杀伤活性

摘要： 目的探讨钠碘转运体(NIS)报告基因的共表达对嵌合型受体T(CAR-T)细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法慢病毒感染法制备CAR-T细胞(仅表达CD19 CAR的T细胞)、NIS-T细胞(仅表达NIS报告基因的T细胞)和NIS-CAR-T细胞(共表达NIS和CD19 CAR的T细胞),然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组(未转染的T细胞)、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CAR-T组。流式细胞术检测各组NIS和CAR转染率。各组细胞常规培养24、48、72 h,CCK-8法检测增殖能力。各组T细胞为效应细胞,Nalm6肿瘤细胞为靶细胞,按效靶比0.5∶1、1∶1、2∶1、4∶1共培养24、48、72 h,乳酸脱氢酶细胞毒性检测法(LDH)检测各组细胞对肿瘤细胞的杀伤率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测共培养上清液中各组细胞因子人干扰素-γ(IFN-γ)和人肿瘤坏死因子-β(TNF-β)释放水平。摄碘实验检测表达NIS蛋白各组细胞的NIS功能。结果CAR-T细胞、NIS-CAR-T细胞的CAR转染率分别为91.91%、99.41%,NIS-T细胞、NIS-CAR-T细胞的NIS转染率分别为47.83%、50.24%。常规培养24、48、72 h CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05)。0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1效靶比作用24 h时CAR-T细胞杀伤率(%)均高于NIS-CAR-T细胞(P0.05)。CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞均存在IFN-γ和TNF-β释放现象,释放水平均高于对照组(P0.05),但均高于对照组T细胞(P<0.05)。结论NIS报告基因的共表达不影响CAR-T细胞中CAR转染率,对细胞增殖和杀伤活性无抑制现象。

摘要： 目的:验证一种新型、尚未报道的体外扩增原代NK细胞的方法,同时检测其杀伤活性。方法:采集6位健康志愿者的静脉血共6份,分离外周血单个核细胞。自然杀伤(NK)细胞诱导培养试剂培养14天。利用流式细胞术检测NK细胞所占比例,将K562、THP-1细胞作为靶细胞并用CFSE标记,以效靶比2:1加入扩增后的NK细胞,利用流式细胞术检测靶细胞凋亡。结果:通过14天的细胞培养,利用自然杀伤(NK)细胞诱导培养试剂培养的NK细胞扩增约300倍。NK细胞纯度达50%左右。体外杀伤实验结果显示,扩增后的NK细胞与靶细胞共培养4 h杀伤能力可达40%以上。结论:此种方法扩增的NK细胞其纯度较高,但是因为缺乏其余免疫细胞提供的支撑作用,所以最终NK细胞的扩增倍数并不理想,但其操作简单,花费低,安全性高,可靠性强。

摘要： 目的 探讨DC-CIK细胞对急性白血病细胞的体外杀伤作用.方法 选取2017年9月—2019年4月本院收治的急性白血病患者98例,随机分为CIK组和DC-CIK组各49例.选择健康人外周血单个核细胞诱导的CIK和DC细胞一同培养,将CIK细胞单独培养作为对照组.比较DC—CIK细胞免疫表型变化、DC-CIK细胞对白血病细胞的杀伤活性、DC-CIK细胞和CIK细胞分泌细胞因子水平.结果 单独培养CIK细胞会随着时间的增加而导致CD3+CD56+、CD8+、CD3+双阳性细胞比例随之增加(P0.05);在40:1-5:1效靶中,效靶和杀伤作用呈现正相关(P<0.05);CIK细胞单独培养组IFN-γ、IL-12的分泌量低于DC-CIK细胞共同培养组(P<0.05).结论 DC-CIK细胞的抗急性白血病的活性以及增值能力都高于CIK细胞,DC-CIK细胞抵抗急性白血病治疗具有一定的作用.

