人牙周膜干细胞

摘要： 背景:人工合成的磷酸钙陶瓷材料与天然骨组织无机成分相似,通过表面形貌和化学组成进行功能化设计可赋予其优异的骨传导和骨诱导性能,研发具有骨诱导性能的磷酸钙陶瓷材料是目前的研究热点。目的:通过材料形貌调控和功能化设计赋予亚微米拓扑结构磷酸三钙陶瓷骨诱导性能,检测其理化性能及骨诱导性能。方法:采用高温烧结法制备亚微米拓扑结构的磷酸三钙陶瓷,以市场可供商品化的骨修复材料Bio-Oss骨粉为对照组,表征两种材料的表面形貌、蛋白吸附能力及体外矿化性能。将第3代人牙周膜干细胞与两种材料浸提液共培养,采用CCK-8法检测细胞增殖,茜素红染色检测细胞矿化性能;将第3代人牙周膜干细胞分别接种至两种材料表面,采用碱性磷酸酶染色检测早期成骨,qR T-PCR检测成骨相关因子的表达。结果与结论:(1)扫描电镜下可见两种材料均具有颗粒状纹理的微孔表面,Bio-Oss颗粒明显小于磷酸三钙陶瓷,两种材料的总孔隙度、大孔隙度和微孔隙度相似,磷酸三钙陶瓷主要为亚微米级孔隙,晶粒粒径100 nm-1.0μm,Bio-Oss骨粉主要为纳米级孔隙;体外矿化实验显示,磷酸三钙陶瓷表面诱导骨磷灰石沉积的能力强于Bio-Oss骨粉;与Bio-Oss骨粉相比,磷酸三钙陶瓷可从胎牛血清、牛血清白蛋白溶液中吸附更多的蛋白质(P0.05);(3)磷酸三钙陶瓷组培养4,7 d的碱性磷酸酶活性高于Bio-Oss组(P<0.05),培养21 d的矿化结节数量多于Bio-Oss组;培养7,14 d的碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白及Runx-2的mRNA表达均高于Bio-Oss组(P<0.05);(4)结果表明,新型磷酸钙陶瓷具有优越的体外骨诱导性能。

摘要： 背景:目前大量研究集中于炎症因子对人牙周膜干细胞的影响,然而关于趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)在人牙周膜干细胞中的表达,国内外相关文献报道较少。目的:探究不同质量浓度MIP-1α对人牙周膜干细胞增殖、凋亡及迁移的影响及与Notch信号通路的相关性。方法:将12-25岁患者(均签署知情同意书)拔下的健康正畸减数前磨牙,通过组织块法联合酶消化法分离培养人牙周膜干细胞。将第3代对数生长期人牙周膜干细胞分为对照组和1,10,100 mg/L MIP-1α组,干预第1,3,5,7天采用CCK-8法检测细胞增殖能力,干预48 h采用流式检测细胞凋亡能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,ELISA检测分泌肿瘤坏死因子α水平,qRT-PCR、Western blot检测Notch1、Hes1mRNA和蛋白表达量。结果与结论:(1)1 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞生物学行为无明显影响,10 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的增殖及迁移,而100 mg/L MIP-1α显著促进人牙周膜干细胞的凋亡,抑制人牙周膜干细胞的增殖和迁移;(2)1 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞中Notch1及Hes1蛋白表达无明显影响;10 mg/L MIP-1α对人牙周膜干细胞中Notch1蛋白表达无显著影响,但可下调细胞中Hes1蛋白表达水平,100 mg/L MIP-1α可上调细胞中Notch1及Hes1蛋白表达水平;(3)1 mg/L MIP-1α组人牙周膜干细胞分泌的肿瘤坏死因子α水平与对照组无显著差异;10 mg/L MIP-1α促进肿瘤坏死因子α分泌;100 mg/L MIP-1α抑制肿瘤坏死因子α分泌;(4)结果表明:10 mg/L MIP-1α促进人牙周膜干细胞增殖、迁移及肿瘤坏死因子α分泌,其机制可能与下调Notch信号通路相关;100 mg/L MIP-1α抑制人牙周膜干细胞增殖、迁移及肿瘤坏死因子α分泌,促进人牙周膜干细胞凋亡,其机制可能与上调Notch信号通路有关。

