核酸疫苗

摘要： 为检测气肿疽梭菌中NagH基因的核酸疫苗的免疫效果,在成功构pVAX1-NagH真核表达重组质粒后,将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光方法对重组体进行鉴定。鉴定成功后,大量提取重组体质粒,对BALB/c小鼠进行免疫,免疫方法为肌肉注射。设置pVAX1-NagH核酸疫苗组、载体对照组以及PBS阴性对照组。对小鼠采血后分离血清,采用ELISA方法对IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IL-4、IFN-γ细胞因子水平进行测定。结果表明:IgG、IgG1、IgG2a抗体水平与IL-4、IFN-γ细胞因子水平呈显著上升趋势,且与另外2个对照组相比,均存在显著性差异,而2个对照组间未表现出显著性差异。该试验说明初步制备了pVAX1-NagH核酸疫苗,并且pVAX1-NagH核酸疫苗可刺激BALB/c小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫。

摘要： 为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略。虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(Pulmonary tuberculosis,PTB)的保护效果仍然存在较大差异(0~80%)。目前,有包括第一代疫苗和第二代疫苗在内的几十种新型TB疫苗已处于临床前或临床研究的不同阶段,而作为第三代疫苗的核酸疫苗随着医药技术的发展也逐渐走入人们的视野。本文主要综述了TB DNA疫苗的免疫学机制、研究现状、免疫增强策略和TB DNA疫苗存在的问题与应用前景,以期为开发更安全、更高效的新型TB DNA疫苗提供新的思路和视角。

摘要： 目的介绍新冠病毒的免疫性和新冠疫苗的发展现状与进展。方法通过知网、PubMed等查阅国内外新冠疫苗的相关文献,对其进行整理和总结,阐述新冠病毒的免疫反应特点及针对新冠病毒的疫苗开发进展。结果世界各国都在加紧研发新冠病毒疫苗,目前针对新冠病毒的疫苗研发主要是灭活疫苗、病毒载体重组蛋白疫苗以及核酸疫苗等。结论接种疫苗是控制和预防传染病最经济、有效的手段,尽快研发出安全有效的疫苗对于控制新冠病毒的传播具有十分重要的意义。

摘要： 近年来基因工程技术、分子生物学技术和细胞工程技术蓬勃发展,疫苗的品种日益丰富,生产方式也日益优化。尤其是在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发以来,围绕COVID-19疫情防控与相关疫苗研发成为时下全球关注的焦点,各种类型疫苗的研究力度进一步加强。虽然传统灭活苗在COVID-19的预防方面做出了突出贡献,但是其他新型疫苗在其他病毒类病原微生物的预防过程中也发挥着重要作用。本文系统性地介绍了传统疫苗以及新型基因工程疫苗在研发过程中的新发现、新特点,其中,亚单位疫苗、活载体疫苗以及核酸疫苗均展现出研发的潜在价值;同时对各种不同类型疫苗目前的研制进展进行梳理总结,以期为后续研究以及免疫策略的制定提供借鉴。

摘要： 过去的一年,新冠病毒(SARS-CoV-2)全球肆虐,严重影响和改变着人们的生活。我国人民在党中央的坚强领导下,全民动员,众志成城,广大医务工作者和检测人员从全国驰援武汉和湖北,谱写了举全国之力战胜新冠疫情的壮歌。疫情暴发后,我国科学家很快分离出SARS-CoV-2毒株,并与世界分享了SARS-CoV-2基因序列;第一时间布局了灭活疫苗、重组蛋白疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体疫苗和核酸疫苗,有14个疫苗进入临床试验,5款疫苗进入Ⅲ期临床。

摘要： 目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.方法 登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-1 gB和gD的T细胞表位.将已知表位和预测表位串联,设计并合成HSV-1 gB、gD的T细胞多表位基因盒(Tg).将Tg克隆入真核表达载体pVAX,构建真核表达质粒pVAX-Tg.pVAX-Tg转染293T细胞,鉴定其蛋白表达.将pVAX-Tg免疫小鼠,检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)水平的变化.结果 成功构建真核表达质粒pVAX-Tg,且该质粒能够成功转染细胞并表达目的蛋白.将pVAX-Tg免疫小鼠后,血清IFN-γ水平明显升高(P<0.001).结论 本研究成功设计构建HSV-1 gB和gD的T细胞表位核酸疫苗,其能够在体外真核细胞中表达,并能够有效诱导细胞免疫,为HSV-1多表位核酸疫苗的研究奠定了坚实基础.