摘要： 目的 分析复发/难治性急性B淋巴细胞白血病(R/RB-ALL)自体CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)制备过程中,培养体系中残留白血病细胞导致CD19 CAR转入白血病细胞的特征和体外杀伤研究.方法①收集30例接受CD19CAR-T细胞治疗的R/RB-ALL患者及6例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC);②流式细胞术分析R/R B-ALL患者PBMC经CD3磁珠分选后及体外培养过程中体系白血病细胞残留情况;③患者及健康志愿者PBMC CD3+T细胞转染CD19 CAR及CD22 CAR慢病毒,制备CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞;④复苏Nalm-6细胞株,CD19 CAR慢病毒转染Nalm-6细胞,制备CD 19 CAR-Nalm-6细胞,同时转染患者原代ALL细胞;⑤流式细胞术检测转染率;⑥CCK-8法检测细胞增殖;⑦乳酸脱氢酶(LDH)法检测CD19 CAR-T、CD22 CAR-T细胞对Nalm-6细胞及CD19 CAR-Nalm-6细胞杀伤活性.结果①30例接受CD19 CAR-T细胞治疗的R/RB-ALL患者中,2例CD3+T细胞中发现3.32％、2.04％的白血病细胞残留,随体外培养时间延长,在培养第4天,白血病细胞完全消失.②体外培养中CD19 CAR-Nalm-6细胞增殖率高于Nalm-6细胞.③效靶比为1∶1且共培养24、48、72 h,CD19 CAR-T细胞对Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-Nalm-6细胞;与CD19 CAR-T细胞相比,CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性更高.④相同效靶比情况,单独应用CD22 CAR-T细胞对CD19 CAR-Nalm-6细胞的杀伤活性高于CD19 CAR-T联合CD22 CAR-T细胞.结论 CD19CAR-T细胞制备过程中培养体系残留白血病细胞可能会导致CD19CAR被引入白血病细胞中而导致CD 19 CAR-T细胞治疗失败,在细胞制备过程中需要检测培养体系中白血病细胞的残留情况.CD22 CAR-T细胞治疗可作为上述情况的挽救治疗措施之一.

摘要： 目的 探讨芝麻素对人外周血中γδT细胞体外增殖及杀伤胃癌细胞株BCG-823作用的影响.方法 分离健康志愿者外周血单个核细胞,经GT-T551无血清培养基(含诱导γδT细胞的细胞因子)诱导培养10 d后,采用异硫氰酸荧光素进行标记,流式细胞仪检测γδT细胞的表型.用不同浓度(0μg/mL、0.156μg/mL、0.313μg/mL、0.625μg/mL、1.250μg/mL、2.500μg/mL、5.000μg/mL、10.000μg/mL、20.000μg/mL、40.000μg/mL、80.000μg/mL、100.000μg/mL)的芝麻素诱导γδT细胞48 h,采用细胞计数法检测γδT细胞增殖情况;选择增殖效果较好的芝麻素浓度诱导γδT细胞48 h,采用流式细胞术检测γδT细胞中穿孔素、颗粒酶B及CD107 a的表达水平;采用乳酸脱氢酶法检测 γδT细胞对胃癌细胞株BCG-823的杀伤活性.结果 培养前外周血中γδT细胞百分率约为6.14％,培养10 d后外周血中γδT细胞百分率高达90.34％.与对照组(0μg/mL芝麻素组)相比,0.156μg/mL、0.313μg/mL、0.625μg/mL、1.250μg/mL、2.500μg/mL芝麻素组的γδT细胞增殖率均升高(均P<0.05),其中芝麻素浓度为1.250μg/mL时γδT细胞增殖率最高;而当芝麻素浓度达到5.000μg/mL以上时,对γδT细胞的生长起抑制作用.0.625μg/mL、1.250μg/mL、2.500μg/mL芝麻素组γδT细胞的颗粒酶B表达水平均高于对照组(P<0.05);0.156μg/mL、0.313μg/mL、0.625μg/mL、1.250μg/mL及2.500μg/mL芝麻素组γδT细胞的穿孔素表达水平均高于对照组(均P<0.05);0.313μg/mL、0.625μg/mL、1.250μg/mL及2.500μg/mL芝麻素组γδT细胞的CD107a表达水平均高于对照组(均P<0.05).作用48 h后,0.156μg/mL、0.313μg/mL、0.625μg/mL、1.250μg/mL、2.500μg/mL、5.000μg/mL芝麻素组γδT细胞对胃癌细胞BCG-823的杀伤活性均高于对照组(均P<0.05).结论 采用适宜浓度的芝麻素诱导人外周血γδT细胞,可增加γδT细胞的增殖率及其对胃癌细胞BCG-823的杀伤作用,这可能与其上调γδT细胞的颗粒酶B-穿孔素通路和CD107 a表达有关.