摘要： 背景:人牙周膜干细胞具有多向分化的潜能,在一定条件下能够发生成骨向分化,诱导骨组织再生,因此,人牙周膜干细胞作为骨组织工程种子细胞之一,在牙槽骨缺损骨再生修复中具有良好的研究前景和临床应用价值。目的:探讨血小板衍生生长因子BB在促进人牙周膜干细胞增殖和成骨分化中的功能特征,旨在为牙槽骨缺损的骨再生修复提供相关的实验室依据。方法:人牙周膜干细胞取自就诊于西南医科大学附属口腔医院口腔颌面外科正畸拔牙患者的牙周膜组织,CCK-8法绘制第1-6代人牙周膜干细胞生长曲线,以及不同质量浓度血小板衍生生长因子BB作用下人牙周膜干细胞的增殖曲线。将第3代人牙周膜干细胞分为空白对照组、成骨诱导液组、成骨诱导液+血小板衍生生长因子BB组,分别诱导7,14,21 d,矿化实验观察人牙周膜干细胞钙化结节形成情况,RT-qPCR、Western blot检测Runx2、骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白的相对表达量。结果与结论:(1)CCK-8实验结果显示第2,3代人牙周膜干细胞的对数生长期比其余代次细胞增殖水平显著升高(P <0.05);(2)同一时间点上,100μg/L血小板衍生生长因子BB组的人牙周膜干细胞增殖能力明显优于0,50,200μg/L血小板衍生生长因子BB组(P <0.05);(3)100μg/L血小板衍生生长因子BB与成骨诱导液联合使用对人牙周膜干细胞具有明显的成骨诱导作用,在成骨诱导第14天时,与成骨诱导液组和空白对照组相比,成骨诱导液+血小板衍生生长因子BB组Runx2、骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白相对表达量明显升高(P <0.05);(4)结果表明,血小板衍生生长因子BB能够促进人牙周膜干细胞的增殖及成骨方向分化。

摘要： 背景:钙离子作为第二信使,调控着众多的生理过程,但在牙周膜干细胞成骨分化方面的生物学效应尚不明确。目的:探讨钙离子在人牙周膜干细胞增殖和成骨分化过程中的作用。方法:使用含钙离子浓度为0(对照组),1,2,5,10,15 mmol/L的完全培养基及成骨诱导液对第3代人牙周膜干细胞进行增殖能力检测及成骨诱导。培养1,3,5,7 d使用CCK-8检测细胞增殖能力;在成骨诱导第3,7天采用Real-Time PCR和Western blot检测RUNX2、OPN、OCN的基因及蛋白表达;成骨诱导第14天时进行茜素红染色分析人牙周膜干细胞的成骨矿化情况。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,2,5 mmol/L钙离子组人牙周膜干细胞在第5,7天的增殖能力优于对照组(P<0.05);②体外成骨诱导7 d后,5,10 mmol/L钙离子组人牙周膜干细胞中RUNX2、OPN、OCN的表达高于对照组(P<0.05);③体外成骨诱导14 d后,含钙离子组人牙周膜干细胞的矿化结节数量均高于对照组(P<0.05);④以上结果表明,在一定浓度范围内,钙离子可促进人牙周膜干细胞的增殖与成骨分化。

摘要： 背景:以干细胞为基础的牙周组织再生工程为牙周病治疗提供了广阔前景.雌激素诱导的人牙周膜干细胞成骨分化与Wnt信号通路息息相关.目的:探讨雌激素刺激下Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+信号通路对人牙周膜干细胞成骨分化的影响及通路间的交叉串扰.方法:收集牙周状态健康的前磨牙,分离纯化培养人牙周膜干细胞,流式细胞仪检测表面标志物,茜素红和油红O染色检测成骨成脂分化潜能.取第3代人牙周膜干细胞,随机分为空白组、对照组、雌激素组、XAV939(Wnt/β-catenin通路抑制剂)组、L-690,330(Wnt/Ca2+通路抑制剂)组和XAV939+L-690,330组,除空白组外,其他组均进行成骨诱导培养.qRT-PCR和Western blot检测各组成骨标志物(Runx2、OCN)及Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+通路关键信号分子表达;Fluo-4荧光探针检测细胞内Ca2+浓度;碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性;茜素红染色检测成骨分化能力.结果 与结论:①胶原酶消化法分离纯化培养的人牙周膜干细胞呈纺锤形、多边形,流式检测显示其表现出类似间充质干细胞的免疫表型,且具有成骨成脂分化潜能;②10-7 mol/L雌激素可上调人牙周膜干细胞内Ca2+浓度、Wnt/Ca2+通路关键信号分子CaMKII和NLK基因及CaMKII蛋白的表达;③联合使用Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+通路抑制剂能有效抑制细胞成骨分化;④单独使用任一通路抑制剂会上调另一通路活性,但对细胞的成骨分化无显著影响;⑤结果表明,雌激素通过Wnt/β-catenin和Wnt/Ca2+信号通路诱导人牙周膜干细胞成骨分化,且两通路间存在交互串扰,共同促进人牙周膜干细胞的成骨分化.

