的转化效率,达7.9×107 CFU/μg DNA,而转化后的培养温度(30°C和37°C)对电转化效率并没有明显影响.结论 经优化电转化条件后得到了高的电转化效率,为构建抗体库奠定基础.

摘要： 目的:抗体药物治疗是目前癌症治疗中很有前景的一种方法,利用前期实验得到的MLAA-34纯化蛋白作为抗原,在噬菌体抗体库中进行筛选得到抗MLAA-34的单链抗体,进行测序并鉴定其亲和力.方法:包被纯化的MLAA-34抗原蛋白于96孔板上,封闭过夜,加入1×1012 cfu噬菌体抗体库,4°C结合4 h,洗脱,洗脱后的噬菌体感染大肠杆菌TG1扩增,经过3轮淘选,淘选得到的克隆再进行Phage-ELISA的鉴定,筛选得到阳性克隆.结果:纯化的MLAA-34作为抗原,经过在噬菌体抗体库中的3轮固相筛选,噬菌体的回收得到富集,洗脱的噬菌体产率显示回收率逐级增加,富集倍数约1000倍.最后一轮筛选后挑选出188个重组噬菌体克隆,His标签蛋白作为对照蛋白,应用Phage-ELISA筛选出33个阳性克隆.结论:利用得到的MLAA-34蛋白为目标抗原,对全人源噬菌体抗体库进行淘选,应用Phage-ELISA法挑选出和MLAA-34抗原结合力的阳性噬菌体,为抗MLAA-34抗体的制备奠定了基础.

摘要： 目的 制备全人源表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体,为基于人EGFR靶点的肿瘤免疫调节治疗提供基础制剂.方法 采集110例胸部肿瘤(肺癌102例,乳腺癌8例)患者外周血,构建噬菌体单链抗体库.经噬菌体展示后筛选阳性克隆,测序并构建全长轻重链表达载体质粒,共转染HEK293.通过亲和层析获得纯化抗体,抗原抗体免疫反应测定抗体特异性和敏感性,生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术测定抗体亲和力和流式细胞技术(fluorescence activating cell sorter,FAGS)检测对肿瘤细胞系EGFR结合活性.结果 成功构建肺癌单链抗体噬菌体库,抗体库库容≥108,筛选获得两株单抗,分别为BTHG17-1,BTHG17-2,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定结合抗原敏感性为10 ng/mL,亲和力在10-8 mol/L水平,两抗体结合相同表位,可特异性结合野生型EGFR和突变体EGFRv Ⅲ蛋白,具有结合肺癌和神经胶质瘤细胞活性.结论 获得较高亲和力全人源EGFR单链抗体(single-chain variable fragment,scFv),具有EGFR(包括EGFRV Ⅲ)特异性,为EGFR靶点封阻和免疫导向治疗研究提供一种新抗体工具.

摘要： 目的 利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗.方法 以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬时转染质粒;轻、重链质粒混合后转染HEK293 EBNA1细胞,瞬时表达全分子抗体.采用Mabselect SuRe介质手动亲和纯化抗体,Nano Vue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度,快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)进行体外中和效价验证.结果 成功构建22个轻链质粒,15个重链质粒.通过真核细胞瞬时表达后,经手动亲和纯化后,获得22株单抗.除1株抗体外,其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300μg/mL;部分抗体纯度均在90％以上.中和活性结果显示,5株在1500～1800 IU/mg之间;8株在800～1500 IU/mg之间;7株在500～800 IU/mg之间;其余2株在500 IU/mg以下.结论 成功构建并验证获得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒单抗,为单抗混合制剂的研究奠定了基础.

