杂交瘤细胞

摘要： 目的筛选对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV2)不同突变株具有广谱特异性的、高亲和性中和抗体,并进行功能验证。方法用脂质体包被的SARS-CoV2刺突蛋白(S蛋白)mRNA疫苗对Balb/c小鼠进行2次免疫,测定小鼠血清中特异性抗体含量,选取抗体含量较高的小鼠进行冲击免疫;取冲击免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用有限稀释法和ELISA筛选出上清能特异性结合S蛋白及S蛋白受体结合域(RBD)的杂交瘤细胞克隆;纯化单克隆抗体,进行假病毒中和实验,验证抗体中和活性;并通过ELISA筛选对4种SARS-CoV2突变株的重组RBD蛋白具有广谱结合特性的单克隆抗体。结果经2次免疫,检测到高剂量组4号小鼠血清中针对S蛋白的抗体含量最高;经过冲击免疫、细胞融合后,共筛选到12株与S蛋白具有结合活性的杂交瘤细胞,其中9株特异性结合RBD蛋白;假病毒中和实验结果显示,41、46和47这3株抗体在体外有显著的中和病毒活性(P<0.05);与另2株抗体相比,46号抗体显示出与SARS-CoV24种包括Omicron在内的突变株的RBD蛋白的广谱结合活性。结论46号抗体是对SARS-CoV2四种不同突变株具有广谱特异性的中和抗体,有望进一步进行人源化改造,用于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗。

摘要： 为了研究不同浓度的泊洛沙姆188(Poloxamer 188,P188)、碳酸氢钠(NaHCO_(3))和HEPES对CPV ID3细胞株生长的影响,分别向无血清培养基中添加不同浓度的P188、NaHCO_(3)和HEPES于125 mL摇瓶内悬浮培养稳定表达犬细小病毒单抗的CPV ID3细胞株,培养体积30 mL,培养条件为36.5°C,5%CO_(2),120 rpm,每天取样测量细胞的密度、活率,并于培养结束后检测抗体表达量。结果显示,P188在0~15 g·L^(-1)的添加范围内,P188浓度越高,细胞高密度维持时间越长,抗体表达量越高。NaHCO_(3)在1.5~2.5 g·L^(-1)添加范围内,NaHCO_(3)浓度与细胞生长速率,乳酸积累量成正比,与抗体表达量成反比。HEPES在0~25 mM添加范围内,与抗体表达量成正比,与最高活细胞密度成反比,当HEPES浓度为10 mM时,细胞生长速率最大;当HEPES浓度大于10 mM时,HEPES浓度与细胞生长速率成反比。结论:针对CPV ID3细胞株,在无血清培养基中添加P188可以延长细胞密度维持时间,提高抗体表达量;培养基中的NaHCO_(3)和HEPES的最适浓度分别为2 g·L^(-1)和10 mM。

摘要： 为制备抗A型塞内卡病毒(SVA)VP1蛋白的单克隆抗体,并初步应用于A型塞内卡病毒的检测,本研究构建了SVA VP1原核重组表达质粒pET30a-GST-VP1(528 bp)。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21感受态细胞并大量表达VP1重组蛋白,利用纯化的VP1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)进行融合,经过细胞亚克隆筛选,获得杂交瘤细胞。将其选为腹水生产细胞株,最后纯化单克隆抗体,通过Western blotting和间接免疫荧光试验对其进行鉴定。结果显示,本研究获得1株能够稳定分泌抗VP1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,其亚型重链为IgG2a、轻链为Kappa链;Western blotting和间接免疫荧光检测显示,该单克隆抗体能够特异性识别SVA病毒粒子。本研究成功制备的抗SVA VP1蛋白单克隆抗体可为进一步研究A型塞内卡病毒VP1蛋白的生物学功能及A型塞内卡病毒致病机制提供有效途径。

摘要： 目的:制备抗Periostin单克隆抗体并鉴定其免疫学性能,为后期临床应用奠定基础。方法:表达并纯化Periostin的GST融合蛋白,经过免疫小鼠、细胞融合及亚克隆筛选,制备效价良好的高亲和力单克隆抗体,并用免疫组化实验鉴定其免疫学性能。结果:获得6株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌高亲和力抗体,经酶联免疫吸附测定、Western blot和免疫组化实验证实均能特异性识别人的Periostin,显微镜下观察发现Periostin在结直肠癌、乳腺癌等肿瘤患者的组织切片中表达水平显著高于健康人。结论:成功制备了高亲和力、特异性强的抗人Periostin单克隆抗体,为小分子抗体以及抗体人源化制备奠定了基础,进而为治疗人体内组织器官纤维化提供理论依据。

