同源重组
同源重组的相关文献在1989年到2022年内共计1025篇,主要集中在分子生物学、基础医学、畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂
等领域,其中期刊论文792篇、会议论文38篇、专利文献24591篇;相关期刊334种,包括石河子大学学报(自然科学版)、生物工程学报、生物技术通报等;
相关会议36种,包括中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会、第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛)、第二届中国肉牛选育改良与产业发展国际研讨会暨中国畜牧兽医学会养牛分会八届二次学术研讨会等;同源重组的相关文献由3547位作者贡献,包括王家宁、陈创夫、黄永章等。
同源重组—发文量
专利文献>
论文:24591篇
占比:96.73%
总计:25421篇
同源重组
-研究学者
- 王家宁
- 陈创夫
- 黄永章
- 崔玉琳
- 秦松
- 邵雷
- 郑文岭
- 陈代杰
- 马文丽
- 张友明
- 朱宝泉
- 李继安
- 陈坚
- 乔军
- 任家利
- 周建光
- 堵国成
- 孙国凤
- 孟庆玲
- 张伟
- 张辉
- 才学鹏
- 李杰
- 柳纪省
- 王康
- K·霍诺德
- Y·张
- 崔东
- 张西锋
- 朱春宝
- 李万芬
- 李志强
- 林向民
- 殷相平
- 焦新安
- 胡又佳
- 邓继先
- 郭凌郧
- 陈焕春
- 黄新祥
- 黄翠芬
- F·A·斯图尔特
- J·P·P·穆伊雷尔斯
- 丁学知
- 何成强
- 何菊
- 冯娟
- 冯尔玲
- 刘先凯
- 刘开东
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周珂辉;
刘延庆;
陶丽
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摘要:
同源重组(homologous recombination,HR)与非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)的选择机制是DNA双链断裂损伤修复的前沿科学问题.末端切除是HR修复的标志性事件,53BP1通过竞争BRCA1介导的末端切除将修复途径从HR转向NHEJ进行.近年来,多个课题组同时发现并证实Shieldin复合物是53BP1介导的两种修复途径选择的下游效应因子.Shieldin是由Rev7、SHLD1(C20orf196)、SHLD2(FAM35A)与SHLD3(CTC-534A2.2)组成的复合体蛋白,能够限制末端切除并抑制HR修复,并以53BP1依赖的方式促进NHEJ修复.该文对Shieldin结构组装、工作与活性调节机制的研究进展进行综述,同时关注Shieldin对肿瘤治疗干预的临床价值,以期为肿瘤耐药机制与逆转耐药研究提供新的线索分子.
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姜婵娟;
崔天琦;
孙洪娈;
焦念志;
符军;
张友明;
王海龙
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摘要:
基因克隆是解析基因功能的重要手段,但仍有很多基因难以克隆,比如高AT含量(>60%)基因组来源的DNA。ExoCET克隆技术通过联合核酸外切酶介导的体外同源重组和大肠杆菌RecET重组酶介导的细胞内同源重组,不仅能从微生物基因组中靶向抓取>100 kb的大片段,而且能高效组装>13个DNA片段,是基因克隆的有力工具,迄今未有利用ExoCET技术从AT含量>63%的基因组克隆大片段的报道。本研究以AT含量为69%的海洋单细胞光合蓝细菌原绿球藻MIT 9301菌株的基因组为研究对象,探究了利用ExoCET技术进行高AT含量基因组大片段克隆的最佳条件。结果显示:①在核酸外切酶介导的体外同源重组时使用Gibson体系较T4聚合酶体系能获得更高的克隆效率;②载体应选择单拷贝的细菌人工染色体(BAC),多拷贝质粒载体会导致克隆失败;③ExoCET可以从原绿球藻基因组上抓取>80 kb的大片段,并且能以100%的正确率组装11个3 kb的DNA片段;④可以一步同时抓取4个7~20 kb的基因组大片段。大规模基因组测序显示高AT含量生物占比超过30%,该研究建立的ExoCET-BAC策略将为高AT含量生物的基因组功能研究提供高效使能技术。
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李绍宽;
刘静;
赵楠;
庞民好;
唐博文;
赵斌;
刘颖超
