N-糖基化

摘要： 以酵母作为宿主生产的蛋白在生活和医疗中有着广泛应用,但其特有的对蛋白进行高甘露糖基化修饰会造成蛋白免疫原性改变、半衰期缩短等负面影响。通过工程改造,能够减弱酵母中蛋白的甘露糖基化修饰程度,且在毕赤酵母(Pichia pastoris)中已经能够产生唾液酸化糖蛋白。介绍酵母系统在生产药物蛋白方面的应用,简述酵母N-糖基化修饰过程以及目前酵母人源化研究进展。

摘要： 骆驼凝乳酶原在毕赤酵母中的表达量较低,不能满足产业化需求。为提高骆驼凝乳酶原的表达量,采用定点突变的方法,分别在其前导肽的第11、26、34、35、38、39位氨基酸处引入1个N-糖基化位点,构建成6种骆驼凝乳酶原的N-糖基化突变体:chy11、chy26、chy34、chy35、chy38和chy39,并分别导入到毕赤酵母中进行分泌表达。测定和比较了野生型(wild)和各突变体骆驼凝乳酶原的表达量。Chy34、chy35、chy38和chy39的表达量显著提高,其中chy34的表达量最高。6种突变体均保持前导肽自切割活性。在50°C保温8 h,wild酶活完全丧失,而突变体仍有20%~80%的相对酶活,表明6种突变体的热稳定性均显著增强。研究结果为提高骆驼凝乳酶原在毕赤酵母中的表达量和增强热稳定性提供了新的研究思路。

摘要： 蛋白质N-糖基化不仅存在于真核生物中,还存在于原核生物中,探讨蛋白质N-糖基化作为一种重要的蛋白质翻译后修饰所具有重要的生物学功能,详细综述原核生物蛋白质N-糖基化及其生物学功能的研究进展,分析原核生物中N-糖基转移酶的结构及识别底物特点,并讨论原核生物N-糖基化系统在糖基化工程中的应用,以期为疫苗开发和疾病治疗提供方案。

摘要： 目的 利用大肠杆菌表达系统对溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸(M6P)糖基化修饰的关键酶N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶(UCE)进行异源表达和功能鉴定。方法 通过UCE的氨基酸序列分析,分别截去UCE的信号肽、前体肽、跨膜区、胞浆尾肽等结构域,形成不同形式的截短型UCE。利用促溶标签麦芽糖结合蛋白(MBP)的载体和大肠杆菌表达系统,对不同的截短型UCE进行表达。将表达的可溶性融合蛋白利用Ni离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化,并利用UDP-Glo试剂盒测定融合蛋白的活性。结果 截短型的UCE-MBP融合蛋白能够被可溶性地融合表达,并且能够利用Ni离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化。去掉其前体肽和仅保留核心区的UCE融合蛋白能够展现出较高的活性。结论 利用促溶标签蛋白能够实现UCE在大肠杆菌中可溶性地融合表达,从而能够快速制备大量的UCE,该酶可用于对溶酶体代谢酶体外糖基化的生物催化修饰。

摘要： 在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol.作者探究人来源的Alg2蛋白(hAlg2)在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并纯化后的体外活性.构建酿酒酵母w303a-GAL1pr-ALG2,并利用该菌株的生长被葡萄糖抑制的特点,发现过表达hALG2基因能够回补其生长缺陷,证实了hALG2和ScALG2的功能同源性.作者利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化了 TrxA-hAlg2,并以Man1GlcNAc2-PP-Phy(PPGn2M1)代替hAlg2的天然底物,测定了其体外活性.结合液质联用的方法,检测发现TrxA-hAlg2具有催化PPGn2M1生成PPGn2M2和PPGn2M3的甘露糖基转移酶活性,为建立基于大肠杆菌表达纯化的hAlg2体外反应体系奠定了基础.

