细胞克隆

摘要： 目的探究miR-10b通过抑制胶质瘤相关癌基因2(GLI2)蛋白表达对卵巢癌细胞克隆、凋亡影响的作用机制。方法选取2019年3月至2021年4月于河北大学附属医院接受卵巢癌手术的60例患者的卵巢癌组织及距离病灶5cm处的癌旁组织作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-10b、GLI2 mRNA的表达;培养卵巢癌细胞,将其分为miR-10b组、GLI2蛋白组、联合组及对照组,采用克隆实验检测细胞的克隆数量,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡,采用双荧光素酶报告基因检测miR-10b与GLI2的靶向性;选取20只裸鼠,右腋皮下接种卵巢癌细胞以建立裸鼠卵巢癌模型,建模成功后,随机分为抑制剂组和空白组,每组10只,取肿瘤组织以计算肿瘤体积。结果卵巢癌组织中miR-10b mRNA表达明显低于癌旁组织,GLI2 mRNA表达明显高于癌旁组织(P0.05),且GLI2蛋白与miR-10b呈现负相关。抑制剂组瘤体体积显著小于空白组(P<0.05)。结论miR-10b可降低卵巢癌细胞的克隆、侵袭数量,并促进其凋亡,作用机制与靶向抑制GLI2蛋白有关。

摘要： 目的探讨黄芪多糖对肝癌Hep G2.215细胞体外增殖的抑制作用及其作用机制。方法CCK-8法测定不同浓度黄芪多糖作用于Hep G2.215细胞48 h、72 h后对其增殖影响;平板细胞克隆实验测定不同浓度黄芪多糖对Hep G2.215细胞克隆生长的影响;流式细胞术检测黄芪多糖对Hep G2.215细胞周期和凋亡的影响。结果CCK-8检测结果显示,当黄芪多糖给药浓度达1000 μg/ml时,对Hep G2.215细胞生长具有抑制作用,且与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。平板细胞克隆实验表明,低浓度(100 μg/ml)的黄芪多糖对Hep G2.215细胞克隆形成具有抑制作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,G2/M期细胞比例与对照组相比呈下降趋势(P<0.05),经过黄芪多糖处理的Hep G2.215细胞,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。结论黄芪多糖对肝癌Hep G2.215细胞生长具有抑制作用,其机制可能是通过阻滞Hep G2.215细胞进入G2/M期,激活了细胞凋亡系统,从而诱导细胞凋亡。

摘要： 目的 分析抑制葡萄糖转运蛋白5(Glut5)的表达对骨肉瘤MG-63细胞系克隆形成能力和迁移能力的影响,并基于Wnt/β-连环蛋白信号通路探讨其可能的作用机制.方法 取对数生长期的MG-63细胞分为Con组、NC组和短发夹RNA(shRNA)-Glut5组.Con组未进行基因干扰,NC组和shRNA-Glut5组则采用RNA干扰技术将杂序的shRNA、shRNA-Glut5分别转染至MG-63细胞.转染48 h后,检测3组细胞的增殖能力、细胞克隆数和迁移能力,以及细胞中Glut5、β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和基质金属蛋白酶3(MMP3)的mRNA和蛋白的表达水平.结果 与其他两组比较,shRNA-Glut5组MG-63细胞的增殖和迁移能力下降,细胞克隆数减少,Glut5、β-连环蛋白、cyclinD1和MMP3的mRNA和蛋白表达水平均降低(均P<0.05).结论 下调Glut5基因表达可以抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、克隆形成和迁移能力,Wnt/β-连环蛋白信号通路可能参与调控该过程.

