基因缺失

摘要： 非洲猪瘟(ASF)是猪的一种高传染性、高致死性的接触性传染病,它是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的,ASFV是一种双链DNA病毒,基因组庞大复杂,可编码170~190种蛋白。ASF自2018年传入我国以来,对我国的社会、经济等造成严重影响,但目前尚无可用的商品化疫苗,ASF的防控受到巨大挑战。目前ASF疫苗的研发主要包括灭活疫苗、亚单位疫苗、病毒活载体疫苗以及基因缺失活疫苗等,其中基因缺失活疫苗的研发被普遍认为是一种较为有效的方式。

摘要： 孤独症谱系障碍(ASD)的发病率在全球范围内呈逐年上升趋势,已成为全球性的公共卫生问题。近年来,诸多研究表明外周躯体感觉神经元功能障碍与ASD发病存在密切关系。文章总结归纳外周躯体感觉神经元与ASD关系的国内外研究现状,主要从躯体感觉神经元功能与人体生长发育的关系、ASD患者的躯体感觉障碍、ASD躯体感觉障碍的主要影响因素、研究存在的不足与展望等方面进行阐述。外周躯体感觉神经元是躯体感觉神经通路中的初级处理中枢,也是重要的信息传递枢纽,对躯体感知觉的形成至关重要;其与大脑间的信息传递对大脑发育、各种复杂行为及情绪的发展具有重要的影响。ASD患者普遍存在躯体感觉行为的改变,通过躯体感觉刺激后可能会改善ASD相关症状。ASD躯体感觉障碍的主要影响因素包括遗传因素和环境因素2个方面,其中遗传因素包括γ-氨基丁酸A型受体亚基β3基因突变、甲基化CpG结合蛋白2基因功能缺失或突变、SHANK3基因突变、Fmr1基因缺失、Cntnap2基因缺失;感染、药物、压力、肥胖等不利环境因素均可能导致ASD发病风险增高。外周躯体感觉神经元作为通路中感觉初级处理和神经传递枢纽,是ASD的感觉障碍表型中重要的功能障碍位点。靶向外周躯体感觉神经元也许可以为躯体感觉异常和ASD治疗提供新的策略。但由于ASD临床表现的多样性、不同致病基因和发病机制的差异性、脊髓背角内感觉中间神经元的高度多样性等原因,下一步还需深入开展有关外周躯体感觉神经元在ASD中的应用研究,以进一步明确其内在机制。

摘要： 目的为探究铁摄取相关基因iucA在尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)致病中的作用,利用UPEC模式菌株CFT073,通过λRed同源重组方法构建iucA基因缺失株ΔiucA,同时构建回补株C-iucA。方法测定A600绘制CFT073、ΔiucA和C-iucA菌株在LB液体培养基和无菌尿液中的增殖曲线。比较CFT073、ΔiucA和C-iucA菌株对人膀胱癌上皮细胞株5637体外黏附和侵袭能力。构建小鼠尿路感染模型,检测CFT073、ΔiucA和C-iucA菌株在膀胱的定植能力。结果CFT073、ΔiucA和C-iucA菌株在LB液体培养基中增殖速率相似(P=0.153)。ΔiucA在无菌尿液中的增殖速率低于CFT073(P=0.001),C-iucA的增殖速率较ΔiucA有所上升(P=0.005)。ΔiucA对5637细胞的黏附和侵袭能力均低于CFT073(P=0.007、0.002)。C-iucA的黏附和侵袭能力较ΔiucA有所上升(P=0.046、0.037)。ΔiucA在小鼠膀胱的定植能力低于CFT073和C-iucA(P=0.002、0.017)。结论iucA基因可能通过促进UPEC增殖、黏附和侵袭以及在靶器官的定植能力在UPEC致病中发挥作用。

摘要： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种胞内寄生虫,可以感染多种动物和人。目前,国内外缺乏针对预防弓形虫病的疫苗,传统灭活疫苗和弱毒活疫苗存在保护力差、弱毒返强等缺点。近年来,随着基因敲除技术的不断发展,越来越多刚地弓形虫免疫效果的研究着眼于构建不同基因缺失株,通过比较特定基因缺失的虫株与正常虫株在毒力、生长发育、宿主的免疫反应方面的差异,研究不同基因在免疫逃逸中的作用。本文通过对弓形虫有关基因缺失株的最新研究进展予以综述,以期为弓形虫疫苗的深入研究提供参考。