摘要： 目的 比较人源化CD19嵌合抗原受体(CAR)-T细胞与鼠源CD19 CAR-T细胞的功能.方法 收集8名健康志愿者的外周静脉血T细胞,行人源化和鼠源CD19 CAR慢病毒感染,制备人源化和鼠源CD19 CAR-T细胞,采用细胞计数8法检测细胞增殖情况.以急性淋巴细胞白血病Nalm-6细胞作为靶细胞,采用乳酸盐脱氢酶法检测对照CD3+T细胞、人源化及鼠源CD19 CAR-T细胞的细胞杀伤活性.将30只Nalm-6细胞荷瘤裸鼠采用随机区组法随机分为3组,每组10只,分别经尾静脉注射人源化CAR-T细胞、鼠源CAR-T细胞和对照CD3+T细胞悬液.采用流式细胞术检测内眦静脉血Nalm-6细胞占外周血细胞比例和CD19 CAR-T细胞占T细胞比例.观察裸鼠的生存时间.结果 体外培养24h,鼠源和人源化CAR-T细胞的增殖率分别为(68.50±0.93)％和(80.63±1.41)％,差异有统计学意义(t=20.353,P＜0.001);共培养48 h时,分别为(91.38±1.41)％和(148.13±1.25)％,差异亦有统计学意义(t=85.364,P＜0.001).效靶比为1∶1时,共培养24 h,人源化CD19 CAR-T细胞组与鼠源CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性差异无统计学意义(P=0.169);共培养48 h,人源化CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性高于鼠源CD19 CAR-T细胞组(P＜0.01).效靶比为4∶1时,共培养24和48 h,人源化CD19 CAR-T细胞组对Nalm-6细胞的杀伤活性均高于鼠源CD19 CAR-T细胞组(均P＜0.01).CAR-T细胞治疗第7天,人源化CD19 CAR-T细胞组、鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中Nalm-6细胞比例下降至最低;21 d后,鼠源CAR-T细胞组裸鼠体内Nalm-6细胞比例高于人源化CAR-T细胞组(P21 d =0.001,P28d＜0.001,P35d＜0.001).人源化CD19 CAR-T细胞组和鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞比例均于CAR-T细胞治疗第7天达到峰值,人源化CD19 CAR-T细胞组高于鼠源CAR-T细胞组(P7d=0.002).鼠源CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞于第14天消失,人源化CAR-T细胞组裸鼠外周血中CAR-T细胞至第21天消失.鼠源CAR-T细胞组和人源化CD19 CAR-T细胞组裸鼠的中位生存时间分别为42和63 d,差异有统计学意义(x2=15.382,P＜0.001).结论 人源化CD19 CAR-T细胞比鼠源CD19 CAR-T细胞增殖能力强、对急性淋巴细胞白血病细胞的杀伤活性高、体内存留时间长,用于急性淋巴细胞白血病的临床疗效可能会优于鼠源CD19 CAR-T细胞.

摘要： 目的 研究反复妊娠失败(RRF)并发遗传性易栓症(IT)患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与妊娠结局的关系.方法 选取该院2017年1月—2020年12月收治的85例RRF并发IT患者纳入研究,将其按照妊娠结局分作流产组41例和正常妊娠组44例.以流式细胞技术完成对所有受试者外周血NK细胞百分数以及外周血NK细胞杀伤活性的检测并进行对比.采用Spearman相关性分析明确RRF并发IT患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与流产的关系.结果 流产组孕0周、孕6周的外周血NK细胞百分数分别为(13.02±1.33)％、(13.74±1.28)％,均高于正常妊娠组的(8.15±1.01)％、(8.36±1.06)％,差异有统计学意义(t=19.092、21.162,P0.05);两组孕8周、孕12周时的外周血NK细胞杀伤活性对比,差异无统计学意义(P>0.05).经Spearman相关性分析可得:RRF并发IT患者孕0周、孕6周的外周血NK细胞百分数、外周血NK细胞杀伤活性均和流产呈正相关关系(P<0.05).结论 RRF并发IT患者外周血NK细胞百分数及其杀伤活性与妊娠结局均密切相关,随着孕0周和孕6周的外周血NK细胞百分数及其杀伤活性增加,不良妊娠风险升高.