摘要： 目的 探讨hsa-miRNA-424-5p(miR-424-5p)对宫颈癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 选取12例正常宫颈组织和33例宫颈癌组织;将宫颈癌HeLa细胞随机分为NC mimics组、mimics组、NC inhibitor组、inhibitor组,分别转染miR-424-5p模拟物阴性对照、模拟物、抑制物阴性对照、抑制物序列.采用实时荧光定量PCR检测宫颈癌组织中miR-424-5p及新型雌激素受体G蛋白偶联受体30(GPR30)mRNA表达及宫颈癌细胞转染效率;平板克隆形成实验检测克隆形成能力;Transwell小室测定细胞侵袭能力;Annexin V-PE/7-AAD双染色法测算细胞凋亡率;双荧光素酶实验初步验证miR-424-5p与GPR30的靶向关系;Western blotting法进一步证实miR-424-5p和GPR30的靶向关系并检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白.结果 实时荧光定量PCR实验结果显示,宫颈癌组织较正常宫颈组织中miR-424-5p相对表达量减少,而GPR30 mRNA表达增加(P均<0.05).转染24 h后,NC mimics组、mimics组、NC inhibitor组、inhibitor组miR-424-5p相对表达量分别为1.00±0.06、10.91±0.42、1.00±0.03、0.01±0.00,细胞克隆率分别为(36.87±0.35)％、(17.43±1.40)％、(14.67±0.65)％、(21.23±0.68)％,细胞侵袭数分别为(179±9)、(71±5)、(133±5)、(221±11)个,细胞凋亡率分别为(12.73±0.31)％、(18.00±1.65)％、(22.37±2.17)％、(15.77±1.88)％,GPR30蛋白表达分别为1.00±0.03、0.72±0.03、1.00±0.11、2.55±0.13,p-AKT/AKT分别为1.00±0.07、0.84±0.02、1.00±0.05、1.17±0.08,p-mTOR/mTOR分别为1.00±0.08、0.65±0.14、1.00±0.05、1.43±0.25,mimics组与NC mimics组相比,inhibitor组与NC inhibitor组相比,P均<0.01.双荧光素酶证实GPR30为miR-424-5p的直接靶基因.结论 miR-424-5p在宫颈癌中发挥抑癌基因的作用,过表达miR-424-5p能够抑制宫颈癌细胞的克隆、侵袭,并促进细胞凋亡;miR-424-5p可能通过GPR30作用于PI3K/AKT/mTOR通路从而抑制宫颈癌的恶性生物学行为.

摘要： [目的]观察消癖颗粒单药及联合他莫昔芬对乳腺癌细胞增殖、迁移、克隆、凋亡及细胞内DNA损伤程度的影响,探讨消癖颗粒与他莫昔芬的协同抗癌作用.[方法]选取雌激素受体(ER)+、孕激素受体(PR)+人源乳腺癌细胞MCF-7和T47D,将消癖颗粒、他莫昔芬单药或联合用药加入对数生长期的MCF-7和T47D细胞中,以不加药同期培养的细胞作为空白组.分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)实验、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、划痕实验、球囊形成实验、平板克隆实验及原位末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)标记法(TUNEL)和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染色法检测干预后乳腺癌细胞MCF-7和T47D的生物学表现.[结果]消癖颗粒、他莫昔芬单药或联合用药均有抑制乳腺癌细胞MCF-7和T47D增殖的作用,呈浓度依赖性,且联合用药组抑制率高于单药组(P<0.05).与消癖颗粒、他莫昔芬单药比较,联合用药显著抑制乳腺癌细胞MCF-7和T47D球囊形成、克隆及迁移能力(P<0.05),且能促进细胞内8-OHdG生成增多(P<0.05),导致细胞内DNA氧化损伤,最后诱导乳腺癌细胞凋亡.消癖颗粒和他莫昔芬单药或联合用药均可显著增加MCF-7和T47D细胞凋亡率,且联合用药组凋亡细胞率明显高于单药组(P<0.05).[结论]消癖颗粒和他莫昔芬单药或联合用药可抑制MCF-7和T47D细胞增殖并促进其凋亡,且联合用药可增强癌细胞对他莫昔芬的敏感性,效果优于单药作用.

摘要： 细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法.细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆.