摘要： 为了探明糖基转移酶GalU对单增李斯特菌致病性的影响,本研究利用同源重组技术构建了galU基因缺失株,分析了亲本株ScottA、缺失株ΔgalU和回补株CΔgalU的生长能力、对细胞的黏附侵袭能力以及对小鼠的致病性。生长试验结果显示,galU基因缺失并不影响单增李斯特菌在BHI培养基中的生长能力。细胞侵染试验结果显示,ΔgalU对肠上皮细胞Caco-2的黏附率(0.74±0.18)%和侵袭率(0.70±0.10)%均显著低于亲本株ScottA的黏附率(2.01±0.11)%和侵袭率(2.48±0.25)%,回补株CΔgalU与亲本株的黏附侵袭率则并无显著性差异。免疫印迹结果显示,内化素InlB在ΔgalU细菌表面的锚定量显著低于亲本株,但其表面InlA的锚定量与亲本株并无显著性差异。小鼠试验结果显示,ΔgalU感染的小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量分别为(3.76×10(-7)±1.41×10(-7))CFU/g和(2.88×10(-7)±2.31×10(-7))CFU/g,均显著低于亲本株感染小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量;此外,ΔgalU感染组小鼠的存活率高于亲本株,但与回补株感染组小鼠的存活率一致。上述结果表明,糖基转移酶galE缺失不影响单增李斯特菌的生长能力,但可能通过影响其InlB的锚定介导该菌侵染宿主细胞的能力以及对小鼠的致病性。本研究结果为深入探索糖基转移酶GalU介导单增李斯特菌的致病机制奠定了基础。

摘要： 阿尔茨海默病(AD)是一种以认知功能进行性下降为特征的神经退行性疾病,严重影响患者的生活质量,并给家庭和社会造成沉重的经济负担,到目前为止还没有有效的治疗策略。AD的发病机制尚不清楚,但多种机制导致β淀粉样蛋白(Aβ)的产生和清除之间失衡,造成了Aβ在大脑中的增加和脑实质内斑块的最终积累,这是AD发病和发展的关键步骤[1]。AD普遍的病因可能与大脑Aβ清除功能障碍有关,各种体外和体内实验结果强调水通道蛋白4(AQP4)可为AD中Aβ代谢和清除的分子靶点[2]。

摘要： 为系统评价外膜蛋白在环境胁迫条件下的生物学功能,以嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)ATCC 7966为研究对象,选取33株外膜蛋白缺失菌株,对其贴太紧在渗透压、金属离子、H_(2)O_(2)及pH等胁迫条件下的生长状态进行测定。结果发现:编码TonB家族蛋白基因AHA_0461、AHA_4275被敲除的菌株在渗透压胁迫条件下较野生型菌株生长更好;编码未知功能蛋白基因AHA_2282被敲除的菌株在金属离子胁迫条件下生长较弱,而ΔAHA_0904菌株在渗透压胁迫条件下生长状况较好;编码长链脂肪酸转运蛋白基因AHA_2145被敲除的菌株在H_(2)O_(2)和金属离子胁迫条件下生长状态较弱;而编码OmpA家族蛋白基因AHA_1279、AHA_1281和分泌素家族蛋白基因pilQ、AHA_0569被敲除的菌株在H_(2)O_(2)胁迫条件下的生长均弱于野生型菌株。提示这些蛋白可能在细菌响应环境胁迫方面起重要作用。本研究结果有望为今后全面地了解嗜水气单胞菌外膜蛋白响应不同环境胁迫的机制提供思路,为该病原菌的防治提供可能的靶点。

