中国仓鼠卵巢细胞

摘要： 生殖激素是调控动物体内复杂生殖过程并影响繁殖性能的一系列的重要激素.近年来,利用生殖激素的批次化生产繁殖技术被广泛使用,提高了母猪的繁殖效率,促进了养猪业向集约化和规模化方向的发展.目前在批次化生产过程中主要采用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)以及化学类激素进行繁殖调控.但是这些产品的应用仍存在一些问题,因此需要开发出成本低、活性好的高品质蛋白类生殖激素产品,应用于猪场批次化生产中,提高生猪养殖效率和降低生产成本,为提升我国乃至全球畜牧业的动物繁殖效率做出贡献,为动物和人类的健康提供重要保证.

摘要： 目的 建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法.方法 利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物纯度,Western blot检测产物特异性,同时比较重组抗体的活性.结果 筛选得到1株稳定表达的细胞株,收液后蛋白BCA定量为135.9 mg·L-1.纯化后获得的目的蛋白相对分子质量约为185 kD,蛋白纯度在99％以上,与商品化的"赫赛汀"一致;活性检测显示其活性与"赫赛汀"相当,细胞实验揭示其能显著抑制BT-474细胞增殖及胞内HER2的表达.结论 该方法筛选获得的重组蛋白,与商品化药物性质基本一致,这为重组抗体药物的大规模悬浮培养放大和工业化生产奠定了基础.

摘要： 目的 探讨不同核心启动子对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞重组蛋白表达的影响.方法 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,分别构建以巨细胞病毒(CMV)启动子、Natural CMV启动子、超级核心启动子(SCP)2和SCP3驱动的表达载体并转染CHO细胞,根据转染表达载体的不同将细胞分为对照组、Natural CMV组、SCP2组和SCP3组.应用荧光倒置显微镜观察报告基因EGFP的瞬时转染效率,流式细胞术检测各组第1代和第30代细胞中EGFP表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组第30代细胞中EGFP mRNA相对表达量.结果 对照组、Natural CMV组、SCP2组细胞的瞬时转染效率比较差异无统计学意义(P>0.05);SCP3组细胞的瞬时转染效率显著高于对照组(P0.05),对照组、Natural CMV组、SCP2组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平显著高于对照组、Natural CMV组和SCP2(P0.05),SCP2组、SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于对照组、Natural CMV组(P<0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于SCP2组(P<0.05).结论 SCP3能够显著提高CHO细胞中重组蛋白的表达及稳定性.

摘要： 抗体,作为应用广泛的一类蛋白质药物,主要通过大规模培养中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞生产。但在CHO细胞培养过程中,细胞高水平代谢伴随着大量活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)生成,环境压力也可促进ROS产生。当抗氧化防御系统难以与其抗衡时将出现氧化应激,不利于细胞生长代谢和生产。本文综述了CHO细胞培养中氧化应激调控的三类工程学方法,即基因工程、抗氧化型添加剂和培养过程控制的应用,旨在为细胞培养时调控氧化还原平衡提供思路。

摘要： 抗体,作为应用广泛的一类蛋白质药物,主要通过大规模培养中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞生产.但在CHO细胞培养过程中,细胞高水平代谢伴随着大量活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)生成,环境压力也可促进ROS产生.当抗氧化防御系统难以与其抗衡时将出现氧化应激,不利于细胞生长代谢和生产.本文综述了CHO细胞培养中氧化应激调控的三类工程学方法,即基因工程、抗氧化型添加剂和培养过程控制的应用,旨在为细胞培养时调控氧化还原平衡提供思路.