摘要： 目的 探究PTD-p53融合蛋白进入肝癌细胞,调控HepG2细胞增殖与凋亡的生物学功能.方法 构建pET28a-PTD-p53原核重组载体,表达具有进入细胞能力的PTD-p53融合蛋白.SDS-PAGE电泳检测融合蛋白质量分数和特异性;蛋白质印迹技术检测融合蛋白跨膜能力;细胞形态学观察和流式细胞仪分析PTD-p53融合蛋白对肝癌细胞HepG2凋亡水平的影响;细胞克隆实验探讨PTD-p53融合蛋白对HepG2细胞的增殖调控.结果 大肠杆菌表达的PTD-p53融合蛋白主要位于包涵体中,复性后的PTD-p53能够以浓度梯度方式进入HepG2细胞,细胞形态学观察和流式细胞仪检测结果表明,PTD-p53融合蛋白处理促进HepG2细胞凋亡;细胞克隆实验显示终质量浓度为1 mg/L或2.5 mg/L的PTD-p53处理HepG2细胞,以剂量依赖方式抑制HepG2细胞克隆形成.结论 PTD-p53融合蛋白可以进入肝癌细胞,促进HepG2细胞凋亡,抑制细胞增殖,为进一步体内验证PTD-p53融合蛋白抑制肿瘤的效果奠定基础.

摘要： 目的研究LncRNA-ATB在胃癌细胞的表达及体外功能,为进一步筛选胃癌的有效诊治靶点奠定基础。方法设计LncRNA-ATB干扰序列,构建敲低LncRNA-ATB的胃癌细胞系并验证,进行克隆、增殖、迁移侵袭实验。结果LncRNA-ATB在胃癌细胞BGC-823、MGC-803中高表达,成功转染LncRNA-ATB干扰序列,并验证敲低效率,体外转染LncRNA-ATB干扰序列后,胃癌细胞克隆、增殖、迁移侵袭能力明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论敲低LncRNA-ATB后胃癌细胞的克隆、增殖、迁移侵袭能力明显降低,表明其在胃癌进展中发挥重要的调控作用。

摘要： 目的:研究下调Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对胃癌细胞克隆形成能力及能量代谢的影响.方法:胃癌细胞BGC823转染YAP小干扰RNA(YAP siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC),同时以不做转染的细胞为对照(Con),qRT-PCR测定细胞中YAP mRNA水平,Western blotting测定细胞中YAP蛋白水平,噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖活性,平板克隆实验测定细胞克隆形成能力,试剂盒测定细胞中三磷酸腺苷(ATP)水平及培养液上清中乳酸含量,Western blotting测定能量代谢相关蛋白己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的水平.结果:YAP siRNA细胞中YAP mRNA和蛋白水平均明显低于Con(P0.05).YAP siRNA细胞增殖活性、克隆形成率明显低于Con(P<0.05),细胞凋亡率明显高于Con(P<0.05),细胞中ATP水平低于Con(P<0.05),上清中乳酸含量低于Con(P<0.05),细胞中HK2、PKM2蛋白水平也低于Con(P<0.05),而Cleaved Caspase-3水平高于Con(P<0.05).结论:下调YAP可以降低胃癌细胞克隆形成能力和增殖活性,诱导Caspase-3介导的胃癌细胞凋亡,干扰糖酵解关键酶HK2、PKM2的表达,降低细胞ATP水平,抑制胃癌细胞糖酵解.

摘要： 目的：应用图像分析方法探讨甲胎蛋白在肝癌细胞株HepG-2克隆细胞内表达。rn 方法：利用细胞稀释法进行HepG-2细胞克隆，采用免疫细胞化学技术进行细胞克隆的甲胎蛋白的检测.以宫颈癌细胞株HeLa细胞作为阴性对照.利用图像分析系统对细胞克隆甲胎蛋白表达进行分析。rn 结果：免疫细胞化学技术显示HepG-2细胞克隆甲胎蛋白染色均为阳性，HeLa细胞甲胎蛋白染色为阴性。但图像分析结果表明细胞克隆的甲胎蛋白水平并不一致。其中一些克隆表达成强阳性，而一些克隆表达较弱。rn 结论：肝癌细胞株HepG-2的克隆细胞群之间表达甲胎蛋白的水平存在差异。

摘要： 本研究从选择毛囊特异性启动子和选择性删除标记基因入手,克隆毛囊特异性表达的人表皮角蛋白14基因启动子,引入Cre/LoxP基因敲除系统构建毛囊特异性表达VEGF164基因及选择性删除标记基因的条件打靶载体pCDsRed2-K14VL,筛选、鉴定转基因细胞克隆,获得稳定转染毛囊特异性表达外源VEGF164基因及可通过Cre酶删除标记基因的核移植细胞供体.

