糖基转移酶

摘要： CRISPR/Cas9系统在植物遗传改良及功能基因研究中有着非常重要的作用.本研究中,根据拟南芥糖基转移酶家族中同工酶UGT79B2/79B3的前体序列,设计针对靶基因UGT79B2/79B3的特异的sgRNA引导序列,构建ugt79b2/79b3-Cas9双突变植物表达载体,并转化到根癌农杆菌GV3101中.将含有目标载体的GV3101活化后,花浸染法浸染拟南芥.以后代阳性株系DNA作为模板,送公司测序.99株阳性转基因株系中分子鉴定发现有24株发生突变,其中只有1株发生ugt79b2/79b3双突变.该研究结果为拟南芥糖基转移酶ugt79b2/79b3突变体的功能开发提供了基础研究与方法支持.

摘要： 人参(Panax ginseng)作为一种具有良好药理活性的药用植物,一直受到广泛关注,而其能够发挥药理活性的部分主要是人参皂苷,主要包括齐墩果烷型和达玛烷型。据研究表明,人参皂苷下游生物合成途径最后一步离不开糖基转移酶的催化过程。因其主要以UDP-糖作为供体分子,所以称之为UDP-糖基转移酶,即UGT。本文结合前人的大量研究对糖基转移酶包括UGT及UGT的功能进行概述,同时介绍了人参UGT基因家族功能到目前为止的研究进展。可为后续对UGT基因家族的研究提供借鉴。

摘要： 为了探明糖基转移酶GalU对单增李斯特菌致病性的影响,本研究利用同源重组技术构建了galU基因缺失株,分析了亲本株ScottA、缺失株ΔgalU和回补株CΔgalU的生长能力、对细胞的黏附侵袭能力以及对小鼠的致病性。生长试验结果显示,galU基因缺失并不影响单增李斯特菌在BHI培养基中的生长能力。细胞侵染试验结果显示,ΔgalU对肠上皮细胞Caco-2的黏附率(0.74±0.18)%和侵袭率(0.70±0.10)%均显著低于亲本株ScottA的黏附率(2.01±0.11)%和侵袭率(2.48±0.25)%,回补株CΔgalU与亲本株的黏附侵袭率则并无显著性差异。免疫印迹结果显示,内化素InlB在ΔgalU细菌表面的锚定量显著低于亲本株,但其表面InlA的锚定量与亲本株并无显著性差异。小鼠试验结果显示,ΔgalU感染的小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量分别为(3.76×10(-7)±1.41×10(-7))CFU/g和(2.88×10(-7)±2.31×10(-7))CFU/g,均显著低于亲本株感染小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量;此外,ΔgalU感染组小鼠的存活率高于亲本株,但与回补株感染组小鼠的存活率一致。上述结果表明,糖基转移酶galE缺失不影响单增李斯特菌的生长能力,但可能通过影响其InlB的锚定介导该菌侵染宿主细胞的能力以及对小鼠的致病性。本研究结果为深入探索糖基转移酶GalU介导单增李斯特菌的致病机制奠定了基础。

摘要： UDP-类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(3GT)是花青素生物合成途径的重要催化酶之一。为研究其在紫玉兰花青素苷合成途径中的作用,该文以紫玉兰品种‘红元宝’(Magnolia liliflora‘Hongyuanbao’)为材料,根据转录组测序获得的3GT序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆花青素苷生物合成途径中的结构基因Ml3GT1,并对其进行生物信息学和表达模式分析。结果表明:(1)Ml3GT1基因的cDNA序列长度为1863 bp,其中最长开放阅读框(ORF)为1374 bp,编码一条457 aa的肽链,相对分子质量为49.37 kDa,理论等电点(pI)为6.04。(2)氨基酸序列比对显示其具备典型的植物次生产物糖基转移酶信号序列(PSPG box)。(3)系统发育分析结果表明,Ml3GT1蛋白与小苍兰、矮牵牛、番薯等物种的3GT蛋白聚在一支。(4)qRT-PCR结果显示Ml3GT1基因的表达具有时空特异性,在花中的表达量最高,在嫩叶和老叶中有少量表达,而在根和茎中几乎不表达;随着花的发育,Ml3GT1基因的表达量呈现先降低后升高的趋势,并在盛花期达到最高。上述结果表明,Ml3GT1可能参与类黄酮3-O的糖基化修饰,本研究结果将为木兰属植物花色育种研究奠定基础。