摘要： 旨在制备猪RNA聚合酶Ⅱ的单克隆抗体并进行初步应用.本研究采用生物信息方法预测免疫原,将其化学合成后免疫5只4～8周龄Bal b/c雌性小鼠,对免疫后呈现阳性的小鼠进行细胞融合试验,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合并获得能稳定分泌抗RNA PolⅡ的杂交瘤细胞.鉴定结果显示,RNA PolⅡ单克隆抗体的重链为IgG 2A型,轻链为Kappa型.利用间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了 8株稳定分泌RNA PolⅡ单克隆抗体的杂交瘤细胞株.将其初步应用到染色质免疫共沉淀(ChIP-seq)技术,并与商业化抗体的富集性进行比较,结果表明,本研究得到的单克隆抗体富集性更强.本研究获得的猪RNA PolⅡ单克隆抗体可为表观遗传学的研究提供理论基础,并且提供重要的生物学材料.

摘要： 学科核心素养是学生后天习得的终身受益成果,是学生在解决真实情境中的生物学问题时所表现出来的必备品格和关键能力。学科核心素养主要包括生命观念、科学思维、科学探究和社会责任四个维度,需要通过每节课或每项活动来逐步培养,最终使学生成为对社会有用的人才。

摘要： 目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法.方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率.ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选.获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条.结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106.该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45％(45/52),阴性符合率为89.58％(43/48),总符合率为88.00％(88/100),结果一致性较好.结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠.

摘要： 目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体.方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10:1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测.选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测.结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株.SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60000:1左右.结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础.

摘要： 用纯化的犬瘟热病毒(CDV)免疫BALB／c小鼠，制备脾细胞，与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选和克隆化，获得5株能稳定分泌CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为3H11、1D7、2C9、lF8和3G3，抗体亚类分别为IgG2bk、IgG1K、IgG2bK、IgG1K和IgG1K，诱生腹水的抗体效价分别为109、107、106、107和106。细胞染色体分析表明，5株杂交瘤细胞株染色体平均数为88～96条，高于SP2／0骨髓瘤细胞或脾细胞的染色体数;间接免疫荧光试验(IFA)证明，5株单抗均与CDV发生特异性反应;免疫印迹(western blotting)分析，单抗1F8和3G3能特异地识别CDV的N蛋白;在病毒中和试验中，单抗3H11和1D7的病毒中和效价分别为105和106，其它3株单抗则没有中和活性;经ELISA相加试验证实，5株单抗作用的抗原位点不同。

摘要： ras基因家族是一种重要的细胞原癌基因，包括Ha-ras、K-ras和N-ras成员，其表达产物大小均为21KD即P21ras蛋白，作为重要的分子开关参与调控细胞的增生、生长、分化及凋亡，并在肿瘤的发生和发展中起重要生物学作用，针对ras蛋白信号通路的靶向治疗目前也成为肿瘤治疗学研究热点。自从1982年第一株抗P21ras单克隆抗体杂交瘤细胞株(Y13-259)建立以来，国外研究人员已开发出多株抗P21ras单克隆抗体杂交瘤细胞株(Y13-258、YA6-172、Y13-128、NCC001／004、Ras10／11、RAP-1／5等)以及在此基础上利用基因工程技术建立的抗P21ras小分子抗体(ScFv)，体外试验显示出良好的抗肿瘤活性。良好的抗肿瘤活性。同时研究人员利用这些单克隆抗体广泛研究了ras蛋白的结构、功能及其在肿瘤发生、发展中的作用机制。然而，国内对ras基因、ras蛋白的结构、功能研究报道较少，对抗P21ras抗体的研究尚未见报道。本课题利用淋巴细胞杂交瘤技术制备5-10株高度特异性、高效价的抗广谱P21ras单克隆抗体杂交瘤细胞，为进一步构建抗P21ras单链抗体奠定理论和实践基础。

摘要： 把PRV(JS-2012株)gE主要抗原表位区核苷酸克隆到pCold-TF原核表达载体中，将重组质粒转化到BI21(DE3)大肠杆菌中，在lmM IPTG、16°C条件下诱导24小时。离心收集的菌液用超声破碎后，SDS-PAGE鉴定结果显示目的蛋白为可溶性表达。用His标签的磁珠将目的蛋白纯化并加佐剂乳化，免疫6周龄BALB/c雌性小鼠，四次免疫后取脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接EUSA和IFA筛选后，取阳性孔细胞做3-4轮亚克隆，最终筛选到4株能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，分别命名为5C3、5B2、2E5和6E6。将O.1MOI PRV病毒接于Vero细胞，18h后用IFA和Westem-Blot检测单克隆抗体与病毒的反应性。IFA实验结果显示四株单克隆抗体均能与PRV反应，但与gE缺失的疫苗毒Bartha-K61株无反应。结果显示，5C3和2E5单克隆抗体能与PRV反应，而与Bartha-K61株无反应，5固和6E五单克隆抗体与两个毒株均无反应。本研究获得了4株能稳定分泌PRV(JS-2012株)gE单克隆抗体的杂交瘤细胞，产生的抗体均具有良好的特异性。这些特异性单克隆抗体为研究伪狂犬病病毒以及建立伪狂犬病的诊断方法提供了良好的工具。