摘要： 背景:柚皮素具有抗菌、抗炎、抗纤维化、抗氧化等多种生理活性,被广泛应用于医药和食品领域.近来有研究证明,柚皮素能有效促进间充质干细胞成骨分化,但柚皮素是否有调节牙周膜干细胞的成骨分化能力尚不清楚.目的:探究不同浓度柚皮素对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响.方法:原代分离培养人牙周膜干细胞,分别用含浓度为10,100 nmol/L、1,10,100μmol/L和1 mmol/L柚皮素的α-MEM培养基处理72 h后,CCK-8法检测柚皮素对人牙周膜干细胞的细胞毒性.取第3代人牙周膜干细胞,分别用含0,1,10,100μmol/L柚皮素的成骨诱导液培养,诱导3,5,7 d后分别进行碱性磷酸酶染色和碱性磷酸酶活性检测,诱导7 d后Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、骨桥蛋白和骨钙素的表达,诱导14 d后进行茜素红染色和矿化结节的定量分析.结果 与结论:10 nmol/L-100μmol/L柚皮素对人牙周膜干细胞没有细胞毒性,1 mmol/L柚皮素对人牙周膜干细胞有明显的细胞毒性;1-100μmol/L柚皮素显著促进碱性磷酸酶活性和矿物质沉积,上调RUNX2、骨桥蛋白和骨钙素的基因表达.结果 表明,柚皮素能显著促进人牙周膜干细胞的成骨分化,100μmol/L时促成骨分化能力最强.

摘要： 背景:柚皮素具有抗菌、抗炎、抗纤维化、抗氧化等多种生理活性,被广泛应用于医药和食品领域。近来有研究证明,柚皮素能有效促进间充质干细胞成骨分化,但柚皮素是否有调节牙周膜干细胞的成骨分化能力尚不清楚。目的:探究不同浓度柚皮素对人牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法:原代分离培养人牙周膜干细胞,分别用含浓度为10,100 nmol/L、1,10,100μmol/L和1 mmol/L柚皮素的α-MEM培养基处理72 h后,CCK-8法检测柚皮素对人牙周膜干细胞的细胞毒性。取第3代人牙周膜干细胞,分别用含0,1,10,100μmol/L柚皮素的成骨诱导液培养,诱导3,5,7 d后分别进行碱性磷酸酶染色和碱性磷酸酶活性检测,诱导7 d后Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、骨桥蛋白和骨钙素的表达,诱导14 d后进行茜素红染色和矿化结节的定量分析。结果与结论:10 nmol/L-100μmol/L柚皮素对人牙周膜干细胞没有细胞毒性,1 mmol/L柚皮素对人牙周膜干细胞有明显的细胞毒性;1-100μmol/L柚皮素显著促进碱性磷酸酶活性和矿物质沉积,上调RUNX2、骨桥蛋白和骨钙素的基因表达。结果表明,柚皮素能显著促进人牙周膜干细胞的成骨分化,100μmol/L时促成骨分化能力最强。

摘要： 目的探讨内质网应激通路在棕榈酸(PA)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)凋亡中的作用机制。方法将培养的hPDLSCs随机分为对照组(不含PA的培养基),PA低、中、高浓度(0.1、0.2、0.4 mmol/L)组以探究PA抑制hPDLSCs增殖的作用机制;将培养的hPDLSCs分为对照组(不含PA的培养基)、PA组(0.4 mmol/L)、PA(0.4 mmol/L)+4-PBA(5μmol/L)组以探究4-PBA对PA所致hPDLSCs凋亡的影响。培养24 h后MTT法检测各组hPDLSCs增殖率,Annexin V-FITC/PI探针观察各组hPDLSCs细胞凋亡情况,免疫印迹法检测内质网应激凋亡相关蛋白表达。结果PA低、中、高浓度组hPDLSCs增殖率明显低于对照组(P<0.05);PA高浓度组细胞核红色荧光和细胞膜绿色荧光较对照组明显增加;PA高浓度组IRE1^(phos)、PERK^(phos)、ATF4、ATF6、CHOP表达明显高于对照组(P<0.05);PA中、高浓度组Cleaved caspase-3表达明显高于对照组(P<0.05);与PA低、中浓度组比较,PA高浓度组IRE1^(phos)、PERK^(phos)、ATF6、ATF4、CHOP、Cleaved caspase-3蛋白表达均明显升高(P<0.05);与PA组比较,PA+4-PBA组PERK^(phos)、CHOP及Cleaved caspase-3表达明显下调(P<0.05)。结论PA可能通过调控内质网应激凋亡通路蛋白表达,促进hPDLSCs凋亡。