摘要： 目的观察对比增强液体衰减反转恢复(CE-FLAIR)序列MRI影像组学模型判断成人弥漫性低级别胶质瘤(DLGG)1p/19q状态的价值。方法纳入135例成人DLGG患者、含81例1p/19q共缺失,经分层抽样按7∶3比例将其分为训练集(n=95)及验证集(n=40)。基于训练集CE-FLAIR数据提取、筛选DLGG 1p/19q共缺失影像组学特征,构建支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、极限梯度提升(XGBoost)、轻量梯度提升机(LightGBM)及逻辑回归(LR)模型;绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积(AUC),评价影像组学模型判断训练集及验证集DLGG 1p/19q状态的价值,并以DeLong检验进行比较。结果共提取851个影像组学特征,以Mann-Whitney U检验筛选出74个差异有统计学意义者,再经5折交叉验证的最小绝对收缩和选择算子选出12个与1p/19q状态显著相关者;以之构建的SVM、RF、XGBoost、LightGBM及LR模型评价训练集DLGG 1p/19q状态的AUC分别为0.89、0.97、0.97、0.96及0.85,评估验证集的AUC分别为0.86、0.92、0.93、0.92及0.78。验证集中,LR模型的AUC低于SVM、RF、XGBoost及LightGBM(Z=2.981、3.136、3.014、2.827,P均0.05);RF模型准确率最高,为88.24%。结论基于CE-FLAIR影像组学模型可有效评估成人DLGG1p/19q状态;SVM、RF、XGBoost及LightGBM模型效能均较高,以RF模型准确率最高。

摘要： 近日,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所联合中国农科院兰州兽医研究所等单位历时18年,共同研制的布鲁氏菌基因缺失标记活疫苗产品在国内首发上市。该产品能有效区别疫苗免疫和自然感染,突破了制约布病疫苗生产应用的重大技术瓶颈,其生产应用将对全国羊布病的有效防控和净化发挥积极作用,为《畜间布病防控五年行动方案(2022-2026年)》的顺利实施提供重要科技支撑。

摘要： 旨在构建鸭肠炎病毒(DEV)UL41基因缺失毒株,并对其生物学特性进行分析,本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架,利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因组片段的亲本黏粒共转染鸭胚成纤维细胞(DEF),拯救获得UL41基因缺失毒株rDEV-SD19/dUL41。将该基因缺失病毒感染DEF后,提取病毒基因组进行PCR鉴定及测序,并利用间接免疫荧光试验检测该病毒感染细胞中UL41基因表达情况;绘制拯救的基因缺失病毒的生长曲线,分析其体外复制特性。PCR及测序结果显示,本研究成功构建了缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41。将该基因缺失黏粒与其他含有DEV基因组的亲本黏粒共转染DEF后能够产生典型的蚀斑病变。PCR及测序结果显示,UL41基因成功从DEV基因组中缺失;间接免疫荧光试验发现,基因缺失病毒rDEV-SD19/dUL41感染DEF后,未见UL41蛋白表达。综上表明,本研究成功构建了DEV UL41基因缺失病毒。体外生长曲线显示,rDEV-SD19/dUL41在DEF中的复制能力明显低于亲本病毒,提示UL41蛋白在DEV复制中发挥重要作用。UL41基因缺失DEV的构建为进一步研究UL41基因在DEV感染和致病中的作用机制奠定了基础。

摘要： 伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的猪和多种家畜共患的一种急性,热性传染病.PRV主要感染猪,能够导致仔猪的高死亡率和种猪繁殖障碍,对养猪业危害极大.疫苗免疫在伪狂犬病控制过程中起了关键作用.2011年开始,中国出现了PRV变异毒株的流行,很多免疫了Bartha-K61株弱毒疫苗的猪场仍然出现伪狂犬病暴发的现象.病原学研究证明PRV变异株的致病力显著增强,而Bartha-K61株疫苗的保护效力显著下降.本研究室通过基因工程技术,以PRV变异株SMX2012株为亲本株,构建了gI、gE、TK三基因缺失毒株rSMX2012△gI/gE△TK.本研究通过一系列动物实验,研究了rSMX2012△gI/gE△TK株的安全性和免疫保护力;为PRV变异株弱毒疫苗的研究奠定了基础.

