裂殖壶菌

摘要： 裂殖壶菌(Schizochytrium sp.S31)作为典型好氧产二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)微生物,其生产过程中同时维持葡萄糖和溶解氧浓度(dissolved oxygen concentration,DO)于充足水平有利于细胞快速生长和DHA的大量积累。然而,裂殖壶菌细胞若长期处于DO充足状态时,存在胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)易发生积累,损害裂殖壶菌生物量和DHA产量的难题。为此,该文提出一种新型的“葡萄糖充足-DO周期”组合控制策略,即通过脉冲流加葡萄糖方式将其质量浓度维持于40 g/L左右的高浓度水平,与此同时,DO控制模式则是将培养阶段等分为10个10 h阶段,每个阶段的前8 h维持DO于充足水平(>10%),后2 h维持DO于受限水平(接近于零)。结果表明,采用该组合控制策略时:(1)最大胞内ROS浓度从对照的209.37 FI/g DCW降至146.38 FI/g DCW的低水平;(2)维持代谢系数从0.02661/h降至0.02121/h的较低水平;(3)DHA合成所需的关键前体物质乙酰辅酶A和辅因子NADPH合成途径中相关关键酶的活性、细胞比生长速度和葡萄糖消耗速率均得到增强;(4)DHA产量达到了13.69 g/L的最高水平,相比于对照两批次的3.92 g/L(葡萄糖充足-DO受限)和9.76 g/L(葡萄糖充足-DO充足),分别提高了256.1%和40.3%。

摘要： 研究了葡萄糖、甘油双碳源发酵对裂殖壶菌发酵二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的影响。首先以葡萄糖和甘油为单一碳源,发现以葡萄糖为碳源,菌体增殖速度和底物消耗速度都明显高于以甘油为碳源,以甘油为碳源细胞油脂中DHA的比例显著高于葡萄糖。为了发挥2种碳源各自优势,对葡萄糖和甘油双碳源发酵进行研究,结果显示2种碳源混合或葡萄糖耗尽后补加甘油结果都不如单一碳源好。但若先用葡萄糖为碳源进行培养,当发酵液中的葡萄糖质量浓度降至10~5 g/L时补加甘油既可以缩短发酵周期,又提高了油脂中的DHA比例。采用初始葡萄糖质量浓度为20 g/L,过程补加100 g/L甘油的发酵控制策略,5 L罐发酵,发酵周期可缩短至56 h,细胞油脂中DHA比例最高可达45.50%,充分发挥了2种碳源的优势。该研究得到了一种裂殖壶菌生产DHA葡萄糖、甘油分段发酵控制策略,大幅提高菌体细胞油脂中DHA的比例,同时有效缩短了发酵周期,具有非常好的工业应用价值。

摘要： 培养高职院校的学生,专业教育至关重要,但为了有效提高高职专业教育的实效性,就需要将其与创新创业教育进行融合,以"裂殖壶菌的产业化项目"为例,将学科专业教育与创新创业教育有机融合在一起,为提高高职院校学生综合素质,锻炼学生的创新创业能力提供了参考.

摘要： 培养高职院校的学生,专业教育至关重要,但为了有效提高高职专业教育的实效性,就需要将其与创新创业教育进行融合,以“裂殖壶菌的产业化项目”为例,将学科专业教育与创新创业教育有机融合在一起,为提高高职院校学生综合素质,锻炼学生的创新创业能力提供了参考。

摘要： 随着二十二碳六烯酸(DHA)在食品和畜牧业上优势的日益体现,人们投入大量的人力与技术在其来源及其一系列相关的研究方面.本文就二十二碳六烯酸含量较高的裂殖壶菌的菌种诱变及提取脂肪酸的工艺(破壁和发酵)进行综述,阐述了裂殖壶菌发酵产DHA的研究进展,并指出了微量元素对裂殖壶菌产DHA的影响,以期为裂殖壶菌工业化生产DHA并在饲料中推广使用提供参考.

摘要： 大量研究表明,在蛋鸡饲粮中添加富含n-3多不饱和脂肪酸的原料可以生产富含DHA的鸡蛋.DHA是人体必需的多不饱和脂肪酸之一,必须从食物中获取.裂殖壶菌作为初级生产者,富含DHA,成为开发DHA鸡蛋的最佳来源.目前,我国对裂殖壶菌在蛋鸡上的应用研究开发相对较少,文章就裂殖壶菌产DHA的优势以及蛋鸡上的应用和前景等进行了简要综述,以期为更加深入地开发利用裂殖壶菌提供参考.