摘要： 目的:研究上调Notch胞内区域(Notch Intracellular Domain,NICD)对人牙周膜干细胞增殖及迁移能力的影响。方法:将细胞分为上调组、对照组及空白组,使用MTT比色法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移情况,并使用Western blot检测人牙周膜干细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白(TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达量。结果:对照组各时间点的人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均低于空白组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。上调组各时间点人牙周膜干细胞增殖率、碱性磷酸酶活性、迁移、黏附个数、TGF-β、BMP-2、β-caten、LEF-1、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量均高于空白组和对照组,且凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达量均低于空白组和对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:上调NICD基因能促进人牙周膜干细胞的增殖和迁移,其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关。

摘要： 目的探讨miR-375靶向锌指蛋白470(ZNF470)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成软骨分化的调控作用。方法以诱导成软骨分化培养基诱导hPDLSCs成软骨分化,实时荧光定量PCR法检测成软骨分化诱导1、3、7、14、21 d时miR-375及ZNF470 mRNA的表达,双荧光素酶报告基因检测法分析miR-375与ZNF470的靶向调控关系。将hPDLSCs分为空白对照组、阴性对照组、miR-375过表达组、对照+空载组、miR-375过表达+空载组及miR-375过表达+ZNF470组,分别转染对照激动剂(NC-ago)、miR-375突变激动剂(miR-375-mut-ago)、miR-375激动剂(miR-375-ago)、NC-ago+空载、miR-375-ago+空载以及miR-375-ago+ZNF470载体,转染后对各组细胞进行成软骨分化诱导。采用阿尔新蓝染色观察各组成软骨分化情况,实时荧光定量PCR与Western blotting分别检测软骨标志性基因Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、性别决定基因9(SOX9)、软骨可聚蛋白多糖(ACAN)以及透明质酸合酶2(HAS2)的mRNA与蛋白表达水平。结果诱导hPDLSCs成软骨分化过程中miR-375 mRNA表达呈时间依赖性下调,ZNF470 mRNA表达呈时间依赖性上调,miR-375与ZNF470表达呈负相关(r=-0.47,P<0.05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-375可靶向负调控ZNF470。阿尔新蓝染色显示,成软骨分化程度miR-375过表达组<空白对照组、阴性对照组,miR-375过表达+空载组

摘要： 目的：克隆人源脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(proline-,glutanic acid-,leucine-rich protein1,PELP1)基因全长,构建PELPI基因全长过表达载体,研究PELP1基因表达特点,为PELP1基因在不同组织细胞中的功能性研究奠定基础.方法：采用反转录PCR法从MCF-7细胞总RNA中克隆PELP1基因全长,与含有EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切位点的真核过表达载体pIRES2-EGFP质粒载体连接,构建重组质粒plRES2-EGFP-PELP1.经双酶切及测序鉴定重组质粒中PELP1基因的完整性及正确性.运用脂质体将重组质粒转染至人牙周膜干细胞中,运用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)及蛋白质印迹法分别从基因和蛋白水平对转染细胞中PELP1的表达进行检测.结果：成功克隆出PELP1基因全长,并将其插入至pIRES2-EGFP过表达载体中,经双酶切鉴定和测序鉴定证实目的质粒片段插入无误.重组质粒pIRES2-EGFP-PELP1转染48 h后PELP1基因水平是转染空质粒人牙周膜干细胞的(148.0±1.3)倍,二者差异有统计学意义(P＜0.005).蛋白质印迹法结果显示,与转入pIRES2-EGFP的人牙周膜干细胞中PELPI蛋白相对表达量(0.3300±0.0117)相比,转入pIRES2-EGFP-PELP1重组质粒的人牙周膜干细胞中PELP1蛋白相对表达量(0.6200±0.0045)显著增高,二者差异有统计学意义(P＜0.005).结论：本项研究成功运用qRT-PCR反应从MCF-7细胞中克隆出PELP1全长基因,并成功构建pIRES2-EGFP-PELP1真核过表达载体.