摘要： 目的 以人肿瘤坏死因子(human tumour necrosis factor-α,human TNF-α)为靶抗原,从构建好的人源天然单链抗体(single-chain antibody fragment,ScFv)噬菌体抗体库中筛选对应的ScFv抗体,验证其中和活性后测定动力学常数(kineticdissociation,KD).方法 以TNF-α梯度稀释后包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选,制备TNF-α单克隆噬菌体抗体颗粒,经ELISA试验筛选阳性克隆后测序并分析;将正确的阳性抗体序列亚克隆到pET-26b表达载体上,原核表达后用Ni Sepharose 6 Fast Flow介质进行纯化;用MTT比色法对筛选的ScFv进行中和活性验证,并测定其中和抗体的KD.结果 通过3轮筛选共得到18个正确的抗体氨基酸序列,对其原核表达及纯化后得到的6株可溶性表达的抗TNF-α ScFv进行中和活性验证,并对其中有中和活性的4株ScFv抗体测定KD.结论 从人源天然ScFv噬菌体抗体库中成功地筛选出4株抗人TNF-α的ScFv中和抗体,其中1株ScFv抗体的KD为4.80×10-8,细胞毒中和率达到48.9％,达到了药用级抗人TNF-α中和抗体的研发要求,为全分子抗体药物的构建及稳定细胞株的筛选奠定了一定的基础.

摘要： 构建骆驼非免疫噬菌体抗体库,完成抗体库的鉴定.从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA后,特异性扩增骆驼重链抗体可变区(VHH)片段,将其与噬菌粒载体 pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠埃希菌TG1后获得 VHH 抗体基因库,并分析其库容量及多样性.结果表明,经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与莱克多巴胺人工抗原特异性结合的噬菌体展示纳米抗体.构建的骆驼天然重链单域抗体库的库容量为107,多样性良好,独立克隆所占比例为90%,筛选出针对莱克多巴胺人工抗原的噬菌体颗粒.已成功构建骆驼天然噬菌体重链抗体库,并筛选出抗莱克多巴胺的噬菌体颗粒,为抗莱克多巴胺纳米抗体的表达和莱克多巴胺的免疫学检测奠定基础,并为后续淘选针对特定抗原的单域重链抗体奠定了基础.%A native camel variable heavy chain phage display antibody library was constructed and was au-thenticated.Total RNA was purified from peripheral blood lymphocytes of the healthy non-immune camel and the VHH coding sequence was amplified,then the PCR products were cloned into a phagemid vector pCANTAB5E.By electroporation of E.coli TG1,the primary library was obtained.The library capacity and diversity were analyzed.The phage display nano-antibodies specific binding ractopamine artificial antigens were selected by adsorption-elution panning.The results showed that a native camel single-domain antibody phage display library containing more than 107individual colonies and functional clones above 90% and having good diversity was obtained.And anti-ractopamine phage particles were selected.A native camel sin-gle-domain antibody phage display library was constructed,and anti-ractopamine phage particles were se-lected.This would lay the foundation for expression of anti-ractopamine nanobody and immunological de-tection of ractopamine,which would be useful for generating VHHs with specific binding affinity.

摘要： 构建抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)噬菌体单链抗体库,筛选鉴定抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体.用猪流行性腹泻疫苗免疫发病耐过的猪,3次免疫后采血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞的总RNA,分别扩增猪IgG重链和轻链可变区,将其组装成scFv基因,连接到噬菌体质粒.进行3轮吸附-洗脱-富集选淘抗猪流行性腹泻病毒的噬菌体单链抗体库.结果构建了库量为9.5×109 pfu/mL抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体库,筛选并得到1株亲和活性较好的抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体.成功构建了抗猪流行性腹泻病毒的噬菌体单链抗体库,并获得抗猪流行性腹泻病毒的单链抗体,可为猪流行性腹泻单克隆抗体的制备提供参考.