摘要： cqvip:新冠肺炎已给全世界带来灾难性影响,目前尚无消退迹象。解决此问题的一种关键手段是研制出有效疫苗,目前有多款疫苗正在加紧研发中。虽然实现控制疫情的目标仍任重道远,但至少已看见胜利曙光。

摘要： 面对新冠疫情,全球紧急启动了疫苗研究,目前共有48种新冠疫苗开展了人体试验,164种正在实验室研究阶段。我国更是同步部署了5条技术路线进行疫苗研发。这些正在研发的疫苗大体可分为:核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组亚单位疫苗和灭活疫苗。

摘要： 核酸疫苗也叫基因疫苗或DNA疫苗,是20世纪90年代初开发的一种新疫苗,具有稳定、安全、制备简单等优点.近年来,大量研究表明,利用核酸疫苗免疫可以有效提高动物的繁殖力,其中有些疫苗已经进入临床应用实验阶段.本文对提高动物繁殖性能的核酸疫苗的种类、作用原理及其在实验动物、家畜等多种动物上的应用研究进行了综述,以期为进一步研究开发更多类型的提高家畜繁殖性能的核酸疫苗提供参考.

摘要： 传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)是引起鲑鳟鱼暴发性死亡的急性传染性病毒疾病.IHN分布广、传播快,每年给全球鲑鳟养殖业造成重大的经济损失.疫苗免疫是防控该病的最有效手段.本文总结了 IHN疫苗的研究进展,主要包括灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗及DNA疫苗等,以期为水生动物疫苗的研制提供参考.

摘要： 第三代疫苗——核酸疫苗：改变传统疫苗高耗能、高污染、高风险的生产状况；华派建立首个兽用核酸疫苗生产平台；华派设立首个件用核酸疫苗的生产标准；给稗用生物制品行业的生产工艺带来巨大的变革；促进养殖业的健康发展及保障人类的公共卫生安全。

摘要： 鸡球虫是由包括堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)在内的7种常见艾美耳球虫引起的一种寄生虫病.寄生虫侵入鸡肠道组织并分裂增殖使其发生损伤而导致腹泻、血便和体重降低,对养禽业造成严重的经济损失.基于球虫抗药性和药物残留的问题,研制安全而有效的基因工程疫苗用于鸡球虫病的防治成为热点.Hsp90家族是分子大小质量81-99Ku的一种进化保守的蛋白质,它在分子伴侣功能、细胞循环调控、抗原传递方面发挥着重要作用,已有研究表明其在多种寄生虫生长发育过程中发挥重要的作用.本研究构建pVAX-Hsp90重组真核质粒，将其在体外瞬时转染Hela细胞进行IFA检测，结果显示Hsp90可在体外成功表达，并将构建的重组真核质粒免疫雏鸡后进行攻虫保护实验，共分为4个组，未免疫未攻虫组（N组）、PBS注射攻虫组（P组）、pVAX1质粒注射组（E组）、pVAX-Hsp90免疫组（H组），实验组分别以100μL/鸡的PBS或100μg/鸡的pVAX1、pVAX-Hsp90剂量于14d和21d胸部肌肉注射免疫雏鸡，在二次免疫后每只鸡口服接种1×105孢子化卵囊，通过观察增重情况、十二指肠病变计分、OPG及抗球虫指数，对不同处理组雏鸡的各项免疫指标进行了检测，用以评价真核表达质粒的免疫效果，结果表明pVAX-Hsp90组较空载体组及PBS组增重明显（p<0.01），且肠道病变减轻，OPG减少，抗球虫指数为166.17。综上初步评价了Hsp90核酸疫苗的免疫保护作用，表明Hsp90是一种潜在的鸡球虫保护性抗原。