摘要： 通过淋巴细胞杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗小鹅瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞.用该细胞诱生Balb/c小鼠制得一批单抗腹水,并对其部分生物学特性进行了测定.试验结果表明,该单抗不仅特异性强反应效价高,而且具有高效价中和能力和凝聚力.用该单抗进行小规模动物预防试验,表明该单抗对于小鹅瘟有较好的预防效果.

摘要： 用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗，单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定，探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示，经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定，该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6，间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105，该细胞连续培养10代以上，生物学性状稳定，间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示，无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5 μg/L，除孔雀石绿外，与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应，表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。

摘要： 以纯化的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)重组S蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合技术，间接ELISA方法进行筛选和有限稀释法3次克隆，获得3株稳定分泌抗TGEV S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，分剐为1G6、2F8和3E5。检测细胞培养上清效价分别为1∶3200，1∶6400，1∶6400，诱导腹水抗体效价分别为1∶1600,1∶3200，1∶3200。腹水中的蛋白含量分别为50.1341mg/mL,48-3649mg/mL，59.3740mg/mL。3株杂交瘤细胞上清与猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CFSV)均无交叉反应;Westernblotting结果表明所获的3株单抗均与天然的TGEV S蛋白发生反应，且纯度很高.用所制单抗建立了单抗介导的双夹心间接ELISA方法检测TGEV S蛋白，该方法具有良好的特异性。

摘要： 重金属汞离子(Hg2+)与螯合剂DTPA螯合后再与载体蛋白KLH偶联获得免疫抗原(Hg-DTPA-KLH)，鉴定抗原成功合成后，以该完全抗原免疫BABL/c小鼠制备杂交瘤细胞，获得了株稳定分泌抗Hg-DTPA抗体的细胞株(H2H5，H1H8)。用H2H5，H1H8细胞株制备小鼠腹水，获得抗Hg-DTPA的高效价腹水型单抗，效价达1∶51200.两株杂交瘤都为IgG1亚类，轻链为κ型。两株杂交瘤分泌抗体稳定性较好。

摘要： 本研究旨在研制出抗猪流感H的亚型特异性单克隆抗体,建立一个快速、敏感、特异、可靠、花费少、节省人力的检测猪流感的ELISA方法,以期能应用于SIV的诊断和研究,从而为更深入地研究、控制猪流感打下一定的基础.

摘要： 本文研究了甜菜碱对杂交瘤细胞C50生长代谢的影响,证实在高渗透压下,甜菜碱对C50细胞有良好的保护作用,并确定了适于C50细胞的最佳浓度为10mM,为消除补料培养后期渗透压过高的问题提供了一种有效的解决方法.

摘要： 开发设计了一种新式倾斜式重力沉降器用于解决动物细胞高密度连续灌注培养过程中的活细胞截留和死细胞分离问题.它可以高效、稳定的截留培养液中的活细胞并可以不断的、选择性的将培养液中的死细胞和细胞碎片分离除去.在灌注速率大幅度改变的情况下,其截留分离效果维持稳定.使用常规未浓缩培养基,在灌注速率为1.5day时,最大细胞密度达到2.5×10cell/ml.经长时间连续灌注培养使用证明,该沉降器优于国内外同类装置.

摘要： 本发明公开了一种富集大鼠浆细胞及建立浆细胞杂交瘤的方法，包括以下步骤：S1、以大鼠CD138为靶点，利用杂交瘤技术开发特异性抗大鼠CD138单克隆抗体；S2、使用抗大鼠CD138抗体对大鼠浆细胞进行富集，抗大鼠CD138抗体中包含EZ‑Link NHS‑PEG4‑生物素；S3、对小鼠骨髓瘤细胞和大鼠浆细胞进行处理，将处理后的小鼠骨髓瘤细胞和大鼠浆细胞进行细胞电融合；S4、将融合细胞转移至HAT筛选培养基中，在CO2培养箱中培养1～2小时，再铺于96孔细胞培养板中培养，7～14天后进行杂交瘤抗体筛选。本发明提供的方法富集度高，且改良了大鼠浆细胞杂交瘤融合技术，使杂交瘤抗体阳性率提高了10‑20倍，极大地提高融合效率和大鼠浆细胞的生物利用度，且本方法铺板数量低，节约了人力和物力成本。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的抗Nodal抗体和检测肿瘤细胞方面的应用。所述杂交瘤细胞株AH12，于2014年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC NO.9105。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗Nodal的单克隆抗体，所述抗Nodal的单克隆抗体与抗Nodal的多克隆抗体组成一种新的可应用于检测肿瘤细胞的试剂盒。本发明提供单克隆抗体的类型为IgG，具有良好的特异性与较高的效价。经检测，其效价可达1:1024000，在western bolt检测中，本发明提供的抗体仅在目标位置检测到特异性条带，且在稀释2000倍后仍显示良好的特异性。所述试剂盒可以较好地用于血清中Nodal蛋白的含量检测，且具有较高的灵敏性和特异性。