摘要： 甘露糖基转移酶Alg11是N糖基化途径中的关键酶,催化第4和第5个甘露糖(Man)残基以α-1,2连键的形式转移到底物Man3-GlcNAc2-PP-Dol生成Man5-GlcNAc2-PP-Dol,人类ALG11基因致病突变会导致相关的先天性糖基化疾病ALG11-CDG(Congenital Disorders of Glycosylation).目前,对ALG11-CDG的研究更侧重于其临床症状,而患者Alg11突变蛋白的性质还有待探索.作者以研究ALG11-CDG突变蛋白的重组表达及活性为目的,首先在人胚胎肾细胞HEK293和酿酒酵母中分别表达了Alg11野生型及突变体蛋白,发现其表达量存在显著差异,突变体蛋白不能稳定表达.最终在大肠杆菌中成功稳定表达了野生型及ALG11-CDG相关突变蛋白,利用液质联用定量分析了蛋白质的活性,结果显示,突变蛋白的活性存在不同程度的降低,其降低程度与ALG11-CDG疾病的严重程度存在一定的相关性.上述研究结果证明:1)ALG11-CDG相关突变蛋白的不稳定有可能是造成疾病的原因之一;2)体外定量测试大肠杆菌表达的ALG11-CDG相关突变蛋白的活性可以为相应患者的疾病严重程度提供参考.

摘要： 先天性糖基化异常(congenital disorders of glycosylation,CDG)是一组罕见的遗传代谢性疾病,是由于糖脂和(或)糖蛋白的形成或加工过程中的缺陷而引起.大多数呈常染色体隐性遗传并具有多系统表现,主要是面部畸形、发育迟缓、生长障碍、肌张力减退、神经系统异常、低血糖和多系统功能障碍等.血清转铁蛋白(transferrin,Tf)等电聚焦电泳(isoelectrofocusing,IEF)及质谱分析(mass spectrometry,MS)技术可以筛查CDG的某些亚型,然而目前许多亚型的诊断仍依赖基因组测序技术.少数亚型可通过治疗得到临床缓解甚至治愈,但大多数尚无有效的治疗方法.不断发展的分子、生化以及人脸识别技术可以加深对这一疾病的认识.

摘要： 目的:探讨超低温环境下不同储存时间对血浆免疫球蛋白G(IgG)N-糖基化水平的影响,以期为大规模流行病学调查中有效保存样本提供帮助.方法:采用随机数表法收集超低温环境下(-80°C)保存于2012年、2013年、2017年、2018年和2019年5个年份的75份女性健康体检的血浆样本,并将其按照不同保存年限分为2012年组、2013年组、2017年组、2018年组和2019年组.采用基于超高压液相色谱平台,对5组血浆样本中的总体IgG N-糖基化水平进行高通量检测,分离出24个糖基结构,并计算其衍生物结构含量.采用方差分析或秩和检验对不同储存时间组的糖基检测结果进行差异性比较.结果:对超低温环境下不同保存时间保存的5组血浆样本中IgG N-糖基结构进行比较,24个糖基结构的检测其色谱峰(GP1～GP24)均无统计学差异;对5组样本中13个IgG N-糖基衍生物结构含量比较均无统计学意义.结论:超低温条件下,血浆样本存储时间的长短对血浆中IgG N-糖基化水平未产生明显的影响.

摘要： 糖基化是蛋白质翻译后最主要的修饰之一,对蛋白质发挥功能十分重要.作为一种常见的糖基化类型,N-糖基化是多种糖蛋白发挥生物学作用的重要一环,一旦出现异常则可能引发遗传性疾病、免疫功能失调等多器官系统疾病.随着质谱技术的发展,N-糖基化检测在对多种疾病的发病机制、诊断、治疗及预后的探索中已展示出广阔的科研前景和巨大的临床价值.本文旨在总结蛋白质N-糖基化的过程、生物学作用和基于质谱的检测分析方法,并重点介绍N-糖基化在维持肾脏生理功能和在Ig A肾病、糖尿病肾病等肾脏疾病相关研究中的最新进展.

摘要： 蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2％～5％为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的.该文对糖基化蛋白质组样品不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,同时也对N.糖基化蛋白质组学富集策略的发展前景进行了展望.

摘要： 蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2％～5％为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的.该文对糖基化蛋白质组样品不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,同时也对N.糖基化蛋白质组学富集策略的发展前景进行了展望.

摘要： 蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2％～5％为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的.该文对糖基化蛋白质组样品不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,同时也对N.糖基化蛋白质组学富集策略的发展前景进行了展望.