摘要： 目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势.方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势.结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2～3 d即出现细胞集落.随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95％.结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势.外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势.在培养的第12天～第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高.采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高.

摘要： 目的:探讨补骨脂二氢黄酮甲醚调控 γδT细胞消减胃癌SGC-7901程度.方法:获取人外周血中单个核细胞,体外扩增 γδT细胞,不同浓度BVC诱导 γδT细胞、SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,CCK-8检测BVC对 γδT细胞增殖率、SGC-7901抑制率影响;流式细胞术测 γδT细胞GZMB、PF、CD107a产生量;LDH法测 γδT细胞消减SGC-7901程度.结果:体外扩增8 d,γδT细胞比例由3.54％增至85.34％.与对照组比较,BVC诱导24 h,浓度10～80 nmol/L促进 γδT细胞增殖(P<0.05).BVC诱导48 h、72 h,浓度5～80 nmol/L促进 γδT细胞增殖(P<0.05).同样浓度,72 hγδT细胞增殖率最大.BVC作用肿瘤细胞24 h、48 h、72 h,浓度160～640 nmol/L SGC-7901生长抑制率高于对照组(P<0.05),浓度10～40 nmol/L,GZMB、PF、CD107a表达高于对照组(P<0.05).BVC诱导 γδT细胞72 h,一定浓度该T细胞消减SGC-7901程度随浓度增高而增高,浓度40 nmol/L消减程度最大,后呈下降趋势.结论:BVC适宜浓度促进 γδT细胞增殖,抑制SGC-7901生长,加强 γδT细胞消减SGC-7901程度,机制考虑:PF、GZMB、CD107a表达提高增强 γδT细胞消减能力.

摘要： 目的 探讨携带甲胎蛋白(AFP)的重组腺相关病毒(rAAV)感染树突状细胞(DCs)对肝癌细胞株SMMC-7721的体外杀伤作用,为肝癌非手术治疗提供方法.方法 首先确定AFP基因序列并合成AFP基因,将其转染至重组腺相关病毒rAAV,之后将转染AFP的rAAV感染树突状细胞,并将感染rAAV的DC与SMMC-7721共同培养,同时设未感染rAAV的DC作为对照组,用MTT法检测rAAV-DC及DC对SMMC-7721的杀伤活性.结果 感染rAAV的DC对SMMC-7721的杀伤活性为89.00％,DC对SMMC-7721的杀伤活性为75.19％,两者比较有差异(P＜0.05).结论 携带AFP的rAAV感染DC后,能明显增强DC对SMMC-7721的杀伤活性.

摘要： 本研究所建立的NK细胞体外扩增方法具有细胞生长速度快、数量多、纯度高、对肿瘤细胞的杀伤力强等特点。供者来源的50ml外周血分离得到的单个核细胞，经体外培养16-21天后，CD3-CD56+NK细胞数量、纯度及活率等均可满足临床治疗的需要，NK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性，同时不存在细菌、真菌、支原体及病毒等的污染，具有很好的临床应用前景。

摘要： 目的:探讨重组人纤维连接片段(RetroNectin)与抗CD3单抗(CD3Ab)联合包被培养对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)增殖和杀伤活性的影响.方法：取完全缓解期急性白血病(AL)患者外周血单个核细胞,用传统方法诱导培养获得CIK细胞作为对照组,采用RetroNectin包被(实验1组)、CD3Ab包被(实验2组)及RetroNectin联合CD3Ab包被(实验3组)体系诱导CIK细胞,比较两种方法诱导的CIK细胞增殖、细胞因子分泌、CD25+细胞表达、细胞周期、对自体AL细胞的杀伤活性以及培养后凋亡率.结果:①各实验组CIK扩增倍数高于对照组(110.23倍)(P＜0.05),其中实验3组(224.75倍)高于实验1组(173.19倍)和实验2组(153.79倍)(P＜0.05).②实验1组和3组诱导的CIK细胞CD25+细胞率分别为(39.84±8.25)％和(42.16±10.38)％,明显高于对照组的(13.76+2.52)％和实验2组的(11.93 ±3.47)％ (P＜0.01).