摘要： 目的 对川射干(Iris tectorum Maxim.)中可能参与黄酮类化合物生物合成的糖基转移酶基因ItUGT797展开初步研究,解析ItUGT797编码蛋白的各项生物信息指标并优化其原核表达体系。方法 提取鸢尾各组织部位的RNA并进行反转录获得cDNA文库,根据鸢尾转录组中ItUGT797基因序列设计基因特异性引物,通过同源克隆的方法构建pET-32a(+)-ItUGT797原核表达重组载体。使用各类生物信息学网站对测序后的ItUGT797序列进行理化性质、蛋白结构和进化关系等分析;实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR)验证基因在各部位的表达情况;蛋白体外表达情况则使用大肠杆菌体系检测。结果 ItUGT797开放阅读框长度为1455 bp,编码蛋白分子量大小分别为53.80 kDa。ItUGT797在各组织中表达情况为花>叶>根茎。系统发育进化树表明,ItUGT797可能是具有7-O-糖基化活性的糖基转移酶。原核表达结果显示在诱导剂IPTG为0.1mM时,ItUGT797能够表达出较多的可溶性蛋白。结论 本研究成功从鸢尾中克隆了ItUGT797基因,并分析了其编码蛋白的特征,检测了基因在根茎、叶和花中的表达量,同时通过原核表达体系筛选出最适合该基因可溶性蛋白表达的诱导剂浓度,为后续探索其参与鸢尾中黄酮类成分生物合成的功能奠定理论基础。

摘要： 糖基转移酶(glycosyltransferase,GTs)在植物的生长发育和逆境胁迫中有重要作用.为了进一步挖掘和研究水稻(Oryza sativa)中新的糖基转移酶的生物学功能,本研究从前期构建的贵州地方稻种'平塘黑糯'(O.sativa ssp.japonica)低温响应转录组文库中,筛选并克隆了1个低温应答类糖基转移酶基因(cold-upregulated glycosyltransferase-like gene 1,OsCUGT1).荧光定量PCR分析发现,OsCUGT1基因受到低温诱导表达.亚细胞定位结果显示其定位于叶绿体.序列比对结果表明,'平塘黑糯'中OsCUGT1基因与'日本晴'(O.sativa ssp.Nipponbare)相比,存在着多个碱基的差异.其中第511 bp的碱基发生了改变,由C变为A,碱基的改变造成了第170位氨基酸由赖氨酸(lysine,Q)变成了谷氨酰胺(glutamine,K).对该基因序列进行多样性分析,发现该基因序列具有丰富的单核苷酸多态性,并在基因的外显子区域找到12个SNP位点.系统遗传进化树分析显示,OsCUGT1氨基酸序列在单子叶植物中较为保守.进一步利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统,构建了OsCUGT1基因敲除载体.通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的愈伤转化、潮霉素筛选及测序分析,成功获得了OsCUGT1基因的定点编辑突变体.该研究结果为进一步明确OsCUGT1在水稻生长发育以及抗逆过程中的作用提供了研究材料和理论依据.

摘要： 糖基转移酶(glycosyltransferase,GT,EC 2.4.x.y)是植物次生代谢过程中一类重要的结构修饰酶,可参与催化受体分子进行糖基化修饰.本研究以杜仲为材料,基于前期构建的杜仲转录组数据设计杜仲糖基转移酶编码基因EuGT2克隆引物,克隆得到全长为285 bp的EuGT2片段,序列分析表明,该基因可编码94个氨基酸,且EuGT 2蛋白结构预测表明,该蛋白分子量为11.2 kDa,理论等电点(pI)为7.88,无信号肽、无跨膜结构域,属疏水性蛋白.蛋白同源序列比对以及系统进化树分析结果表明,与黄灯笼辣椒(Capsicum chinense)的糖基转移酶CcGT 6的亲缘关系较近,序列同源一致度为69.14％.Real-time PCR分析表明,EuGT2基因在杜仲初生幼苗期(2片真叶)的根、茎和叶中表达量没有显著差异性,而在杜仲小苗期(初生)的各器官中出现显著差异,其中EuGT2在茎中的表达量最高,分别为幼苗生长30 d左右根和叶片中表达量的2.5倍和5.5倍.