摘要： 本发明涉及检测技术领域，特别涉及杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的甘胆酸单克隆抗体和检测试剂盒。该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.15292。本发明具有的技术效果为：由本发明杂交瘤细胞株产生的甘胆酸单克隆抗体效价较高，可用于酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测甘胆酸，具有样品操作便捷、成本低廉、反应快速、灵敏度高、特异性强等特点。

摘要： 本发明公开了一种分泌抗水稻瘤矮病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的水稻瘤矮病毒(RGDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗RGDV单抗的杂交瘤细胞株11B6，其保藏号为CGMCC No.14897。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的抗Nodal抗体和检测肿瘤细胞方面的应用。所述杂交瘤细胞株AH12，于2014年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为杂交瘤细胞，保藏编号为CGMCC No.9105。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗Nodal的单克隆抗体，所述抗Nodal的单克隆抗体与抗Nodal的多克隆抗体组成一种新的可应用于检测肿瘤细胞的试剂盒。本发明提供单克隆抗体的类型为IgG，具有良好的特异性与较高的效价。经检测，其效价可达1∶1024000，在westernbolt检测中，本发明提供的抗体仅在目标位置检测到特异性条带，且在稀释2000倍后仍显示良好的特异性。所述试剂盒可以较好地用于血清中Nodal蛋白的含量检测，且具有较高的灵敏性和特异性。

摘要： 一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株能够分泌与乙肝表面抗原特异性结合的乙肝表面抗原单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株保藏号为CGMCC No.17681、CGMCC No.17682。杂交瘤细胞株制备方法，包括如下步骤：免疫、测定血清效价、融合、细胞株筛选。上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生的乙肝表面抗原单克隆抗体及制备方法，其制备方法包括如下步骤：腹水生产；腹水过滤；腹水稀释；测OD后上样；平衡；洗脱并接样；吸光值上扬后换管接样；加入NaN3；跑电泳、测活性；进行胶体金筛选。本发明提供的杂交瘤细胞株的制备方法获得的乙肝表面抗原单克隆抗体，产量高、稳定性好，成本低，胶体金检测应用中可提高检测灵敏度，快速准确检测大量临床样本。

摘要： 本发明涉及检测技术领域，特别涉及杂交瘤细胞株及基于杂交瘤细胞株的甘胆酸单克隆抗体和检测试剂盒。该杂交瘤细胞株的保藏编号为CGMCC No.15292。本发明具有的技术效果为：由本发明杂交瘤细胞株产生的甘胆酸单克隆抗体效价较高，可用于酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测甘胆酸，具有样品操作便捷、成本低廉、反应快速、灵敏度高、特异性强等特点。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株的抗CRH抗体N‑D19及其检测方面的应用。所述杂交瘤细胞株，于2016年4月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名为杂交瘤细胞N‑D19，保藏编号为CCTCC NO.C2015216。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的单克隆抗体N‑D19，以及所述单克隆抗体应用于检测急性高原病的试剂盒。本发明提供的抗CRH单克隆抗体N‑D19，可以识别CRH的N端表位；具有良好的特异性与较高的效价，其效价可达1：4×10

摘要： 本发明涉及生物技术领域，公开了杂交瘤细胞株的抗CRH抗体C‑D17及其检测方面的应用。所述杂交瘤细胞株，于2016年5月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，分类命名为杂交瘤细胞C‑D17，保藏编号为CCTCC NO.C2015215。基于所述杂交瘤细胞株产生的抗肾上腺皮质激素释放激素(CRH)的单克隆抗体C‑D17，以及所述单克隆抗体应用于检测急性高原病的试剂盒。本发明提供的抗CRH单克隆抗体C‑D17，可以识别CRH的C端表位；具有良好的特异性与较高的效价，其效价可达1：4×10

摘要： 本发明公开了一种分泌抗水稻瘤矮病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的水稻瘤矮病毒(RGDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗RGDV单抗的杂交瘤细胞株11B6，其保藏号为CGMCC No.14897。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10