摘要： 鼠伤寒沙门菌是一种常见的能引起哺乳动物胃肠炎的食源性病原菌，全球每年有2千万人感染沙门菌病，有大约20万人死于沙门菌病，在公共卫生方面具有重要的意义。本研究以鼠伤寒沙门菌SL1344△crp和SL1344△sipB基因缺失株为研究对象，研究crp和sipB基因缺失后对细菌侵袭能力的影响。研究结果发现crp基因缺失株失去了利用麦芽糖、半乳糖、山梨醇等的能力，并且生长速度较亲本菌株相比也发生了显著的下降。而sipB基因缺失株仍然保持着利用麦芽糖、半乳糖、山梨醇等的能力，并且其生长速度较亲本菌株相比没有发生明显的变化，说明sipB基因缺失后不影响菌株参与碳水化合物、氨基酸和小肽代谢等功能。体外和体内侵袭力的实验对crp基因缺失株和sipB基因缺失株进行了比较，在小鼠体内的动态分布试验结果显示缺失菌株较亲本菌株相比在肝脏和脾脏上面分离到的细菌数明显的低于亲本菌株，细胞的黏附和侵入试验结果也显示出缺失sipB基因后能够显著降低对上皮细胞的黏附和侵入能力，而crp基因缺失株实验组与亲本菌株对照组无明显差别，均与前面的小鼠试验模型结果相一致。

摘要： 本实验通过Red重组技术敲除了Bm90基因，构建了Bm90缺失型病毒Bm90-ko-Bacmid，同时利用Bac-to-Bac系统将Bm90基因定点补回到BmNPV病毒基因组中，从而获得Bm90补回型病毒Bm90-re-Bacmid，敲除型及补回型经PCR鉴定各条带大小与预期大小一致。而后将野生型病毒wtBacmid,Bm90-ko-Bacmid和Bm90-re- Bacmid DNA分别转染家蚕BmN细胞，通过测定三者不同时相病毒滴度的变化，研究该基因缺失对病毒感染家蚕细胞发病的影响。

摘要： 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步降低其毒力以制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型sg菌株基因缺失株S8△clpP为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,敲除了ApxⅡ溶血素激活基因apxⅡC,构建了无抗生素标记的双基因缺失突变株S8△clpP/△apxⅡC.生物学特性结果显示,双基因缺失株仔生长速率没有明显改变,但溶血活性完全消失,结果表明双基因缺失株Sg△clpP/△apxⅡC可作为APP基因缺失弱毒活疫苗的候选株.

摘要： 目的:应用野生型(wild-type,WT)和ATP13A2敲除(ATP13A2 knockout,ATP13A2-/-)小鼠,制备MPTP联合丙磺舒所致PD慢性模型(MPTP/p模型),从整体及分子水平研究ATP13A2在PD发生中发挥的作用及其机制.结果:1)ATP13A2基因缺失显著加重MPTP诱导的神经运动功能障碍、显著减少中脑酪氨酸经化酶(TH)阳性细胞数目(p<0.05)。2)ATP13A2基因缺失加重MPTP诱导的星形胶质细胞活化，炎症因子的释放以及NF-xB信号通路的激活(p<0.05)。3)ATP13A2基因缺失显著增加MPTP/p诱导的中脑内质网应激水平，其机制涉及促进MPTP币弓I起的内质网应激中蛋白伴侣分子GItP78、转录因子CHOP、效应分子Caspasel2表达上调和炎症因子IL-Iβ及TNF-α释放增加。4)ATPI3A2基因缺失增加LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化，但不能降解自噬底物蛋白p62，抑制自噬小体与溶酶体的结合，引起无效自噬，降低溶酶体清除α-突触核蛋白(α-synuclein)的能力。结论:1)ATP13A2缺失加重MPTPip诱导的小鼠SNc区多巴胺能神经元损伤。2)ATP13A2基因缺失损伤溶酶体功能，抑制自噬，降低α-synuclein的清除能力，调节ATP13A2有望成为治疗早发性帕金森病的新策略。