摘要： 近年来,细菌糖基化修饰系统的研究受到了越来越广泛的关注.已有文献报道了诸多细菌糖基化修饰系统,包括最具有代表性的空肠弯曲杆菌的N-糖基化修饰系统以及脑膜炎奈瑟菌的O-糖基修饰系统.本文在已有的研究基础上进行了系统的归纳总结,讨论对细菌蛋白质糖基化系统的理解,同时综述了细菌蛋白质糖基化应用方面的相关进展.

摘要： 糖基化是一种常见的翻译后修饰,能够参与重要生理功能的调控.其中,核心岩藻糖基化是只发生在N-聚糖上的α1,6岩藻糖修饰.目前研究发现,只有一种糖基转移酶——岩藻糖基转移酶8(fucosyltransferase 8,FUT8)能催化核心岩藻糖基化.本文重点介绍哺乳动物细胞内的核心岩藻糖基化修饰及其相关的生物学功能.核心岩藻糖基转移酶8以鸟苷二磷酸岩藻糖为糖供体来催化核心岩藻糖形成.人源FUT8蛋白结晶对该酶的催化机制及其底物特异性进行了合理解释.现有研究发现,核心岩藻糖基化在肿瘤进程、免疫调控和干细胞分化中发挥着重要作用.而岩藻糖类似物既可以是代谢标志物,也可以是岩藻糖基化抑制剂.核心岩藻糖基化N-聚糖的特异性标记和全自动合成将对其功能的深入研究和临床应用具有重要意义.

摘要： 目的 对1 例Bw亚型个体进行分子遗传学及蛋白结构分析.方法 采用血清学技术进行红细胞表面抗原和血清中抗体的测定,并用PCR-基于序列的分型(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)方法进行ABO基因的全编码区序列和第1 内含子区红系特异性调控元件的分析.进一步对存在突变位点的第5 ? 7外显子扩增片段进行T-A克隆分离单倍体和序列验证分析.应用Pymol软件对突变蛋白进行3D结构的模拟,分析氨基酸残基的变化对蛋白结构稳定性的影响.结果 该样本血清学表现为B抗原减弱,血清中含有抗-B抗体.ABO基因全编码区测序初步确定其基因型为ABO*B.O1/ABO*O.01.01伴有c.734C/T的杂合突变.第1内含子红系特异性调控元件区碱基序列无异常.通过单倍体克隆分离,确定突变位点c.734T位于ABO*B.01等位基因链,另一个等位基因为ABO*O.01.01.该突变将B糖基转移酶活性中心245位Thr置换为Ile.蛋白3D结构的模拟分析发现氨基酸置换后,与之结合的残基未发生改变而连接的氢键距离发生变化,同时增加了与远距离水分子之间的连接.结论 B糖基转移酶基因c.734C>T突变导致酶活性中心氨基酸置换,影响了突变B糖基转移酶蛋白稳定性,引起酶活性减弱,从而产生了 Bw变异型.

摘要： 雷莫拉宁(Ramoplanin)属于糖肽类抗生素,能够抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌,并且因为其具有独特的化学结构、强大的抗广谱革兰氏阳性菌的功效和暂无对其耐药的报道,而越来越受到人们的关注,目前已经进入Ⅲ期临床研究。万古霉素糖基转移酶GtfE在万古霉素生物合成途径中负责催化活性葡萄糖连接至万古霉素苷元,已有文献报道其具有良好的底物宽泛性,能够识别非天然糖受体与非天然糖供体,获得糖基多样性的化合物。本研究将万古霉素糖基转移酶GtfE在无糖雷莫拉宁产生菌中进行体内表达,通过体内转糖反应,以期获得雷莫拉宁。本研究从万古霉素产生菌Amycolatopsis orientalis HCCB10007中PCR扩增万古霉素糖基转移酶基因片段,同时用KpnⅠ和XbaⅠ双酶切pSP72质粒,用SacⅠ和XbaⅠ双酶切得到扩增的gtfE基因片段。然后酶切,对酶切回收后得到的三个片段进行连接,得到带有红霉素启动子的pSP72质粒,命名为pWYX12-3-31.从pWYX12-3-31中用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切,同时用EcoR I和XbaⅠ双酶切pSET152质粒。再次酶切,对酶切回收后得到的两个个片段进行连接,得到带有红霉素启动子与gtfE片段的pSET152质粒,命名为pWYX12-4-12,基因测序结果与标准序列完全一致,电泳检测质粒构建成功。用pWYX12-4-12转化E.coli ET12567的感受态细胞得到转化菌株。此时含有质粒pWYX12-4-12的E.coli ET12567菌株作为供体菌株,与无糖雷莫拉宁产生菌(Actinoplanes CJS1001)进行接合转移,得到阳性接合子。获得突变株mWYX-dRE,首先验证其基因型正确,接着在其RNA转录水平进一步验证,电泳结果均显示正确,确定了GtfE基因在无糖雷莫拉宁产生菌中的成功表达,然后进行突变株发酵培养。经HPLC检测处理过的发酵液,发现突变株mWYX-dRE有新的化合物产生,命名为RW,对突变株mWYX-dRE发酵产物进行分离纯化后,得到液相纯度达到95％以上的RW样品进行初步结构鉴定,经LC-MS检测中发现信号m/z ([M+2H]2+)=1278,计算MASS为2554,同时LC-MS检测无糖雷莫拉宁产生菌发酵产物中不存在这一新的化合物,以上结果表明,万古霉素糖基转移酶GtfE能够在无糖雷莫拉宁产生菌中进行异源表达,并生成了新的化合物RW,因在液相条件下检测结果与A2的一致,且经过LC-MS检测分子量相同,推测可能是雷莫拉宁A2或者是其类似物,工作为今后深入研究新的化合物的生成提供了新的思路。