摘要： 为了鉴定本研究构建的猪2型圆环病毒pIRES-ORF2核酸疫苗的免疫效果,试验采用间接ELISA方法和T淋巴细胞亚类计数法进行效果评估.结果表明:免疫1w后小鼠产生特异性PCV2抗体,并逐渐提高,在首免后第5w达峰值,显著高于对照组(P＜0.05),该疫苗可以诱导小鼠产生抗PCV2特异性的体液免疫.同时,疫苗免疫组小鼠脾T淋巴细胞CD3+CD8+亚类显著高于灭活苗免疫组和plRES对照组(P＜0.05),疫苗免疫组T淋巴细胞CD3+CD4+亚类显著高于pIRES对照组(P＜0.05).

摘要： 本文分析了近年来鸡球虫疫苗的发展状况,指出基因重组技术在疫苗研究领域应用前景广阔，从鸡球虫活疫苗、核酸疫苗两方面对当前鸡球虫疫苗免疫防治的研究进展进行了论述。

摘要： 本研究旨在将鸡IL-18基因作为细胞因子佐剂与柔嫩艾美耳球虫EtMIC2基因串联到真核表达载体pVAXl.0上构建核酸疫苗,并免疫鸡检测其免疫保护力.利用DNA重组技术,将EtMIC2基因、鸡IL-18基因单独或串联到真核表达载体pVAXl.0上,经酶切鉴定,成功构建了pVAX-MIC2、pVAX-IL-18、pVAX-MIC2-IL-18重组质粒.将各重组质粒用转染试剂Lipofectamine 2000转入293T细胞,并于转染24h后固定细胞进行IFA检测,裂解收集细胞进行Western-blot检测重组质粒在体外的表达情况.通过ELISA检测小鼠血清中特异性抗体明显升高,表明重组质粒在动物体内表达.保护力实验证实串联表达IL-18&EtMIC2免疫保护效果明显高于单独表达组.研究表明,IL-18基因作为细胞因子佐剂的EtMIC2基因串联真核表达DNA疫苗候选株的构建,为研制预防鸡球虫病的基因工程疫苗奠定了基础.

摘要： 本研究以柔嫩艾美耳球虫cDNA和鸡脾脏cDNA为模板,参照GenBank登录序列设计引物,引物上下游加入酶切位点,扩增了柔嫩艾美耳球虫顶体膜蛋白1基因(EtAMAl)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(EtSerpin)、棒状体颈部蛋白2基因(EtRON2)、钙依赖蛋白激酶3基因(EtCDPK3)等4种球虫基因和鸡IFN-γ基因,经测序验证后,将4种球虫基因分别插入pCAGGS真核表达载体,构建了该4种基因的真核表达重组质粒，将构建的pCAGGS-EtAMA1、pCAGGS-EtAMAl-IFN-γ重组质粒通过腿部肌肉注射(100μg/只)分别免疫7日龄雏鸡,14日龄时以相同剂量进行二免,同时设pCAGGS空载体组、感染对照组及健康对照组.结果表明,核酸疫苗pCA-GGS-EtAMA1和pCAGGS-EtAMA1-IFN-γ均有一定保护效果,其增重均与健康对照组的相当(P＞0.05),而不免疫感染组明显低于健康对照组(P＜0.05)；盲肠病变记分明显低于不免疫感染组(P＜0.05)；卵囊减少率分别为67.43％和72.89％.核酸疫苗pCAGGS-EtAMA1-IFN-γ与pCAGGS-EtAMA1比较,加入了鸡IFN-γ作为免疫佐剂,对鸡的增重、盲肠病变计分、卵囊减少率等均略有提高,但差异不显著(P＞0.05).研究结果为深入进行鸡球虫核算疫苗研究奠定了基础.