摘要： 目的：长期以来对长期低剂量饮酒引起的高密度脂蛋白(HDL)升高的机制并不十分清楚,本实验拟通过乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因敲除鼠观察长期慢性酒精刺激及基因型对小鼠血脂的影响.方法：6-8周健康C57BL与ALDH2基因敲除鼠,随机分为饮水与饮酒4组.饮酒组起始乙醇浓度为2.5％,随后按每周5％、10％、18％共饮酒4周;测小鼠体重、心脏重量、脂肪重量;检测血清胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、乙醇、乙醛浓度.结果：按此剂量长期慢性饮酒可引起饮酒组ALDH2 基因敲除鼠心脏重量与脂肪重量较饮水组明显降低、基因敲除鼠死亡率高于野生鼠;饮酒4周后野生鼠与基因敲除鼠血HDL显著升高,饮酒组野生鼠血TC水平明显升高,但基因敲除鼠没有明显改变,血TG水平在4组中没有差异;基础状态即饮水组ALDH2基因敲除鼠与野生鼠血乙醇浓度无差别,但基因敲除鼠血乙醛浓度较野生鼠升高显著,饮酒4周后野生鼠与基因敲除鼠血乙醇、乙醛浓度均明显升高.结论：上述结果提示长期慢性饮酒引起的HDL升高与血乙醇浓度升高紧密相关,而与乙醛浓度改变相关性不大。

摘要： 为了了解延平区规模养殖场猪伪狂犬病(PR)野毒感染情况,2013年1-6月从本地大部分使用猪伪狂犬gE基因缺失疫苗免疫的10个规模猪场共采集了366份血清,应用酶联免疫吸附试验,进行猪伪狂犬病gE抗体检测.结果表明,猪场抗体阳性率为70％ (7/10),样品阳性率为18.03％(66/366),说明延平区本地规模猪场不同程度受到猪伪狂犬病的野毒感染.

摘要： 文章介绍了荧光原位杂交技术的定义，阐明其具有敏感、特异的优点，探讨了FISH检测基因异常的原理，及其结果判读基本步骤。

摘要： 文章介绍了荧光原位杂交技术的定义，阐明其具有敏感、特异的优点，探讨了FISH检测基因异常的原理，及其结果判读基本步骤。

摘要： 文章介绍了荧光原位杂交技术的定义，阐明其具有敏感、特异的优点，探讨了FISH检测基因异常的原理，及其结果判读基本步骤。

摘要： 本发明涉及合成生物学领域，特别涉及基因的缺失及其应用，缺失该基因的菌株及其在提高微生物次级代谢产物的产量中的应用。通过实验发现，基因YEL017C‑A、YEL017W和/或YER182W的缺失能够提高脱氧紫色杆菌素前体、脱氧紫色杆菌素、紫色杆菌素前体和/或紫色杆菌素的产量。

摘要： 提供用于制备基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母的方法，包括用缺失盒转化粟酒裂殖酵母，该缺失盒由4轮连续PCR、阻断PCR或全基因合成构建，含有同源重组位点。还提供了由该方法制备的基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母突变体，和基因靶向的杂合缺失粟酒裂殖酵母突变体文库。此外，该文库在构建用于筛选药物作用方式的方法和试剂盒中有用。

摘要： 本发明涉及合成生物学领域，特别涉及基因的缺失及其应用，缺失该基因的菌株及其在提高微生物次级代谢产物的产量中的应用。通过实验发现，基因YEL017C‑A、YEL017W和/或YER182W的缺失能够提高脱氧紫色杆菌素前体、脱氧紫色杆菌素、紫色杆菌素前体和/或紫色杆菌素的产量。

摘要： 本发明涉及鸭瘟病毒UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失突变株及其构建方法与应用，本发明提供一种UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失的重组鸭瘟病毒毒株，该毒株具有减弱的毒力，对鸭无致病性，且具有良好的免疫原性，能够实现抗鸭瘟病毒的免疫保护。本发明提供的减毒鸭瘟病毒毒株能够用于制备鸭瘟活疫苗，或作为活病毒载体经插入其它病原的抗原基因制备基因工程活载体疫苗，具有很大的应用潜力和市场。