摘要： 目的 筛选具有较好结合能力的抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体(scFv),并进行可溶性表达和鉴定.方法 前期实验室构建了抗木瓜凝乳蛋白酶全套鼠源scFv噬菌体抗体文库,对抗体文库进行4轮富集后,采用ELISA筛选抗木瓜凝乳蛋白酶阳性scFv;将ELISA最强阳性克隆pFAB5C-scFv的重组噬粒切除gene 3 singal后进行表达,SDS-PAGE分析、双抗体夹心ELISA分析、鉴定表达产物,并将阳性克隆可变区序列与Gene Bank数据库进行同源性比较.结果 经4轮噬菌体展示富集,筛选到3株亲和力相对较高的阳性克隆;去除gene 3 singal后的重组scFv在宿主菌E.coli XL1-blue中主要以可溶性的形式进行了表达,且对木瓜凝乳蛋白酶有较好的亲和力.基因序列分析表明阳性克隆所包含的重链可变区基因(VH)与小鼠免疫球蛋白γ重链基因同源性达96％,轻链可变区基因(VL)和小鼠免疫球蛋白轻链κ基因同源性达98％.结论 成功筛选出结合能力较好的抗木瓜凝乳蛋白酶scFv并进行了可溶性表达,所克隆的scFv基因符合小鼠抗体序列的特征.%Objective To screen, express and identify specific scFv against chymopapain. Methods The scFv library of mouse source was constructed in our previous study, and here the scFv library was enriched for four rounds and the positive scFv was screened by ELISA. The positive clone was ligated with the expression vector FAB5C and the construct was excised gene 3 signal for soluble expression in E.coli XL1-Blue. The expressed scFvs were identified by SDS-PAGE and DAS-ELISA, and gene homology of variable region of the positive clone was compared with the gene bank database. Results After four rounds of enrichment, the three specific scFvs with better affinity were selected, and the scFv with gene 3 signal excised was mainly expressed in soluble form. Gene sequence analysis showed that the gene homology between VH of the scFv and VH ofγchain of mouse immunoglobulin reached 96％, while VL of the scFv and VL of κchain of mouse immunoglobulin reached 98％. Conclusion The specific scFvs against chymopapain with better affinity have been successfully screened and expressed mainly in soluble form, and the scFv sequence is in line with that of mouse antibody.

摘要： Hepatitis B virus (HBV)infection is a major global health problem.However,current treatments are not satisfactory in removing virus thoroughly from patients,thus we need innovative treatment strategies to remove virus continuously,especially in suppressing the levels of HBsAg and HBV DNA invivo profoundly and persistently.In this study we discovered 129G1 mAb,which is a mouse monoclonal antibody binding to a special epitope on the hepatitis B surface (HBsAg).129G1 mAb can suppress the levels of HBsAg and HBV DNA in vivo profoundly and persistently,thus has the potential to be used in drugs of therapeutic antibodies.In order to reduce the immunogenicity of 129G1 mAb,we accomplished the humanization of 129G1 using complementarity determining region (CDR)-grafting and framework region optimization to keep the original biological function with phage display technology. 129G1 humanized antibodies'binding activity with HBsAg is similar to 129G1 cAb.It makes the phagocytosis rate of THP-1 cells up to 50% at concentration of 1.45μg/mL.In HBV transgenic mice,the humanized 129G1 exhibited continuous ability in suppressing the HBV DNA in serum and clearing HBsAg.%乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球最为重要的公共卫生问题之一,目前临床上治疗 HBV的药物在彻底清除病毒方面并没有取得满意的结果,因此迫切需要发展能有效清除病毒,尤其是能有效清除乙肝表面抗原(HBsAg)或大幅度降低 HBsAg血清学水平的创新性治疗药物.筛选到一株针对 HBV和 HBsAg上一个特定表位的鼠单抗129G1,它能持续有效地清除转基因小鼠体内的 HBV及 HBsAg,有发展为治疗性抗体药物的潜力.为了降低129G1的免疫原性,采用互补决定区(CDR)移植的方式,利用噬菌体抗体库技术对这个鼠单抗进行了人源化,最终得到人源化抗体.人源化抗体与 HBsAg的结合活性与嵌合抗体相当,抗体质量浓度为1.45μg/mL时介导 THP-1细胞吞噬率达到50%.在 HBV转基因小鼠的实验中,获得的129G1人源化抗体能持续有效地抑制血清中 HBV DNA及清除 HBsAg.