摘要： 目的:通过对正常受精胚胎、山羊同克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)以及牛-山羊异种克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)中线粒体超微结构的观察与比对,从亚细胞水平中揭示异种克隆胚胎出现异常的原因,为异种克隆技术的进一步研究提供新思路.方法:利用透射电镜分别对山羊正常受精胚胎、山羊同种克隆胚胎及牛-山羊异种克隆胚胎的原核阶段、2-细胞、4-细胞、8-细胞及桑椹胚阶段的早期胚胎进行线粒体超微结构观察.结果:山羊自然受精胚胎、山羊同种克隆胚胎的线粒体均为帽状,随着胚胎的发育,线粒体由电子密度高、嵴少的未成熟状态发育为电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体,而牛-山羊异种克隆胚胎从2-细胞胚胎～桑椹胚都存在一种具有多个分叶的线粒体,但这种形态异常的线粒体同样也能够形成电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体.结论:牛卵母细胞与山羊体细胞之间不能有效的进行核-质互作,本研究中具体表现为出现多分叶形线粒体,从而影响牛-山羊异种克隆胚胎的发育.

摘要： 目的：建立检测Cre重组酶活性的转基因猪成纤维细胞系,为制备转基因报告猪提供供体细胞。rn 方法：构建条件性表达绿色荧光蛋白的载体,线性化后通过脂质体方法转染到猪胚胎成纤维细胞中,通过G418筛选,获得细胞克隆,并对细胞克隆进行鉴定。rn 结果：获得 228 株细胞克隆,并对所获得的细胞克隆通过鉴定,最终获得 5 株细胞克隆。

摘要： 本文旨在探讨煤焦沥青的成分，了解煤焦沥青诱导体外培养的BEAS-2B细胞恶性改变时的染色体改变，并从DNA加合物水平和端粒/端粒酶改变探讨其可能机制。结果表明，煤焦沥青的主要成分以多环芳烃为主，在体外作用于支气管上皮细胞BEAS-2B经过诱导传代培养可以引起细胞形态改变，G2/M期细胞明显增多，形成细胞克隆的能力明显增强，核型分析显示出现明显的染色体不稳定现象，单细胞凝胶电泳显示煤焦沥青对于BEAS-2B细胞没有明显的DNA损伤作用，DNA加合物测定也显示煤焦沥青组并没有明显的增加，提示煤焦沥青诱导的细胞恶性转化可能是通过其他机制。

摘要： 本研究拟探讨β-catenin通路抑制剂FH535对胰腺癌细胞及裸鼠移植瘤生长的影响,从而研究β-catenin通路靶向治疗措施在胰腺癌治疗中的应用价值.结果表明FH535能够下调细胞核中β-catenin蛋白水平。FH535抑制胰腺癌细胞的生长及克隆形成能力，并抑制裸鼠移植瘤的生长。流式细胞术证实FH535能够阻滞细胞周期于G2/M期。基因芯片显示，FH535处理后，参与细胞周期调控的BCCIP等基因表达上调，而CCNG1、SERTAD1等基因表达被抑制。

摘要： 本研究拟探讨β-catenin通路抑制剂FH535对胰腺癌细胞及裸鼠移植瘤生长的影响,从而研究β-catenin通路靶向治疗措施在胰腺癌治疗中的应用价值.结果表明FH535能够下调细胞核中β-catenin蛋白水平。FH535抑制胰腺癌细胞的生长及克隆形成能力，并抑制裸鼠移植瘤的生长。流式细胞术证实FH535能够阻滞细胞周期于G2/M期。基因芯片显示，FH535处理后，参与细胞周期调控的BCCIP等基因表达上调，而CCNG1、SERTAD1等基因表达被抑制。

摘要： 本研究拟探讨β-catenin通路抑制剂FH535对胰腺癌细胞及裸鼠移植瘤生长的影响,从而研究β-catenin通路靶向治疗措施在胰腺癌治疗中的应用价值.结果表明FH535能够下调细胞核中β-catenin蛋白水平。FH535抑制胰腺癌细胞的生长及克隆形成能力，并抑制裸鼠移植瘤的生长。流式细胞术证实FH535能够阻滞细胞周期于G2/M期。基因芯片显示，FH535处理后，参与细胞周期调控的BCCIP等基因表达上调，而CCNG1、SERTAD1等基因表达被抑制。