摘要： 目的:探讨了二代和三代CAR-T对不同淋巴瘤细胞株的体内体外杀伤活性比较. 方法:利用慢病毒包装并感染T细胞的方法制备CD19CAR-T,利用CCK8、ELASA和乳酸脱氢酶细胞毒性检测的方法检测CD19CAR-T的增殖、炎症因子释放和肿瘤杀伤能力,利用流式分析了CD19CAR-T在治疗淋巴瘤荷瘤裸鼠的过程中的肿瘤负荷和CAR-T残留水平. 结果:相比二代CAR-T而言,三代CAR-T的肿瘤杀伤和增殖能力较强,而炎症因子的释放水平则没有显著变化.CD19CAR-T针对侵袭性淋巴瘤细胞株Raji杀瘤效果相比惰性淋巴瘤细胞株EHEB的杀瘤效果明显,体内实验显示了CD19CAR-T治疗后注射Raji的裸鼠肿瘤负荷下降高于注射EHEB的裸鼠肿瘤负荷,而注射Raji的裸鼠的CAR-T残留水平高于注射EHEB的残留水平. 结论:CD19CAR-T治疗侵袭性淋巴瘤在较短的时间内可迅速起效,而对惰性淋巴瘤则需要CAR-T在体内存活较长的时间才可达到满意疗效.

摘要： 目的:本实验探讨了利妥昔单抗对CD19-CAR-T细胞的增殖分化以及对淋巴瘤细胞株的杀伤活性影响. 方法:利用慢病毒包装并感染T细胞的方法制备CD19-CAR-T细胞,利用流式检测CD19-CAR-T转染率,利用CCK8、乳酸脱氢酶细胞毒性检测以及ELASA的方法检测CD19-CAR-T细胞的增殖、肿瘤杀伤能力和炎症因子释放水平. 结果:CD19-CAR-T细胞可特异性识别并杀伤CD19+B细胞恶性肿瘤细胞;在含有残留剂量利妥昔单抗的生长环境中,CD19-CAR-T细胞的增殖活性并没有受到影响,且CD19-CAR-T细胞对弥漫大B细胞的杀伤功效以及炎症因子分泌水平也没有较大变化. 结论:CD19-CAR-T细胞的功能不受残留的利妥昔单抗的影响.

摘要： 目的:探讨抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)对食管鳞癌细胞(esophagealsquamous cell carcinoma,ESCC)Ecap-109的体外杀伤作用.方法:将加热430C2小时的Ecap-109细胞用超声细胞破碎仪破碎后离心,取上清作为肿瘤抗原,与经IL-4,GM-CSF,TNF-α等细胞因子诱导的DC共同培养,在体外对培养的人食管鳞癌细胞Ecap-109进行杀伤活性实验,并与未负载抗原的DC杀伤活性进行比较.结果:负载抗原的DC在与Ecap-109比值为25:1时,其杀伤活性达到59.41％,比未加抗原的DC杀伤活性明显增强(P＜0.01).结论:抗原负载的DC对食道鳞癌细胞Ecap-109的体外杀伤作用明显高于未负载抗原的DC.

摘要： 目的:观察十两茶提取物对小鼠免疫功能的影响.rn 方法:利用昆明种小鼠模型,设立不同剂量的十两茶提取物给药组以及对照组,分别在给药后的第7、14、28d检测小鼠血清中补体成分含量、相关细胞因子含量以及免疫球蛋白含量,检测腹腔巨噬细胞吞噬功能,检测T细胞、B细胞增殖活性,检测NK细胞的数量及杀伤活性,并做T细胞亚群分析.rn 结果:给药后14d,给药组小鼠脾脏中NK细胞的数量下调,但其细胞杀伤活性没有受到影响;给药后28d,给药组小鼠NK细胞的杀伤活性显著高于对照组;而血清补体含量、IgG含量、细胞因子含量以及腹腔巨噬细胞吞噬功能,T、B细胞增殖活性以及CD4+T细胞/CD8+T细胞比值等指标的差别没有统计学意义.rn 结论:十两茶提取物可显著促进小鼠NK细胞的杀伤活性,在短期内对小鼠的适应性免疫功能没有明显影响.