摘要： 蛋白质的糖基化是生物体内重要的蛋白质翻译后修饰之一,但其丰度通常较低,糖基化蛋白质酶解肽段中仅有2％～5％为糖基化肽段,因此,为实现糖基化蛋白质组的深度覆盖分析,对糖基化蛋白质/肽段进行富集是非常必要的.该文对糖基化蛋白质组样品不同富集方法的原理、特点以及最新研究进展进行了综述,同时也对N.糖基化蛋白质组学富集策略的发展前景进行了展望.

摘要： 埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90％,目前尚没有特效药物供临床使用.病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入届主程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确.本研究发现GP蛋白的表达及成熟需要分子伴侣CNX和CRT的辅助;同时GP1蛋白N端4个糖基化位点介导了GP蛋白与CNX/CRT的结合,而位于GP2亚基的N563和N618两个糖基化位点显著影响GP蛋白的成熟.

摘要： 埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90％,目前尚没有特效药物供临床使用.病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入届主程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确.本研究发现GP蛋白的表达及成熟需要分子伴侣CNX和CRT的辅助;同时GP1蛋白N端4个糖基化位点介导了GP蛋白与CNX/CRT的结合,而位于GP2亚基的N563和N618两个糖基化位点显著影响GP蛋白的成熟.

摘要： 埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90％,目前尚没有特效药物供临床使用.病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入届主程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确.本研究发现GP蛋白的表达及成熟需要分子伴侣CNX和CRT的辅助;同时GP1蛋白N端4个糖基化位点介导了GP蛋白与CNX/CRT的结合,而位于GP2亚基的N563和N618两个糖基化位点显著影响GP蛋白的成熟.

摘要： 埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90％,目前尚没有特效药物供临床使用.病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入届主程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确.本研究发现GP蛋白的表达及成熟需要分子伴侣CNX和CRT的辅助;同时GP1蛋白N端4个糖基化位点介导了GP蛋白与CNX/CRT的结合,而位于GP2亚基的N563和N618两个糖基化位点显著影响GP蛋白的成熟.

摘要： 埃博拉病毒(EBOV)感染人类及其他灵长类动物的致死率可高达90％,目前尚没有特效药物供临床使用.病毒粒子表面的囊膜蛋白GP在介导病毒入届主程中发挥重要作用,但其依靠宿主细胞完成自身成熟的具体机制仍不明确.本研究发现GP蛋白的表达及成熟需要分子伴侣CNX和CRT的辅助;同时GP1蛋白N端4个糖基化位点介导了GP蛋白与CNX/CRT的结合,而位于GP2亚基的N563和N618两个糖基化位点显著影响GP蛋白的成熟.

摘要： 目的:为EPO分析建立两种简易的基于LC的互补方法,分别用于获取N-糖基化和O-糖基化的相关信息.rn 方法:借助采用新型糖基标记试剂RapiFluor-MS的样品制备新策略,快速释放rhEPO中的N-糖基,对其进行GlycoWorksRapiFluor-MS标记,得到rhEPO的N-糖谱图,然后利用灵敏的荧光检测和质谱检测技术进行亲水作用色谱(HILIC)分析.接下来的平行分析中,利用完整蛋白质的HILIC分析甄别糖基释放的rhEPO,以解析O糖基化的相关信息.rn 结果:笔者没有采用分析rhEPO游离O-糖的策略,而是开发了另一种表征策略工作流程,首先使用GlycoWorks Rapid PNGase F和1％RapiGestTM SF表面活性剂对rhEPO进行快速糖基释放,10分钟后获得了一份经N-糖基释放的完整rhEPO样品,然后采用ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide糖蛋白分析专用柱通过HILIC分离对其进行分析.rn 结论:重组人促红细胞生成素(rhEPO)分子此前由于其糖基化结构相对复杂,一直被视为糖基化表征的难题,本文介绍的两种简易策略可用于详细研究rhEPO的N-联糖基化和O-联糖基化;充分利用这些工具有助于加快新型生物仿制药的开发.