摘要： 本发明公开一种双基因缺失肠炎沙门氏菌、其构建方法及含有该双基因缺失肠炎沙门氏菌的疫苗，所述双基因缺失肠炎沙门氏菌为rfaH基因和sopB基因都被敲除的肠炎沙门氏菌，所述构建方法采用同源重组方法和蔗糖敏感基因的负筛选方法对所述肠炎沙门氏菌中的rfaH基因和sopB基因进行敲除，所述疫苗的组分包括采用上述方法制得的双基因缺失肠炎沙门氏菌。本发明双基因缺失肠炎沙门氏菌细胞免疫和黏膜免疫得到增强，攻毒保护效果好，免疫效果优良，且在宿主中清除效果好，在体内3~4周内就可以被定殖清除去，安全性能优异。

摘要： 本发明属于基因工程技术和病毒学技术领域，具体涉及一种独特基因缺失组合的PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株及其应用。该四基因缺失株是通过缺失伪狂犬病病毒的gE基因、TK基因、UL56基因和US3基因后得到的，具体是先制备PRVΔgE/TK/UL56三基因缺失株，然后通过同源重组技术、Cre‑LoxP系统，在PRVΔgE/TK/UL56三基因缺失株的基础上缺失毒力基因US3，获得PRVΔgE/TK/UL56/US3四基因缺失株。本发明的四基因缺失毒株可作为弱毒活疫苗，免疫仔猪后未出现PRV临床症状，具有良好的安全性，且能够对PRV强毒的攻击提供完全保护。

摘要： 本发明涉及鸭瘟病毒UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失突变株及其构建方法与应用，本发明提供一种UL56基因3’端缺失和LORF5基因缺失的重组鸭瘟病毒毒株，该毒株具有减弱的毒力，对鸭无致病性，且具有良好的免疫原性，能够实现抗鸭瘟病毒的免疫保护。本发明提供的减毒鸭瘟病毒毒株能够用于制备鸭瘟活疫苗，或作为活病毒载体经插入其它病原的抗原基因制备基因工程活载体疫苗，具有很大的应用潜力和市场。

摘要： 本发明涉及一种蔗糖致死基因SacB在基因缺失反向筛选标记中的应用及其无痕缺失自杀载体，本发明利用sacB基因编码蔗糖果聚糖酶，该酶能催化蔗糖水解成葡萄糖和果糖，并且将果糖聚合成高分子量的果聚糖，但高分子量果聚糖积累对细胞存在潜在的毒性作用，可造成细胞死亡。因此利用蔗糖致死基因SacB构建自杀载体，无需通过抗性基因来代替目的基因，避免了抗性标记对下游基因产生任何可能的极性作用，对鸭疫里默氏杆菌基因的功能研究具有重要意义。

摘要： 本发明公开一种双基因缺失肠炎沙门氏菌、其构建方法及含有该双基因缺失肠炎沙门氏菌的疫苗，所述双基因缺失肠炎沙门氏菌为rfaH基因和sopB基因都被敲除的肠炎沙门氏菌，所述构建方法采用同源重组方法和蔗糖敏感基因的负筛选方法对所述肠炎沙门氏菌中的rfaH基因和sopB基因进行敲除，所述疫苗的组分包括采用上述方法制得的双基因缺失肠炎沙门氏菌。本发明双基因缺失肠炎沙门氏菌细胞免疫和黏膜免疫得到增强，攻毒保护效果好，免疫效果优良，且在宿主中清除效果好，在体内3~4周内就可以被定殖清除去，安全性能优异。

摘要： 本发明公开了一种利用Nsp2基因缺失构建PRRSV基因缺失疫苗毒株的方法及其应用。本发明的降低PRRSV BJ－4株毒力的方法，是连续缺失PRRSV BJ－4株基因组的Nsp2编码区中长度为69nt的核苷酸片段，得到毒力降低的毒株；所述69nt核苷酸片段的核苷酸序列如GenBank Accession Number AF331831的自5′末端第2795至2863位所示。由该降低PRRSV BJ－4株毒力方法制备的病毒rV63的Nsp2缺失21个氨基酸，具有开发成标记疫苗的潜力，并可以缺失的多肽开发鉴别诊断方法。在开发疫苗过程中，可以利用已经建立的反向遗传技术平台对GP5的糖基化位点进行改造，克服影响中和表位的抑制性因素，以提高疫苗诱导的中和抗体水平。