摘要： 目的:吸烟是成人慢性牙周炎的高危因素,而尼古丁是烟草中的主要毒害物质.本研究尝试通过体外实验探索尼古丁对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化能力的影响,并进一步明确其具体作用机制.rn 方法:利用组织贴壁法从人牙周膜组织中分离人牙周膜细胞,有限稀释法提纯hPDLSCs进行体外培养,通过多向分化及表面分子标记物等指标对细胞干性进行鉴定.采用组织学染色,qPCR和western blot技术从不同水平检测尼古丁对hPDLSCs成骨分化的影响.检测α7nAChR蛋白在干细胞中的表达情况,利用受体阻滞剂的协同作用明确其介导的对细胞成骨能力及下游wnt信号通路相关蛋白分子的变化.利用wnt通路阻滞剂明确该信号通路对尼古丁调控hPDLSCs成骨能力的影响.rn 结果:利用有限稀释法成功获得具有多向分化潜能和间充质来源干细胞表面标志物的hPDLSCs。组织学，基因和蛋白水平证明尼古丁对hPDLSCs成骨分化能力具有负性调控作用。hPDLSCs表达α7nAChR，且通过阻断该受体，可缓解尼古丁对细胞成骨能力的阻碍作用。在hPDLSCs中，α7nAChR下游存在wnt信号通路的激活，阻断给信号通路也可在一定程度逆转尼古丁对细胞成骨分化能力的负性调控作用。rn 结论:尼古丁通过结合hPDLSCs中表达的α7nAChR，进而激活下游的wnt信号通路从而对hPDLSCs成骨分化能力产生负性调控作用。

摘要： 本文研究人牙周膜干细胞对同种异体B淋巴细胞功能的影响.麻醉下无菌拔除人阻生第三磨牙,轻轻剥离其周围的牙周组织,取中段牙周组织,参照以往文献报道分离并培养牙周膜干细胞.利用免疫磁珠从人外周血中分离B淋巴细胞,检测B淋巴细胞纯度、牙周膜于细胞对同种异体B淋巴细胞表型、分化和趋化功能的影响以及利用B淋巴细胞再激活实验、增殖实验、凋亡检测等实验来研究牙周膜干细胞的免疫学特性.研究表明，牙周膜干细胞对同种异体B淋巴细胞的免疫分子HLA-DR,CD40,CD80和CD86的表达无明显影响，但对B淋巴细胞的趋化作用明显减弱，同时能够明显抑制B淋巴细胞的分化功能。在牙周膜干细胞免疫学特性方面，牙周膜干细胞能够抑制B淋巴细胞增殖;与B淋巴细胞凋亡没有关系。

摘要： 本发明提供了一种HS90A作为鉴别牙髓干细胞和牙周膜干细胞的标志物的应用、鉴别二者的试剂盒及方法，涉及生物技术领域，本发明的发明人通过实验发现，HS90A基因和/或HS90A蛋白在牙髓干细胞和牙周膜干细胞中的表达存在差异，其在牙髓干细胞中显著高表达，在牙周膜干细胞中显著低表达，因此可以作为两种干细胞的特殊标志物用于细胞的区分，具有较高的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明提供了一种HS90A作为鉴别牙髓干细胞和牙周膜干细胞的标志物的应用、鉴别二者的试剂盒及方法，涉及生物技术领域，本发明的发明人通过实验发现，HS90A基因和/或HS90A蛋白在牙髓干细胞和牙周膜干细胞中的表达存在差异，其在牙髓干细胞中显著高表达，在牙周膜干细胞中显著低表达，因此可以作为两种干细胞的特殊标志物用于细胞的区分，具有较高的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞培养液及其应用和诱导牙周膜干细胞向神经样细胞分化的方法。本发明提供的培养液中包括基础培养液、FBS、B27、EGF、bFGF和NGF。本发明提供的培养液能够提高牙周膜干细胞向神经样细胞分化的比例并缩短分化的时间。实验表明，以本发明提供的培养液诱导牙周膜干细胞，12小时后即可见部分细胞贴壁并有短小突起伸出，3天后可见大部分细胞贴壁生长，形态不规则，突起不断增粗和伸长，1周后分化成形态不一的、分散成片的多突起星状细胞和神经元样细胞，突起互相交织成网状。