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摘要:
拟轮枝镰孢(Fusarium verticillioides)是玉米穗腐病的主要病原菌之一,其产生的伏马毒素是一种有毒次级代谢产物,严重降低玉米品质,威胁食品安全。DHOD基因编码二氢乳清酸氧化酶(DHOD),主要通过参与生命体中的嘧啶合成途径来影响机体的DNA、RNA合成,进而调控次生物质代谢等过程。为明确DHOD基因在拟轮枝镰孢伏马毒素生物合成中的作用,首先分析拟轮枝镰孢DHOD的系统发育关系,然后通过同源重组法创制拟轮枝镰孢DHOD基因敲除突变体,采用高效液相色谱法(HPLC)检测拟轮枝镰孢野生型与DHOD基因敲除突变体伏马毒素产生量的差异,并利用RT-qPCR技术分析DHOD基因及伏马毒素合成相关基因的表达量。系统发育分析及序列同源比对结果表明,DHOD基因在镰孢菌中较保守;PCR和RT-qPCR分析表明,采用同源重组法获得了拟轮枝镰孢DHOD基因敲除突变体;HPLC分析显示,DHOD基因敲除突变体的毒素产量较野生型显著下降88.32%~93.56%;RT-qPCR检测结果表明,拟轮枝镰孢DHOD基因敲除突变体中fum1、fum6、fum8和fum13基因表达量较野生型均显著下降。综上所述,拟轮枝镰孢中DHOD基因表达量与伏马毒素的产量呈正相关。
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史玉洁;
李芳;
王昕
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摘要:
规律成簇间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeat,CRISPR)及其相关蛋白(Cas)系统是一种新型的基因编辑技术,具有操作简单,编辑高效率等优点,在基因治疗、制作抗体药物、构建模式动物等领域广泛应用。山羊和绵羊作为重要的家畜类型,CRISPR/Cas9基因编辑技术出现后,在山羊、绵羊的遗传修饰中得到迅速应用。本文概述了CRISPR/Cas系统的发展历程、组成及分类、作用方式和原理,总结了CRISPR/Cas系统近年来在提升山羊和绵羊生产性能方面的应用,并对该技术的发展前景作简要阐述,以期为解决畜禽种业的瓶颈问题以及我国畜禽种业的快速、健康和持续发展提供参考。
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刘洋;
王攀琦;
王芳;
刘星吟;
董兰;
魏瑶璐;
宁志丰;
沈定文
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摘要:
目的构建肿瘤转移相关基因1短式(MTA1s)原核表达载体并诱导其蛋白表达,为后续MTA1s的相关研究奠定基础。方法取对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,提取细胞总RNA并反转录成cDNA,并以此为模板扩增MTA1s基因的蛋白编码区。采用一步克隆的方法将目的片段插入表达载体pET-28a(+)中并构建重组原核表达载体(命名为:pET-28a-MTA1s),将构建的重组载体用双酶切、菌液聚合酶链式反应(菌液PCR)、和测序进行鉴定。将pET-28a-MTA1s导入细菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MTA1s重组蛋白,通过SDS-PAGE进行鉴定重组蛋白(MTA1s)表达情况以及蛋白免疫印迹分析(Western blot)鉴定重组蛋白(MTA1s)表达量。结果以MCF-7乳腺癌细胞为模板扩增出大小位置正确的片段;构建的pET-28a-MTA1s重组载体经双酶切、菌液PCR验证正确,DNA测序证实序列正确。考马斯亮蓝染胶和Western blot结果显示IPTG诱导表达的重组蛋白分子量正确且条带单一。结论成功构建pET-28a-MTA1s原核表达载体,为后续进行下游实验的研究奠定基础。
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郭雨萱;
严顺平;
王应祥
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摘要:
减数分裂(meiosis)是有性生殖细胞中发生的特殊分裂方式,在这个过程中DNA复制一次,细胞核分裂两次,最终产生单倍体的配子。雌雄配子融合后基因组又恢复到二倍体水平,不仅保证了有性生殖过程中世代间基因组的稳定性,还导致后代的遗传多样性。减数分裂同源重组(homologous recombination,HR)是其前期I的核心事件之一,它不仅保证了后续同源染色体的正确分离,而且允许同源染色体之间遗传信息发生交换,增加了后代的遗传多样性。RAD51(RADiation sensitive 51)和DMC1(disruption Meiotic cDNA 1)是HR过程中必需的重组酶,二者有一定的共性和特性。本文从起源、进化、结构和功能等方面总结并比较了它们间的保守和分化,并对未来的研究方向提出了展望,为进一步深入研究减数分裂的重组机制提供了借鉴。
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陆泓雨;
付玮;
丁士刚
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摘要:
Rad51是同源重组的中心分子,其基本作用原理是形成Rad51-ssDNA核蛋白丝结构,在染色体联会配对期间侵入模板链。Rad51在恶性肿瘤中的作用主要包括:(1)与p53、p38和p21等细胞周期检查点分子相互作用,影响肿瘤的发展和转移;(2)Rad51表达减少导致了部分上皮间质转化过程的逆转;(3)Rad51不同位点的突变可以显著影响肿瘤发展的风险和抗肿瘤治疗的结果;(4)部分微小RNA和长链非编码RNAs可以靶向Rad51的编码区并调控基因表达。近年来,各项研究中卵巢癌、乳腺癌和肺癌Rad51的高表达证实了上述机制,提示Rad51高表达与肿瘤转移和耐药高度相关。调节Rad51的表达可以逆转肿瘤耐药过程,有望成为肿瘤治疗和逆转肿瘤耐药的全新靶点。
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王晨玺;
邓霞;
赵志聪;
蔡珍生;
张盼盼;
李莲;
李昊翔;
赵丽;
王东;
杨玲;
袁国跃
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摘要:
目的构建及鉴定携带小鼠PTG基因(NM_016854)的过表达重组腺病毒载体,为深入研究PTG的功能奠定基础。方法化学合成小鼠PTG基因的编码序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增、酶切,后插入GV314载体(CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP),得到重组穿梭质粒pGV314-PTG;进一步BamHⅠ/AgeⅠ双酶切,产物交换入线性化表达载体pDC315,构建重组腺病毒Ad-PTG,将其转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测,最后利用PCR、Western blot及测序验证重组腺病毒。结果经PCR、Western blot及测序后,结果显示成功构建pGV314-CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-PTG过表达腺病毒载体(Ad-PTG),终点稀释法测得病毒滴度为4×10^(10)PFU/ml,Western blot和荧光定量PCR显示PTG的蛋白和mRNA表达水平显著升高。结论成功构建携带小鼠PTG基因的重组过表达腺病毒载体,且能有效上调肝细胞中PTG基因的表达。
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柯竹芳;
徐旭东;
高宏
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摘要:
在蓝藻合成生物学中,对大片段进行无标记删除可以加快基因组简化的进程。研究以聚球藻PCC 7942为材料,基于同源重组技术对基因组中大于10 kb的3个非必需区域进行无标记删除。构建带有两侧同源片段的不可在聚球藻复制的质粒,利用接合转移将其导入藻细胞获得同源单交换株,再借助于条件致死基因sacB筛选第二步交换的克隆,获得无标记删除突变株。研究证明了传统的同源重组和筛选技术可用于蓝藻基因组的大片段无标记删除。
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杨明珠;
陈晓春;
张媛;
王秀丽;
李俊平
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摘要:
为探寻伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因缺失株rPRV-bc-8基因组UL4-UL3基因间区域是否可作为外源基因的插入位点,在实验室已构建的含有增强型绿色荧光蛋白(Enhance Green fluorescent protein,EGFP)基因的转移质粒pMD-US6+7-EGFP-US2的基础上,通过DNA体外分子克隆技术将UL4序列替换左同源臂US6+7序列,UL3序列替换右同源臂US2序列,并将PolyA引入转移质粒,得到转移质粒pMD-UL4-EGFP-UL3。利用脂质体转染法将转移质粒pMD-UL4-EGFP-UL3与亲本毒rPRV-bc-8共转染PK-15细胞,经蚀斑纯化成功得到一株能够稳定表达EGFP基因的重组伪狂犬病毒rPRV-UL4-EGFP-UL3。通过倒置荧光显微镜观察以及PCR鉴定确定EGFP基因已成功插入到伪狂犬基因组的UL4-UL3之间,并通过细胞传代试验分析得到重组毒的遗传稳定性良好。通过体外增殖试验分析得到重组病毒rPRV-UL4-EGFP-UL3在细胞内的增殖速度较快,接种后12 h内滴度始终高于亲本毒rPRV-bc-8,接种后40 h达到最高滴度108.3 TCID50/mL,与亲本毒的最高滴度接近,但是最高滴度的出现时间晚于亲本毒,并且在达到平台期后病毒滴度下降的比亲本毒快。通过对病毒培养液中荧光蛋白浓度进行测定,结果显示在接种后56 h时荧光蛋白浓度达到最高值4793.9 ng/mL,之后进入平台期。综上结果表明构建的重组病毒具有良好的遗传稳定性及体外复制能力,并且外源基因EGFP在此位点具有良好的表达效果,为进一步相关重组病毒的构建奠定了基础。
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张笛;
金文杰;
徐步
- 《中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会》
| 2015年
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摘要:
OmpA(大肠杆菌外膜蛋白A)又称为热修饰蛋白,基因序列全长1041bp编码347个氨基酸,蛋白相对分子质量约为36kD.研究表明OmpA广泛的存在于革兰氏阴性菌的外膜中,具有一定保守性,维持外膜的完整是其主要的功能,缺失了OmpA的细菌突变株的形态则会发生改变,同时细胞膜的稳定性也受到影响,并且影响着大肠杆菌的黏附和侵袭.OmpA是细菌抗宿主杀伤因子,同时也是细菌重要的毒力因子.利用具有同源序列短、重组效率高和操作灵活等特点的Red/ET同源重组技术对ompA基因进行缺失,用以进一步研究ΔompA缺失菌株致病力是否存在改变,为进一步研究鹅卵黄性腹膜炎的发病机制奠定基础.ompA基因的缺失影响到了大肠杆菌在易嗜部位的黏附和定殖以及对组织的致病性。通过对OmpA的初步研究为探索OmpA在细菌致病过程中发挥的作用,以期为揭示鹅卵黄性腹膜炎发生机理提供基础和帮助,对疾病的防制提供新方法和新途径。
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王龙江;
王甜甜;
孙慧;
陈佩佩;
史文艳;
刘卿;
张杰;
陈正涛;
李宏梅;
肖一红;
王方昆;
赵孝民
- 《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会》
| 2013年
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摘要:
本研究旨在通过同源重组的方法建立一套有效的适用于布拉氏酵母菌的基因敲除体系.以URA3为目的基因进行敲除,通过两次PCR的方法将遗传标记扩增,然后进行酵母菌的转染将PCR产物导入到酵母菌基因组中,同时利用带有Cre的质粒实现筛选标记的重复利用,通过遗传标记的筛选得到突变株.最后将目的基因重新导入到突变株中,可以使突变株在营养缺陷型的培养基中生长.布拉氏酵母菌基因敲除系统的成功建立,为从分子水平上研究益生菌的作用机理、基因调控通路和机理提供了强有力的手段,以及进行功能基因的敲除、插入及染色体基因的替换,进而可以阻断微生物细胞的代谢旁路,减弱毒/副作用,强化目标产物的产量或质量奠定坚实基础.
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胡进;
游武进;
陈焕春;
贝为成
- 《第14届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会》
| 2013年
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摘要:
本研究在以本实验室谭臣博士构建的△SsPep为亲本菌基础上,通过基因工程同源重组技术,缺失SsPspC基因,构建不含抗性标记的猪链球菌2型双基因缺失突变疫苗菌株△SsPep△SsPspC.通过小鼠安全及免疫保护试验,使其成为一个安全有效的猪链球菌2型基因工程弱毒活疫苗菌株打下基础,为预防和控制猪链球菌2型的发生与流行提供技术支持.