摘要： 本试验采用旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因构建核酸疫苗,检测其免疫效果.首先根据Genbank登陆的旋毛虫肌幼虫43ku ES抗原基因序列设计引物,在上下游分别引入KpnⅠ和BamHⅠ的酶切位点.用PCR技术扩增肌幼虫43ku ES抗原基因,选择阳性克隆菌提取质粒及真核表达载体pVAX1进行相同酶切,将产物回收后连接并转化入DH5α中.转染后诱导表达.将4-6周龄BALB/C小鼠随机分组,肌注100μL质粒DNA.每组免疫三次,每次间隔1周.末次免疫后一周,每只小鼠攻旋毛虫肌幼虫,30天后,处死.从脾脏和淋巴结中分离T细胞和B细胞用流式细胞仪测定各细胞因子的表达水平.结果显示,重组真核表达质粒组的抗体水平明显高于其他两组,差异显著,各细胞因子表达水平也明显增高.重组真核表达质粒pVAX1:Ts 43组旋毛虫肌幼虫减虫率最高可达52.1％;重组真核表达质粒pVAX1-Ts45组旋毛虫肌幼虫减虫率最高可达39.5％；重组真核表达质粒pVAX1-Ts43与重组真核表达质粒pVAX1-Ts45混合使用组旋毛虫肌幼虫减虫率最佳,达到了75.9％.以上结果表明,旋毛虫肌幼虫43ku Es抗原基因在小鼠体内得到表达,诱导小鼠产生免疫反应对抗旋毛虫感染,与pVAX1-Ts45联合效果更佳,为研制预防旋毛虫病核酸疫苗奠定了试验基础.

摘要： 本研究旨在克隆贝氏隐孢子虫Rhomboid基因,构建真核表达载体,对重组载体在真核细胞中的表达进行了研究.将GenBank中发表的C.parvum、C.hominis和C.Muris的Rhomboid基因序列比对分析,设计合成该基因保守片段的1对引物,以贝氏隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增出CbROM基因保守片段,采用染色体步移技术与生物信息学分析,得到完整的CbROM基因,克隆至pMD 18-TSimple载体,测序鉴定正确后,经SacⅠ和KpnⅠ双酶切,亚克隆至pEG-FP-C2真核表达载体,构建pEGFP-C2-CbROM重组表达质粒；采用脂质体介导法,将鉴定为阳性的重组质粒转染至HEK293细胞；通过荧光显微镜观察,SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测CbROM基因在HEK293细胞中的表达.结果表明,扩增的CbROM基因保守片段长度为359bp,与GenBank中发表的C.parvum Rhomboid核苷酸序列相似性为96％,通过染色体步移技术和开放阅读框预测,获得CbROM基因全长为1422bp;构建的真核表达质粒pEGFP-CbROM转染HEK293细胞24h后,在荧光显微镜下可观察到稳定的绿色荧光信号,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析表达融合蛋白的分子量为52 kDa,具有较好的反应原性.结果提示,真核表达质粒pEGFP-CbROM得到成功构建,并能够在HEK293细胞中表达,为进一步研究贝氏隐孢子虫Rhomboid蛋白的生理功能,研发隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础.

摘要： 食品级乳酸菌作为口服疫苗载体已经受到越来越多的关注.然而,目前大多数研究主要集中在利用乳酸菌自身表达系统来表达递送抗原,而利用乳酸菌来递送DNA疫苗的研究近年也受到更广泛的关注.DNA疫苗由于其DNA质粒可以进入真核细胞进行表达及蛋白加工,这对DNA疫苗的效果至关重要.乳酸菌可作为DNA疫苗载体,但其本身并没有侵入能力,因此可模拟病原菌侵入过程,构建侵入型乳酸菌,使其具有更好的递送能力.最后,综述了乳酸菌作为DNA疫苗载体的研究进展.

摘要： 食品级乳酸菌作为口服疫苗载体已经受到越来越多的关注.然而,目前大多数研究主要集中在利用乳酸菌自身表达系统来表达递送抗原,而利用乳酸菌来递送DNA疫苗的研究近年也受到更广泛的关注.DNA疫苗由于其DNA质粒可以进入真核细胞进行表达及蛋白加工,这对DNA疫苗的效果至关重要.乳酸菌可作为DNA疫苗载体,但其本身并没有侵入能力,因此可模拟病原菌侵入过程,构建侵入型乳酸菌,使其具有更好的递送能力.最后,综述了乳酸菌作为DNA疫苗载体的研究进展.