摘要： 目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和功能的影响.rn 方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据刺激因子(CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)加入方法不同将实验分为7组.用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力;流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4,CD8,CD28,CD16、CD56+CD16,CD3+CD8+,CD3+CD4+,CD3+CD56+,CD3+CD28+,CD45RO,颗粒酶B(granzyme B),穿孔素(Perforin)和CD107a等分子的变化和用ELISA方法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α含量;乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞株的杀伤活性.rn 结果:在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10天时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6±5.5)(P＜0.05).在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞标记中以延迟3天添加IL-15和IL-21组最明显.在PBMC培养体系中加入不同的活化因子其细胞表分泌的细胞因子有明显差异,在含IL-15和IL-21组中IFN-γ分泌量显著高于其他组.经不同活化因子刺激培养10天的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3天添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2％、60.3％和70.6％),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9％、44.6％和50.4％)(P＜0.05).培养的各组细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强.rn 结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记、细胞因子分泌和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定意义.

摘要： 目的:重组人纤维连接片段(RetroNectin)包被培养自然杀伤(NK)细胞对其体外增殖和杀伤活性的影响,以期获得扩增效率和活性更为理想的免疫活性细胞.方法：取急性白血病(AL)患者完全缓解后外周血分离单个核细胞,采用50和25μg/ml的RetroNectin包被及传统方法培养获得NK细胞,检测各组NK细胞增殖、表型、培养上清细胞因子含量以及对K562细胞的杀伤活性的影响.结果:①Ret-roNectin 25和50 μg/ml组NK细胞分别扩增(51.17±9.46)和(78.52±15.73)倍;均高于对照组的(37.38±11.26)倍(P＜0.05);RetroNectin 50 μg/ml组高于RetroNectin 25μg/ml组(P＜0.05).

摘要： 目的:探讨NK细胞活化受体(NKG2D)介导的NK细胞抗白血病作用.方法：取健康人的外周血,分离单个核细胞人(MNC),用含有100 U/ml IL-2的培养液(含10％ FBS的RPMI 1640)或用特殊的滋养细胞K562-mb15-41 BBL培养14天扩增NK细胞,用流式细胞术检测不同培养方法扩增前后的NK细胞表面NKG2D的表达.以扩增培养后的NK细胞作为效应细胞,用表达NKG2D配体的白血病细胞K562作为靶细胞,用铬释放实验检测培养前后NK细胞对白血病细胞杀伤活性的改变.

摘要： 目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和功能的影响.rn 方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据刺激因子(CD3mAb、CD28mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)加入方法不同将实验分为7组.用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力;流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4, CD8, CD28, CD16、CD56+ CD16, CD3+ CD8+,CD3+CD4+,CD3+ CD56+,CD3+CD28+,CD45RO,颗粒酶B(granzyme B),穿孔素(Perforin)和CD107a等分子的变化和用ELISA方法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α含量;乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞株的杀伤活性.rn 结果:在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10天时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6±5.5)(P＜0.05).在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+ CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞标记中以延迟3天添加IL-15和IL-21组最明显.在PBMC培养体系中加入不同的活化因子其细胞表分泌的细胞因子有明显差异,在含IL-15和IL-21组中IFN-γ分泌量显著高于其他组.经不同活化因子刺激培养10天的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3天添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2％、60.3％和70.6％),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9％、44.6％和50.4％)(P＜0.05).培养的各组细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强.rn 结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记、细胞因子分泌和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定意义.