摘要： hTERT慢病毒重组体永生化人牙周膜干细胞系的方法，包括以下步骤：步骤一、原代人牙周膜干细胞(hPDLSC)的培养：步骤二、稳定表达hTERT基因的永生化基因工程细胞系hTERT‑PDLSC构建：本发明利用表达hTERT基因的慢病毒载体，在一定条件下将其感染原代培养的PDLSC，经过嘌呤霉素的抗性筛选，得到稳定表达hTERT基因的永生化细胞系，能够将细胞使用寿命从3‑8代延长至35代，得到性质稳定、功能良好、表型正常的永生化细胞模型；本发明在研究牙周膜干细胞对于牙周组织工程、研发有效的治疗牙周炎的药物方面具有有益效果。

摘要： 本发明主要涉及一种细胞表面标记特异性富集的人牙周膜干细胞微胶囊及其制备方法，所述微胶囊包括微球内核及外壳。发明还涉及其制备方法、生物学效力检测方法。本发明也涉及将通过本发明制备的细胞微胶囊用于再生医学的用途。

摘要： 本发明提供了一种特异的人牙周膜干细胞亚群及其富集方法。本方法包含牙组织样品的采集运输，牙周膜干细胞的分离，及表达CD18干细胞的富集。本发明还提供了一种富集的牙周膜干细胞亚群生物学特性的检测方法。包括与干性相关的集落形成能力检测，增殖能力检测，体外成骨分化能力检测，体内成骨分化能力检测。

摘要： 本发明提供一种补肾益气活血组合物及其在人牙周膜干细胞增殖分化中的应用，属于医药和分子生物学技术领域。本发明研究发现补肾益气活血方能有效提升体外培养的人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的能力，且效果较当归和补骨脂单味药更佳。这一结果从细胞生物学和牙周组织工程的角度为中医药相关组方药应用于慢性牙周炎的临床治疗提供了实验支撑，对补肾益气活血方剂用于临床上治疗慢性牙周炎具有指导意义，具有良好的实际应用之价值。

摘要： 本发明提供了一种人牙周膜干细胞无血清培养基，涉及生物培养领域，包括氨基酸、维生素、无机盐、蛋白水解物、脂类和生长因子添加物。不含动物源成分，可以完全实现无血清培养干细胞。采用本发明的无血清培养基培养添加了独家的Hydroxyapatite和氟化物，同时添加浓缩生长因子(CGF)和糖基化终端产物，可以显著提高人牙周膜干细胞的扩增效率，可在体外获得高数量、高纯度并且安全优质的牙周再生的种子细胞，同时可提高细胞存活率，维持干细胞的特性。本发明可解决人牙周膜干细胞扩增效率偏低，细胞数量不够的问题，且每批次的细胞数量、存活率及免疫表型更加稳定。

摘要： hTERT慢病毒重组体永生化人牙周膜干细胞系的方法，包括以下步骤：步骤一、原代人牙周膜干细胞(hPDLSC)的培养：步骤二、稳定表达hTERT基因的永生化基因工程细胞系hTERT-PDLSC构建：本发明利用表达hTERT基因的慢病毒载体，在一定条件下将其感染原代培养的PDLSC，经过嘌呤霉素的抗性筛选，得到稳定表达hTERT基因的永生化细胞系，能够将细胞使用寿命从3-8代延长至35代，得到性质稳定、功能良好、表型正常的永生化细胞模型；本发明在研究牙周膜干细胞对于牙周组织工程、研发有效的治疗牙周炎的药物方面具有有益效果。

摘要： 一种人牙周膜干细胞库的构建方法，本发明包括基本信息采集、牙周膜干细胞获取、牙周膜干细胞的冻存、入库以及信息记录与核对的步骤；应用时按照实际需要进行复苏和扩增培养。本发明由废弃的人健康牙齿的牙周膜中获得牙周膜干细胞，利用系统工程，建立有效资源的储备库，储存于库内的人牙周膜干细胞，经短期培养可获得大量富有功能活性的牙周膜干细胞，并能长期保存而不失其活性；与已有技术相比，本发明的构建操作规范，简单容易掌握，安全可行，建库成本低廉，标准化程度高，针对不同年龄段来源的细胞采用不同的冻存液使得复苏后细胞的活性增强，扩大了细胞的来源、增强了细胞的活性。本发明所用的牙齿均为各种原因被拔除废弃的牙齿，大大节约了医疗资源，具有广泛的应用前景。