摘要： 本文目的在于总结噬菌体抗体库筛选技术的研究进展,采用文献综述的方法,介绍了噬菌体抗体库的相关研究情况,重点介绍了噬菌体抗体库的分类,抗体库的筛选方法和优化.

摘要： 本研究首先用纯化的H5N1亚型禽流感病毒制备油乳化灭活疫苗,免疫岭南黄鸡,使之产生高免抗体;然后采用RT-PCR技术,从免疫鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增到抗体重链可变区和轻链可变区基因,运用重叠延伸PCR技术将两种抗体可变区基因随机拼结成单链抗体基因,并克隆至M13噬菌粒载体pCANTAB 5E,电转化大肠杆菌TG1,成功构建了库容量为7×107cfu的噬菌体抗体库,其重组率达100％,经测序验证,该抗体库具有良好的多样性.用辅助噬菌体M13K07成功对噬菌体抗体库进行了拯救,并以纯化的H5亚型血凝素重组蛋白为靶抗原,对抗体库进行了四轮的筛选富集.挑选淘选后的单克隆菌落,经过以纯化的H5亚型血凝素重组蛋白和H5N1全病毒抗原为包被抗原做ELISA鉴定,成功的筛选到了2株与禽流感H5亚型HA蛋白和H5N1全病毒抗原都能特异性结合的噬菌体单链抗体.本研究为禽流感的诊断和治疗奠定了基础,而且对进一步研究病毒在体内的致病机制提供了有利的工具.

摘要： 目的:对从噬菌体抗体库中筛选的人源抗狂犬病毒单链抗体A12进行可溶性表达及特异性鉴定和中和活性检测. 方法:将表达人源单链抗体的菌株A12进行诱导后进行SDS-PAGE及Westernblot检测,用流式细胞仪(FACS)检测其结合感染表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒Vero细胞的能力,用快速荧光灶抑制实验(RFFIT)测定A12表达产物的中和活性. 结果:westernblot显示经诱导的A12ScFv表达产物与抗C-myc抗体在约30KD处有强阳性表达带.FACS结果表明A12与表达狂犬病毒G蛋白的重组痘苗病毒感染的Vero细胞有特异性反应.RFFIT结果表明,A12ScFv在1:27倍稀释时能完全中和病毒. 结论:A12经诱导后获得了可溶性表达,表达产物能特异性结合狂犬病毒G蛋白,并对狂犬病毒具有一定的中和活性.

摘要： 变形链球菌(S.mutans)C型是引起龋齿的主要致病菌,其表面蛋白PAc是致龋变链菌重要的毒力因子之一,在细菌对牙齿的初始黏附中起重要作用,具有良好的免疫原性,可诱导机体的保护性免疫应答.本研究用纯化的变形链球菌重组表面蛋白AP包被免疫试管对pDAN5噬菌体抗体库进行5轮亲和免疫筛选,第5轮筛选后洗脱下来的噬菌体与第一轮相比,富集了30倍.筛选得到13株噬菌体单链抗体,经ELISA检测OD450nm均在0.4以上.并对其中一株表达量较高的重组噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用IPTG诱导表达非融合性单链抗体,SDS-PAGE检测,其表达量为30﹪.表达的非融合性单链抗体复性后经Western-blotting杂交检测显示该非融合性单链抗体可与AP蛋白发生特异性抗原抗体反应,证明表达的非融合性单链抗体有生物活性。

摘要： 目的：制各全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。rn 方法：取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源，提取总RNA，用RT PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对，以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段，再以它们为模板分别扩增VH linker与VL linker，用SOE PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ，胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB 5E后电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率，1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。rn 结果：食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp 。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg，scFv的阳性插入率为91.7％(22/24)。rn 结论：食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

摘要： 目的：制各全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。rn 方法：取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源，提取总RNA，用RT PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对，以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段，再以它们为模板分别扩增VH linker与VL linker，用SOE PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ，胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB 5E后电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率，1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。rn 结果：食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp 。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg，scFv的阳性插入率为91.7％(22/24)。rn 结论：食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