摘要： 本研究拟探讨β-catenin通路抑制剂FH535对胰腺癌细胞及裸鼠移植瘤生长的影响,从而研究β-catenin通路靶向治疗措施在胰腺癌治疗中的应用价值.结果表明FH535能够下调细胞核中β-catenin蛋白水平。FH535抑制胰腺癌细胞的生长及克隆形成能力，并抑制裸鼠移植瘤的生长。流式细胞术证实FH535能够阻滞细胞周期于G2/M期。基因芯片显示，FH535处理后，参与细胞周期调控的BCCIP等基因表达上调，而CCNG1、SERTAD1等基因表达被抑制。

摘要： 本研究旨在克隆贝氏隐孢子虫Rhomboid基因,构建真核表达载体,对重组载体在真核细胞中的表达进行了研究.将GenBank中发表的C.parvum、C.hominis和C.Muris的Rhomboid基因序列比对分析,设计合成该基因保守片段的1对引物,以贝氏隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增出CbROM基因保守片段,采用染色体步移技术与生物信息学分析,得到完整的CbROM基因,克隆至pMD 18-TSimple载体,测序鉴定正确后,经SacⅠ和KpnⅠ双酶切,亚克隆至pEG-FP-C2真核表达载体,构建pEGFP-C2-CbROM重组表达质粒；采用脂质体介导法,将鉴定为阳性的重组质粒转染至HEK293细胞；通过荧光显微镜观察,SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测CbROM基因在HEK293细胞中的表达.结果表明,扩增的CbROM基因保守片段长度为359bp,与GenBank中发表的C.parvum Rhomboid核苷酸序列相似性为96％,通过染色体步移技术和开放阅读框预测,获得CbROM基因全长为1422bp;构建的真核表达质粒pEGFP-CbROM转染HEK293细胞24h后,在荧光显微镜下可观察到稳定的绿色荧光信号,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析表达融合蛋白的分子量为52 kDa,具有较好的反应原性.结果提示,真核表达质粒pEGFP-CbROM得到成功构建,并能够在HEK293细胞中表达,为进一步研究贝氏隐孢子虫Rhomboid蛋白的生理功能,研发隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础.

摘要： 一种增殖细胞核抗原的单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述分泌增殖细胞核抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系的保藏号为CGMCC No.12045。所述杂交瘤细胞系分泌的增殖细胞核抗原的单克隆抗体，其特征在于，其能够特异的结合增殖细胞核抗原；优选地，所述单克隆抗体的亚型为IgG2b。

摘要： 本发明提供了分泌牛白细胞介素‑2(IL‑2)单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D8和6D7。本发明的分泌牛IL‑2单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体MAb3D8和MAb6D7具有效价高、特异性好、与天然IL‑2抗原亲和力强的优势，基于此建立的牛IL‑2双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和流式细胞术(FCM)检测试剂盒，具有较好的灵敏度和特异性，可以用作重组表达牛IL‑2的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定等非诊断目的研究。

摘要： 本发明目的是利用人类白细胞抗原(HLA)一致的活性淋巴细胞使造血干细胞移植后附着生长稳定。从末梢血或脐带血分离获得的单核球细胞中的HLA一致淋巴细胞经增殖、活化后，进一步分离提纯，制备以HLA一致淋巴细胞为主要成分的造血干细胞移植后附着生长稳定的组合物。该组合物可以广泛应用于预防造血干细胞移植后附着生长不全及促进造血干细胞移植后附着生长的治疗。本发明中组合物的给药量因患者的年龄、症状而异，对于包括人在内的哺乳动物，人源抗体的给药量为0.2－20毫克/千克体重·天。给药可经静脉注射，每日一次(单次给药或连续给药)或间隔性地每周1－3次，每2周或每3周1次。

摘要： 一种增殖细胞核抗原的单克隆抗体及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述分泌增殖细胞核抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系的保藏号为CGMCC No.12045。所述杂交瘤细胞系分泌的增殖细胞核抗原的单克隆抗体，其特征在于，其能够特异的结合增殖细胞核抗原；优选地，所述单克隆抗体的亚型为IgG2b。