摘要： 本发明公开了一种小肽衍生物在提高自然杀伤细胞杀伤力和迁移活性中的应用，属于生物领域，涉及小肽衍生物在自然杀伤细胞培养中的应用。本发明请求保护一种小肽衍生物在体外提高自然杀伤细胞杀伤力和迁移活性中的应用，所述小肽衍生物为N‑Formyl‑MLFK。本发明通过实验发现，小肽衍生物N‑Formyl‑MLFK不仅可以提高自然杀伤细胞的杀伤力还可以提高其迁移活性，这有助于自然杀伤细胞发挥其杀伤作用。

摘要： 本发明涉及生化材料技术领域，提供了一种兼具荧光成像和I型光动力/光热杀伤癌细胞活性的荧光探针及其制备方法和应用。本发明提供的荧光探针具有聚集诱导发光特性，能够产生更强的荧光，在生物体内能够选择性富集于癌症组织，可应用于活体检测病变癌症组织；该荧光探针具有较长的近红外吸收，可避免生物组织自吸收，降低背景干扰；该荧光探针还具有优异的光稳定性、抗光漂白能力以及近红外发光能力，使其适用于活细胞或活体中癌症组织的长时示踪；同时，该荧光探针还具有I型活性氧产生能力及光热性能，可用于光动力/光热协同杀伤癌细胞，构建兼具诊断与治疗功能于一身的诊疗试剂。

摘要： 本发明公开了一种高增殖活性和高杀伤力的NK细胞及其用途，该NK细胞中miR‑718高表达。本发明从分子、细胞和动物层面发现miR‑718基因高表达可以提高NK细胞的杀伤力。本发明还发现，miR‑718基因高表达有助于提高NK细胞的增殖活性。因此，该NK细胞可以用于细胞免疫治疗提高疗效。

摘要： 本发明涉及一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法和用途。所述增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法为将LAK细胞与DC细胞共培养。DC细胞用于增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的用途。本发明通过将LAK细胞和DC细胞共培养，促进LAK细胞的增殖，增强了LAK细胞的杀伤活性。

摘要： 本发明涉及能够比人体外周血的自然杀伤细胞产生更高水平的自然杀伤细胞受体并且具有优秀的杀伤活性及很高的γ‑干扰素生产能力的记忆样自然杀伤细胞的制备方法、通过上述方法制备的记忆样自然杀伤细胞以及利用上述记忆样自然杀伤细胞的癌症治疗方法。

摘要： 本发明公开了一种CXCR3激活剂在提高自然杀伤细胞杀伤活性中的应用。本发明试验证明，水麦冬酸具有提高NK细胞杀伤活性的作用，体内、体外试验都可以证明这种作用，且水麦冬酸有可能是通过激活CXCR3发挥该作用。故而，水麦冬酸可以用于制备提高NK细胞杀伤活性的药物，也可以用于制备提高NK细胞杀伤活性的培养基。

摘要： 本发明公开了复方苦参注射液在促进自然杀伤细胞增殖和杀伤活性中的应用，属于医药技术领域。本发明发现在培养基中添加复方苦参注射液，能够使NK细胞的增殖速度快、活力好、凋亡率低、杀伤作用增强。复方苦参注射液具有促进NK细胞增殖和杀伤活性中的应用，复方苦参注射液具有制备促进NK细胞增殖和杀伤活性的培养基的应用。本发明显著提高了体外培养NK细胞的活力、增殖与杀伤作用，改良了NK细胞的培养方法。

摘要： 本发明涉及一种增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法和用途。所述增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的培养方法为将LAK细胞与DC细胞共培养。DC细胞用于增强LAK细胞杀伤活性和增殖活性的用途。本发明通过将LAK细胞和DC细胞共培养，促进LAK细胞的增殖，增强了LAK细胞的杀伤活性。

摘要： 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种提升免疫细胞杀伤活性的嵌合受体及其应用。具体地，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括胞外部分、胞外铰链区、跨膜区、胞内区胞内部分。最优选地，本发明所述融合蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.：1、3、5、7、9、11的依次连接，表达所述融合蛋白的免疫细胞具有强杀伤活性。

摘要： 本发明提供了一种提高NK细胞杀伤活性的方法，属于细胞免疫技术领域。本发明提供的方法包括如下步骤：将Acipensin 2多肽加入到NK细胞培养基中配制成含有Acipensin 2多肽的NK细胞培养基；使用无菌过滤器对所述含有Acipensin 2多肽的NK细胞培养基进行过滤；在培养装置中加入NK细胞,添加过滤后的所述含有Acipensin 2多肽的NK细胞培养基，置于细胞培养箱中对NK细胞进行培养。使用本发明方法培养NK细胞可以增加NK细胞的增殖速度，同时可以提高NK细胞中颗粒酶B和穿孔素的表达。