摘要： 目的：制各全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。rn 方法：取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源，提取总RNA，用RT PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对，以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段，再以它们为模板分别扩增VH linker与VL linker，用SOE PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ，胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB 5E后电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率，1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。rn 结果：食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp 。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg，scFv的阳性插入率为91.7％(22/24)。rn 结论：食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

摘要： 目的：制各全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。rn 方法：取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源，提取总RNA，用RT PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对，以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段，再以它们为模板分别扩增VH linker与VL linker，用SOE PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ，胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB 5E后电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率，1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。rn 结果：食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp 。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg，scFv的阳性插入率为91.7％(22/24)。rn 结论：食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

摘要： 目的：制各全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。rn 方法：取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源，提取总RNA，用RT PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对，以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段，再以它们为模板分别扩增VH linker与VL linker，用SOE PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ，胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB 5E后电转入Ecoli TG1。PCR法鉴定抗体基因插入率，1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。rn 结果：食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带；VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp 。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg，scFv的阳性插入率为91.7％(22/24)。rn 结论：食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。

摘要： 本发明公开了一种噬菌体展示抗体库并筛选到了五株能够跟新冠病毒SARS‑CoV‑2的S蛋白结合的抗体，本发明基于合成生物学与噬菌体展示技术，将突变导入抗体可变区的超可变区，并将此基因转至大肠杆菌中，从而构建了含有108种抗体的合成抗体库；本发明的噬菌体展示抗体库能够筛选获得具有特异性和检测功能的抗体，扩大了生物研究和医学诊断的有力资源；本发明还筛选到了五株能够跟新冠病毒的S蛋白结合的抗体，可以用于病毒的检测，部分抗体可以阻断病毒与细胞结合，具有中和新冠病毒传染力的能力，可用于制备新冠病毒检测产品、制备抑制新冠病毒药物和制备预防或治疗由新冠病毒引起的疾病的药物制剂，具有广泛的应用前景。

摘要： 本发明涉及使用源自M13噬菌体的pIX的工程化杂交噬菌体载体来生成pIX噬菌体展示文库并使用该文库来产生一种或多种非抗体肽或蛋白质的组合物和方法。

摘要： 本发明公开了去除半抗原噬菌体展示纳米抗体文库中表达载体蛋白纳米抗体的噬菌体的方法。该方法包括(1)偶联所述载体蛋白的磁珠与所述半抗原噬菌体展示纳米抗体文库进行孵育获得结合所述表达载体蛋白纳米抗体的噬菌体的磁珠；(2)采用磁性分离去除所述结合所述表达载体蛋白纳米抗体的噬菌体的磁珠，从而去除半抗原噬菌体展示纳米抗体文库中表达载体蛋白纳米抗体的噬菌体。该方法提高了小分子纳米抗体的筛选效率。

摘要： 本发明提供一种Benzonase免疫噬菌体展示抗体库的构建方法，其步骤包括：(1)用Benzonase蛋白免疫兔，提取淋巴细胞的总RNA，逆转录成cDNA；(2)利用PCR技术扩增重链可变区和轻链可变区片段并拼接成scFv基因；(3)构建pCANTAB5E‑scFv重组质粒，电转化至TG1感受态细胞，构建噬菌体单链抗体库；(4)特异性富集噬菌体单链抗体库，从中筛选出阳性克隆。并公开了筛选得到的单克隆抗体及其编码基因。本发明通过噬菌体展示抗体库技术筛选得到高亲和力的兔源单链抗体。本发明的单链抗体可以通过大肠杆菌BL21表达得到，为免疫检测试剂盒的开发提供可选的原料。

摘要： 本发明公开了一种构建高度多样性的大容量天然人源Fab噬菌体抗体库的方法，采用DNA重组技术从15位健康志愿者外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链和重链可变区基因，分别插入噬菌体载体PFK-1，PFL-6相应的位置，建立高容量、高多样性的天然人源Fab噬菌体抗体库，该方法建立的kappa链Fab抗体库容量为2.85×108，lambda链Fab抗体库容量为2.9×108，符合大容量体抗体库的标准，且包含几乎覆盖人抗体的全部轻链和重链可变区基因，具有高度的多样性。该抗体库主要用来高通量筛选临床治疗用的低抗原性和高亲和性人源抗体。使用该抗体库，筛选出一株抗CD6的单克隆抗体。