摘要： 目的：克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因gtfE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法：从万古霉素总DNA中克隆糖基转移酶基因gtfE,并连入pET37b构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用LC-MS检测其活性。结果：成功建立了万古霉素糖基转移酶基因gtfE体外转糖反应模型,该模型可以体外转化尿苷二磷酸葡萄糖,LC-MS确定为葡萄糖万古霉素；但不能转化鸟苷二磷酸D型廿露糖。结论：异源表达的万古霉素糖基转移酶GtfE具有良好的活性,其体外测活方法快捷可靠,为获得糖基多样性的万古霉素打下基础。

摘要： 本文构建了同框敲除质粒plw-dNogD,利用接合转移的方法将其转入黑胡桃链霉菌Streptomycesnogalater ATCC27451.通过同源重组双交换的方法敲除了糖基转移酶基因NogD内部223个氨基酸,松弛培养后筛选得到了双交换阻断突变株SIPI-A.mdnogd (△nogD),经过测序验证,该突变株与野生型相比,糖基转移酶NogD确实缺失了223个氨基酸从而引起失活。对该突变株进行发酵,结果显示,该突变株未检测到诺加霉素产生,同时也并没有检测到无糖诺加霉素前体的产生。推测该酶除了可能负责后修饰糖基的转移外,可能还有其他的功能,其失活使得诺加霉素生物合成受到阻断。

摘要： 研究羊种布鲁氏菌糖基转移酶(WboA)在诱发胚胎滋养层细胞炎症反应中的作用.研究表明WboA蛋白具有细胞毒作用,布鲁氏菌的致炎作用与脂多糖O链相关,为进一步阐明布鲁氏菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础.rn 布鲁氏菌是兼性胞内寄生菌，胚胎滋养层细胞是布鲁氏菌侵染的靶细胞。胚胎滋养层细胞受到损伤会引发强烈的炎症反应，影响胎儿向母体的植入，容易引发母畜流产。布鲁氏菌LPS是一种毒力因子，已被初步证明与引发母畜流产相关。光滑型布鲁氏菌的外膜存在完整的LPS，而粗糙型布鲁氏菌的外膜缺少O链多糖，当布鲁氏菌LPS的O链多糖缺失时，布鲁氏菌从光滑型转变为粗糙型，同时导致细菌的毒力减弱。布鲁氏菌的WboA基因编码的糖基转移酶与光滑型布鲁氏菌LPS O链的合成密切相关。在本研究中，通过纯化WboA蛋白和构建△WboA并将其分别作用于胚胎滋养层细胞，ELISA检测炎症相关细胞因子，研究了布鲁氏菌所引发的致炎作用与LPS的关系，为进一步研究布鲁氏菌感染机制奠定了基础。