摘要： 本文中提供了能够在被靶向的物种中打断耐受性的前列腺抗原的共有氨基酸序列，包括PSA、PSMA、STEAP和PSCA抗原。还提供了编码前列腺抗原PSA、PSMA、STEAP和PSCA的一种或多种共有氨基酸序列的核酸序列以及表达所述序列的基因构建体/载体和疫苗。本文中还提供了通过施用提供的疫苗、蛋白质和/或核酸序列的一种或多种产生针对前列腺癌细胞的自身免疫反应的方法。

摘要： 本文提供编码疱疹病毒抗原的新型共有氨基酸序列的核酸序列、以及遗传构建体/载体和表达所述序列的疫苗。本文还提供使用所提供的疫苗产生针对疱疹的免疫应答的方法。

摘要： 本文中提供了能够在被靶向的物种中打断耐受性的前列腺抗原的共有氨基酸序列，包括PSA、PSMA、STEAP和PSCA抗原。还提供了编码前列腺抗原PSA、PSMA、STEAP和PSCA的一种或多种共有氨基酸序列的核酸序列以及表达所述序列的基因构建体/载体和疫苗。本文中还提供了通过施用提供的疫苗、蛋白质和/或核酸序列的一种或多种产生针对前列腺癌细胞的自身免疫反应的方法。

摘要： 本文提供编码疱疹病毒抗原的新型共有氨基酸序列的核酸序列、以及遗传构建体/载体和表达所述序列的疫苗。本文还提供使用所提供的疫苗产生针对疱疹的免疫应答的方法。

摘要： 本文中提供了能够在被靶向的物种中打断耐受性的前列腺抗原的共有氨基酸序列，包括PSA、PSMA、STEAP和PSCA抗原。还提供了编码前列腺抗原PSA、PSMA、STEAP和PSCA的一种或多种共有氨基酸序列的核酸序列以及表达所述序列的基因构建体/载体和疫苗。本文中还提供了通过施用提供的疫苗、蛋白质和/或核酸序列的一种或多种产生针对前列腺癌细胞的自身免疫反应的方法。

摘要： 本发明提供编码疱疹病毒抗原的新型共有氨基酸序列的核酸序列、以及遗传构建体/载体和表达所述序列的疫苗。本发明还提供使用所提供的疫苗产生针对疱疹的免疫应答的方法。

摘要： 本发明中提供了能够在被靶向的物种中打断耐受性的前列腺抗原的共有氨基酸序列，包括PSA、PSMA、STEAP和PSCA抗原。还提供了编码前列腺抗原PSA、PSMA、STEAP和PSCA的一种或多种共有氨基酸序列的核酸序列以及表达所述序列的基因构建体/载体和疫苗。本发明中还提供了通过施用提供的疫苗、蛋白质和/或核酸序列的一种或多种产生针对前列腺癌细胞的自身免疫反应的方法。

摘要： 本发明涉及由鞭毛蛋白与热休克蛋白gp96制备的融合蛋白Flagp96疫苗佐剂。本发明的疫苗佐剂具有如下的特性：①Flagp96能与Toll-like受体结，活化抗原提呈细胞；②启动特异性CD8

摘要： 本发明公开一种猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因核酸疫苗pcDNA-ORF5的免疫佐剂，包含真核表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4。细胞因子IL-2和IL-4构建的真核表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-4合用作为猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸疫苗的免疫佐剂具有明显明显增强其免疫效果。

摘要： 本发明提供一种多肽及其多肽复合物纳米粒、核酸疫苗和应用，属于药物递送领域。所述多肽具有压缩并保护核酸不被降解、促进核酸穿透细胞膜等功能，具有更高的抗体效应，所述多肽及包含所述多肽的多肽复合物纳米粒可用于体内外细胞基因转染及应用于疫苗制剂的制备。