摘要： 寻找中国仓鼠卵巢(CHO)细胞染色体上稳定表达位点是解决CHO细胞长期培养表达不稳定问题的有效手段。本课题组前期利用慢病毒转染将示踪基因(Zsgreen1)整合CHO细胞染色体上并发现多个潜在稳定表达位点。本研究验证了其中一个位点稳定表达外源蛋白的能力,该位点位于染色体NW_003614241.1上148052~148157 bp区域。首先观察Zsgreen1基因的表达情况,随后采用CRISPR/Cas9技术将增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因定点整合至该位点,获得3株EGFP基因定点整合的细胞,经60代悬浮培养,细胞荧光强度无明显变化,证明此位点可稳定表达EGFP基因。采用同样方法构建了表达人血清白蛋白(HSA)基因的重组CHO细胞株,经Western blot验证,此位点可分泌表达HSA,表明上述位点可定点整合和稳定表达外源蛋白。

摘要： 登革病毒引起的登革热是全球热带亚热带地区主要公共卫生问题。蚊虫细胞来源的高甘露糖型登革病毒更易于感染树突状细胞,但不同糖基化修饰水平是否影响登革病毒感染尚不清楚。以中国仓鼠卵巢CHO-K1细胞及其N-乙酰葡萄糖基转移酶缺陷型Lec1细胞(高甘露型糖基化)作为模型,研究糖基化修饰对登革病毒感染的影响。结果表明:使用相同量登革病毒感染CHO-K1和Lec1细胞,48 h后免疫荧光法检测到Lec1细胞中表达更多的登革病毒E蛋白,qPCR检测到在Lec1细胞中登革病毒E基因复制水平显著高于CHO-K1细胞。Lec1细胞在吸附病毒和病毒入胞水平上也高于CHO-K1细胞。对于含荧光素酶的登革病毒复制子,用酶标仪进行荧光检测显示复制子在CHO-K1和Lec1细胞中的复制水平无明显差异。使用Lec1细胞培养的子代病毒对Vero细胞具有更高的感染性。综上所述,CHO-K1细胞糖基化修饰为Lec1细胞后,更易于感染登革病毒。

摘要： 嵌入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的C型内源性逆转录病毒(ERV)被改变以改变培养上清液中逆转录病毒颗粒和/或逆转录病毒样颗粒的释放。尽管缺少这些颗粒的传染性证据，但它们的存在已经引发了安全问题。鉴定出聚集在功能性保守组内的173个C型ERV序列。鉴定出来自一个C型ERV组的转录物为具有完整的开放阅读框的全长转录物，并且具有装载到逆转录病毒样颗粒中的相应病毒RNA基因组。此外，对来自病毒颗粒的基因RNA的序列分析表明，它们可能是由少数表达的ERV序列导致的。本文公开了使用CRISPR‑Cas9基因组编辑对表达的ERV组的gag基因进行破坏/改变。对在DNA和mRNA水平上CRISPR衍生的突变进行比较，从而确定了负责从CHO细胞中释放病毒RNA负载颗粒的单个ERV基因座。在这个特定ERV基因座带有Gag功能缺失突变的克隆显示细胞上清液中含病毒RNA的颗粒减少了超过250倍。值得注意的是，ERV的诱变没有损害细胞生长、细胞大小或重组蛋白的产生。本文提供了一种新的策略和细胞，特别是工程化CHO细胞，以减轻生物制药过程中来自CHO内源性逆转录病毒的潜在污染。

摘要： 本文提出一种用于改良中国仓鼠卵巢CHO细胞中的治疗蛋白的产生的高通量(HTP)基因组工程改造平台。所公开的HTP基因组工程改造平台以计算方式驱动并且整合分子生物学、自动化和先进机器学习方案。所述平台使用一套独特的HTP基因工程改造工具来探索与治疗蛋白产生路径相关的基因组全景，以便阐明生物驱动因素并且理清负责优化CHO细胞中的治疗蛋白产生的非特征基因架构。

摘要： 本发明涉及用中国仓鼠卵巢细胞表达外源蛋白时信号肽的选择方法及应用，属于生物技术领域。本发明采用信息分析技术，对29种在CHO细胞中常用的高分泌表达信号肽和外源蛋白串联序列进行分析，最终选择分析结果合适的10种信号肽，通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5’端相连，分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western blot检测CHO培养基中重组表位蛋白的累积差异,结果证明蛋白累计差异与本方法选择结果相符合，从而证明了所述方法的可行性。

