下调Yes相关蛋白对胃癌细胞克隆形成能力和能量代谢的影响

摘要

目的:研究下调Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对胃癌细胞克隆形成能力及能量代谢的影响.方法:胃癌细胞BGC823转染YAP小干扰RNA(YAP siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA-NC),同时以不做转染的细胞为对照(Con),qRT-PCR测定细胞中YAP mRNA水平,Western blotting测定细胞中YAP蛋白水平,噻唑蓝(MTT)测定细胞增殖活性,平板克隆实验测定细胞克隆形成能力,试剂盒测定细胞中三磷酸腺苷(ATP)水平及培养液上清中乳酸含量,Western blotting测定能量代谢相关蛋白己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的水平.结果:YAP siRNA细胞中YAP mRNA和蛋白水平均明显低于Con(P0.05).YAP siRNA细胞增殖活性、克隆形成率明显低于Con(P<0.05),细胞凋亡率明显高于Con(P<0.05),细胞中ATP水平低于Con(P<0.05),上清中乳酸含量低于Con(P<0.05),细胞中HK2、PKM2蛋白水平也低于Con(P<0.05),而Cleaved Caspase-3水平高于Con(P<0.05).结论:下调YAP可以降低胃癌细胞克隆形成能力和增殖活性,诱导Caspase-3介导的胃癌细胞凋亡,干扰糖酵解关键酶HK2、PKM2的表达,降低细胞ATP水平,抑制胃癌细胞糖酵解.