摘要： 应用生物技术大量生产糖链是最有前景的途径。细菌表面多糖抗原基因簇中含有丰富的糖合成基因资源。以细菌表面多糖抗原合成基因为研究材料，可以同时破译和鉴定大量糖基转移酶，具有重要的科学和应用价值。本实验室在完成大肠杆菌0152抗原基因簇的破译基础上，运用生物信息学方法预测了wfgE基因为0152抗原基因簇中编码涉及重复单位中第三个糖苷键Glc-β1→2-Glc键合成的糖基转移酶。为鉴定wjgE基因的功能，在对基因wfgE进行克隆、大肠杆菌中高效表达的基础上，以实验室自制的Glc-β1→3-G1cNAc-α-P03-P03-(CH2)11为受体底物，UDP-Glc为给予体底物进行酶促反应，应用电喷雾离子化多级串联质谱对酶促反应三糖产物的糖链序列和精细结构进行分析。探索的高效、准确、快捷和灵敏的寡糖结构生物质谱分析方法，对糖基转移酶基因特定功能的鉴定有普遍适用性。

摘要： 本文以野葛植物为研究对象,旨在从分子角度解析野葛植物异黄酮物质修饰代谢过程;LC-MS分析显示,野葛植物异黄酮修饰代谢主要体现在糖基化与甲基化过程,其中包括3'-位置甲氧基化、4'-位置甲氧基化、4'-位置糖基化、4',7-位置双糖基化以及8-位置碳糖基化过程,而且这些修饰代谢物主要在该植物根组织部位积累;利用RNA-sequencing技术构建了野葛植物根与叶器官的转录组学数据库,发现了一批可能参与异黄酮修饰代谢过程的糖基转移酶与甲基转移酶基因;利用异源蛋白表达与生物化学技术,明确了3'-位置甲氧基化、4'-位置甲氧基化、4'-位置糖基化与4',7-位置双糖基化关键酶基因,尤其是异黄酮3'-位置甲氧基化与4'-位置糖基化酶在植物界尚属首次发掘;结合植物转基因策略与蛋白互作技术,解析了异黄酮物质甲基化修饰代谢的调控机理,发现了野葛植物异黄酮物质甲基化修饰调控发生在蛋白质水平而非转录水平,在外界逆境信号诱导下,异黄酮修饰酶分子与上游骨架形成酶形成蛋白复合体,最终强化了野葛植物异黄酮物质修饰代谢路径.

摘要： 目的：本研究分析胰腺癌组织和癌旁组织中糖基转移酶的表达情况和调控机制,为胰腺癌的干预与早诊提供依据.rn 方法：利用RT-PCR方法研究N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶(N-acetylglucosaminyltransferases V,GNT-V)在胰腺癌组织中的mRNA表达.用RNA干扰GNT-V的慢病毒载体转染胰腺癌细胞系BxPC-3,利用CCK-8法进行细胞增殖实验,细胞划痕进行迁移实验.利用细胞周期检测试剂盒进行细胞周期实验.利用WB检测干扰GNT-V后的细胞磷酸化蛋白表达情况.rn 结果：RT-PCR结果表明,胰腺癌组织与癌旁组织相比,糖基转移酶GNT-V显著降低.用RNA干扰GNT-V基因的慢病毒载体转染BxPC-3细胞后,细胞的增殖、迁移显著升高;细胞周期中S期显著升高;磷酸化蛋白p-P38MAPK明显升高.rn 结论：GNT-V在胰腺癌组织中表达显著降低;干扰GNT-V促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和生长,促进胰腺细胞p-P38MAPK的表达,提示干扰GNT-V后可能通过P38MAPK通路促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和生长。