摘要： 二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)因具有调节血脂、降低纤维蛋白、预防心血管疾病以及抗炎抗过敏的生理功能,被广泛应用于食品、医疗、化妆品以及饲料添加等领域.目前,EPA的需求日益增加,但是富含多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)的鱼油等自然资源逐渐匮乏,利用改造的微生物菌种发酵生产EPA的方式成为主要趋势.本研究利用同源重组技术将Shewanella sp.SCRC2738的烯酰还原酶基因(enoyl-reductase,sh-ER)分别敲入Schizochytrium limacinum SR21的ORFB-ER和ORFC-ER基因中,调控多不饱和脂肪酸合成的偏好性以提高EPA的产量.研究表明,sh-ER替换ORFB-ER基因的重组菌株(B-sh-ER)中EPA含量提高了85.7％,聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)途径相关基因转录水平明显上调.而sh-ER替换ORFC-ER基因的重组菌株(C-sh-ER)中PUFAs合成基本不变.在5 L发酵罐中放大培养后,B-sh-ER重组菌株总油脂提高28.7％,达到73.2 g/L;EPA产量提高71.6％,达到732.4 mg/L.本研究为促进裂殖壶菌PUFAs高产提供了新的策略,同时也为调控裂殖壶菌合成EPA提供了新的视角.

摘要： 二十碳五烯酸(EPA)是一种具有重要生理功能的n3-多不饱和脂肪酸,在保健食品、药品、饲料等行业具有广阔的商业前景,传统的鱼油来源难以满足EPA日益增长的市场需求.文中以裂殖壶菌为出发菌株,通过单因素实验在摇瓶水平优化了发酵温度,在5 L发酵罐中进一步研究变温时间和溶氧对裂殖壶菌产EPA发酵性能的影响,建立了两阶段控温和低溶氧发酵策略,并研究了发酵过程中脂肪酸各组分的变化情况.结果表明,裂殖壶菌在阶段控温(28°C(0～24 h)→34°C(24～120 h))培养时,EPA含量最高,达到8.35％;在5 L发酵罐中确定了最佳变温时间为24 h,不同溶氧研究表明,中高溶氧(10％DO和25％DO)有利于裂殖壶菌的生长和油脂积累,但低溶氧(2％DO)更利于EPA的积累,EPA含量分别是中、高溶氧水平的2.05倍和4.98倍;建立了一种两阶段控温和低溶氧发酵策略,发酵至96 h时生物量、油脂产量、EPA含量和EPA产量分别达到56.60 g/L、9.62 g/L、12.50％和1.14 g/L,与优化前相比,EPA的含量和产量分别提高了14.5倍和6.1倍.

摘要： 二十二碳六烯酸(DHA)属于N-3多不饱和脂肪酸,具有改善免疫作用、促进动物生长等生理功能.裂殖壶菌是一类海洋真菌,富含DHA,可作为一种理想的的畜禽饵料添加剂.本文综述了裂殖壶菌中DHA在抗炎、免疫调节、改善脂类代谢等方面的生理功能,以及裂殖壶菌在家禽生产、反刍动物生产、水产养殖中的应用,为加快研究成果的转化提供参考.

摘要： 为研究裂殖壶菌油脂成分及抗氧化活性,采用气相色谱-质谱和核磁共振技术分别对裂殖壶菌油脂的脂肪酸组成和脂质成分进行分析,并对油脂的自由基清除能力和总抗氧化能力进行测定.结果表明:裂殖壶菌油脂的脂肪酸组成简单,主要为C14:0(13.22％)、C16:0(26.78％)、C22:5n-6(DPA,13.66％)和C22:6n-3(DHA,42.04％);其脂质成分以甘油三酯为主,含有少量游离脂肪酸,且C22:6n-3和C22:5n-6等多不饱和脂肪酸主要结合于甘油三酯的sn-2位.同时,裂殖壶菌油脂具有较好的DPPH、ABTS+和羟基等自由基清除能力和总抗氧化能力,且在10～50mg/mL质量浓度范围内呈现显著的量效关系(P＜0.05).裂殖壶菌油脂富含C22:6n-3和C22:5n-6等多不饱和脂肪酸,且具有较好的抗氧化活性,因此其具有较高的营养价值和功能油脂开发潜力.本研究为裂殖壶菌油脂成分分析、抗氧化活性评价以及功能性油脂开发提供了理论依据.

摘要： 为了研究碱性蛋白酶对裂殖壶菌细胞破壁技术的工艺优化问题,本文以油脂产量为指标,采用碱性蛋白酶对裂殖壶菌进行破壁,提取胞内油脂.通过单因素和正交试验,筛选出最佳的破壁条件.结果表明,酶解温度为55°C,酶解时间为9h,酶用量为3％,酶解pH为10时破壁效果最好,各因素对破壁效果的影响顺序为:酶解温度＞酶解时间＞酶用量＞酶解pH.在酶解温度55°C,酶解时间9h,酶用量为生物量的3％,酶解pH为10的条件下,油脂产量达到14.15g/L.