摘要： 本发明涉及一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架及其制备方法。本发明以糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖和PLGA为原料制备多孔复合骨组织工程支架材料，通过调整原料的组成比例弥补了单一材料成型性差、力学强度低和细胞吸附性弱的缺点。PLGA具有良好的生物相容性、无毒和良好的成型性能，通过热致分相法将糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖与PLGA结合制备的三维孔洞网络结构，具有与天然骨极其相似的纳米结构，有利于细胞在支架材料表面的粘附、增殖与分化，一定的粗糙度和孔隙率也有利于新生骨组织长入植入体表面，并促进植入体/宿主组织界面处的骨整合过程。

摘要： 本发明涉及用于无糖基化抗体产生的转基因小鼠和由此产生的无糖基化抗体的用途。本发明的转基因小鼠可用于容易地产生针对多种靶抗原的无糖基化抗体，并且由此产生的无糖基化抗体可精确地检测糖蛋白生物标志物，从而实现疾病诊断的准确性。

摘要： 提供了调节表达目标蛋白的细胞培养物的特性的方法。在不同实施方案中，所述方法与涉及N‑糖基化途径的蛋白质的过表达有关。

摘要： 本发明涉及一种仿生糖基化矿化胶原/糖基化壳聚糖/PLGA复合骨组织工程支架及其制备方法。本发明以糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖和PLGA为原料制备多孔复合骨组织工程支架材料，通过调整原料的组成比例弥补了单一材料成型性差、力学强度低和细胞吸附性弱的缺点。PLGA具有良好的生物相容性、无毒和良好的成型性能，通过热致分相法将糖基化矿化胶原、糖基化壳聚糖与PLGA结合制备的三维孔洞网络结构，具有与天然骨极其相似的纳米结构，有利于细胞在支架材料表面的粘附、增殖与分化，一定的粗糙度和孔隙率也有利于新生骨组织长入植入体表面，并促进植入体/宿主组织界面处的骨整合过程。

摘要： 本发明提供了在由哺乳动物细胞表达蛋白质的过程中的岩藻糖基化抑制剂。所述抑制剂源自鼠李糖并且通过抑制GDP‑甘露糖4,6‑脱水酶(GMD)来起作用。本发明进一步提供了制造岩藻糖基化水平降低的蛋白质的方法，所述蛋白质诸如抗体和通过本发明方法制造的抗体。此类低岩藻糖基化抗体或非岩藻糖基化抗体可用于例如治疗人类疾病，其中引导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)介导的在细胞表面上表达抗体靶标的细胞的杀伤是治疗有益的，例如在使用低岩藻糖基化或非岩藻糖基化抗CTLA‑4抗体消耗癌症患者的Treg中。

摘要： 本公开涉及一种甜味剂组合物，其包含转糖基化甜菊苷和转糖基化瑞鲍迪甙A。

摘要： 提供了调节表达目标蛋白的细胞培养物的特性的方法。在不同实施方案中，所述方法与涉及N‑糖基化途径的蛋白质的过表达有关。

摘要： 本发明涉及用于无糖基化抗体产生的转基因小鼠和由此产生的无糖基化抗体的用途。本发明的转基因小鼠可用于容易地产生针对多种靶抗原的无糖基化抗体，并且由此产生的无糖基化抗体可精确地检测糖蛋白生物标志物，从而实现疾病诊断的准确性。

摘要： 本发明涉及一种用于预防或治疗与抑制糖基化终产物(AGEs,A dvanced glycation end‑products)的生成及促进糖基化终产物的分解有关的疾病的组合物，其含有栗寄生(Korthalsella japonica(Thunb.)Engl)提取物作为有效成分，根据本发明，通过栗寄生提取物所具有的抑制糖基化终产物的生成的效果和裂解糖基化终产物与胶原蛋白之间的交联的效果，能够用于预防或改善因AGEs的沉积而引起的诸如糖尿病并发症、动脉硬化、肾功能衰竭、类风湿性关节炎或者阿尔茨海默病等的与糖基化终产物有关的疾病及皮肤老化。

摘要： 通过在甜菊醇糖苷组合物的酶催化糖基化之前、之间和/或之后采用碱性条件，从而改善了制备用作食品和饮品等中的甜味剂和风味调节剂的糖基化甜菊醇糖甙组合物的方法。