摘要： 目的：研究IgG型多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的N-糖谱特征和相关糖基转移酶的调控机制.rn 方法：采用基于DNA测序仪的荧光糖电泳(DNAsequencer-assisted,fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis,DSA-FACE)技术检测IgG型MM和健康对照血清和纯化IgG的N-糖谱;凝集素印迹(Lectin blot,LB)分析血清IgG重链上特异性糖结构的结合力;通过蛋白质印迹(Western blot,WB)和LB鉴定IgG型多发性骨髓瘤和贫血对照的骨髓标本中N糖组特征;用RNA干扰糖基转移酶α-2,6唾液酸转移酶1(alpha-2,6-sialyltranferase1,ST6GAL1)和β-1,4-半乳糖基转移酶1亚型(beta1,4-galactosyl transferase polypeptide1,B4GALT1)的慢病毒载体感染IgG型MM细胞系LP-1,利用Annexin V/PI双染法进行细胞凋亡实验,配套的细胞周期检测试剂盒进行细胞周期实验.rn 结果：IgG型MM血清N-糖组中大部分来源于IgG的N-糖峰Peak1(无半乳糖-α-1,6-核心岩藻糖基化二天线结构,NGA2F),Peak3(单半乳糖-α-1,6-核心岩藻糖基化二天线结构,NG1A2F)和Peak4(同Peak3)显著升高,而大多来源于去IgG糖蛋白的N-糖峰Peak5(双半乳糖二天线结构,NA2)和Peak8(三半乳糖三天线结构,NA3)显著下降,同时其改变与疾病的ISS分期、病情的缓解和复发密切相关.用IgG和去IgG糖蛋白标化后,无半乳糖结构的N-糖峰丰度下降,三天线和四天线结构的N-糖峰丰度升高.IgG型MM血清IgG N-糖组中,G0型(无半乳糖糖型)显著降低,G2型(双半乳糖糖型)显著升高,同时与疾病的发生、发展有关.LB的结果显示,IgG型MM血清IgG重链中接骨木凝集素(Sambucus nigraagglutinin,SNA)的结合力上升,鸡冠刺桐凝集素(Erythrinacristagalli lectin,ECL)/刀豆凝集素A(concanavalinA,CONA)和SNA/CONA的结合力也升高.IgG型MM和贫血对照的骨髓WB和LB分析表明,与唾液酸化相关的糖基转移酶ST6GAL1显著升高,相关凝集素SNA的结合力也显著上升;与半乳糖基化相关的糖基转移酶B4GALT1有升高的趋势,相关凝集素ECL出现显著升高.用RNA干扰ST6GAL1基因的慢病毒载体感染LP-1细胞后,细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率升高,活细胞率下降,细胞周期停滞于G0/G1期;用RNA干扰B4GALT1基因的慢病毒载体感染LP-1细胞后,仅出现细胞早期凋亡率的下降.rn 结论：IgG型MM的N-糖谱呈现高半乳糖基化和高唾液酸化的特点,ST6GAL1和B4GALT1基因的RNA干扰显示,唾液酸化的ST6GAL1对于IgG型MM的细胞的生长、增殖和抗凋亡的作用显著,而与半乳糖基化相关的B4GALT1对细胞的DNA合成和凋亡影响不大,主要呈现唾液酸糖结构载体的伴随效应.

摘要： 敲除雷莫拉宁生物合成基因簇中orf29,所得的突变株能够发酵产生无糖雷莫拉宁,但其功能还未确定。本研究为了验证orf9的体内功能,在大肠杆菌中构建orf29回补质粒pSET152/PermE*/ramo-orf29,将其转入敲除了orf29的雷莫拉宁产生菌突变株SIPI-A.2006Δorf29中,通过同源重组单交换的方法构建orf29回补突变株。经发酵验证,突变株发酵产物中检测到有雷莫拉宁产生,证明了orf29基因的体内功能。

摘要： 敲除雷莫拉宁生物合成基因簇中orf29,所得的突变株能够发酵产生无糖雷莫拉宁,但其功能还未确定。本研究为了验证orf9的体内功能,在大肠杆菌中构建orf29回补质粒pSET152/PermE*/ramo-orf29,将其转入敲除了orf29的雷莫拉宁产生菌突变株SIPI-A.2006Δorf29中,通过同源重组单交换的方法构建orf29回补突变株。经发酵验证,突变株发酵产物中检测到有雷莫拉宁产生,证明了orf29基因的体内功能。

摘要： 本发明的目的是提供包含除了糖核苷酸以外的糖供体化合物的糖供体试剂和能够使用除了糖核苷酸以外的糖供体化合物催化糖基转移反应的酶。本发明提供了以下：包含式(a)化合物的糖供体试剂：

摘要： 本发明涉及一种酶法修饰糖蛋白的方法。所述方法包括以下步骤：在为或衍生自β‑(1,4)‑N‑乙酰半乳糖胺转移酶的糖基转移酶的存在下，使包含含有末端GlcNAc部分的聚糖的糖蛋白与非天然的糖衍生物核苷酸接触。所述非天然的糖衍生物核苷酸如式(3)所示：

摘要： 本发明提出一种安哥拉糖胺基合成酶及糖基转移酶多基因共表达系统的构建及其应用，是以链霉菌基因组文库质粒为模板，通过PCR扩增6个安哥拉糖胺合成酶基因及其糖基转移酶基因，将其依次连接并置于链霉菌启动子P