摘要： 研究了葡萄糖和甘油分别作为唯一碳源对裂殖壶菌ATCC20888发酵过程中脂质和类胡萝卜素变化特性的影响,并对不同碳源可能导致胞内类胡萝卜素与脂质代谢不同进行了讨论.结果表明:裂殖壶菌对葡萄糖的代谢速率高于甘油,但甘油发酵更有利于总脂和DHA合成.甘油发酵更有利于总类胡萝卜素的合成,反耗后期,β-胡萝卜素含量是葡萄糖的3.25倍,但此时葡萄糖发酵番茄红素和虾青素含量分别是甘油发酵的1.60倍和2.81倍.虽然两种碳源发酵合成的类胡萝卜素组成含量有差异,但PKS比例均与总类胡萝卜素含量呈正相关,类胡萝卜素可能在细胞以及PUFA抗氧化方面发挥着作用.

摘要： 裂殖壶菌作为好氧型产油微生物,是目前工业化生产DHA（二十二碳六烯酸，不饱和脂肪酸）的主要菌株之一.吐温是一种表面活性剂,作为培养基添加物,可起到改变细胞膜渗透性、增强底物与氧气传质、促进生长、提高脂质积累的效果.实验探究了吐温系列(tween-20、tween-40、tween-60和tween-80)对裂殖壶菌生长、脂质积累和脂肪酸组成的影响.结果表明,在1％(v/v)添加量下,吐温20与40促进菌体生长;4种吐温均显著增强了菌体总脂积累能力,DHA产量分别比对照组提高了28.68％、29.33％、16.29％和20.67％;吐温20和40将最终总脂产量由22.68g/L提升至29g/L以上,DHA产量由10.74g/L提升至约13.8g/L.

摘要： 裂殖壶菌是一种极具商业价值的海洋真菌,具有生长速度快、易于培养、菌株使用安全等优点,因而使其成为最具发展潜力的工业化生产DHA的菌株,本文对其营养成分、DHA合成机制、DHA消化机制、国内外研究进展及应用等进行了介绍.安佑集团围绕裂殖壶菌也做了大量的研究工作，开发了一种富含DHA的饲料添加剂产品。经发酵培养基优化和发酵工艺优化后，裂殖壶菌的生物量在20 g／L以上，油脂含量占细胞干重45％以上，DHA占总脂肪酸25％左右，与文献报道的相同菌株的生物量及DHA产率相比有较大的提高。

摘要： 二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)是一种高附加值的ω-3脂肪酸,具有重要的生理功能.本文通过单因素实验确定葡萄糖/甘油和蛋白胨/酵母浸粉为Schizochytrium sp.FJU-512生产DHA的最适碳氮源.在单因素实验的基础上设计Plackett-Burman实验和Box-Behnken实验优化培养基, DHA产量可达15.23 g/L,较优化前的6.18g/L提高了2.46倍.借助Logistic和Luedeking-Piret方程,分别建立了裂殖壶菌菌体生长和DHA生成的动力学模型;为了实现裂殖壶菌工业化高密度培养,根据单位体积液体中搅拌功率相同的准则,进行15L～100L发酵罐主要控制参数——搅拌转速的理论放大计算.裂殖壶菌的生物量、油脂产量和DHA产量分别由原来的103.26g/L、51.50 g/L和19.44 g/L增加到放大后的110.75 g/L、50.77 g/L和22.32g/L.rn 为了进一步提高DHA发酵产量，考察了添加柠檬酸和苹果酸对发酵裂殖壶菌的影响。在摇瓶培养60h时添加1 g/L(w/v)的柠檬酸和添加1~3g/L(w/v)的苹果酸可提高DHA的产量，在15L发酵罐中验证结果与摇瓶实验相符，在60h添加1g/L(w/v)的柠檬酸钠和3g/L(w/v)的苹果酸，DHA产量分别从原来的16.04g/L提高到21.00g/L和19.54g/L.

摘要： 对裂殖壶菌发酵产二十二碳六烯酸(DHA)过程中关键酶(苹果酸酶ME、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G6PDH、异柠檬酸脱氢酶ICDH)的酶活变化进行了研究,并在此基础上考察了不同时间添加关键酶激活剂如NaNO3、(NH4)2SO4,对裂殖壶菌生长和脂肪酸组成的影响.结果表明,在42小时补加NaNO3 后,DHA 产量达到7.04 g/L,与对照相比提高了16%,油脂中饱和脂肪酸含量降低,不饱和脂肪酸含量提高,DHA在总脂肪酸中所占百分比提高到40.2%.