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潘登科
- 《第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会》
| 2013年
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摘要:
本文利用同源重组技术和TALEN技术分别获得了敲除a1,3GT基因克隆猪(GaIKO)。利用Minigene策略获得了表达人hCD46基因猪,转基因猪细胞抗人血清补体介导的排斥反应效果明显。针对组织器官移植存在的凝血炎症反应,目前主要通过转人抗凝血因子如TFPI,CD39,TM基因等来解决。针对T细胞排斥反应,主要通过转人LEA29Y,CⅡTA-DN等基因来有效克服。我们构建了猪胰岛素启动子特异表达hCD39基因和LEA29Y基因的载体、猪血管内皮特异表达TM基因的载体、CAG启动子广泛性表达CⅡTA-DN载体,己完成胚胎移植,多基因修饰克隆猪Ga1K0/hCD46/TM,Ga1K0/hCD46/CⅡTA-DN,Ga1K0/hCD46/Ins hCD39/Ins LEA29Y即将获得。
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Zhang Qiong;
张琼;
Jiang Bijie;
姜碧杰;
Zan Linsen;
咎林森
- 《第二届中国肉牛选育改良与产业发展国际研讨会暨中国畜牧兽医学会养牛分会八届二次学术研讨会》
| 2013年
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摘要:
本文旨在构建秦川肉牛ADIG基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在秦川肉牛脂肪细胞中表达,进而研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子机制和相关信号通路.根据NCBI收录的牛的mRNA(NM_001113720.1)设计引物,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接pMD19-T simple Vector并测序正确.质粒提取纯化后,通过BglⅡ与salⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,并用pacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化E.coli Top10进行扩繁.将测序结果与NCBI上收录的序列相比对,CDS区完全匹配,说明成功构建ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAd-ADIG,可用于下一步的病毒包装。
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易新萍;
叶锋;
姚刚;
谷文喜;
马晓菁;
吴冬玲;
钟旗
- 《第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛)》
| 2014年
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摘要:
目的:构建牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株并免疫BALB/c鼠,初步评估了其免疫保护效果.rn 方法:应用PCR方法扩增A19疫苗株VirB12基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pBK-CMV-SacB-VirB 12,将该质粒电击转化至布鲁氏菌A19感受态细胞中,筛选得到布鲁氏菌疫苗株A19的VirB12基因缺失株.以A19疫苗株为参照,应用A19-△VirB12疫苗接种BALB/c小鼠,免疫45d后布鲁氏菌2308强毒株攻毒,攻毒15d后取BALB/c鼠的脾脏进行克脾指数测定和病理组织学检测.Westem-blotting鉴定VirB 12蛋白的免疫反应性.rn 结果:构建了牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株,小鼠免疫攻毒后15d,A19-△VirB12免疫组和A19免疫组的克脾指数与对照组之间有显著性差异(P0.05).Westem-blotting实验表明VirB12蛋白具有免疫反应性.rn 结论:牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株与亲本株A19免疫保护性无明显差异,通过血清学方法可区分疫苗免疫与野生型牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)感染动物,具备作为标记疫苗的潜力.
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易新萍;
叶锋;
姚刚;
谷文喜;
马晓菁;
吴冬玲;
钟旗
- 《第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医微生物学专业委员会联合学术论坛)》
| 2014年
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摘要:
目的:构建牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株并免疫BALB/c鼠,初步评估了其免疫保护效果.rn 方法:应用PCR方法扩增A19疫苗株VirB12基因的上下游同源臂序列,构建重组质粒pBK-CMV-SacB-VirB 12,将该质粒电击转化至布鲁氏菌A19感受态细胞中,筛选得到布鲁氏菌疫苗株A19的VirB12基因缺失株.以A19疫苗株为参照,应用A19-△VirB12疫苗接种BALB/c小鼠,免疫45d后布鲁氏菌2308强毒株攻毒,攻毒15d后取BALB/c鼠的脾脏进行克脾指数测定和病理组织学检测.Westem-blotting鉴定VirB 12蛋白的免疫反应性.rn 结果:构建了牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株,小鼠免疫攻毒后15d,A19-△VirB12免疫组和A19免疫组的克脾指数与对照组之间有显著性差异(P0.05).Westem-blotting实验表明VirB12蛋白具有免疫反应性.rn 结论:牛布鲁氏菌A19-△VirB12突变株与亲本株A19免疫保护性无明显差异,通过血清学方法可区分疫苗免疫与野生型牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)感染动物,具备作为标记疫苗的潜力.