摘要： 本发明涉及外源基因定点整合的FRT‑CHOS细胞系及其用途。该细胞系利用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)作为宿主细胞通过插入识别标签在其1p12区而获得。本发明FRT‑CHOS细胞系支持外源基因的定点整合，并长期维持外源蛋白的高效和稳定表达。

摘要： 本发明人提供了一种中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，所述细胞与野生型中国仓鼠卵巢细胞相比能够实现更高的蛋白质唾液酸化，例如在存在功能性GnT 1的情况下，其中所述CHO细胞可通过以蓖麻凝集素I(RCA‑I)选择来获得。

摘要： 本发明提供了一种用于中国仓鼠卵巢细胞克隆形成的培养基，本发明提供的培养基不含血清、不含动物来源的组分，本发明所提供的克隆培养基，能够使CHO细胞的克隆成团更紧密、扩散少，并且克隆的生长速度快，能够更高效地挑选出适合生产使用目的的表达克隆。

摘要： 本发明涉及用中国仓鼠卵巢细胞表达外源蛋白时信号肽的选择方法及应用，属于生物技术领域。本发明采用信息分析技术，对29种在CHO细胞中常用的高分泌表达信号肽和外源蛋白串联序列进行分析，最终选择分析结果合适的10种信号肽，通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5’端相连，分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western blot检测CHO培养基中重组表位蛋白的累积差异,结果证明蛋白累计差异与本方法选择结果相符合，从而证明了所述方法的可行性。

摘要： 本发明属于细胞培养领域，涉及一种中国仓鼠卵巢细胞培养基。本发明仓鼠卵巢细胞培养基，包括以下组分：DMEM基础培养基，酵母抽提物，碳酸氢钠，氨基酸，维生素，无机盐，白蛋白，转铁蛋白和亚油酸。本发明的培养基为CHO细胞生长提供了丰富的营养环境，避免了有血清添加的各种弊端，本发明培养基各组分共同作用，减少了CHO细胞生长代谢产生的有害代谢物，在不添加补料培养基的条件下，能够促进CHO细胞蛋白的表达。

摘要： 本实用新型公开了一种用于中国仓鼠卵巢细胞培养装置，属于细胞培养装置技术领域，该装置包括细胞培养装置，所述的细胞培养装置是由外环、中环、支撑圆块、连接装置和夹紧装置组合而成；通过转动杆能够使第一环体与第二环体之间水平转动，第二环体与块体之间水平转动，在使用者握住把手移动时，能够将晃动的力稍微缓冲，并能够使得块体不会晃动的特别厉害，从而能够保护块体上放置的培养皿，通过扭簧能够将晃动的力小于扭簧的力的时候自动复位，通过配重块能够使得晃动更加平稳，且放在试验台上时，如果不小心碰到试验台时，能够使得细胞培养装置在试验台上稳定，且块体不会晃动剧烈，从而能够保护块体上的培养皿。

摘要： 本实用新型公开了一种改造的中国仓鼠卵巢细胞培育装置，包括培育箱和设置于培育箱顶部的盖板，所述培育箱内部滑动有用于承载培育器皿的承载板，所述培育箱内部设置有用于驱动承载板做竖直往复移动的驱动装置；所述驱动装置包括固定板和升降杆，所述固定板固定于培育箱内壁。该改造的中国仓鼠卵巢细胞培育装置，通过开启升降电机从而驱动转动杆带动转动块旋转，此时转动块凸起部位能够抵触滚轮凹槽，进而带动转动滚轮推动升降杆和承载板做竖直往复移动，从而是方便工作人员对承载板上的培育器皿进行拿取，从而避免器皿发生堕落而影响卵巢细胞观察的效果，保证了设备的使用效果，减小了材料成本，避免发生浪费的问题。