摘要： 采用酶法破碎裂殖壶菌提取胞内油脂,进行单因素实验和正交实验优化酶解反应条件,从而提高毛油产量.结果表明,酶解反应的影响因素的主次顺序为:温度＞酶用量＞pH＞时间,最佳酶解工艺参数为:53°C,酶用量2%,pH10.0,搅拌反应2h.该法所得毛油的产量提高至75%以上,对工业化生产有一定的参考价值.

摘要： 代谢组学是对某一生物或细胞在特定生理时期内所有低分子量代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科.它是以组群指标分析为基础,以高通量检测和数据处理为手段,以信息建模与系统整合为目标的系统生物学的一个分支.本文以二十二碳六烯酸(DHA)生产菌株裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)为研究对象,优化胞内代谢产物分析的预处理方案,通过对比实验得到样品预处理方法:取0.05g湿菌体,采用冷甲醇(60%,-40°C)淬灭停止胞内反应,超声波破碎细胞后,以60%甲醇水溶液提取代谢产物.胞内产物经衍生化后,通过GC-MS 图谱对不同时期的胞内代谢产物进行鉴定,并采用SPSS Statistics 统计学软件进行主成分分析,快捷获取数据信息,得到与油脂积累及菌体生长相关的代谢物质,从而更深入、详尽的了解微观代谢物质与表观性状之间的关系,为发酵工艺的进一步优化提供更好的依据与视角.

摘要： 研究了不同浓度(0,0.02%,0.05%,0.1%,0.2%)(v/v)的表面活性剂Tween80对裂殖壶菌发酵性能包括发酵周期、葡萄糖和谷氨酸的消耗、发酵终止PH、细胞干重、总脂和DHA产量以及脂肪酸分布的影响.结果显示,添加Tween80能够明显缩短发酵周期和改变脂肪酸分布,随着其添加浓度的升高,发酵终止时PH、总脂和DHA含量先升高后减低,且高浓度的Tween80轻微地抑制了细胞的生长.当Tween80浓度为0.05%(v/v)时,总脂和DHA产量最高,达到33.75g/l和7.97g/l,分别相对于不添加Tween80提高了6%和31.33%.

摘要： 采用Thermomyces lanuginosus 产磷脂酶A1 对裂殖壶菌发产DHA 毛油进行脱胶处理,以脱胶油磷含量、酸价为考查指标,先对脱胶时间、反应温度、加酶量和加水量等因素进行单因素实验,然后通过正交实验得出微藻DHA 油脂的最佳脱胶条件为:脱胶时间3h,反应温度45°C,加酶量0.6mL/100g 油,加水量为2mL/100g 油;此条件下油脂中磷脂含量从158.1mg/Kg 降到4. 6mg/Kg,酸价变化较小.与传统的脱胶工艺相比,新型酶法脱胶优势明显.

摘要： 本发明提供了一种裂殖壶菌的选育方法，包括(1)制备裂殖壶菌初始菌体的菌悬液；(2)将所述菌悬液涂布于甘蔗渣水解液固体培养基上培养；(3)挑选所述甘蔗渣水解液固体培养基上成活的单菌落，分别传代培养；(4)选择能够稳定传代且菌体DHA产量高的菌株。本发明的选育方法简单快捷，成本低廉，且选育的菌株能够在未脱毒甘蔗渣水解液中生长，DHA产量高。

摘要： 本发明公开了一株裂殖壶菌及粗甘油培养裂殖壶菌产油脂的方法，属于微生物技术领域。所述的裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)6961Y01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC NO.9043。该菌株为裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)WZU6961经紫外诱变获得，与Schizochytrium sp.WZU6961比较，棕榈酸含量提高50％而DHA降低30％，不仅能以生物柴油副产品粗甘油为碳源快速生长和积累油脂，而且其油脂组成更适宜用于生产生物柴油。

摘要： 本发明公开了一种裂殖壶菌(Schizochytrium)STA‑M‑3，该裂殖壶菌被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.9381，保藏时间为：2014年6月25日。本发明还公开了一种产生裂殖壶菌的方法，包括如下步骤：步骤一、以裂殖壶菌B4D1和黑曲霉CGMCC3.316作为两亲本，制备两亲本的原生质体；步骤二、将两亲本的原生质体融合；步骤三、将融合后的原生质体接种于淀粉培养基上培养，得到裂殖壶菌STA‑M‑3。本发明还公开了一种利用裂殖壶菌生产DHA的方法，裂殖壶菌STA‑M‑3在淀粉培养基中培养，产生DHA。本发明解决了DHA产品价格比较高的问题。