摘要： 本发明一般地涉及通过糖基化的肽或多肽修饰的方法。特别地，本发明涉及通过使用多功能重组核苷酸依赖性糖基转移酶将二糖聚糖一步法合成到受体底物上，并从而产生O‑和/或S‑糖基化的新糖肽，其中包括抗微生物肽。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种α‑1,3‑岩藻糖基转移酶突变体及利用该突变体制备3‑岩藻糖基乳糖的应用。α‑1,3‑岩藻糖基转移酶突变体与SEQID NO:1具有至少90％的核苷酸序列一致性，且包含以下至少一个或多个位置的突变，所述的突变位点包括SEQ ID NO:1的第46、128、129或132位中的至少一个或者对应的位置，突变为在所述的突变位点上发生取代、插入或删除一个或多个氨基酸残基。本发明制备的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶突变体在在基因工程化的细胞中合成3‑岩藻糖基乳糖产量可高达10.96g/L，比野生型菌株FutA提高了64.5倍，提升3‑岩藻糖基乳糖产量的效果显著。

摘要： 本发明涉及糖基转移酶UGT‑76用于在甜菊糖苷类化合物的O‑(Glc)n的第一个糖基的C‑3’添加β‑葡萄糖苷的新用途。另外，本发明还涉及使用糖基转移酶UGT‑76和/或糖基转移酶UGT‑76和糖基转移酶UGT‑91生产莱鲍迪苷A(RA)、莱鲍迪苷D(RD)和/或莱鲍迪苷M(RM)的方法。本发明在一定程度上解决了甜菊糖苷生物合成可用的糖基转移酶种类较少、方法较单一、且催化专一性及转化效率都较低的问题。本发明的转化率可达到100％，并且不需添加二甲亚砜或甲醛等不属于食品安全试剂的助溶剂和通透剂，因此更加安全，且方法操作简单，生产成本低，适合于工业化生产。

摘要： 本发明提供产生具有增加的三叶苷含量或增加的4’‑O‑糖基转移酶活性的宿主细胞、植物细胞或植物的方法，所述方法包括用编码具有4’‑O‑糖基转移酶活性的多肽的多核苷酸转化所述宿主细胞或植物细胞。本发明还提供经遗传修饰以包含和/或表达所述多核苷酸的宿主细胞、植物细胞和植物。

摘要： 本发明涉及一种酶法修饰糖蛋白的方法。所述方法包括以下步骤：在为或衍生自β‑(1,4)‑N‑乙酰半乳糖胺转移酶的糖基转移酶的存在下，使包含含有末端GlcNAc部分的聚糖的糖蛋白与非天然的糖衍生物核苷酸接触。所述非天然的糖衍生物核苷酸如式(3)所示：其中A选自‑N3、‑C(O)R3、‑(CH2)iC≡C‑R4、‑SH、‑SC(O)R8、‑SC(O)OR8、‑SC(S)OR8、‑F、‑Cl、‑Br、‑I、‑OS(O)2R5、末端C2‑C24烯基、C3‑C5环烯基、C4‑C8链二烯基、末端C3‑C24丙二烯基和氨基。本发明还涉及一种通过本发明的方法可获得的糖蛋白，涉及一种可通过将糖蛋白与接头缀合物缀合而获得的生物缀合物，并且涉及可用于制备本发明的糖蛋白的β‑(1,4)‑N‑乙酰半乳糖胺转移酶。

摘要： 本发明提出一种安哥拉糖胺合成酶及糖基转移酶多基因共表达系统的构建及其应用，是以链霉菌基因组文库质粒为模板，通过PCR扩增6个安哥拉糖胺合成酶基因及其糖基转移酶基因，将其依次连接并置于链霉菌启动子P

摘要： 本发明涉及花生糖基转移酶AhUGT4在将白藜芦醇转化为白藜芦醇糖苷中的应用、在提高植物体内白藜芦醇当量中的应用；还涉及一种获得白藜芦醇糖苷的方法以及一种提高植物体内白藜芦醇当量的方法。AhUGT4可高效糖基化白藜芦醇生成相应的白藜芦醇糖苷类物质，尤其是该酶具有催化合成白藜芦醇双糖基化合物(白藜芦醇‑3,5‑O‑双葡糖糖苷)的活性，这在其他植物中尚未见到相关报道。构建的AhUGT4基因超表达框可提高植物体内的白藜芦醇当量。此外，AhUGT4还为在植物或微生物中异源合成白藜芦醇糖苷类化合物提供有用的基因资源，对推动白藜芦醇生物合成的产业化和促进人类健康具有重大意义。