摘要： 本发明提供了分泌牛白细胞介素-2(IL-2)单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D8和6D7。本发明的分泌牛IL-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体MAb3D8和MAb6D7具有效价高、特异性好、与天然IL-2抗原亲和力强的优势，基于此建立的牛IL-2双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)和流式细胞术(FCM)检测试剂盒，具有较好的灵敏度和特异性，可以用作重组表达牛IL-2的检测、对离体组织进行检测、表位鉴定等非诊断目的研究。

摘要： 本发明公开了一株分泌CAV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C1、由该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。所述杂交瘤细胞株2C1保藏编号为CGMCC No.10878。间接免疫荧光结果表明：2C1杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能特异性识别CAV-2病毒而与MDCK细胞不反应。本发明制备的2C1和另一杂交瘤细胞株7D7分泌的两个单克隆抗体的叠加实验结果表明：这两个单克隆抗体为针对CAV-2病毒不同抗原表位的单抗。本发明所制备的单克隆抗体能很好的和CAV-2反应，可用于临床分离毒株的鉴定。本发明所制备的2C1单克隆抗体和7D7单克隆抗体是识别CAV-2的两个不同抗原决定簇的单抗，因此说明本发明的单克隆抗体能用于检测CAV-2病原胶体金的制备和夹心ELISA方法的建立。

摘要： 本发明涉及病毒培养技术领域，具体涉及BHK‑21细胞克隆株及利用BHK‑21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法。本发明提供BHK‑21细胞克隆株QYHZZ‑BHK‑21，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021133。该BHK‑21细胞克隆株能够在全悬浮无血清培养过程中快速增殖，保持较高的细胞活率，在接种新城疫病毒后，能够使得病毒快速繁殖，在较短时间内获得较高的病毒HA效价，制备得到的新城疫病毒抗原的质量较好，具有较高的免疫原性和安全性。本发明提供的全悬浮无血清培养方法适用于新城疫病毒及其疫苗的规模化生产，为细胞源疫苗的生产提供了技术基础。

摘要： 本发明涉及病毒培养技术领域，具体涉及LMH细胞克隆株及利用LMH细胞克隆株全悬浮培养禽腺病毒‑4型的方法。本发明提供LMH细胞克隆株QYHZZ‑XF‑LMH，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021162。该细胞株能够在全悬浮无血清培养过程中快速增殖，保持较高的细胞活率，在接种禽腺病毒‑4型后，能够使得病毒快速繁殖，在较短时间内获得较高的病毒效价，制备得到的禽腺病毒‑4型抗原的质量较好，具有较高的免疫原性、保护力和安全性。本发明提供的禽腺病毒‑4型的全悬浮无血清培养方法适用于禽腺病毒‑4型及其疫苗的规模化生产，为细胞源疫苗的生产提供了技术基础。

摘要： 本发明提供了一种单克隆细胞培养基、应用及培养单克隆细胞的方法，涉及细胞培养技术领域，本发明提供的单克隆细胞培养基，包括基础培养基和条件培养基，对贴壁细胞和悬浮细胞均适用。通过基础培养基和条件培养基的配合使用，使得本发明提供的单克隆细胞培养基具有丰富的营养物质，在单克隆细胞生长期间不需要反复换液直至单细胞克隆集落形成，一方面避免了因换液带来的污染风险，另一方面也缩短了单克隆细胞集落的时间，同时提高了单克隆细胞的成活率。

摘要： 本实用新型公开了一种一步实现干细胞克隆分离和转移的细胞克隆针，属于细胞生物学领域。所述细胞克隆针依次相连的负压端部、连接部以及吸取部，三者套接配合，可自由拆卸，且两两连接处保持密封；所述负压端部用于提供负压环境，连接部设为软管，用于控制负压环境的开关，吸取部由玻璃制成，包括粗端和细端，粗端和细端之间过渡自然平滑，粗端与所述连接部相连，细端用于直接分离和转移克隆。本实用新型的细胞克隆针具有材料简单、操作简便、可重复利用、无需使用解剖显微镜、节省成本的优点。