摘要： 本发明公开了一种从ScFv噬菌体抗体库中以THY‑1/CD90为靶点筛选出的全人源拮抗抗体，该全人源拮抗抗体为单链抗体，全人源拮抗抗体重链DNA序列如SEQ ID NO:1所示，轻链DNA序列如SEQ ID NO:2所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。上述技术方案，从人ScFv噬菌体抗体库中筛选以THY‑1/CD90为靶点的全人源拮抗抗体，并分别测定其DNA序列和氨基酸序列，通过该方法获得的全人源拮抗抗体具有靶向THY‑1/CD90的特异性。这样产生的抗体能够克服杂交瘤技术生产抗体的缺点，还能实现高通量、快速筛选抗体的目的，且价格低廉。

摘要： 本发明涉及生物医药工程技术领域，公开了一种从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法，包括A、单克隆噬菌体抗体培养，并取培养上清液；B、定性分析：将步骤A中的培养上清液置于96孔板中，依次经DMEM培养基以及中和用病毒中和、BSR细胞悬液培养、预冷丙酮固定后，与稀释后的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白抗体共孵育，选择可明显抑制病毒感染的克隆测序，排除重复的序列，初步获得中和活性各不相同的抗狂犬病病毒抗体序列；C、定量分析：挑选不同序列有中和活性的各个克隆，重新制备噬菌体抗体颗粒，纯化并稀释一定倍数后采用RFFIT法测定体外中和活性；以及D、全分子抗体瞬时表达和活性分析。

摘要： 本发明公开了一种构建高度多样性的大容量天然人源Fab噬菌体抗体库的方法，采用DNA重组技术从15位健康志愿者外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链和重链可变区基因，分别插入噬菌体载体PFK-1，PFL-6相应的位置，建立高容量、高多样性的天然人源Fab噬菌体抗体库，该方法建立的kappa链Fab抗体库容量为2.85×108，lambda链Fab抗体库容量为2.9×108，符合大容量体抗体库的标准，且包含几乎覆盖人抗体的全部轻链和重链可变区基因，具有高度的多样性。该抗体库主要用来高通量筛选临床治疗用的低抗原性和高亲和性人源抗体。使用该抗体库，筛选出一株抗CD6的单克隆抗体。

摘要： 本发明提供了一种用于构建噬菌体抗体库的噬菌粒载体构建方法及抗体筛选方法，所述噬菌粒为外壳蛋白PIII编码基因与目的基因插入位点之间含有牛凝血酶酶切位点的丝状噬菌粒。在噬菌粒中引入牛凝血酶（thrombin）酶切位点，通过蛋白水解裂解，从而导致非特异性洗脱噬菌粒的背景下降。使用本发明提供的噬菌粒筛选抗体效率更高，解决了现有技术中噬菌体展示技术中筛选效率低的问题。

摘要： 本发明公开了一种从ScFv噬菌体抗体库中以THY‑1/CD90为靶点筛选出的全人源拮抗抗体，从ScFv噬菌体抗体库中筛选以THY‑1/CD90为靶点的全人源拮抗抗体，该全人源拮抗抗体为单链抗体，全人源拮抗抗体的DNA序列如1E01DNA序列所示，氨基酸序列如1EO1氨基酸序列所示。上述技术方案，从人ScFv噬菌体抗体库中筛选以THY‑1/CD90为靶点的全人源拮抗抗体，并分别测定其DNA序列和氨基酸序列，通过该方法获得的全人源拮抗抗体具有靶向THY‑1/CD90的特异性。这样产生的抗体能够克服杂交瘤技术生产抗体的缺点，还能实现高通量、快速筛选抗体的目的，且价格低廉。