摘要： 本发明提供了一种裂殖壶菌的选育方法，包括(1)制备裂殖壶菌初始菌体的菌悬液；(2)将所述菌悬液涂布于甘蔗渣水解液固体培养基上培养；(3)挑选所述甘蔗渣水解液固体培养基上成活的单菌落，分别传代培养；(4)选择能够稳定传代且菌体DHA产量高的菌株。本发明的选育方法简单快捷，成本低廉，且选育的菌株能够在未脱毒甘蔗渣水解液中生长，DHA产量高。

摘要： 本发明公开了一株裂殖壶菌及粗甘油培养裂殖壶菌产油脂的方法，属于微生物技术领域。所述的裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)6961Y01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC NO.9043。该菌株为裂殖壶菌(Schizochytrium sp.)WZU6961经紫外诱变获得，与Schizochytrium sp.WZU6961比较，棕榈酸含量提高50％而DHA降低30％，不仅能以生物柴油副产品粗甘油为碳源快速生长和积累油脂，而且其油脂组成更适宜用于生产生物柴油。

摘要： 本发明公开了一种裂殖壶菌(Schizochytrium)STA-M-3，该裂殖壶菌被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.9381，保藏时间为：2014年6月25日。本发明还公开了一种产生裂殖壶菌的方法，包括如下步骤：步骤一、以裂殖壶菌B4D1和黑曲霉CGMCC3.316作为两亲本，制备两亲本的原生质体；步骤二、将两亲本的原生质体融合；步骤三、将融合后的原生质体接种于淀粉培养基上培养，得到裂殖壶菌STA-M-3。本发明还公开了一种利用裂殖壶菌生产DHA的方法，裂殖壶菌STA-M-3在淀粉培养基中培养，产生DHA。本发明解决了DHA产品价格比较高的问题。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种高产EPA的裂殖壶菌及其应用。本发明通过离子束注入和紫外‑氯化锂复合诱变等方式，筛选得到一种高产EPA的裂殖壶菌，其保藏编号为CCTCC NO:M 2021565。该裂殖壶菌具备较高的产EPA性能，且该裂殖壶菌快速生长，相较于现有需要在低温条件下才能合成含量较高的EPA的裂殖壶菌而言，具备更高的EPA产量和效率，此外在该裂殖壶菌的产物中还发现了一定含量的角鲨烯。

摘要： 本发明涉及一株高效积累DHA和β‑胡萝卜素的裂殖壶菌FR‑908及其制备方法与应用。所述的裂殖壶菌(Schizochytrium limacinum)FR‑908于2021年9月15日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M20211181。本发明将裂殖壶菌、圆红冬孢酵母出发菌株分别制备原生质体，并通过加热的方式对原生质体进行双亲本灭活，以聚乙二醇为促融剂，进行细胞融合与再生，并通过平板初筛、摇瓶发酵筛选得到发酵生物量高、油脂含量高，同时能够有效合成DHA、β‑胡萝卜素的新型融合裂殖壶菌。该菌株能够用于禽畜养殖及饲料开发，能提高禽畜农产品品质。

摘要： 本发明涉及微生物诱变育种技术领域，具体涉及一株联产DHA和β‑胡萝卜素的裂殖壶菌SL‑916及其应用。所述的裂殖壶菌(Schizochytriumlimacinum)SL‑916于2021年9月22日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M20211197。本发明采用ARTP诱变，并通过平板初筛、摇瓶发酵筛选得到发酵生物量高、油脂含量高，同时能够高效联产DHA、β‑胡萝卜素的裂殖壶菌SL‑916。该菌株能够用于禽畜养殖及饲料开发，能提高禽畜农产品品质。

摘要： 本发明提供了一种过表达3‑酮酰基合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株的构建方法及其应用，该方法包括以下步骤：以Schizochytrium ATCC 1381基因组DNA为模板，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列为引物，PCR扩增出3‑酮酰基合酶基因；将3‑酮酰基合酶基因插入pBlue‑MAT‑Zeo质粒中，获得过表达载体pBlue‑KSb；将过表达载体pBlue‑KSb转化高糖驯化裂殖壶菌HG‑20中，获得过表达3‑酮酰基合酶基因的裂殖壶菌基因工程菌株。由此以裂殖壶菌高糖驯化菌株为受体菌株，通过过表达3‑酮酰基合酶基因以提高重组菌中二十碳五烯酸EPA的占比。